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GUIN DE

PRCTICAS
QUMICA ANALTICA
2 de Grado en Ingeniera Qumica
Mercedes Pina Menndez

NDICE
-DETERMINACIN DE HIERRO EN VINOS MEDIANTE ESPECTROSCOPA DE
ABSORCIN ATOMICA CON LLAMA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

INTRODUCCIN
FUNDAMENTO
MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
CLCULOS
PROCEDIMIENTO
TRATAMIENTO DE DATOS
APLICACIONES
CUESTIONARIO

-DETERMINACIN FLUORIMTRICA DE QUININA EN UN AGUA TNICA


1.
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7.
8.

INTRODUCCIN
FUNDAMENTO
MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
CLCULOS
PROCEDIMIENTO
TRATAMIENTO DE DATOS
APLICACIONES
CUESTIONARIO

-DETERMINACIN Y CUANTIFICACIN DE COMPUESTOS VOLTILES DEL


AROMA MEDIANTE CROMATOGRAFA DE GASES
1.
2.
3.
4.
5.
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8.

INTRODUCCIN
FUNDAMENTO
MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
CLCULOS
PROCEDIMIENTO
TRATAMIENTO DE DATOS
APLICACIONES
CUESTIONARIO

-DETERMINACIN DE HIERRO (II) EN COMPRIMIDOS MEDIANTE ANLISIS


POR INYECCIN EN FLUJO
1.
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4.
5.
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8.

INTRODUCCIN
FUNDAMENTO
MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
CLCULOS
PROCEDIMIENTO
TRATAMIENTO DE DATOSS
APLICACIONES
CUESTIONARIO

-DETERMINACIN DE HIERRO (II) EN UN PREPARADO FARMACUTICO


MEDIANTE VALORACIN CON KMnO4
1.
2.
3.
4.

INTRODUCCIN Y FUNDAMENTO
MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
PROCEDIMIENTO
TRATAMIENTO DE DATOS

- IDENTIFICACIN Y DETERMINACIN DE CAFENA EN DIFERENTES


MUESTRAS (CAF, T Y BEBIDAS DE COLA
1.
2.
3.
4.
5.
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8.

INTRODUCCIN
FUNDAMENTO
MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
CLCULOS
PROCEDIMIENTO
TRATAMIENTO DE DATOS
APLICACIONES
CUESTIONARIO

DETERMINACIN DE HIERRO EN VINOS MEDIANTE


ESPECTROMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON LLAMA.

1. INTRODUCCIN
Diversos alimentos y bebidas, cuentan con la presencia en su composicin de
diversos metales, que proceden de los suelos en los que se cultivan, ya que a ellos
llegan lodos residuales, fertilizantes qumicos utilizados en la agricultura, etc El hierro
es uno de esos metales, y es necesario conocer su contenido en los alimentos para
determinar si es posible su comercializacin o no.
Esta prctica se basa en la determinacin de ese hierro en vinos de mesa, un
estudio que se va a realizar mediante una tcnica conocida como espectroscopa de
absorcin atmica con llama.

2. FUNDAMENTO DE LA TCNICA
En qu consiste la espectroscopa de absorcin atmica? La espectroscopa
consiste en la medicin e interpretacin de la radiacin electromagntica absorbida,
dispersada o emitida por tomos, molculas u otras especies qumicas. Estos
fenmenos estn asociados con cambios en los estados de energa de las diferentes
especies. Por consiguiente, dado que cada especie posee estados energticos
caractersticos, la espectroscopa puede utilizarse para identificarlas y cuantificarlas.
En absorcin atmica, los tomos absorben parte de la radiacin procedente de
una fuente, y el resto de radiacin llega al detector. La emisin atmica procede de
tomos que se encuentran en estado excitado por la gran energa trmica de la llama.
Para poder ser examinada, la muestra ha de ser atomizada para encontrarse en
su forma elemental, mediante radiofrecuencia, un horno calentado elctricamente,
llama o plasma.

3. MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS


Para llevar a cabo la prctica, el material necesario ser el siguiente:
- 2 vasos de precipitados de 250 ml
- 1 matraz aforado de 100 ml
- 1 matraz aforado de 50 ml
- 6 matraces aforados de 25 ml
- 15 tubos de ensayo grandes
- Pipetas de 2, 5 y 10 ml
- 1 gradilla y 1 varilla

Y los reactivos necesarios sern los siguientes:


- Disolucin patrn de Fe: 1000 g/ml en HNO3 al 2%
- Disoluciones patrn de Fe de:
o 100 g/ml, preparar 100 ml por dilucin, a partir de 1000 g/ml.
Enrasar con HNO3 al 2%
o 10 g/ml, preparar 50 ml por dilucin, a partir de la de 100
g/ml. Enrasar con HNO3 al 2%
- HNO3 concentrado
- HNO3 al 2%

4. CLCULOS:
-Partimos de una disolucin patrn de Fe de 1000 g/ml y preparamos 100 ml
de una de 100 g/ml:
-Partimos de una disolucin patrn de Fe de 100 g/ml y preparamos 50 ml de
una de 10g/ml:
-Partimos de una disolucin de Fe de 10 g/ml y preparamos patrones de 0.5,
1, 2.5, 3.5 y 5 g/ml en matraces de 25 ml:

5. PROCEDIMIENTO
Ayudndose de una pipeta y un pipeteador, se cogen 10 ml del patrn de Fe de
1000 g/ml, se introducen en un matraz de 100 ml y se enrasa con HNO3. Una vez que
se tiene esta disolucin, se cogen 5 ml de ella, se introducen en un matraz de 50 ml y
se enrasa de nuevo con HNO3.
Cuando esta nueva disolucin est preparada, a partir de ella, se preparan los
patrones. Para ello, se cogen los volmenes correspondientes a cada patrn
(calculados en el anterior apartado), se introducen en matraces de 25 ml a cada uno, y
se enrasa con HNO3. Adems de los patrones que se preparan con cada volumen, hay
que preparar un blanco, es decir, rellenar un matraz de 25 ml solamente con HNO3.
Una vez que hecho esto, hay que repetir este proceso, pero aadiendo a cada
nuevo patrn, 10 ml de una muestra de vino de mesa.

Cuando todas estas disoluciones estn preparadas, se traspasan a tubos de ensayo,


para hacer ms fcil su medida en el espectrmetro.
Para llevar a cabo la medida, se coge el portatubos, y empezando por los patrones
sin vino, se irn realizando las medidas, introduciendo el cable que sale del aparato
espectrmetro en cada disolucin, y esperando a leer en la pantalla la medida de
absorbancia que proporciona dicho aparato.

