MATERIA: QUIMICA II FECHA: 14 DE NOVIEMBRE DE 2.014 TEMA: ADN FORENSE ALUMNO: FERRERO, FRANCO DANIEL
1. 2. 3. 4. 5.
La reaccin en cadena de la polimerasa: Breve descripcin.
Tipos de ADN y su uso en ciencias forenses. ADN nuclear El uso del ADN no codificante en ciencias forense. Nociones de hibridacin del ADN por el mtodo southern Blotting DESARROLLO 1) La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una tcnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la clula de duplicar el ADN. Se trata de una tcnica usada para crear un gran nmero de copias de un segmento de ADN, que utiliza ciclos de desnaturalizacin, apareamiento con cebadores y extensin por una ADN polimerasa termoresistente. Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de replicacin y, a continuacin, dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente. La reaccin en cadena de la polimerasa fue perfeccionada por Kary Mullis perteneciente a la Cetus Corporation en California, en la dcada de 1980. Por lo general, la PCR es una tcnica comn y normalmente indispensable en laboratorios de investigacin mdica y biolgica para una gran variedad de aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonacin de ADN para la secuenciacin, la filogenia basada en ADN, el anlisis funcional de genes, el diagnstico de trastornos hereditarios, la identificacin de huellas genticas (usada en tcnicas forenses y test de paternidad) y la deteccin y diagnstico de enfermedades infecciosas. 2) USO FORENSE DEL ADN: El ADN se ha convertido en una de las herramientas ms precisas para la identificacin de individuos y es utilizado por miles de laboratorios fundamentalmente en: A_ La identificacin de vestigios biolgicos de inters en la investigacin criminal de muy diversos delitos. B_ La identificacin de restos humanos y personas desaparecidas.
C_ La investigacin biolgica de la paternidad y otras relaciones
de parentesco. Un perfil gentico no es ms que un patrn de fragmentos cortos de ADN ordenados de acuerdo a su tamao que son caractersticos de cada individuo. Dicho patrn es fcilmente convertible en un sencillo cdigo numrico muy fcil de almacenar y comparar con un alto poder de discriminacin. Obviamente, cuanto ms baja es la probabilidad de encontrar otro perfil igual entre individuos no relacionados genticamente, mayor es el poder de discriminacin. Recurdese que tanto mtADN como Cromosoma Y permiten diferenciar realmente linajes maternos y paternos, respectivamente. TIPOS DE ADN QUE SE USAN EN CIENCIAS FORENSE: Adems del ADN autosmico heredado al 50% de nuestros progenitores, otros dos tipos de ADN humano tienen gran inters en las investigaciones forenses. El ADN mitocondrial (mtADN) es un pequeo genoma localizado dentro de las mitocondrias que es heredado por va materna. Todos los miembros de un mismo grupo familiar que compartan esta lnea tendrn el mismo mtADN. Dado que la variabilidad gentica de su secuencia es menor que la del genoma nuclear, el perfil gentico que se obtiene presenta un poder discriminacin mucho ms limitado. Por otro lado, su mayor ventaja es que se encuentra en un gran nmero de copias en cada clula (hay entre 100 y 1000 copias de mtADN por una de genoma nuclear) y, por tanto, se puede detectar en muchos casos en los que no es posible la obtencin de ADN nuclear (p.ej: tallos de pelos, restos seos antiguos,etc). El estudio del ADN del cromosoma Y, implica que todos los miembros varones de un grupo familiar que compartan la lnea paterna tienen el mismo haplotipo de cromosoma Y. El anlisis de sus regiones STR (Y-STR) permite obtener un patrn gentico especfico del varn, lo que resulta muy til en la identificacin gentica de restos de semen y otros fluidos biolgicos en los casos de agresiones sexuales a mujeres. 3) ADN NUCLEAR: Existen aproximadamente tres millones de pares de bases en una copia simple del genoma humano. Dentro de la clula humana el ADN se encuentra en el ncleo de la clula
(ADN nuclear) el cual, esta dividido en los cromosomas que son
paquetes densos de ADN protegidos por protenas histonas. El genoma humano consiste de 22 pares de cromosomas autosmicos y un par de cromosomas sexuales. As, las clulas humanas normales contienen 46 cromosomas agrupados en 23 pares. Mientras que los hombres estn designados por XY debido a que contienen una copia del cromosoma X y otra del cromosoma Y. Por tanto, las mujeres contienen dos copias del cromosoma X y son denominadas como XX. En la genmica y disciplinas relacionadas, secuencias de ADN no codificantes son componentes de ADN de un organismo que no codifican secuencias de protenas. Algunos de ADN no codificante se transcribe en molculas de ARN no codificantes funcionales, mientras que otros no se transcriben o dan lugar a ARN transcripciones de funcin desconocida. La cantidad de ADN no codificante vara en gran medida entre las especies. Por ejemplo, ms del 98% del genoma humano es ADN no codificante, mientras que slo aproximadamente el 2% de un genoma bacteriano tpico es ADN no codificante. En un principio, una gran proporcin de ADN no codificante no tena ninguna funcin biolgica conocida y era por lo tanto a veces referido como "ADN basura", sobre todo en la prensa. Algunas secuencias pueden no tener una funcin biolgica para el organismo, tales como retrovirus