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ANLISIS CROMATOGRFICOS
CROMATOGRAFIA GASEOSA (CG)
2011
Instrumentacin
Gas Portador
Detectores
Aplicaciones
Referencias
Gas aportador
El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con el analito o la
columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argn, nitrgeno, hidrgeno o
dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector
empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o empleando un generador,
especialmente en el caso del nitrgeno y del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de
manmetros y reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema de
deshidratacin del gas, como puede ser un tamiz molecular.
Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un primer manmetro se
sita a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del cromatgrafo, donde
se regula el flujo. Las presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a
caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas
capilares. Para comprobar el caudal se puede utilizar un rotmetro o un simple medidor de
pompas de jabn, el cual da una medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la
columna.
Si es necesaria una reproducibilidad del tamao de muestra inyectado se puede usar una
vlvula de seis vas o vlvula de inyeccin, donde la cantidad a inyectar es constante y
determinada por el tamao del bucle de dicha vlvula.
Si la columna empleada es ordinaria, el volumen a inyectar ser de unos 20 L, y en el caso
de las columnas capilares dicha cantidad es menor, de 10-3 L. Para obtener estas
cantidades, se utiliza un divisor de flujo a la entrada de la columna que desecha parte del
analito introducido.
En caso de muestras slidas, simplemente se introducen en forma de disolucin, ya que en
la cmara de vaporizacin instantnea el disolvente se pierde en la corriente de purga y no
interfiere en la elucin.
Segn las curvas de Van Demter (HEPT vs. Velocidad Lineal), el mejor gas a usar en la
columna cromatogrfica como portador de los analitos es el hidrgeno, sin embargo dada
su peligrosidad, es ms usado como gas de encendido en el detector FID, junto con el aire.
Detectores
El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de determinar cundo ha salido el
analito por el final de la columna. Las caractersticas de un detector ideal son:
Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo sale analito
y cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de
analito.
CO2, SO2, agua y xidos de nitrgeno. Este hecho, ms que limitar el mbito de aplicacin
de este detector, permite el anlisis de muestras contaminadas con alguno de los
compuestos mencionados.
Ventajas:
Desventajas:
Funcionamiento
Se emplean dos pares de elementos o sensores, uno de ellos en el flujo de efluente de la
columna y el otro en la corriente de gas previa a la cmara de inyeccin de la muestra (gas
limpio). En el esquema elctrico Figura b) se muestran como muestra y referencia,
respectivamente. Mediante este montaje elctrico, se consigue compensar el efecto de los
cambios de presin, caudal y potencia elctrica, midindose nicamente los cambios en la
conductividad del gas.
En la actualidad se utilizan tambin los sensores de filamento nico, los cuales carecen de
deriva en la lnea base, se equilibran rpidamente y son muy sensibles. El funcionamiento
de este sensor consiste en una cmara de 5 l que contiene un pequeo filamento. Sobre l
se hacen pasar alternativamente el gas de referencia y el de salida de la columna, con una
frecuencia de 10 Hz, obtenindose una seal elctrica de 10 Hz cuya amplitud depende de
la diferencia entre la conductividad trmica del gas de referencia y del gas de salida. Otra
ventaja de usar una seal de 10 Hz es que de esta forma se elimina el ruido trmico del
sistema.
Los gases empleados como portadores permiten distinguir con facilidad cundo el gas lleva
analito, debido a que las conductividades del hidrgeno y helio son de 6 a 10 veces
Simplicidad.
Detector no destructivo.
Desventajas:
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Desventajas:
Bajo rango dinmico lineal, 10 unidades.
Precauciones de uso debido a la presencia de material
El curio (Unidad)
El curio (abreviacin Ci) es una antigua unidad de radiactividad, igual a 3,71010
becquereles (desintegraciones nucleares por segundo), que es ms o menos la actividad de
1g de
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Ra.
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Definiciones:
Plasma (estado de la materia)
En fsica y qumica, un plasma es un sistema que contiene un nmero significativo de
partculas cargadas (iones) libres y cuya dinmica presenta efectos colectivos dominados
por las interacciones electromagnticas de largo alcance entre las mismas. Con frecuencia
se habla del plasma como un estado de agregacin de la materia con caractersticas propias,
diferencindolo de este modo del estado gaseoso, en el que no existen efectos colectivos
importantes.
Microondas:
Con el trmino microondas se identifica a las ondas electromagnticas en el espectro de
frecuencias comprendido entre 300 MHz y 300 GHz.
