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CARRERA: LICENCIATURA EN CRIMINALISTICA

MATERIA: QUIMICA II
FECHA: 14 DE NOVIEMBRE DE 2.014
TEMA: ADN FORENSE
ALUMNO: FERRERO, FRANCO DANIEL

1.
2.
3.
4.
5.

La reaccin en cadena de la polimerasa: Breve descripcin.


Tipos de ADN y su uso en ciencias forenses.
ADN nuclear
El uso del ADN no codificante en ciencias forense.
Nociones de hibridacin del ADN
por el mtodo southern
Blotting
DESARROLLO
1) La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una
tcnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la clula de
duplicar el ADN. Se trata de una tcnica usada para crear un gran
nmero de copias de un segmento de ADN, que utiliza ciclos de
desnaturalizacin, apareamiento con cebadores y extensin por
una ADN polimerasa termoresistente. Esta tcnica se fundamenta
en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar
hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas
temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recin
formadas entre s tras cada fase de replicacin y, a continuacin,
dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder
duplicarlas nuevamente. La reaccin en cadena de la polimerasa
fue perfeccionada por Kary Mullis perteneciente a la Cetus
Corporation en California, en la dcada de 1980. Por lo general, la
PCR es una tcnica comn y normalmente indispensable en
laboratorios de investigacin mdica y biolgica para una gran
variedad de aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonacin de
ADN para la secuenciacin, la filogenia basada en ADN, el anlisis
funcional de genes, el diagnstico de trastornos hereditarios, la
identificacin de huellas genticas (usada en tcnicas forenses y
test de paternidad) y la deteccin y diagnstico de enfermedades
infecciosas.
2) USO FORENSE DEL ADN: El ADN se ha convertido en una de
las herramientas ms precisas para la identificacin de individuos
y es utilizado por miles de laboratorios fundamentalmente en:
A_ La identificacin de vestigios biolgicos de inters en la
investigacin criminal de muy diversos delitos.
B_
La identificacin de restos humanos y personas
desaparecidas.

C_ La investigacin biolgica de la paternidad y otras relaciones


de parentesco.
Un perfil gentico no es ms que un patrn de fragmentos cortos
de ADN ordenados de acuerdo a su tamao que son
caractersticos de cada individuo. Dicho patrn es fcilmente
convertible en un sencillo cdigo numrico muy fcil de
almacenar y comparar con un alto poder de discriminacin.
Obviamente, cuanto ms baja es la probabilidad de encontrar otro
perfil igual entre individuos no relacionados genticamente,
mayor es el poder de discriminacin. Recurdese que tanto
mtADN como Cromosoma Y permiten diferenciar realmente linajes
maternos y paternos, respectivamente.
TIPOS DE ADN QUE SE USAN EN CIENCIAS FORENSE:
Adems del ADN autosmico heredado al 50% de nuestros
progenitores, otros dos tipos de ADN humano tienen gran inters
en las investigaciones forenses.
El ADN mitocondrial (mtADN) es un pequeo genoma localizado
dentro de las mitocondrias que es heredado por va materna.
Todos los miembros de un mismo grupo familiar que compartan
esta lnea tendrn el mismo mtADN. Dado que la variabilidad
gentica de su secuencia es menor que la del genoma nuclear, el
perfil gentico que se obtiene presenta un poder discriminacin
mucho ms limitado. Por otro lado, su mayor ventaja es que se
encuentra en un gran nmero de copias en cada clula (hay entre
100 y 1000 copias de mtADN por una de genoma nuclear) y, por
tanto, se puede detectar en muchos casos en los que no es
posible la obtencin de ADN nuclear (p.ej: tallos de pelos, restos
seos antiguos,etc).
El estudio del ADN del cromosoma Y, implica que todos los
miembros varones de un grupo familiar que compartan la lnea
paterna tienen el mismo haplotipo de cromosoma Y. El anlisis de
sus regiones STR (Y-STR) permite obtener un patrn gentico
especfico del varn, lo que resulta muy til en la identificacin
gentica de restos de semen y otros fluidos biolgicos en los
casos de agresiones sexuales a mujeres.
3) ADN NUCLEAR: Existen aproximadamente tres millones de
pares de bases en una copia simple del genoma humano. Dentro
de la clula humana el ADN se encuentra en el ncleo de la clula

(ADN nuclear) el cual, esta dividido en los cromosomas que son


paquetes densos de ADN protegidos por protenas histonas. El
genoma humano consiste de 22 pares de cromosomas
autosmicos y un par de cromosomas sexuales. As, las clulas
humanas normales contienen 46 cromosomas agrupados en 23
pares. Mientras que los hombres estn designados por XY debido
a que contienen una copia del cromosoma X y otra del
cromosoma Y. Por tanto, las mujeres contienen dos copias del
cromosoma X y son denominadas como XX.
En la genmica y disciplinas relacionadas, secuencias de ADN no
codificantes son componentes de ADN de un organismo que no
codifican secuencias de protenas. Algunos de ADN no codificante
se transcribe en molculas de ARN no codificantes funcionales,
mientras que otros no se transcriben o dan lugar a ARN
transcripciones de funcin desconocida. La cantidad de ADN no
codificante vara en gran medida entre las especies. Por ejemplo,
ms del 98% del genoma humano es ADN no codificante,
mientras que slo aproximadamente el 2% de un genoma
bacteriano tpico es ADN no codificante.
En un principio, una gran proporcin de ADN no codificante no
tena ninguna funcin biolgica conocida y era por lo tanto a
veces referido como "ADN basura", sobre todo en la prensa.
Algunas secuencias pueden no tener una funcin biolgica para el
organismo, tales como retrovirus endgenos. Sin embargo,
muchos tipos de secuencias de ADN no codificantes tienen
importantes funciones biolgicas, incluyendo la regulacin de la
transcripcin y de la traduccin de las secuencias codificantes de
protenas. Otras secuencias no codificantes tienen probabilidades,
pero que an no determinada, funciones. La cantidad de ADN
genmico total vara ampliamente entre los organismos, y la
proporcin de codificacin y no codificadora de ADN dentro de
estos genomas vara en gran medida tambin. Ms del 98% del
genoma humano no codifica las secuencias de protenas,
incluyendo la mayora de las secuencias dentro de intrones y el
ADN ms intergnica.
TIPOS DE SECUENCIAS DE ADN NO CODIFICANTES:
Noncoding ARN funcional: ARN no codificantes son
molculas de ARN funcionales que no se traducen en
protenas. Ejemplos de ARN no codificantes incluyen ARN