6. RESULTADOS OBTENIDOS:
[Fe] (solo) Absorbancia
0
0
0,5
0,019
1
0,043
2,5
0,091
3,5
0,128
5
0,182

MEDIDA SIN VINO

0,6
0,5

Absorbanci
a

0,4
y = 0,0996x + 0,0162
R = 0,996

0,3

0,2
0,1

[Fe]
0
0

[Fe] (con vino)


0
0,5
1
2,5
3,5
5

Absorbancia
0,027
0,046
0,127
0,267
0,356
0,519

MEDIDA CON VINO

0,6
0,5
0,4

y = 0,0996x + 0,0162
R = 0,996

0,3
0,2
0,1

[Fe]

0
0

Las grficas representan la concentracin de Fe frente a la medida de


absorbancia obtenida, y los altos valores que presenta la R2 en cada grfico, indican
que la regresin lineal realizada sobre las medidas obtenidas en el laboratorio, es lo
suficientemente exacta como para dar por vlido el experimento.
Los posibles errores cometidos, surgen desde el comienzo de la prctica, en las
distintas medidas tomadas para realizar cada uno de los patrones. A su vez, el aparato
tiene tambin su margen de error, por lo que las medidas realizadas no se
corresponden de forma completamente exacta con la realidad, de echo, durante la
realizacin del experimento se observaron diversas anomalas a la hora de llevar a
cabo las medidas en el aparato, que provocaron tener que repetir alguna de las
medidas.

7. APLICACIONES
Una aplicacin importante, es como acabamos de observar la deteccin de
metales a nivel traza, metales que se comportan como catalizadores (Pb, Cd, As) y que
a concentraciones bajas ya son contaminantes
Sin embargo, los anlisis que se ofrecen incluyen prcticamente todos los
elementos de la tabla peridica en una amplia variedad de muestras lquidas y
slidas, lo que resulta muy beneficioso a la hora de realizar medidas en el
laboratorio.

8. CUESTIONARIO:
a. Cul es el fundamento de la tcnica?
La espectroscopa consiste en la medicin e interpretacin de la radiacin
electromagntica absorbida, dispersada o emitida por tomos, molculas u otras
especies qumicas. Estos fenmenos estn asociados con cambios en los estados de
energa de las diferentes especies. Por consiguiente, dado que cada especie posee
estados energticos caractersticos, la espectroscopa puede utilizarse para
identificarlas y cuantificarlas.
En absorcin atmica, los tomos absorben parte de la radiacin procedente de
una fuente, y el resto de radiacin llega al detector. La emisin atmica procede de
tomos que se encuentran en estado excitado por la gran energa trmica de la llama.
Para poder ser examinada, la muestra ha de ser atomizada para encontrarse en su
forma elemental, mediante radiofrecuencia, un horno calentado elctricamente, llama
o plasma. En el laboratorio se ha empleado el mtodo de espectroscopa de absorcin
atmica con llama.

b. Dibujar un esquema con los componentes principales del instrumento de


espectroscopa de absorcin atmica (AAS) utilizado.

c. Qu fuente de excitacin se ha utilizado? Qu fuente de excitacin se


utilizara en el caso de espectroscopa de emisin atmica (AES)?
En el mtodo utilizado en el laboratorio la fuente est apagada y es el atomizador
(la llama) quien excita a los tomos.

d. Explicar el tipo de sistema de atomizacin que se ha utilizado. Comente otra


posible alternativa de atomizacin
La atomizacin consiste fundamentalmente en dividir cada cm3 de combustible
lquido en alrededor de 7 millones de gotitas del tamao mnimo posible (Ley de
Stockes).
En el laboratorio se ha utilizado un sistema de atomizacin mediante llama, donde
se puede utilizar propano o butano como gas de combustin. El aerosol formado por el
flujo del gas oxidante, se mezcla con el combustible y se pasa a travs de una serie de
deflectores que eliminan las gotitas que no sean muy finas. Como consecuencia de la
accin de estas, la mayor parte de la muestra se recoge en el fondo de una cmara y se
drena hacia un contenedor de desechos. El aerosol, el oxidante y el combustible se
queman en un mechero provisto de una ranura de 1 mm o 2 de ancho por 5 10 mm
de longitud. Estos mecheros proporcionan una llama relativamente estable y larga,
estas propiedades aumentan la sensibilidad y la reproducibilidad.

e. Qu tipo de calibracin se va a utilizar? Por qu? Explique cmo se lleva a


cabo.
Como todas las tcnicas instrumentales, la espectrometra de absorcin atmica
con llama es una tcnica relativa, y por lo tanto, es necesario establecer
experimentalmente una curva que relacione la seal analtica obtenida con la
concentracin del elemento analito en las soluciones a analizar. En el caso ms directo,
la concentracin de una solucin incgnita se obtiene por interpolacin grfica a partir
de una curva de seal obtenida con varios patrones adecuadamente espaciados, que
cubren el mbito de concentraciones requerido.
La calibracin que se realiza en esta prctica se basa en una grfica en la que se
representan la concentracin de Fe presente en los patrones realizados (0.5. 1, 2.5,
3.5, 5 g/ml) frente a la medida de absorbancia obtenida en el ordenador.

DETERMINACIN FLUORIMTRICA DE QUININA EN UN AGUA


TNICA

1. INTRODUCCIN
La quinina o chinchona, es un alcaloide natural, blanco y cristalino, con
propiedades analgsicas entre otras, y presenta un sabor muy amargo. La quinina era
el principal compuesto empleado en el tratamiento de la malaria hasta que fue
sustituido por otros medicamentos ms eficaces. Durante cientos de aos
la Quinina se obtena de la corteza del rbol de la quina originario del Per, y se ha
utilizado para combatir enfermedades como la malaria y dolores musculares.
En gastronoma, la quinina se usa como potenciador del sabor en el agua
tnica, confirindole su caracterstico sabor amargo. Debido a los efectos secundarios
de altas dosis de quinina, su concentracin se ha limitado por la FDA estadounidense a
un mximo de 83 ppm. Este valor es aproximadamente un cuarto del empleado
teraputicamente y se ha visto que a estas dosis no tiene ningn efecto perjudicial
para la salud, ms bien lo contrario. La tnica, aparte de aportar energa, cuenta con
ciertas propiedades que ayudan a realizar una buena digestin.
Esta prctica se basa en determinar la concentracin de quinina presente en
una muestra de agua tnica, utilizando sus propiedades fluorescentes.

