UNIVERSIDAD

NACIONAL ABIERTA Y A
DISTANCIA

201711 FISIOLOGA VEGETAL

HOJA DE RUTA
APRENDIZAJE PRCTICO
2015 - I

Germn Gonzalo Castellanos

Director de curso

APRENDIZAJE PRCTICO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Ambiente
201711 Fisiologa Vegetal

Ttulo: Hoja de ruta para el curso 201711 Fisiologa vegetal

Nombre de la actividad prctica:
Actividad 1. Salida de campo
Nombre del entorno en el cual el estudiante realizar la prctica: Entorno de aprendizaje prctico
Objetivo de aprendizaje Salida de campo.
Observar en el cultivo la arquitectura de la plantas, estado de desarrollo de las plantas y sistema de
cultivo (distribucin espacial de las plantas)
Observar las condiciones ambientales especficas en el sitio visitado que pueden impactar
fuertemente el rendimiento del cultivo (negativa o positivamente).
Analizar lo observado relacionando la implicaciones sobre la
produccin de cultivos.

transpiracin, la fotosntesis y

Proponer recomendaciones para mejorar el uso del agua, el aprovechamiento de la luz y del espacio.
Tipo de actividad: Colaborativa.
Tiempo de duracin de la actividad: 4 horas
Fecha de inicio y cierre de la actividad: 16 de febrero 19 de abril
Descripcin de las actividades prcticas que debe realizar el estudiante y espacio o lugar
donde las realizar:
Visita a anlisis de un sistema de cultivo agrcola o forestal
Descripcin de la ubicacin geogrfica del sitio y descripcin detallada las condiciones ambientales y
relieve.

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201711 Fisiologa Vegetal

Observacin de la arquitectura y morfologa de la plantas, estado de desarrollo de las plantas

(principales fases fenolgicas) y sistema de cultivo (arreglo y densidad de siembra, riego, tutorado,
etc).
Observar las condiciones ambientales (Temperatura, precipitacin, viento, radiacin solar, HR,
suelos), especficas en el sitio visitado que pueden impactar fuertemente el rendimiento del cultivo
(negativa o positivamente).
Analizar y discusin de lo observado relacionando las implicaciones sobre la
respiracin y la fotosntesis, nutricin, traslocacin de fotoasimilados, etc.

transpiracin,

Proponer recomendaciones para mejorar en las plantas el uso del agua, el aprovechamiento de la luz
y el espacio.
Productos a entregar al tutor del componente prctico de su CEAD:
Productos a entregar al tutor de prcticas
Informe de las actividades realizadas.
El informe debe contener.

Portada
Introduccin
Anlisis y Discusin.
Conclusiones
Referencias
Condiciones de entrega del producto solicitado:

El trabajo debe ser de la autora del estudiante, el plagio se penaliza con una nota de 0.0
Esta actividad prctica, exige el acompaamiento del tutor de prctica de su correspondiente
CEAD.

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Actividad 2. Laboratorio de fisiologa vegetal

Nombre del entorno en el cual el estudiante realizar la prctica: Entorno de aprendizaje prctico.
Laboratorio.
Objetivos de aprendizaje.
Determinar el contenido relativo de agua en plantas (CRA).
Determinar el potencia' de agua (A) en plantas.
Observacin de estomas a travs del microscopio.
Determinar la cantidad de clorofila total, y de clorofilas a y b presentes en una muestra de hoja.
Interpretar datos y elaborar conclusiones.
Tipo de actividad: Colaborativa
Tiempo de duracin de la actividad: 8 horas
Fecha de inicio y cierre de la actividad: 16 de agosto 19 de abril
Descripcin de las actividades prcticas que debe realizar el estudiante y espacio o lugar
donde las realizar:
Es necesario que los estudiantes se familiaricen con los instrumentos y tcnicas de laboratorio
utilizadas para realizar determinaciones de indicadores fisiolgicos de las plantas y ser capaz de
analizar los datos obtenidos con el fin de contribuir a entender e investigar los procesos fisiolgicos
de las plantas. Al finalizar encontrar la gua de laboratorio en el Anexo 1. Esta es una gua general
para realizar el laboratorio de fisiologa vegetal, sin embargo el tutor de prctica teniendo en cuenta el
mdulo del curso podr cambiar, modificar o proponer las actividades del laboratorio de acuerdo a
disponibilidad de recursos y a la experiencia profesional.
Productos a entregar al tutor del componente prctico de su CEAD:
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Informe de las actividades realizadas.