ribosomal, ARN de transferencia, ARN Piwi-que interactan y


microRNA.
Cis-y
trans-elementos
reguladores:
Cis-elementos
reguladores son secuencias que controlan la transcripcin de
un gen cercano. Cis-elementos pueden estar situados en 5 'o
3' regiones no traducidas o dentro de intrones. Transelementos reguladores controlan la transcripcin de un gen
distante.
Los intrones: Los intrones son secciones no codificantes de
un gen, que se transcribe en la secuencia de ARNm
precursor, pero en ltima instancia eliminan mediante corte
y empalme de ARN durante el procesamiento para madurar
ARN mensajero. Muchos intrones parecen ser elementos
genticos mviles.
Pseudogenes: Los pseudogenes son secuencias de ADN,
relacionados con genes conocidos, que han perdido su
capacidad de codificacin de la protena o de otro modo ya
no se expresa en la clula. Los pseudogenes surgen de
retrotransposicin o duplicacin genmica de los genes
funcionales, y se convierten en "fsiles genmicos" que son
no funcionales debido a mutaciones que impiden la
transcripcin del gen, tal como dentro de la regin
promotora del gen, o fatalmente alteran la traduccin del
gen, tales como codones de parada prematuros o
desplazamientos del marco
4) Funciones de ADN no codificante: Muchas secuencias
de ADN no codificantes tienen importantes funciones
biolgicas como indican los estudios de genmica
comparativa que reportan algunas regiones de ADN no
codificante que estn altamente conservadas, a veces en
escalas de tiempo que representan a cientos de millones de
aos, lo que implica que estas regiones no codificantes se
encuentran bajo una fuerte presin evolutiva y positiva
seleccin.
Algunas secuencias especficas de ADN no
codificante pueden ser caractersticas esenciales de la
estructura cromosmica, la funcin centrmero y el
reconocimiento homlogo en la meiosis.
Proteccin del genoma: ADN no codificador genes
separados el uno del otro con las brechas de largo, por lo

que la mutacin en un gen o parte de un cromosoma, por


ejemplo, supresin o insercin, no tiene la "Mutacin" en
todo el cromosoma. Cuando la complejidad del genoma es
relativamente alta, como en el caso del genoma humano, no
slo los genes diferentes, sino tambin en el interior de un
gen hay lagunas de intrones para proteger todo el segmento
de codificacin para reducir al mnimo los cambios causados
por la mutacin.
Interruptores genticos: Algunas secuencias de ADN no
codificantes son "interruptores" genticos que regulan
cundo y dnde se expresan los genes.
Regulacin de la expresin gnica: Algunas secuencias
de ADN no codificantes determinar los niveles de expresin
de diversos genes.
Factor de transcripcin sitios: Algunas secuencias de
ADN no codificantes determinan que los factores de
transcripcin se unen. Un factor de transcripcin es una
protena que se une a secuencias de ADN no codificantes
especficas, controlando de este modo el flujo de la
informacin gentica del ADN a ARNm. Los factores de
transcripcin actan en muy diferentes lugares en los
genomas de diferentes personas.
5) METODO SOUTHER BLOTTING: La localizacin de una
secuencia particular de nucletidos dentro de un fragmento
de ADN genmico se consigue mediante el mtodo descrito
en 1975 por Southern. El ADN genmico que se desea
analizar se digiere con una o ms enzimas de restriccin y
los fragmentos resultantes se separan por electroforsis
sobre gel de agarosa. Seguidamente, se desnaturaliza el
ADN in situ y se transfiere el mismo desde el gel a un
soporte de papel secante (normalmente un papel de
nitrocelulosa o una membrana de niln) (*). Durante la
transferencia del ADN desde el gel al papel secante, las
posiciones de los distintos fragmentos se mantienen. El ADN
fijado al filtro se hibrida (al encontrarse desnaturalizado cada
una de las cadenas es capaz de aparearse con una cadena
complementaria exgena) con un RNA o ADN marcado con

con un istopo radioactivo (usualmente 14-C o 32-P) y el


compuesto
marcado
resultante
se
detecta
por
autoradiografa. De esta forma, se detectan las cadenas que
son complementarias a las de la sonda empleada. La
cantidad de ADN genmico necesaria para originar una
hibridacin detectable depende de varios factores
incluyendo la cantidad de genoma que es complementario
de la sonda, el tamao de esta y su actividad especfica y la
cantidad de ADN que es transferida al filtro. En las mejores
condiciones, la tcnica permite detectar menos de 0.1 pg de
ADN (aproximadamente una parte en tres millones).