2. FUNDAMENTO
La fluorescencia consiste en la absorcin de radiacin electromagntica por
parte de las molculas, que pasan a estado excitado, para posteriormente emitir parte
de esa energa tambin en forma de radiacin electromagntica (fluorescencia), que es
emitida en todas direcciones. La intensidad de radiacin emitida es proporcional a la
concentracin de fluorgeno en la muestra.
Un compuesto fluorgeno es el sulfato de quinina, que est presente en el agua
de tnica. Para poder captar esa radiacin, es necesario saber la frecuencia de
radiacin, que en este caso ser de 450 nm.
Este mtodo presenta una eficacia elevada, y se utiliza por ello como patrn de
fluorescencia.
En el siguiente vdeo se puede observar el fuerte carcter fluorescente que
presenta la quinina.
http://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=spXKkYcQzQM

3. MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS


El material necesario ser el siguiente:
- Fluorescmetro
- Cubetas
- 1 matraz aforado de 25 ml
- 6 matraces aforados de 50 ml
- 2 matraces aforados de 100 ml
- 1 pipeta de 10 ml
- 1 pipeta de 1 ml
- 2 vasos de precipitados de 250 ml
- 1 embudo pequeo
- 1 vidrio de reloj
- 1 esptula
- 1 varilla
Los reactivos necesarios son:
- H2So4 0.05 M
- Disolucin madre de quinina de 1000 g/ml
- Disolucin de trabajo de quinina de 100 g/ml

4. CLCULOS
-

Partimos de la disolucin madre de 1000 g/ml y queremos obtener 100


ml de una 100 g/ml:

Partimos de la disolucin de 100 g/ml y preparamos los patrones de


0.5, 1, 2, 3, 4 y 5 g/ml en matraces de 50 ml:

5. PROCEDIMIENTO
Primero, se prepara la disolucin madre de quinina, para ello, se cogen 25 mg
de quinina y se disuelven en 10 ml de H2SO4 0.05 M en un vaso de precipitados. Una
vez que est disuelto, se pasa a un matraz de 25 ml y se enrasa con H2SO4 0.05 M.
Haciendo uso de la pipeta, se coge un volumen de 10 ml de la disolucin madre
de quinina de 1000 g/ml, se introduce en un matraz de 100 ml y se enrasa con H2SO4.
Una vez que esta disolucin est preparada, se van cogiendo, ayudndose de la
pipeta, los volmenes necesarios para preparar los patrones en matraces de 50 ml, y
una vez hecho esto, se enrasa con H2SO4.
Adems de los patrones, se prepara un blanco, un matraz de 50 ml lleno de
H2SO4 0.05 M.
Una vez que se tienen todos los patrones preparados, se prepara el
fluormetro.

6. TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Y CUESTIONES


a. Obtener la curva de calibrado
[quinina]

fluorescencia

5
4
3
2
1
0,5
0
muestra

531
441
331
194
77
59
0
293

Fluorescencia
Intensidad de fluorescencia

600
500

400
300

y = 109,45x - 9,0614
R = 0,9945

200
100
0
-100

[Quinina]

b. Calcular la concentracin de quinina en la muestra de agua


tnica
Haciendo uso de la ecuacin de la recta de regresin obtenida, se calcula la
concentracin de quinina en la muestra de agua tnica que se ha estudiado.

Donde y representa la intensidad de fluorescencia y x la concentracin de


quinina:
[quinina]

fluorescencia

5
4
3
2
1
0,5
0
muestra

531
441
331
194
77
59
0
293

c. Por qu se colocan dos filtros (o dos monocromadores) en el


instrumento?
Para evitar que la deteccin fluorimtrica se vea alterada por la luz exterior
que pueda haber en el laboratorio, bien procedente de la ventana o de los flexos que
puedan estar utilizndose. Una ancdota tpica en la realizacin de esta prctica es
observar como la deteccin de fluorescencia vara si el filtro se tapa con la mano o si se
deja que la luz del sol incida sobre el.
d. Por qu tienen que colocarse en ngulo recto?
La fluorescencia se propaga desde la muestra en todas direcciones, pero lo ms
conveniente es observar la que forma un ngulo recto con el haz de excitacin, ya que
a otros ngulos, la dispersin producida en la disolucin y en las paredes de las
cuubetas aumenta y se pueden cometer grandes errores a la hora de medir la
intensidad.

e. Mediante un diagrama de niveles de energa, explica por qu la


longitud de onda de fluorescencia es mayor que la longitud de
onda de absorcin.
Con el paso del tiempo los electrones vuelven a su estado fundamental
emitiendo radiacin de ciertas longitudes de onda en todas las direcciones. La
radiacin absorbida es reemitida sin ningn cambio de frecuencia.
Parte de la energa de fluorescencia se pierde como energa no radiante por
fenmenos como la conversin interna, que implica la colisin entre las molculas de
analito y de disolvente, de ah que la energa de absorcin o excitacin sea menor. Por
tanto, la longitud de onda de emisin de fluorescencia es mayor que la de absorcin.

f. El hecho de que existan pocas especies qumicas que presentan


fluorescencia supone una ventaja y un inconveniente. Cules
son?
Supone una ventaja, ya que este mtodo permite identificar fcilmente este tipo
de substancias presentes en determinados compuestos, sin embargo, si existieran un
gran nmero de substancias con esta propiedad, sera mas complicado y conllevara la
utilizacin de otros mtodos.

7. APLICACIONES
El fenmeno de la fluorescencia tiene numerosas aplicaciones, tanto de la vida
cotidiana, como son la iluminacin de casas y oficinas, o la diferenciacin de billetes
falsos de verdaderos (puesto que nicamente los verdaderos tienen una impresin con
tinta fluorescente, solo visible bajo una luz especial); como en el mundo cientfico,
como son diversas tcnicas de laboratorio utilizadas para detectar antgenos y
anticuerpos o tcnicas de oftalmologa para detectar lesiones en la crnea.

8. CUESTIONARIO
a. Cul es el fundamento de la tcnica?
La fluorescencia consiste en la absorcin de radiacin electromagntica por parte
de las molculas, que pasan a estado excitado, para posteriormente emitir parte de
esa energa tambin en forma de radiacin electromagntica (fluorescencia), que es
emitida en todas direcciones. La intensidad de radiacin emitida es proporcional a la
concentracin de fluorgeno en la muestra.
Un compuesto fluorgeno es el sulfato de quinina. Este compuesto se encuentra en el

agua de tnica y en esta prctica se propone su determinacin. Para poder captar esa
radiacin, es necesario saber la frecuencia de radiacin, que en este caso ser de 450
nm.
Este mtodo presenta una eficacia elevada, y se utiliza por ello como patrn de
fluorescencia.

b. Dibujar un esquema con los componentes principales del


espectrofluormetro utilizado en la medida de fluorescencia.

c. Por qu se mide la radiacin de fluorescencia con una disposicin

en ngulo recto respecto a la radiacin de excitacin?