El informe debe contener.

Portada
Introduccin
Anlisis y Discusin.
Conclusiones
Referencias
Condiciones de entrega del producto solicitado:

El estudiante que no particip en el laboratorio tendr una nota de 0.0.

El trabajo debe ser de la autora del estudiante, el plagio se penaliza con una nota de 0.0
Esta actividad prctica, exige el acompaamiento del tutor de prctica de su correspondiente
CEAD.
ACTIVIDADES DEL LABORATORIO DE FISIOLOGA VEGETAL
1. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE AGUA EN LAS PLANTAS
Introduccin
El contenido de agua es la medida ms comn para estimar el grado de hidratacin de las plantas.
Por lo general, ste se expresa en trminos relativos, en relacin con la mxima capacidad de agua
que los tejidos vegetales pueden almacenar, y se expresa de manera sencilla as:

= Pf - Ps
Donde:
= Contenido de agua en gramos
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Pf = Peso fresco
Ps = Peso seco (a 85C hasta peso constante).

Sin embargo, esta medida es imprctica porque no se pueden hacer comparaciones con otras
medidas de contenido de agua en las mismas plantas o con otras especies.
El contenido de agua se puede expresar con base en peso seco o peso fresco; es decir:
Formula:

PFPS
x 100
PS

PFPS
x 100
PF

Sin embargo, estas dos expresiones tambin subestiman o sobreestiman el contenido de agua
porque al expresarlo con base en peso seco, este tiende a cambiar diaria o estacionalmente, y al
expresarlo con base en su peso fresco, los problemas de cambio de peso se minimizan, pero tambin
tiende a minimizar cambios importantes en el contenido de agua.
Para evitar estos errores, el

se expresa con base en su peso trgido (Pt) que es el peso del

tejido a su mxima turgencia. De esta manera el

se llama ahora "contenido relativo de agua

(CRA)" o "dficit de saturacin de agua (DSA)".

CRA=

PFPS
x 100
PT PS

DSA=

PT Pf
x 100
PT PS
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DSA = 100-CRA

CRA: Contenido Relativo de Agua

PF: Peso Fresco
PS: Peso Seco
PT: Peso Turgente

Objetivo
Determinar el contenido relativo de agua en plantas (CRA).
Material
Material vegetal, cajas de Petri, balanza y sacabocados de 17 rnrn de dimetro aproximadamente.
Procedimiento
Con el sacabocados se cortan discos de hojas y se pesan (peso fresco: PF, despus se colocan en
cajas de Petri con agua destilada y se dejan saturar durante cuatro horas (es importante que se
determine el tiempo que se dejan saturar en agua las diferentes especies de plantas a las cuales se
les determine el CRA, por ejemplo, para el caso de frijol son cuatro horas. Esto se logra si se pesa en
diferentes intervalos hasta que las muestras no cambian de peso). Despus, se sacan de la caja de
Petri y se elimina el exceso de agua en la superficie utilizando papel secante y se pesan de nuevo
(peso trgido: PT). Finalmente, los discos se secan en una estufa a 85C durante 48 horas y se
pesan (peso seco: PS).
El contenido relativo de agua se determina con la siguiente ecuacin:

CRA=

PFPS
x 100
PT PS

A continuacin, se muestran los resultados de CRA, obtenidos en las plantas de frijol en condiciones
de riego y sequa.

