UNIVERSIDADE PARANAENSE UNIPAR

RECONHECIDA PELA PORTARIA MEC N 1580, DE 09/11/93 DOU 10/11/93.

MANTENEDORA ASSOCIAO PARANAENSE DE ENSINO E CULTURA APEC

Espectrofotometria na regio do visvel:

obteno de um espectro de absoro,
preparao de uma curva de calibrao e
determinao da concentrao de uma
amostra desconhecida.

Curso: Qumica 4 Ano.

Disciplina: Anlise Instrumental.
Acadmicas: Regiane da Silva Gomes
Alaine de Moura Lino
Jos Luiz Banhara Jnior

RA: 33890.
RA: 34229.
RA: 33875.

Professor: Jos Gaspar Ferrarezi.

Abril 2007

INTRODUO
A espectrofotometria o mtodo de anlise ptico mais usado nas investigaes
biolgicas e fisico-qumicas. O espectrofotmetro um instrumento que permite comparar
a radiao absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade
desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substncia. Todas as
substncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente
transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visvel. A gua
absorve fortemente na regio do infravermelho. A absoro das radiaes ultravioletas,
visveis e infravermelhas dependem das estruturas das molculas, e caracterstica para
cada substncia qumica. Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia
absorvida: a energia radiante no pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das
substncias se deve a absoro de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide
sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas
no absorvidos. O instrumento usado na espectroscopia UV/VIS chamado de
espectrofotmetro. Para se obter informao sobre a absoro de uma amostra, ela
inserida no caminho ptico do aparelho. Ento, luz UV e/ou visvel em certo comprimento
de onda (ou uma faixa de comprimentos de ondas) passada pela amostra. O
espectrofotmetro mede o quanto de luz foi absorvida pela amostra. A intensidade da luz
antes de passar pela amostra simbolizada por I 0, e a intensidade da luz depois de passar
pela amostra simbolizada por I. A transmitncia da amostra definida pela razo (I / I0), a
qual normalmente expressa em porcentagem de transmitncia (%T). A partir dessa
informao, a absorbncia de ambos determinada para esse certo comprimento de onda ou
como uma funo de uma faixa de comprimentos de onda. Os espectrofotmetros mais
sofisticados normalmente fazem isso automaticamente. Existem dois tipos de
espectrofotmetros: de feixe simples e de feixe duplo.
Os espectrofotmetros so instrumentos de anlise que permitem:

Selecionar o comprimento de onda (lmbda) da radiao adequado anlise de um

determinado componente;

Medir a intensidade I do feixe emergente que corresponde a um determinado feixe

incidente I0, convertendo o sinal recebido no detector em medida de Absorbncia
para o comprimento de onda da anlise.

Determinar a concentrao de uma espcie em soluo a partir do grfico da

variao de absorbncia (ou transmitncia) em funo da concentrao de vrias
solues-padro.

A preciso dos comprimentos de onda para anlise chamada de bandas de passagem,

mais comum na ordem de 10nm. O espectro da anlise mais comum de 360nm a 1000nm
para a faixa visvel. Apesar de, as amostras poderem ser slidas (ou mesmo gasosas), elas
usualmente so lquidas. Uma cela transparente (ou seja, que no absorve radiao na faixa
de comprimentos de onda usada), comumente chamada de cubeta, preenchida com a
amostra lquida e inserida no espectrofotmetro. O caminho ptico L pela a amostra ento

a largura da cubeta. Espectrofotmetros mais simples (econmicos) usam cubetas com a