La fluorescencia se propaga desde la muestra en todas direcciones, pero lo ms
conveniente es observar la que forma un ngulo recto con el haz de excitacin, ya que
a otros ngulos, la dispersin producida en la disolucin y en las paredes de las
cuubetas aumenta y se pueden cometer grandes errores a la hora de medir la
intensidad.

d. Explicar el fenmeno conocido como desplazamiento de Stokes.


Cuando un sistema, ya sea una molcula o un tomo, absorbe un fotn, ganan
energa, se excitan, y suben de nivel; y una manera de que el sistema se relaje es
soltando un fotn, es decir, perdiendo energa. Cuando el fotn emitido, tiene menos
energa que el fotn absorbido, esta diferencia de energa, se conoce como el
desplazamiento de Stokes. Es decir, el desplazamiento de Stokes nos da la diferencia
de energa que existe entre las absorciones y emisiones entre dos mismos niveles.

e. Comentar algunos factores que influyen en la medida de


fluorescencia, potencindola o produciendo una disminucin de la
misma.
A diferencia de la espectrometra visible o la ultravioleta, los espectros
independientes no son fciles de alcanzar, y, de hecho, son varios los factores que
influyen y distorsionan los espectros, siendo necesario, realizar diversas correcciones
para lograr el espectro verdadero.
- Existen distorsiones provocadas por el instrumento, debido a que la
longitud de onda y la intensidad de la fuente de luz varan con el tiempo
y no permanecen constantes durante todo el experimento. Para corregir
esto, se puede aplicar un haz separador despus del monocromador de
excitacin para dirigir una porcin de luz a un detector de referencia que
tenga en cuenta estas variaciones. Adems, hay que tener en cuenta que
el rendimiento de transmisin de los monocromadores y de los filtros
vara con el tiempo.

Existen distorsiones provocadas por la propia muestra, por tanto hay


aspectos de sta que deben de tenerse en cuenta.
La fotodescomposicin que puede disminuir la intensidad
de fluorescencia
La dispersin de la emisin
Los efectos del filtro interior, (que cambian el espectro y
la intensidad de la luz emitida), como la reabsorcin, que
se produce cuando otra molcula absorbe las longitudes
de onda en las que se emite radiacin; o el hecho de que
la intensidad de excitacin de luz no sea constante a lo
largo de la solucin.

DETERMINACIN Y CUANTIFICACIN DE COMPUESTOS


VOLTILES DEL AROMA MEDIANTE CROMATOGRAFA DE
GASES
1. INTRODUCCIN
Los alimentos, adems de ser nutricionalmente adecuados y seguros, han de
resultar apetecibles desde el punto de vista sensorial. Para conseguirlo, han de tener
una textura concreta, un olor caracterstico, un sabor agradable y un aroma que invite
a degustarlos. Gran parte de estos atributos los aportan los aditivos alimentarios, entre
ellos los aromas artificiales. El aroma de un alimento puede venir dado de dos formas
distintas: de forma natural o artificial.
El aroma se relaciona con las sustancias voltiles presentes en los alimentos. Los
compuestos voltiles suelen aparecer como productos secundarios de reacciones,
como la reaccin de caramelizacin de los azcares. Sin embargo, existe un amplio
abanico de reacciones que originan compuestos aromticos. Algunos ejemplos de
estas sustancias son los aldehdos, cetonas, furanos, pirroles, tiroles, steres o
terpenos, entre muchos otros.
Sin embargo, hay que tener en cuenta que los compuestos voltiles pueden ser
perjudiciales para la salud humana, y pueden provocar irritacin de ojos, garganta,
nariz, nuseas, dolores de cabeza, vmitos, hinchazn, mareos, manchas en la piely
con exposiciones a largo plazo, pueden provocar degeneracin del sistema nervioso.
Como conclusin, el aroma de un producto alimentario est constituido por un
gran nmero de compuestos voltiles, pero solamente unos pocos tienen relevancia
desde el punto de vista sensorial. Esta prctica se centra en la cuantificacin mediante
una tcnica conocida como cromatografa de gases, de 3 aldehdos que estn
presentes y forman parte del aroma caracterstico de los productos en salazn.

2. FUNDAMENTO
La cromatografa es una tcnica de separacin de los componentes de una mezcla
hacindolos pasar a travs de una fase estacionaria mediante el flujo de una fase
mvil.
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se
volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se
produce por el flujo de una fase mvil (que en este caso es un gas inerte). A diferencia
de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas
del analito, y su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna.

Existen dos tipos de cromatografa de gases, la cromatografa gas-slido y la gaslquido, sta ltima utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas
sobre la superficie de un slido inerte.

3. MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS


El material que se va a necesitar es el siguiente:
-

Matraces de 10 ml

Pipetas

Vaso de precipitados

Varilla

Pipeteador

Jeringuilla para inyectar

Los reactivos que se van a necesitar son:


-

(z)-4-heptenal (de 1000 g/ml y de 250 g/ml)

(E,E)-2,4-heptadienal (de 1000 g/ml y de 250 g/ml)

(E,Z)-2,6-nonadienal (de 1000 g/ml y de 250 g/ml)

Patrn interno (Undecano) (de 1000 g/ml y de 250 g/ml)

Metanol

4. CLCULOS
Preparamos 3 niveles, con una muestra de cada patrn en cada nivel,
representamos los clculos para cada nivel:
-

Nivel 1: para cada reactivo, tenemos que coger para cada matraz:

Nivel 2: para cada reactivo, tenemos que coger para cada matraz:

Nivel 3: para cada reactivo, tenemos que coger para cada matraz:

5. PROCEDIMIENTO
Ayudndose de una pipeta y de un pipeteador, se coge de cada muestra el
volumen correspondiente al primer nivel 0,4 ml y se introduce en un matraz de 10 ml,
enrasando con metanol. Se repite el mismo procedimiento para preparar los patrones
para cada nivel.
Adems, se prepara un patrn interno, Undecano, para cada nivel.
Una vez preparado todo esto, y haciendo uso de la jeringuilla, se introducen 2 l
del extracto de cada muestra, en cada nivel en el cromatgrafo de gases para calcular
la concentracin de los analitos encontrados.

6. TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Y CUESTIONES

a. Heptenal

Heptenal
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
y = 0,013x + 0,1807
R = 0,9322

0,1
0
0

10

15

20

25

30

35

b. Heptadienal

Heptadienal
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2

0,15

y = 0,0119x + 0,016
R = 0,9848

0,1
0,05
0
0

c.

10

15

20

25

30

35

Nonadienal

Nonadienal
0,7
0,6

0,5
0,4
0,3
y = 0,0211x - 0,05
R = 0,986

0,2
0,1
0
0

10

15

20

25

30

35

d. Cuestiones
- Calcule el nmero de platos tericos y la altura equivalente a
un plato terico de la columna utilizada (referido al primer
compuesto que eluye). Qu se pretende evaluar mediante
estas medidas?