Tabla 1. Plantas de frijol con riego. Fuente: Larqu-Saavedra 1990.

Pf(mg)

Pt (mg)

Ps (mg)

CRA (%)

24.60

28.60

4.45

87
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0.22
S

0.51

0.65

Xs

0.20

0.26

0.09

Tabla 2. Plantas de frijol en sequa. Fuente: Larqu-Saavedra 1990

Pf(mg)

Pt (mg)

Ps (mg)

CRA (%)

25.45

30.65

3.93

77

1.02

1.10

0.34

SX

0.41

0.45

0.14

2. DETERMINACIN DEL POTENCIAL DE AGUA TOTAL

La energa libre del agua es un concepto termodinmico que se usa para expresar la capacidad que
tiene el agua para realizar trabajo dentro del sistema de la planta (potencial qumico) y ms
apropiadamente se le llama "potencial de agua" (A). El A es la diferencia entre el potencial qumico
del agua en el sistema y el potencial qumico del agua pura a la misma temperatura, y se expresa de
la siguiente manera:

Potencial de agua =

A=

RT
e
ln
Va e

Donde:
R = Constante de los gases
V = Volumen parcial molar
T = Temperatura absoluta
e = Presin de vapor del agua en el sistema
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e = Presin de vapor a saturacin del agua pura.

El A en plantas integra el efecto de varios componentes: potencial osmtico (o), potencial de

turgencia (t), potencial matricial (m) y potencial gravitacional (g). El potencial gravitacional se
puede eliminar porque slo representa una fuerza de 0.01 Megapascales (MPa) por metro y la
contribucin del potencial matricial tambin es despreciable con valores cercanos a cero. Finalmente,
el A total de un tejido est expresado por los componentes: potencial osmtico (o) y potencial de
turgencia (t).
A = o + t
Se supone que el A puro a la temperatura y presin estndar es igual a cero, por lo tanto, el A de
las plantas es, por lo general, negativo y se usan unidades de presin para expresarlo:
1 baria = 1.0 X 10 dyn/cm = 1.0 X 10 N/m
= 0.987 atm = 1017 cm de agua = 75.0 cm Hg
= 14.50 Ib/pulg. = 10 Pa = 0.1 MPa = 100 J/Kg.

2.1 Mtodo de cambio de peso

Introduccin

Este mtodo para determinar el potencial de agua (A) es uno de los ms antiguos. Se basa en el
hecho de que los tejidos vegetales ganan o pierden agua, cuando se les coloca en soluciones que
tienen un potencial osmtico (o) conocido como sacarosa, manitol o polietiln glicol. Las soluciones
con una concentracin conocida se utilizan para ceder o absorber agua del tejido vegetal que se
coloca en ellas. La finalidad de este mtodo es encontrar una solucin en la cual el tejido no
modifique su peso. Esto indica que no hubo ni prdida ni ganancia de agua y que el tejido y la
solucin estn en balance, por lo tanto, el A del tejido es igual al A de la solucin.

Este mtodo, basado en el cambio de peso, puede ser muy til cuando no se tiene otros instrumentos
que ayuden a precisar el A.
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Objetivo
Determinar el potencia' de agua (A) en plantas utilizando esta tcnica.

Material
Material vegetal (de preferencia papa). cajas de Petri sacabocados con un di~metro de 10 mm,
balanza analtica, pinzas, papel secante y soluciones de sacarosa: 0,05 0,1 0,2 0,5 0,8 molal.

Procedimiento
Prepare las cajas de Petri con 50 ml de las soluciones de sacarosa. Tome muestras de la papa con el
sacabocados, aproximadamente cilindros de 1 cm de longitud y pese estos tejidos en la balanza
(peso inicial). Coloque cada cilindro en cada caja de Petri con la solucin de sacarosa; mantngalo
as y pese cada cilindro a intervalos de un .hora (elimine el exceso de agua con papel secante), hasta
que los cilindros de papa ya no indiquen aumento de peso. Saque los cilindros de papa, elimine el
exceso de agua con papel secante y pselo. (Peso final).