forma cilndrica (tubos de ensaio), porm os mais sofisticados usam cubetas retangulares,
geralmente com uma largura de 1 cm. Para espectroscopia apenas no visvel, simples
cubetas de vidro podem ser usadas, porm a espectroscopia no ultravioleta requer cubetas
especiais feitas de um material que (ao contrrio do vidro) no absorva luz UV, como o
quartzo. Um espectro ultravioleta-visvel essencialmente um grfico (ou plotagem) da
absorbncia versus o comprimento de onda na faixa do ultravioleta e/ou visvel. Tal
espectro pode facilmente ser produzido pelos espectrofotmetros mais sofisticados. O
comprimento de onda freqentemente representado pelo smbolo . Da mesma forma,
para uma dada substncia, um grfico psilon; vs. pode ser feito ou usado se um j est
disponvel. Para uma dada substncia, o comprimento de onda no qual ocorre o mximo de
absoro chamado de max (lmbda mximo).
OBJETIVOS
Preparao de uma curva de calibrao e determinao da concentrao de uma
amostra desconhecida.
MATERIAIS UTILIZADOS
- Bales volumtricos de 25mL;
- Bquer de 50mL;
- Pipeta graduada de 5mL;
- Conta-gotas;
- gua destilada (solvente branco);
- Soluo padro de KMnO4 a 0,002 mol/L;
- Cubetas;
- Espectrofotmetro.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Etapa 1: Primeiramente, pepitou-se 2,5 mL da soluo padro de KMnO4 0,002mol/L
para um balo volumtrico de 25mL. Completou-se o volume do balo com gua destilada,
e posteriormente, agitou-se a soluo para homogeneizar a mistura. Como a gua foi o
solvente da soluo, utilizada como o branco, colocou-se a mesma em uma cubeta,
cuidadosamente, para no danificar a cubeta, e interferir na leitura. No aparelho utilizado,
contm 3 compartimentos para o cmodo das cubetas. Em um compartimento, colocou-se a
cubeta contendo o branco (gua destilada), e em outro compartimento colocou-se a cubeta
contendo a soluo de KMnO4 diluda. Calibrou-se com o branco o espectrofotmetro,
eliminando a diferena de absorbncia do branco, promovendo ento a leitura real de
absorbncia da soluo. Feito a calibrao, configurou-se o aparelho em um comprimento
de onda () de 450nm, e com o auxlio de uma alavanca fixa no aparelho, pode-se
movimentar as cubetas do compartimento 01(branco) e o compartimento 02(soluo de
KMnO4) para o feixe de luz, verificando-se a absorbncia neste comprimento. Calibrou-se
novamente o aparelho, utilizando-se a alavanca para movimentar o compartimento 01(onde
se encontra a cubeta com o branco), alinhando-se esta ao feixe de luz, para zerar a diferena
de absorbncia do solvente. Programou-se o aparelho para detectar a absorbncia no
comprimento de onda () de 460nm. Com auxlio da alavanca, colocou-se a soluo diluda
alinhada ao feixe de luz, para medir a absorbncia dessa regio. O procedimento calibrao,

aferimento e coleta de dados, foram realizados a cada 10 nm, de 450nm a 600nm.

Etapa 2: Foram utilizados 5 bales volumtricos de 25mL, numerados de 1 a 5. No balo
n. 1, pipetou-se 1,5mL de KMnO4 e transferiu-se para um balo, e completou-se o volume,
com o auxlio de um conta-gotas, at ao menisco com gua destilada. Em seguida, pipetouse 2,0mL de KMnO4, e transferiu-se para o balo n. 2, e completou-se seu volume com
gua destilada. No balo n. 3, foram adicionados 2,5mL de KMnO 4 e completou-se seu
volume com gua destilada. No balo n. 4, adicionou-se 3,0mL de KMnO 4 e completou-se
seu volume com gua destilada. E finalmente no balo n. 5, adicionou-se 3,5mL de uma
amostra de KMnO4 e completou-se seu volume com gua destilada. Em seguida,
analisaram-se as amostras dos 5 bales no espectrofotmetro. Como a gua foi o solvente
da soluo, utilizada como o branco, colocou-se a mesma em uma cubeta, cuidadosamente,
para no danific-la, afim de no comprometer a leitura. No aparelho utilizado, havia
apenas um compartimento para a leitura rente ao feixe de luz, onde foi colocada a cubeta
com o branco (gua destilada), para a calibrao, eliminando-se a diferena de absorbncia
do branco e promovendo ento a leitura real de absorbncia da soluo. Feito a calibrao,
configurou-se o aparelho em um comprimento de onda (mx.) de 520nm (lmbda mxima
encontrada na anlise da Etapa 1 ver Fig. 01). Retirou-se a cubeta com o branco do
aparelho, e em uma outra cubeta, adicionou-se uma quantidade da soluo contida no balo
n. 1, e colocou-a no aparelho para medir sua absorbncia. Anotou-se o valor obtido, e
retirou-se a cubeta do aparelho. Calibrou-se o aparelho novamente, colocando-se a cubeta
do branco no aparelho, zerando a diferena de absorbncia, para analisar a prxima
amostra. Posteriormente, preparou-se outra cubeta com a amostra da soluo contida no
balo n. 2 e colocou-a no aparelho, obtendo-se assim o valor de absorbncia da mistura. O
procedimento calibrao, aferimento e coleta de dados, foram realizados em todos os
bales. Feito isso, mediu-se tambm a absorbncia da amostra problema, e anotou-se o
resultado.
RESULTADOS E DISCUSSES
Com os dados coletados na etapa 01, pode-se construir uma tabela demonstrativa (Tab.
1) dos dados referentes absorbncia da soluo de KMnO4.
Tab. 1 - Leitura da absorbncia da soluo de KMnO4.