endgenos. Sin embargo, muchos tipos de secuencias de ADN no codificantes tienen importantes funciones biolgicas, incluyendo la regulacin de la transcripcin y de la traduccin de las secuencias codificantes de protenas. Otras secuencias no codificantes tienen probabilidades, pero que an no determinada, funciones. La cantidad de ADN genmico total vara ampliamente entre los organismos, y la proporcin de codificacin y no codificadora de ADN dentro de estos genomas vara en gran medida tambin. Ms del 98% del genoma humano no codifica las secuencias de protenas, incluyendo la mayora de las secuencias dentro de intrones y el ADN ms intergnica. TIPOS DE SECUENCIAS DE ADN NO CODIFICANTES: Noncoding ARN funcional: ARN no codificantes son molculas de ARN funcionales que no se traducen en protenas. Ejemplos de ARN no codificantes incluyen ARN
ribosomal, ARN de transferencia, ARN Piwi-que interactan y
microRNA. Cis-y trans-elementos reguladores: Cis-elementos reguladores son secuencias que controlan la transcripcin de un gen cercano. Cis-elementos pueden estar situados en 5 'o 3' regiones no traducidas o dentro de intrones. Transelementos reguladores controlan la transcripcin de un gen distante. Los intrones: Los intrones son secciones no codificantes de un gen, que se transcribe en la secuencia de ARNm precursor, pero en ltima instancia eliminan mediante corte y empalme de ARN durante el procesamiento para madurar ARN mensajero. Muchos intrones parecen ser elementos genticos mviles. Pseudogenes: Los pseudogenes son secuencias de ADN, relacionados con genes conocidos, que han perdido su capacidad de codificacin de la protena o de otro modo ya no se expresa en la clula. Los pseudogenes surgen de retrotransposicin o duplicacin genmica de los genes funcionales, y se convierten en "fsiles genmicos" que son no funcionales debido a mutaciones que impiden la transcripcin del gen, tal como dentro de la regin promotora del gen, o fatalmente alteran la traduccin del gen, tales como codones de parada prematuros o desplazamientos del marco 4) Funciones de ADN no codificante: Muchas secuencias de ADN no codificantes tienen importantes funciones biolgicas como indican los estudios de genmica comparativa que reportan algunas regiones de ADN no codificante que estn altamente conservadas, a veces en escalas de tiempo que representan a cientos de millones de aos, lo que implica que estas regiones no codificantes se encuentran bajo una fuerte presin evolutiva y positiva seleccin. Algunas secuencias especficas de ADN no codificante pueden ser caractersticas esenciales de la estructura cromosmica, la funcin centrmero y el reconocimiento homlogo en la meiosis. Proteccin del genoma: ADN no codificador genes separados el uno del otro con las brechas de largo, por lo
que la mutacin en un gen o parte de un cromosoma, por
ejemplo, supresin o insercin, no tiene la "Mutacin" en todo el cromosoma. Cuando la complejidad del genoma es relativamente alta, como en el caso del genoma humano, no slo los genes diferentes, sino tambin en el interior de un gen hay lagunas de intrones para proteger todo el segmento de codificacin para reducir al mnimo los cambios causados por la mutacin. Interruptores genticos: Algunas secuencias de ADN no codificantes son "interruptores" genticos que regulan cundo y dnde se expresan los genes. Regulacin de la expresin gnica: Algunas secuencias de ADN no codificantes determinar los niveles de expresin de diversos genes. Factor de transcripcin sitios: Algunas secuencias de ADN no codificantes determinan que los factores de transcripcin se unen. Un factor de transcripcin es una protena que se une a secuencias de ADN no codificantes especficas, controlando de este modo el flujo de la informacin gentica del ADN a ARNm. Los factores de transcripcin actan en muy diferentes lugares en los genomas de diferentes personas. 5) METODO SOUTHER BLOTTING: La localizacin de una secuencia particular de nucletidos dentro de un fragmento de ADN genmico se consigue mediante el mtodo descrito en 1975 por Southern. El ADN genmico que se desea analizar se digiere con una o ms enzimas de restriccin y los fragmentos resultantes se separan por electroforsis sobre gel de agarosa. Seguidamente, se desnaturaliza el ADN in situ y se transfiere el mismo desde el gel a un soporte de papel secante (normalmente un papel de nitrocelulosa o una membrana de niln) (*). Durante la transferencia del ADN desde el gel al papel secante, las posiciones de los distintos fragmentos se mantienen. El ADN fijado al filtro se hibrida (al encontrarse desnaturalizado cada una de las cadenas es capaz de aparearse con una cadena complementaria exgena) con un RNA o ADN marcado con
con un istopo radioactivo (usualmente 14-C o 32-P) y el
compuesto marcado resultante se detecta por autoradiografa. De esta forma, se detectan las cadenas que son complementarias a las de la sonda empleada. La cantidad de ADN genmico necesaria para originar una hibridacin detectable depende de varios factores incluyendo la cantidad de genoma que es complementario de la sonda, el tamao de esta y su actividad especfica y la cantidad de ADN que es transferida al filtro. En las mejores condiciones, la tcnica permite detectar menos de 0.1 pg de ADN (aproximadamente una parte en tres millones).