Es conveniente pesar las muestras en orden cronolgico, segn se hayan Introducido en la solucin.
Elabore una tabla que muestre lo~ pesos Iniciales, los pesos finales y los cambios de peso.
Determine el porcentaje de cambio de peso con la siguiente frmula:

de cambio de peso=

Peso FinalPeso Inicial

x 100
Peso Inicial

Las diferentes especies de plantas tienen distinta velocidad de absorcin de agua, por eso es
importante pesar en diferentes intervalos y determinar el tiempo que tarda en alcanzar el equilibrio
cada una de las especies que se desea estudiar.

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Ejemplo:
A continuacin, se indican los resultados de A obtenidos en esta prctica. El A es el punto en que
el tejido ni aumento ni perdi peso (igual al o de la solucin), este valor se busca en tablas de
presiones osmticas de la siguiente ecuacin:
o = -miRT
En donde:
o = potencial osmtico de la solucin
m = molalidad de la solucin (moles de soluto/1000 g H2O)
I = una constante que estima la ionizacin del soluto u otras desviaciones de soluciones perfectas.
R = Constante general de los gases (0.0831 litros baria/mol grado).
T = Temperatura absoluta (273 K)

En este caso, el resultado fue el siguiente:

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o = - (0.35 mol/LH2O) (1.0) (0.0831 Litro baria/mol grado) (298 K)

o = - 8.66 barias a 25C
2.2 Mtodo de coloracin de Shardakov
Introduccin
Este mtodo consiste en sumergir muestras de tejido vegetal durante algn tiempo en un gradiente
de concentracin, de soluciones de sacarosa, manitol o polietilen-glicol. Las soluciones ganarn o
perdern agua (disminuyendo y aumentado su densidad respectivamente), esto depende del
potencial del agua A del tejido.
Si la densidad de la solucin no cambia, esto indica que el tejido y la solucin tienen el mismo A.
La presin de turgencia, la transpiracin, los componentes del soluto y la hidratacin son factores que
influyen en el potencial hdrico de una planta.
En el laboratorio se determinar el potencial hdrico a diferentes concentraciones de sacarosa y se
analizar qu sucede en cada una de ellas.
Fenmenos osmticos
Osmosis es la difusin de una sustancia a travs de una membrana semipermeable, es decir, aquella
que deja pasar los solventes pero no los solutos. En las clulas vegetales ocurre smosis porque las
membranas citoplasmticas no dejan pasar numerosas sustancias disueltas en las vacuolas, lo cual
determina la existencia de una menor energa libre del agua en su interior, provocando la entrada de
agua a la clula; a medida que esta agua entra, el protoplasma es presionado contra la pared celular
limitando ella su grado de expansin. Dicha presin se denomina "presin de turgencia" y es el
producto, a su vez, de la presin osmtica del contenido celular.
El termino o conocido como potencial de solutos o potencial osmtico, representa el efecto de la
disolucin de solutos sobre el potencial hdrico. Los solutos reducen la energa libre del agua por su
dilucin. Este efecto es esencialmente un efecto entrpico; es decir, la mezcla de solutos yagua
aumenta el desorden (entropa) del sistema y, consecuentemente, disminuye la energa libre. El
efecto entrpico de los solutos disueltos tambin se observa en otros efectos fsicos, conocidos como
propiedades coligativas de las soluciones: los solutos disminuyen la presin de vapor de las
soluciones, aumentan su punto de ebullicin y disminuyen su punto de congelamiento.
Para soluciones diluidas de sustancias no disociadas, el potencial osmtico puede ser estimado por la
ecuacin de Van't Hoff:
o = - RTCs
Donde:
R = constante de los gases (8,32 Lmolv.k': 0,00831Kg.MPa.moll.okl)
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T = temperatura absoluta en grados Kelvin

Cs = concentracin de solutos de la solucin expresada como osmolalidad (moles de solutos totales
disueltos por litro de agua [mol.L:']).
Objetivos
Determinar con esta tcnica el potencial de agua del tejido vegetal.