Comp. de onda ( ) nm

Absorbncia

450

0,012

460

0,013

470

0,014

480

0,016

490

0,021

500

0,027

510

0,031

520

0,036

530

0,035

540

0,034

550

0,028

560

0,019

570

0,016

580

0,011

590

0,007

600

0,006

A tabela acima permite observar os valores de absoro da soluo de KMnO 4 em um

intervalo de 10 nm, cobrindo a faixa de 450 a 600nm. Analisando os valores de absoro
obtidos, foi possvel identificar comprimento de onda mximo (mx.), esboado
graficamente (Fig. 1) para melhor visualizao:

Fig. 1- Varredura da Absoro de KMnO4 a 0,002 Mol/L.

No grfico acima esboado, possvel observar o valor comprimento de onda mximo
(mx.) encontrado foi de 520 nm, para uma absorbncia de 0,036.
Na etapa 2, foram analisadas as solues dos cinco bales (de concentraes distintas),
a fim de verificar seus respectivos valores de absorbncia, no comprimento de onda de 520
nm (mx.),como se observa na tabela abaixo:
Tab.2 Leitura da absorbncia x mximo.

Balo

Comp. de onda
( ) nm

Absorbncia

520

0,026

520

0,031

520

0,037

520

0,043

520

0,050

* Amostra Problema

520

0,046

O valor do comprimento de onda mximo (mx.) 520 nm utilizado na tabela acima para
medir a absorbncia das cinco solues, foi encontrado na etapa 1. Na etapa 2, foi medida
tambm a absorbncia de uma amostra problema (*), de concentrao desconhecida.
Posteriormente, pode-se calcular as concentraes finais dos cinco bales analisados:

Balo 1:
1,5 ml soluo KMnO4 0,002 mol/L
C1 . V1= C2 . V2
0,002 . 1,5 = C2 . 25
C2 = 1,2x10-4 mol/L
Balo 2:
2,0ml soluo KMnO4 0,002 mol/L
C1 . V1= C2 . V2
0,002 . 2,0 = C2 . 25
C2 = 1,6x10-4 mol/L
Balo 3:
2,5ml soluo KMnO4 0,002 mol/L
C1 . V1= C2 . V2
0,002 . 2,5 = C2 . 25
C2 = 2,0x10-4 mol/L
Balo 4:
3,0ml soluo KMnO4 0,002 mol/L
C1 . V1= C2 . V2
0,002 . 3,0 = C2 . 25
C2 = 2,4x10-4 mol/L

Balo 5:
3,5ml soluo KMnO4 0,002 mol/L
C1 . V1= C2 . V2
0,002 . 3,5 = C2 . 25
C2 = 2,8x10-4 mol/L
Depois de encontrados os valores das concentraes finais das solues dos cinco
bales analisados, pde-se montar a seguinte tabela demonstrativa:
Tab.3 Tabela demonstrativa de dados.

Balo

Comp. de onda
( ) nm

Absorbncia

Concentrao

520

0,026

1,2E-4

520

0,031

1,6E-4

520

0,037

2,0E-4

520

0,043

2,4E-4

520

0,05

2,8E-4

A tabela acima mostra as concentraes finais encontradas para cada soluo (exceto a
soluo problema), suas respectivas absorbncias em funo de um comprimento de onda
determinado. A partir destas, pde-se montar o seguinte grfico:

Fig.2 Variao da Concentrao de KMnO4 x Absorbncia (520nm).

O grfico acima (Fig.2), permite observar a variao da concentrao da soluo
padro de Permanganato de Potssio (KMnO 4) em funo da absorbncia. A partir dos
resultados obtidos no grfico, pde-se encontrar a linearidade da reta R= 0,99835 (valor da

reta) e atravs de sua equao, calcular a concentrao da amostra problema:

Equao da reta:
y = a + b.x
0,046 = 0,0074 + 150 x
150x = 0,0386
x = 2,573.10-4 mol/L
Depois de calculadas as concentraes em mol/L da amostra problema e das demais
5 solues, converteu-se as mesmas em ppm como segue os clculos abaixo:
Amostra problema:
1 mol KMnO4 ---------- 158,04 g/mol
2,573 .10-4 mol ---------- x
x = 0,04067 g/L
Como:
1 mg --------- 10-3g/L
x ------------- 0,04067g/L
x = 40,67 mg/L ou 40,67 ppm
Balo 1:
1 mol KMnO4 ---------- 158,04 g/mol
1,2 .10-4 mol
---------- x
x = 0,01896 g/L
Como:
1 mg --------- 10-3g/L
x ------------- 0,01896 g/L
x = 18,96 mg/L ou 18,96 ppm

Balo 2:
1 mol KMnO4 ---------- 158,04 g/mol
1,6 .10-4 mol
---------- x
x = 0,02529 g/L
Como:
1 mg --------- 10-3g/L
x ------------- 0,02529 g/L
x = 25,29 mg/L ou 25,29 ppm

Balo 3:
1 mol KMnO4 ---------- 158,04 g/mol
2,0 .10-4 mol
---------- x
x = 0,03161 g/L
Como:
1 mg --------- 10-3g/L
x ------------- 0,03161 g/L
x = 31,61 mg/L ou 31,61 ppm
Balo 4:
1 mol KMnO4 ---------- 158,04 g/mol
2,4 .10-4 mol
---------- x
x = 0,03793 g/L
Como:
1 mg --------- 10-3g/L
x ------------- 0,03793 g/L
x = 37,93 mg/L ou 37 ,93 ppm
Balo 5:
1 mol KMnO4 ---------- 158,04 g/mol
2,8 .10-4 mol
---------- x
x = 0,04425 g/L
Como:
1 mg --------- 10-3g/L
x ------------- 0,04425 g/L
x = 44,25 mg/L ou 44,25 ppm
Para melhor visualizao, os valores calculados foram dispostos na tabela de dados
abaixo:
Tab.4 - Converso da concentrao (mol/L) de KMnO4 em ppm.
Balo
Conc. (Mol/L)
Conc. (ppm)
1
1,20E-04
18,96
2

1,60E-04

25,28

2,00E-04

31,6

2,40E-04

37,93

2,80E-04

44,25

* Amostra Problema

2,57E-04

40,67

A tabela 4 mostra a converso das concentraes em mol/L para ppm de todas as

solues analisadas, inclusive da amostra problema. Assim, pode-se esboar os valores das
concentraes em ppm graficamente:

Fig.3 Variao da Concentrao (ppm) de KMnO4 x Absorbncia.

A figura 3 expressa os valores de concentrao de KMnO 4 em ppm, em funo das
respectivas absorbncias para cada soluo. A amostra problema no foi includa no
grfico, entretanto, analisando-se sua concentrao em relao ao grfico, possvel
observar que o valor da mesma no fugiu da linha de tendncia das demais concentraes
analisadas.

CONCLUSES
Com base nos resultados observados, pde-se concluir que a curva de calibrao est
de forma linear com os pontos obtidos das concentraes das solues analisadas, e que a
margem de erro foi pequena, tendo em vista que o coeficiente linear (R) apresentou um
valor muito prximo de 1, aproximadamente 0,99835. Contudo, imprescindvel ressaltar
que para se obter uma curva de calibrao perfeita, e/ou com a menor margem de erro
possvel, a fim de no comprometer os resultados do experimento; deve-se estar atento
durante toda execuo do procedimento, tanto para pipetar a quantidade correta de soluo,
bem como cuidar para no ultrapassar a marcao do menisco ao preencher o volume dos
bales. Deve-se tambm, tomar o mximo cuidado ao manusear as cubetas a fim de evitar
as perdas por reflexo e espalhamento, lembrando-se que a cubeta de referncia deve conter
o mesmo solvente utilizado (branco). Outro fator relevante, diz respeito ao nmero de
pontos para construo da curva de calibrao, que deve ser de no mnimo 5 ou 6, para
maior certeza na determinao da concentrao da amostra.

Atravs do grfico (fig.2) pode-se gerar a equao da reta, e assim pode-se e calcular e
obter o valor da concentrao da amostra problema, de 2,573.10-4 mol/L e/ou 40,67 ppm.
BIBLIOGRAFIAS
SKOOG, Douglas A., HOLLER, F. James, NIENAM, Timothy A. Princpios de anlise
instrumental; Traduo: Ignez Caracelli et al. 5 ed. Bookman: Porto Alegre, 2002, p. 194,
276-297.
<http://pt.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometria> Acesso em: 04 abr 2007.