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Colimador:
Un colimador es un sistema que a partir de un haz (de luz, de electrones,...) divergente
obtiene un "haz" paralelo. Sirve para homogeneizar las trayectorias o rayos que emitidos
por una fuente salen en todas direcciones y obtiene un chorro de partculas o conjunto de
rayos con las mismas propiedades. Los colimadores pticos suelen estar formados
fundamentalmente por un espejo parablico, unas lentes y algunos diafragmas. En el caso
de los colimadores para chorros de partculas elementales cargadas se emplean campos
elctricos y magnticos y diafragmas. Para el caso de partculas neutras se emplean
diafragmas para impedir el paso de partculas que se separan de la direccin elegida y
algunos filtros absorbentes para eliminar ciertos rangos de energa.
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Detector termoinico
El detector termoinico (TID, de thermoionic detector) es un detector usado en
cromatografa de gases. Es selectivo para compuestos orgnicos fosforados y nitrogenados,
aunque su respuesta no es igual para ambos elementos, siendo para el fsforo 10 veces
mayor que para el nitrgeno. Es unas 500 veces ms sensible que el detector de ionizacin
de llama para compuestos fosforados y unas 50 veces ms sensible para compuestos
nitrogenados (tpicamente aminas, nitratos y otras especies). Debido a esta sensibilidad
obtenida con compuestos fosforados, su uso es amplio en la determinacin de pesticidas
fosforados.
Este detector tiene un principio de funcionamiento parecido al detector de ionizacin de
llama: el gas de salida de la columna se mezcla con hidrgeno y se quema. Este gas pasa
alrededor de una esfera de rubidio calentada elctricamente hasta unos 600-800C, y
mantenida a un potencial de 180 V respecto al colector, alrededor de la cual se forma un
plasma. Mediante un mecanismo no muy bien establecido, se forma una gran cantidad de
iones a partir de las molculas fosforadas y nitrogenadas, y al tener un medio conductor
dicha diferencia de potencial permite la aparicin de una pequea corriente elctrica
amplificable y medible. Por lo general, la intensidad de la corriente ser proporcional al
nmero de iones formados, y por tanto a la cantidad de analito.
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El material de relleno ideal consiste en pequeas partculas, esfricas y uniformes, con una
buena resistencia mecnica, para tener una mxima superficie donde interaccionar la fase
estacionaria y el analito. La superficie especfica mnima ha de ser de 1 m/g. Como todos
los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas temperaturas (~400C) y
humectarse uniformemente con la fase lquida estacionaria durante el proceso de
fabricacin. El material preferido actualmente (2005) es la tierra de diatomeas natural,
debido a su tamao de poro natural. Estas especies, ya extinguidas, utilizaban un sistema de
difusin molecular para tomar nutrientes del medio y expulsar sus residuos. Por tanto,
debido a que el sistema de adsorcin superficial del analito y la fase estacionaria es
parecido, son materiales especialmente tiles.
El tamao es crtico a la hora de darse el proceso de interaccin del analito, y a menores
tamaos la eficacia de la columna es mejor. Pero existe el problema de la presin necesaria
para hacer circular un caudal estable de gas portador por la columna, ya que dicha presin
es inversamente proporcional al cuadrado del dimetro de dichas partculas. As, el tamao
mnimo para usar presiones mximas de 50 psi es de 250 a 149 m.
Columnas capilares
Las columnas capilares son de dos tipos bsicos: las de pared recubierta (WCOT) y las de
soporte recubierto (SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la pared
interna se ha recubierto con una finsima capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT
tienen en su parte interna una fina capa de material adsorbente como el empleado en las
columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se ha adherido la fase estacionaria. Las
ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de carga de esta ltima, ya
que en su fabricacin se emplean mayores cantidades de fase estacionaria, al ser la
superficie de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar estn las WCOT,
luego las SCOT y por ltimo las columnas de relleno.
Las columnas WCOT se fabrican a partir de slice fundida, conocidas como columnas
tubulares abiertas de slice fundida o FSOT. Estas columnas se fabrican a partir de slice
especialmente pura, sin apenas contenido de xidos metlicos. Debido a la fragilidad
inherente a este material, en el mismo proceso de obtencin del tubo se recubre con una
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capa de poliimida, de esta forma la columna puede enrollarse con un dimetro de unos
pocos centmetros. Estas columnas, con propiedades como baja reactividad, resistencia
fsica y flexibilidad, han sustituido a las WCOT clsicas.
Las columnas FSOT tienen dimetros internos variables, entre 250 y 320 m (para
columnas normales) y 150-200 m para columnas de alta resolucin. Estas ltimas
requieren menor cantidad de analito y un detector ms sensible, al eluir menor cantidad de
gas. Existen asimismo columnas macrocapilares con dimetros de hasta 530 m, que
admiten cantidades de analito comparables a las de relleno pero con mejores prestaciones.