Observar cambios en el potencial hdrico y osmtico a travs de diferencias de densidad.

Distinguir el potencial hdrico como un factor importante en el desarrollo integral de una planta.

Entender los diferentes procesos que ocurren dentro de una hoja.

Materiales
Tubos de ensayo (10)
Material vegetal (hojas o trozos de papa de igual tamao)
Pipetas de 10 mL
Azul de metileno al 1 %
Gradilla
Pinzas y cuchillas
Pipetas Pasteur o cuentagotas
Soluciones de sacarosa con concentraciones de 0,05 0,1 0,2 0,5 0,8 molal
Metodologa
Preparar 2 series de 5 tubos de ensayo con las soluciones de sacarosa. Se debe etiquetar dos
tubos de ensayo por cada una de las concentraciones de sacarosa.
Realice cortes con un sacabocados crculos de tejido de las hojas (o papa para que el proceso
sea ms rpido) o con un bistur cortes de un cm2.
En la primera serie se agrega a cada tubo 15 mL de una solucin de sacarosa y 4 cortes o discos
de hojas, del cual se desea conocer su potencial hdrico. En la segunda serie se colocan 15 mL de
solucin de sacarosa ms cuatro gotas de azul de metileno. Se deben tapar los tubos con papel
parafilm para evitar la evaporacin.
Al cabo de dos horas, se retira con unas pinzas el tejido vegetal de cada uno de los tubos. Con el
cuentagotas o una pipeta Pasteur se toman unas gotas de la solucin coloreada de sacarosa 0,05
molal y se libera a unos 3 cm bajo la superficie de de la solucin del el tubo donde estaba el tejido
a la concentracin 0,05 molal, observando qu sucede con la gota coloreada, y as con cada uno
de los dems tubos de forma respectiva. Se toma como parmetro si la gota sube, baja o se
diluye. Escriba los resultados en una tabla.
El potencial hdrico ser igual al potencial osmtico de la solucin coloreada en la cual la gota de la
solucin coloreada permaneci suspendida.
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Discuta los resultados.

Figura tomada de Flrez 2004

3. DISTRIBUCIN DE LOS ESTOMAS E NDICE ESTOMTICO. TCNICA DE IMPRESIN
Introduccin
La prdida de agua que sufren las plantas es un fenmeno totalmente fsico; el agua se evapora de la
hoja como lo hara de un recipiente cualquiera. La hoja necesita estar saturada de agua para su vida
normal, y aunque tiene la epidermis impermeable, siempre hay difusin a travs de ella; igualmente,
la hoja tiene estomas y, si bien puede cerrarlos, el cierre no es hermtico. Adems, los estomas se
abren conforme a las leyes fisicoqumicas. Es claro que una planta no podra vivir sin intercambio de
O2 y CO2 con el ambiente; y por donde entra CO2 escapa H2O gaseoso, lo cual se da con la apertura
de los estomas que depende de las circunstancias del medio ambiente.
La mayor parte de la transpiracin se hace por los estomas; aun cuando el ostolo est cerrado, deja
un orificio de aproximadamente 0,211 y, dado el tamao de la molcula de agua (0,3nm), se calcula
que pueden pasar por el estoma cerrado unas 5.000 molculas.