- Calcule la resolucin de los dos componentes que eluyen


primero

- Es adecuada la fase estacionaria de esta columna para la


separacin de los aldehdos? Qu columna utilizara para la
separacin de una mezcla de alcoholes y cidos orgnicos?
Consulte algn catlogo para responder.
S, porque es la que se ha utilizado en el laboratorio para la realizacin de esta
prctica.
Se podra utilizar una columna HP-5 o una ULTRA-2 con 5% de difenil y 95% de
dimetil-polisiloxano. Es una columna apolar y sus aplicaciones son para steres
metlicos de cidos grasos, alcaloides y componentes halogenados

7. APLICACIONES
La cromatografa de gases constituye el mejor mtodo analtico ideado para la
separacin de gases, lquido o slidos que pueden pasar fcilmente al estado
vapor o transformndolos previamente en otros estados voltiles. Por eso su
utilizacin es indispensable en anlisis industriales, forenses bromatolgicos,
toxicolgicos, clnicos y de contaminacin ambiental.

8. CUESTIONARIO

a. Cul es el fundamento de la tcnica?


La cromatografa es una tcnica de separacin de los componentes de una mezcla
hacindolos pasar a travs de una fase estacionaria mediante el flujo de una fase
mvil.
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se
volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se
produce por el flujo de una fase mvil (que en este caso es un gas inerte). A diferencia
de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas
del analito, y su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases, la cromatografa gas-slido y la gaslquido, sta ltima utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas
sobre la superficie de un slido inerte.

b. Dibujar un esquema con los componentes principales del


instrumento de cromatografa de gases utilizado.

c. Qu funcin tiene la columna cromatogrfica?


La columna de cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se
excluyen mutuamente. La primera consiste en separar los componentes de la mezcla,
para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de
muchas sntesis). y la segunda, consiste en medir la proporcin de los componentes de
la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son
pequeas.

d. Qu significa trabajar a temperatura isoterma o con gradiente


de temperatura? Explicar las diferencias.
Cuando trabajamos a temperatura isoterma la temperatura del sistema
permanece constante. Para ello, es necesario que el sistema se encuentre en contacto
con un foco trmico, que se define como una substancia capaz de absorber o ceder
calor sin modificar su temperatura.
Si esto ocurre, la temperatura inicial y la temperatura final del sistema sern
iguales, y por tanto, la variacin de energa interna ser nula:

Calculamos el trabajo, sustituyendo el valor de la presin en funcin del volumen y


de la temperatura, segn la ecuacin de los gases ideales, e integrando, obtenemos la
expresin para el trabajo realizado por el gas en una tranformacin isoterma:

Sabiendo que:

Llegamos a la conclusin de que, cuando trabajamos a temperatura isoterma,


todo el calor absorbido se transforma en trabajo.

Sin embargo, en muestras donde los puntos de ebullicin son parecidos, la


temperatura ptima es ligeramente mayor al punto medio de ebullicin de los
componentes, este ajuste de la temperatura es lo que se conoce como gradiente de
temperatura.

e. Explicar cmo es la separacin de dos compuestos, A y B, si


tienen una resolucin Rs=1
La resolucin en una columna en cromatografa de gases viene dada por la
siguiente frmula.

Para que la distancia entre en los picos del cromatograma sea adecuada y
permita una buena lectura, el valor de Rs debe de ser mayor de 1.5.
Dado que su resolucin es menor que de 1.5, la lectura de los datos ser menos
preciosa puesto que los picos estarn ms cerca los nos de los otros.

DETERMINACIN DE HIERRO (II) EN COMPRIMIDOS MEDIANTE


ANLISIS POR INYECCIN EN FLUJO

1. INTRODUCCIN
Consumir alimentos ricos en hierro es una parte importante del tratamiento de la
anemia. Sin embargo, con una dieta alimenticia a veces no es suficiente y con
frecuencia se necesitan suplementos de hierro para aumentar las reservas de este
elemento en el cuerpo.
Esta prctica se basa en la determinacin de la concentracin de hierro en un
determinado tipo de comprimidos vitamnicos ricos en hierro.

2. FUNDAMENTO
El anlisis por inyeccin en flujo, FIA, es el mtodo ms moderno de flujo continuo,
y se basa en introducir volmenes de muestra medidos con gran precisin en una
corriente no segmentada.
Al igual que en los analizadores de flujo segmentado, muestra y reactivos se
transportan a travs de un tubo de plstico flexible por la accin de una bomba
peristltica. El tubo utilizado tiene un dimetro tpico de 0,5 mm. Los tamaos de
muestra para este tipo de anlisis van desde 5 a 200 l.

3. MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS


El material que se va a necesitar es el siguiente:
-

Matraces aforados de 100 ml

Matraces de 250 ml

Pipeta

Pipeteador

Esptula

Vaso de precipitados

Los reactivos que se van a necesitar son:


-

Tampn actico-acetato 0,2M (500 ml)

Clorhidrato de Hidroxilamina 0,5% (P/V) (250 ml)

Patrn de Hierro (II) de 1000 ppm (50 ml)

Muestra, que ya est preparada en el laboratorio: complejo vitamnico.

4. CLCULOS
- Partiendo de un patrn de Hierro (II) de 1000 ppm, preparamos una disolucin
patrn de Hierro (II) de 100 ppm en Clorhidrato de Hidroxilamina:

- O-Fenantrolina

M (250 ml) en tampn actico acetato de 0,2M de pH=4,5

- Preparamos los patrones de 0,5; 1,5; 3 y 5 ppm:

5. PROCEDIMIENTO
Ayudndose de la pipeta, se coge un volumen de 10 ml de la disolucin patrn de
Fe de 1000 ppm y se traslada a un matraz aforado de 100 ml, y se enrasa con
clorhidrato de hidroxilamina.
Despus, con ayuda del vidrio de reloj, de una esptula y de la bscula, se cogen los
0.099 g de O-Fenantrolina y se disuelven en un vaso de precipitados en un tampn
actico-acetato 0.2M.
Ayudndose de nuevo de la pipeta, se cogen los volmenes correspondientes para
cada patrn de 0.5, 1.5, 3 y 5 ppm, de la disolucin de Fe (II) de 100 ppm, y se
introducen cada uno en un matraz de 100 ml, finalmente se enrasa con agua Mili-Q
(agua ultra pura)
Para preparar la muestra, (que ya se da preparada en el laboratorio), primero se
pulveriza finamente la muestra (complejo vitamnico) en un mortero y luego con ayuda
de una esptula se pasa dicho polvo a una bscula hasta pesar exactamente 55 mg.
Una vez hecho esto, se vierten esos 55 mg en un vaso de precipitados y se lava el vidrio
de reloj con un poco de agua para arrastrar los posibles restos que quedan en l. Se
aaden 25 ml de HCl de concentracin 6M, y se introduce en una vitrina para
calentarlo hasta que su disolucin.
Una vez que el complejo vitamnico est disuelto, se agita lentamente y se deja
enfriar. Despus se filtra a un matraz aforado e 100 ml, se lava el vaso con varias
porciones de Clorhidrato de hidroxilamina para evitar que queden restos, y finalmente
se enrasa con Clorhidrato de Hidroxilamina.
Una vez que se tiene esta disolucin, para trabajar con ella, se cogen con ayuda de
una pipeta 2.5 ml de esta y se traspasan a un matraz de 100 ml. Se completa el
volumen con tampn actico-acetato y antes de enrasar se confirma que el ph es
aproximadamente 4,5.