En estas columnas existe un problema debido a la adsorcin del analito sobre la superficie
de la slice fundida, adsorcin debida a la presencia de grupos silanol (Si-OH), los cuales
interaccionan fuertemente con molculas polares orgnicas. Este inconveniente se suele
solventar inactivando la superficie por sililacin con dimetilclorosilano (DMCS). La
adsorcin debida a los xidos metlicos se ve paliada en gran parte por la elevada pureza de
la slice empleada.
La fase estacionaria
Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida inmovilizada son:
1. Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de selectividad )
adecuados al analito.
2. Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al menos
100C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno.
3. Baja reactividad.
4. Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin.
Existen como mucho una docena de disolventes con estas caractersticas. Para elegir uno,
debe tenerse en cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor
polaridad deber tener la fase estacionaria. Algunas fases estacionarias utilizadas
actualmente (2005) son:
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Aplicaciones
La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad para separar
mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y sistemas bioqumicos. Su otra
aplicacin es como mtodo para determinar cuantitativa y cualitativamente los
componentes de la muestra. Para el anlisis cualitativo se suele emplear el tiempo de
retencin, que es nico para cada compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo
gas portador, rampa de temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones
cuantitativas, integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con los
calibrados adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de cada analito
Instrumentacin
Debido a las caractersticas de la fase mvil (alta presin y temperatura) se emplean
equipos parecidos a los de HPLC, con varias diferencias:
El uso de un restrictor, empleado para poder mantener por una parte la presin en el
interior de la columna y por otra parte permitir la bajada de la presin a la salida
para que el fluido supercrtico (SF en adelante) pase al estado gaseoso y pueda ser
detectado adecuadamente el analito disuelto.
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Fases estacionarias
Se pueden emplear, al igual que en la GC, las columnas capilares o de relleno, prefirindose
las primeras. Las dimensiones son parecidas en longitud, de 10 a 20 m, y el dimetro
interno es bastante menor, de 0,05 a 0,10 mm. La pelcula interna es de siloxano
entrelazado y polimerizado. Si se emplean columnas de relleno, su dimetro interno vara
entre 0,5 y 4,6 mm, y el grosor de la partcula de relleno es de 3 a 10 m. En este caso, el
recubrimiento es parecido al empleando en HPLC de reparto.
Fases mviles
La fase mvil estrella en la SFC es el dixido de carbono, por sus excelentes propiedades:
Inodoro
No txico
Fcil de obtener
Barato
No inflamable
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El CO2 tiene la ventaja de que se puede obtener fcilmente como fluido supercrtico. Su
temperatura crtica es de 31C y la presin crtica de 72,9 atm, condiciones realmente
asequibles y por debajo del rango de condiciones usuales en la HPLC.Otras fases mviles
tambin probadas y empleadas son el etano, pentano, dietilter, amonaco, tetrahidrofurano,
diclorofluorometano y xido nitroso.
Detectores
Se puede emplear el detector de ionizacin de llama (tambin usado en GC), por sus
caractersticas de universalidad (permite detectar casi cualquier compuesto orgnico), alta
sensibilidad y bajo mantenimiento. El espectrmetro de masas tambin tiene utilidad, al
tener una salida en fase gas, y detectores espectrofotomtricos como el de infrarrojos,
ultravioleta, el de emisin por fluorescencia, el termoinico y el fotomtrico de llama.
Aplicaciones
La SFC se aplica a una gran variedad de compuestos, entre los que podemos citar drogas,
alimentos, herbicidas, tensioactivos, polmeros y aditivos, explosivos o combustibles
fsiles.
Acoplamiento de la cromatografa de gases con mtodos espectroscpicos
La cromatografa de gases a menudo se combina con otras tcnicas selectivas como la
espectroscopia y la electroqumica. Los mtodos que resultan se llaman mtodos acoplados,
y proporcionan al qumico una potente herramienta para la identificacin de componentes
de una mezcla compleja.
En los primeros mtodos acoplados, los gases efluentes de una columna cromatogrfica,
despus de ser detectados por un detector no destructivo y no selectivo, se recogan como
fracciones separadas en una trampa fra. La composicin de cada una de las fracciones se
investigaba por resonancia magntica nuclear, infrarrojo, o espectroscopia de masas, o por
medidas electroanalticas. Una importante limitacin en esta metodologa era que las
cantidades de soluto que contenan las fracciones eran muy pequeas (normalmente
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Referencias
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