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Los estomas son poros formados por un par de clulas especializadas llamadas clulas guarda. Se
encuentran en la epidermis de las partes areas de la mayora de las plantas terrestres.
Convencionalmente, un estoma se acepta como el poro y las dos clulas que lo rodean (clulas
guarda). Un complejo estomtico se refiere a las clulas guarda y a las clulas vecinas (clulas
subsidiarias).
La apertura y cierre del estoma es posible por la morfologa especial de las clulas oclusivas o
guardas, que al llenarse de agua, se alargan y se despegan las paredes que forman el borde del
ostolo, el cual queda abierto; cuando sale agua de ellas, quedan flcidas y por elasticidad toman su
forma primitiva.
El estudio de los estomas es uno de los campos ms activos en la fisiologa vegetal y una de las
razones de este gran inters se debe a que los estomas intervienen en el control de dos de los ms
importantes procesos fisiolgicos en las plantas: fotosntesis y transpiracin.
Usualmente, los estomas estn distribuidos al azar en la epidermis de las plantas. Sin embargo, en la
mayora de las monocotiledneas y en gimnospermas los estomas estn distribuidos en hileras.
Factores genticos y ambientales como disponibilidad de agua, intensidad de luz, temperatura, y
concentracin de CO2 influyen en la distribucin, frecuencia y morfologa de los estomas. Debido a
que todos estos factores influyen en la frecuencia. Salisburv introdujo, en 1928, el trmino ndice
estomtico, que relaciona el nmero de estomas por unidad de rea con el nmero de clulas
epidrmicas por unidad de rea:

Indice estomtico=

Nm . de estomas por unidad de rea

Nm . de estomas por rea+ Nm . de clulas epidrmicas por rea

Al parecer este ndice permanece constante dentro de las hojas de una misma planta.
El estudio de los estomas se puede realizar mediante dos mtodos: los directos y los indirectos. Los
directos incluyen las observaciones directas en las hojas en el microscopio o mediante rplicas de la
superficie de las hojas. Los mtodos indirectos incluyen las estimaciones de la apertura de los
estomas mediante pormetros de flujo de masas, pormetros de resistencia a la difusin.
Objetivo
Dominar la tcnica de impresin de estomas y determinar el ndice estomtico en diferentes especies
de plantas.
Material
Plantas de la especie que se desee, portaobjetos y cubreobjetos, pinzas pequeas, barniz para uas
y microscopio.
Procedimiento
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En la superficie de las hojas a las cuales se quiere tomar impresiones, coloque una pelcula delgada
de esmalta (barniz para uas), -es conveniente usar uno de buena calidad y de secado rpido- con un
pincel de aproximadamente 1 cm2 (tener en cuenta de no tocar la pelcula con la mano para no dejar
huellas. Espere unos 30 minutos para que la pelcula seque y, despus, con pinzas, desprenda la
pelcula plstica que se form y colquela sobre el portaobjetos cuidando que la superficie que estuvo
en contacto con la epidermis de la hoja quede hacia arriba, coloque el cubreobjetos y proceda a
observar la pelcula en el microscopio.
Halle el ndice estomtico.
Dibuje y comente los resultados.
4. PIGMENTOS VEGETALES
Introduccin
Todos los organismos que habitan en la biosfera dependen de las plantas como fuente de energa,
debido a su capacidad de fijar dixido de carbono por medio de la fotosntesis para constituir
molculas ms complejas. Entre estas molculas encontramos la glucosa, azcar simple precursor de
compuestos orgnicos. La capacidad de las plantas para fijar carbono a travs del proceso
fotosinttico depende en gran medida de la cantidad de radiacin disponible.
La fotosntesis es un proceso biolgico de foto-absorcin de energa y foto-asimilacin de elementos
esenciales. Durante la fase de foto-absorcin de energa, la luz visible del espectro radiactivo
electromagntico incidente es absorbida diferencialmente por las molculas de los pigmento s
vegetales, logrando que la energa lumnica sea transformada en energa electroqumica.
Esta energa es almacenada en dos biomolculas estables: NADPH (fuente de poder reductor) y ATP
(poder de enlace), necesarias para la fase siguiente.
Durante la fase de foto-asimilacin de elementos esenciales, se asimilan los elementos constitutivos
de la materia orgnica a partir de fuentes minerales inorgnicas y se incorporan en biomolculas
orgnicas metabolizables. Por ejemplo, la energa de la primera fase es usada en la conversin de
CO2 yagua en azcares.
Existen diferentes tipos de pigmentos foto sintticos que se encuentran en mayor o menor proporcin
en las diversas especies; stos comprenden las clorofilas a y b, algunas xantofilas y carotenos. Para
su identificacin y valoracin se hace necesario un proceso de extraccin en el que se macera el
tejido vegetal en presencia de un solvente orgnico.