6. TRATAMIENTO DE LOS DATOS:


a. Representacin de los datos obtenidos
[Fe]

Altura de pico

0
0,5
1,5
3
5

5,821187E-03
2,009147E-02
6,624380E-02
1,046017E-01
1,716009E-01

[FE] frente a ALTURA DE PICO

Altura de pico

2,0E-01
1,8E-01
1,6E-01
1,4E-01
1,2E-01
1,0E-01
8,0E-02
6,0E-02
4,0E-02
2,0E-02
0,0E+00

A= 0,033[Fe] + 0,0077
R = 0,994
0

[Fe]

b. Estudio de las muestras y datos obtenidos para cada muestra

tiempo de
residencia

[Fe]/ppm

Muestra 1

0,1076694

3,02937576

Muestra 2

0,1131116

3,19429091

Muestra 3

0,1042186

2,92480606

Y a partir de aqu sacamos el porcentaje de Fe en cada muestra:

MUESTRA 1
mg Fe en 100ml
mg Fe en 55mg pastilla
% Fe / pastilla

0,30293758
12,117503
22,0%

mg Fe en 100ml
mg Fe en 55mg pastilla
% Fe / pastilla

0,31942909
12,7771636
23,2%

MUESTRA 2

MUESTRA 3
mg Fe en 100ml
mg Fe en 55mg pastilla
% Fe / pastilla

0,29248061
11,6992242
21,3%

Una vez que tenemos el porcentaje de Fe en cada muestra de pastilla,


calculamos la media y la desviacin tpica para poder hacer una comparacin con otro
mtodo de determinacin de hierro mediante valoracin.

c. Fiagrama obtenido
Time Series byRun

0.20

0.15

0.10

0.05

0.00
300

500

700

900

-0.05

Time (sec)

7. APLICACIONES
Una de las aplicaciones que tiene el mtodo FIA, anlisis de inyeccin de
flujo, es la determinacin de nitratos y nitritos en productos crnicos. El control del
uso de nitratos y nitritos en los productos crnicos es fundamental para asegurar la
salud de los consumidores. FIA, es un mtodo utilizado para este fin por su
versatilidad, flexibilidad y bajo costo, as como precisin, rapidez y fcil manejo.

8. CUESTIONARIO
a. Cul es el fundamento de la tcnica?
El anlisis por inyeccin en flujo, FIA, es el mtodo ms moderno de flujo continuo,
y se basa en introducir volmenes de muestra medidos con gran precisin en una
corriente no segmentada.
Al igual que en los analizadores de flujo segmentado, muestra y reactivos se
transportan a travs de un tubo de plstico flexible por la accin de una bomba
peristltica. El tubo utilizado tiene un dimetro tpico de 0,5 mm. Los tamaos de
muestra para este tipo de anlisis van desde 5 a 200 l.

b. Dibujar un esquema con los componentes principales del


instrumento de anlisis por inyeccin en flujo (FIA) utilizado

c. Explicar qu tipo de tcnica es la colorimetra


La colorimetra es una ciencia, cuyo objetivo fundamental consiste en
determinar la medida de los colores.
Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin
en la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que
deseamos determinar no posee color por s misma, entonces, es preciso llevar a
cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a sustancias
coloreadas con la muestra que interesa estudiar.
Se denomina colormetro a aquellos aparatos en los que la longitud de onda
con la que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros pticos.

d. Cmo influye el caudal de flujo en el sistema FIA a las medidas


analticas?
Cuando el caudal aumenta, disminuye la dispersin, el tiempo de arranque, y
disminuye tambin la anchura de pico, como se puede observar en el diagrama.

e. Explicar qu se entiende por fiagrama


Se denomina fiagrama a la representacin de la seal medida, ya sea de
absorbancia, fluorescencia, cromatograma, etcy da lugar a en un diagrama como
el de la figura

DETERMINACIN DE Fe (II) EN UN PREPARADO FARMACUTICO


MEDIANTE VALORACIN CON KMnO4

1. INTRODUCCIN Y FUNDAMENTO DEL MTODO

La valoracin es un mtodo de anlisis qumico cuantitativo en el laboratorio, que


se utiliza para determinar la concentracin desconocida de un reactivo conocido. Se le
conoce tambin como anlisis volumtrico.
Un reactivo llamado valorante de volumen y concentracin conocida se utiliza para
que reaccione con una solucin del analito,2 de concentracin desconocida. Utilizando
una bureta calibrada para aadir el valorante es posible determinar la cantidad exacta
que se ha consumido cuando se alcanza el punto final.
El punto final es el punto en el que finaliza la
valoracin, y se determina mediante el uso de
un indicador. IIdealmente es el mismo volumen que
en el punto de equivalenciael nmero de moles de
valorante aadido es igual al nmero de moles de
analito. Pueden usarse muchos mtodos para indicar
el punto final de una reaccin: a menudo se usan
indicadores visuales (cambian de color).
Esta prctica se basa en determinar con KMnO4,
aplicando el mtodo de valoracin, la concentracin
de Fe (II) en un preparado farmacutico.
La realizacin de esta prctica tiene como
finalidad comparar con el mtodo de FIA (prctica
anterior) los valores obtenidos con el fin de
determinar la eficacia de los mtodos.

2. MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS


El material que se va a necesitar es el siguiente:
-

Matraz erlenmeyer de 250 ml

Bureta de 50 ml

Matraz aforado de 100 ml

Pipetas

Los reactivos que se van a necesitar son los siguientes:


-

Disolucin de KMnO4 0,02 N previamente valorada con cido oxlico


(PM(KMnO4)=158 g/mol)

Disolucin de H2SO4 5M

Disolucin de H3PO4 concentrado

3. PROCEDIMIENTO
Para empezar, hay que preparar la muestra. Para ello se trituran un par de pastillas
de FERO-GRADUMET en n mortero de vidrio. A continuacin, 525 mg del polvo
obtenido se trasvasan a un matraz aforado de 100 ml arrastrndolo con un poco de
agua destilada, se aaden 4.5 ml de la disolucin de H2SO4 5M y se enrasa con agua
destilada. Se preparan 3 matraces.
Ayudndose de la pipeta, se cogen 10 ml de la disolucin de la muestra problema
preparada, se introducen en el matraz de 250 ml y se aaden los siguientes reactivos:
4.5 ml de disolucin de H2SO4 5M, 2 ml de H3PO4 concentrado y se enrasa finalmente
con agua.
Se llena la bureta con la disolucin de KMnO4 0,02 N y se aade sobre el matraz
con la muestra hasta obtener un color violeta permanente.
Este procedimiento de valoracin se repite al menos 3 veces.

4. TRATAMIENTO DE DATOS Y CUESTIONES

1. Primera valoracin:
Volumen gastado de KMnO4 (ml)
Primera valoracin

11.9

2. Segunda valoracin

Volumen gastado de KMnO4 (ml)


Segunda valoracin

12.2

3. Tercera valoracin
Volumen gastado de KMnO4 (ml)
Tercera valoracin

12.3

Una vez obtenido el porcentaje de hierro para cada valoracin que se ha hecho,
se calcula la media de los tres y la desviacin tpica, necesarios para realizar una
comparacin entre los mtodos de FIA y valoracin.

a. Escribe la reaccin que tiene lugar en la valoracin

b. Por qu se aade cido fosfrico?


Para crear el medio cido para las semirreacciones y lograr el balance
estequiomtrico, el cido agrega los iones de hidrgeno (H+).

c. Haz un test de comparacin de medias para comparar los


resultados obtenidos mediante FIA y la valoracin redox. Primero
haz un test de comparacin de varianzas y segn los resultados
despus el test de comparacin de medias correspondiente;
P=0.05
XA=25.8167
A Mtodo de valoracin

SA=0.4428
SA2=0.1960
XB=22.1781

B Mtodo de inyeccin de flujo

SB=0.9881
SB2=0.9763

Partimos de:
Ho: SA2 = SB2
H1: SA2 SB2

Buscamos en la tabla A.4. el valor correspondiente de Ftablas=5.988 y


comparamos.

Fexperimental=0.201
Fexperimental < Ftablas por tanto, se acepta Ho, y las precisiones son comparables.
Una vez que se determina esto, se calcula:

Buscamos en la tabla ttablas,4 para =0.05 y obtenemos ttab=2.78.


Si comparamos esos dos valores obtenemos que t tabl < texp y por tanto, ambos
mtodos de anlisis no son comparables

IDENTIFICACIN Y DETERMINACIN DE CAFENA EN


DIFERENTES MUESTRAS (CAF, T Y BEBIDAS DE COLA)
1. INTRODUCCIN
La cafena es un alcaloide del grupo de las xantinas, slido cristalino, blanco y de sabor
amargo, que acta como una droga estimulante.
Es consumida por los humanos principalmente en infusiones extradas del fruto de la
planta del caf y de las hojas del arbusto del t, as como tambin en varias bebidas y
alimentos que contienen productos derivados de la nuez de cola.
Las bebidas que contienen cafena, tales como el caf, el t, algunas bebidas no
alcohlicas (especialmente los refrescos de cola) y las bebidas energticas gozan una gran
popularidad.
Sin embargo, para los humanos, la cafena es un estimulante del sistema nervioso
central que produce la eliminacin de la somnolencia.
Esta prctica est basada en la determinacin del nivel de cafena presente en
diferentes bebidas como son el t, la coca-cola o el caf.

2. FUNDAMENTO
La cromatografa es un mtodo muy utilizado en todas las ramas de la ciencia,
que permite la separacin, identificacin y determinacin de los componentes
qumicos en mezclas complejas.
La cromatografa lquida (HPLC), es una tcnica utilizada para separar los
componentes de una mezcla lquida. Consiste en una fase estacionaria no polar
(columna) y una fase mvil, que acta de portador de la muestra.
La muestra en solucin es inyectada en la fase mvil y una vez hecho esto, los
componentes de la solucin emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de
los compuestos con la columna. Estas interacciones qumicas, determinan la
separacin de los contenidos en la muestra.
Esta tcnica est indicada para la separacin de compuestos orgnicos
semivlatiles, Hidrocarburos Poliaromticos (PAHs), Aminocidos: OTA, cido Flico o
Herbicidas.

3. MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS


El material que se va a necesitar es el siguiente:
-

1 matraz aforado de 1000 ml


5 matraces aforados de 100 ml
1 matraz aforado de 50 ml
1 matraz aforado de 25 ml
1 pipeta de 10 ml y otra de 25 ml
Viales de 0 ml
Filtros

Los reactivos que se van a necesitar son los siguientes:


-

Cafena (patrn puro)


Metanol
Agua MiliQ (ultra pura)
cido actico

4. CLCULOS
- Preparamos 1 litro de disolucin que contenga 30% de metanol, 0,1% de
cido actico y 69,9% de agua, y que tenga un pH=3.5

Preparamos 5 matraces de 100 ml a partir de 1000 g/l

5. PROCEDIMIENTO
Abrimos los botes de metanol y cido actico y echamos cantidad en un vaso de
precipitados cada uno. Haciendo uso de una pipeta, cogemos un volumen de 300 ml
de metanol y lo introducimos en un matraz de 1 l, despus cogemos 1 ml de cido
actico y lo introducimos en ese matraz. Cogemos 699 ml de agua y los echamos
tambin en ese matraz.
Una vez que se tiene esta disolucin preparada, preparamos los patrones de 0.025,
0.05, 0.075, 0.1 y 0.125 g/l en 5 matraces de 100 ml.
Como muestra, se utiliza coca-cola. Llenamos un matraz de 25 ml con ella, y
agitamos hasta que desaparezcan las burbujas de CO2.
Se prepara el sistema cromatogrfico, utilizando como fase mvil Metanol/agua
MiliQ, dejndola pasa durante 5-10 minutos antes de comenzar con las inyecciones y
registrando simultneamente la respuesta en el detector para asegurarse de que no
quedaron sustancias retenidas en la columna procedentes de experimentos previos.
Se realizarn 2 inyecciones de cada nivel de concentracin, para ello, se carga en
posicin LOAD aproximadamente 20l de cada patrn, y se inyectarn en el
cromatgrafo en la posicin INJECT.
Se irn realizando las inyecciones de menor a mayor concentracin.

6. TRATAMIENTO DE LOS DATOS OBTENIDOS Y CUESTIONES

Los datos obtenidos son los siguientes

TIEMPO (min)
A1
A2
Concentracin

NIVEL 1
3,625
6,8
6,8
0,025

NIVEL 2
3,558
13,6
13,3
0,05

NIVEL 3
3,492
20,9
21
0,075

NIVEL 4
3,458
26,3
25,9
0,1

NIVEL 5
3,558
33,2
33,1
0,125

MUESTRA 1
3,4585
24,2
24,2
X

Hacemos la representacin de la concentracin de cafena en funcin del la


media de las dos reas obtenidas en el detector
Concentracin

rea

0,025
0,05
0,075
0,1
0,125
x

6,8
13,45
20,95
26,1
33,15
24,2

Medida de la cafena

35
30
25
20

15

y = 261,4x + 0,485
R = 0,9975

10
5
0
0

0,02

0,04

0,06

0,08

0,1

0,12

0,14

Haciendo uso de la recta de regresin obtenida, donde la x representa la


concentracin de cafena y la y el rea obtenida en el detector, calculamos la
concentracin de cafena en la muestra

a. A qu trmino ingls corresponden las siglas HPLC y cul es su


significado?
High-performance liquid chromatography, que significa cromatografa lquida de
alto rendimiento.
b. En qu se diferencian HPLC en fase normal y en fase reversa?
La fase normal utiliza una fase mvil polar y una fase estacionaria apolar, y se
utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar. El compuesto polar se asocia
y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de absorcin aumenta a medida que
aumenta la polaridad del compuesto.
La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de
retencin de los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos (aquellas

sustancias que son repelidas por el agua o no se pueden mezclar con ella) tienden a
aumentar el tiempo de retencin.
La fase reversa est formada por una fase estacionaria apolar y una fase mvil
polar. Una de las fases estacionarias ms comunes es la slica tratada.
El tiempo de retencin en este tipo de fase, es mayor para las molculas de
retencin apolar, mientras que las polares eluyen ms rpidamente. El tiempo de
retencin aumenta con la adicin de disolvente polar a la fase mvil y disminuye con la
introduccin de disolventes ms hidrofbicos.
La cromatografa de fase reversa se basa en el principio de las interacciones
resultantes de las fuerzas de repulsin entre un disolvente polar, un compuesto apolar
y una fase estacionaria tambin apolar.

7. APLICACIONES
En la medicina clnica, se utiliza para la purificacin y caracterizacin de enzimas y
protenas, cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina y estrgenos.
En la qumica forense, se usa para determinar la existencia de drogas, venenos,
alcohol, en la sangre y otros tejidos o fluidos
En el mbito de los elementos contaminantes, se utiliza para determinar sustancias
puedan ser desfavorables para la salud pblica
En el campo farmacutico para el anlisis de antibiticos, sedantes, esteroides y
analgsicos.
En la industria qumica se utiliza en el anlisis de algunos productos como son los
aromticos condensados, tensioactivos, propulsores, colorantes, etc

8. CUESTIONARIO
a. Cul es el fundamento de la tcnica?
La cromatografa es un mtodo muy utilizado en todas las ramas de la ciencia,
que permite la separacin, identificacin y determinacin de los componentes
qumicos en mezclas complejas.
La cromatografa lquida (HPLC), es una tcnica utilizada para separar los
componentes de una mezcla lquida. Consiste en una fase estacionaria no polar
(columna) y una fase mvil, que acta de portador de la muestra.

La muestra en solucin es inyectada en la fase mvil y una vez hecho esto, los
componentes de la solucin emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de
los compuestos con la columna. Estas interacciones qumicas, determinan la
separacin de los contenidos en la muestra.
Esta tcnica est indicada para la separacin de compuestos orgnicos
semivlatiles, Hidrocarburos Poliaromticos (PAHs), Aminocidos: OTA, cido Flico o
Herbicidas

b. Dibujar un esquema con los componentes principales del


instrumento de cromatografa lquida (HPLC) utilizado.

c. Explicar la separacin mediante HPLC trabajando en gradiente


Trabajar en gradiente, quiere decir que la composicin de la muestra no es
constante, sino que va variando con el tiempo. es una innovacin introducida en la
tcnica del HPLC. El gradiente utilizado vara en funcin de la hidrofobicidad del
compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una funcin de
la afinidad del compuesto de la fase mvil utilizada respecto a la afinidad por la fase
estacionaria

d. Explicar las diferencias entre fase normal e inversa. Qu modo


se utiliza en esta prctica?
La fase normal utiliza una fase mvil polar y una fase estacionaria apolar, y
se utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar. El compuesto polar se
asocia y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de absorcin aumenta a medida
que aumenta la polaridad del compuesto.
La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el
tiempo de retencin de los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos
(aquellas sustancias que son repelidas por el agua o no se pueden mezclar con ella)
tienden a aumentar el tiempo de retencin.
La fase reversa est formada por una fase estacionaria apolar y una fase
mvil polar. Una de las fases estacionarias ms comunes es la slica tratada.
El tiempo de retencin en este tipo de fase, es mayor para las molculas de
retencin apolar, mientras que las polares eluyen ms rpidamente. El tiempo de
retencin aumenta con la adicin de disolvente polar a la fase mvil y disminuye con la
introduccin de disolventes ms hidrofbicos.
La cromatografa de fase reversa se basa en el principio de las interacciones
resultantes de las fuerzas de repulsin entre un disolvente polar, un compuesto apolar
y una fase estacionaria tambin apolar.
Las caractersticas del compuesto de inters juegan un papel muy importante
en la retencin, por ejemplo un compuesto con una cadena alquil larga tiene un
tiempo de retencin mayor por las interacciones que sufre, y los compuestos
ramificados suelen eluir ms rpidamente.
En esta prctica, la fase utilizada ha sido la fase reversa

e. Explicar las diferencias encontradas entre una columna utilizada


en GC y otra en HPLC
Las columnas en GC tiene una longitud que vara entre 2 y 60 metros, son de
aceros inoxidables, vidrio, slice fundida o tefln. Suelen ser helicoides de dimetros de
entre 10 y 30 cm. La temperatura ptima de la columna depende del punto de
ebullicin de la muestra y del grado de separacin requerido y se obtienen tiempos de
elucin de 2 a 30 min. En cromatografa de gases se usan dos tipos generales de
columnas, las empaquetadas, o de relleno y las tubulares abiertas, o capilares.

Las columnas en HPLC son de acero inoxidable con un dimetro uniforme,


aunque tambin se pueden encontrar tubos de vidrio con paredes resistentes y sueles
tener una longitud de entre 10 y 30 cm. El empaquetado ms comn es de partculas
de slice, pero tambin se usa la almina, polmeros porosos y resinas de intercambio
inico. Hace poco, han empezado a fabricarse columnas de alta resolucin ms
rpidas, y que tienen menores dimensiones que las anteriores y su longitud oscila
entre 3 y 7,5 cm