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Objetivos
Determinar la cantidad de clorofila total, y de clorofilas a y b presentes en una muestra de hoja.
Materiales e Instrumentos
- Material vegetal (Hojas de la planta seleccionada)
- Mortero y pistilo
- Probeta
- Acetona
- ter de petrleo
- Tubos de ensayo
- Pinzas
- Espectrofotometeo
Extraccin de clorofila
- Embudo de decantacin
- Pipetas
- Carbonato de calcio
- Cloruro de sodio (10%)
- Sulfato de sodio anhidro
Procedimiento
1) Tome 3 g de tejido foliar sin nervadura.
2) Macere.
3) Aada 0,1 g de CaC03 y contine macerando.
4) Aada 10 ml, de acetona al 80% y contine macerando.
5) Tome el sobrenadante del macerado y llvelo al embudo de separacin. Tpelo para evitar
que se volatilice la acetona.
6) lave nuevamente el macerado con 10 ml, de acetona, lleve el sobrenadante al embudo de
separacin y tpelo.
7) Agregue 15 ml, de ter de petrleo al mortero y termine de macerar el tejido vegetal.
8) Vierta el sobrenadante en el embudo de separacin y tpelo.
9) Agite el embudo de separacin en forma rotatoria, teniendo cuidado de que el tapn no salga
expulsado del embudo.
10) Prepare una solucin de NaCl al 10%.
11) Tome 60 ml, de solucin de NaCl y adala al embudo de separacin. Tape y agite en forma
rotatoria.
12) En el embudo de separacin se forman dos capas. Retire el tapn y elimine la capa inferior
abriendo la llave de paso.
13) Repita los pasos 11 y 12 .:
14) Recoja la capa superior en un tubo de ensayo, tpelo y llvelo a la oscuridad para evitar la
incidencia de la luz.

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Cantidad de clorofila
Calibre el fotocolormetro utilizando acetona al 80% como blanco de calibracin. Tome la densidad
ptica del extracto de clorofila con el fotocolormetro, ajustando el aparato a longitudes de onda
entre 663 y 645 nm para cada medida.
Si el extracto est muy concentrado, haga una dilucin 1: 10 con acetona al 80%.
Cantidad de clorofila (a, b o total) en mg de clorofila por g de tejido (mg!g):

Clorofila a=

(12,7 x D 663)(2,69 x D 645) x V

1.000 xW

Clorofila b=

( 22,8 x D645)(4,48 x D663) x V

1.000 xW

Clorofila total=

(20,2 x D 645)+(8,02 x D 663) x V

1.000 xW

Donde:
D = densidad ptica o absorbancia.
V = volumen de extracto utilizado en la determinacin de la densidad ptica.
W = masa del material inicial (3 g de tejido foliar).
Resultados y preguntas

Presente los clculos de las cantidades de clorofila (total, a y b) en

Mg/g de tejido.
Bibliografa
Azcn-Bieto, J., Taln, M. (2003). Fundamentos de la Fisiologa Vegetal. McGraw-Hill Interamericana.
Edicions Universitat de Barcelona.
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Flrez R. y Cruz R 2004. Guas de laboratorio de fisiologa vegetal. Universidad Nacional de

Colombia. Bogot.
Larqu-Saavedra A. El agua en las plantas. Manual de prcticas de fisiologa vegetal. Trillas.
Mxico.
Salisbury, F. B., y Ross, C. W. (1994). Fisiologa Vegetal. Grupo Editorial
Iberoamericana. Mxico.

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