Para la identificacin de lignina usamos la reaccin de Wiesner que produce una

coloracin roja-rosa o rojo cereza por la reaccin con floroglucinol en cido

clorhdrico concentrado. Esta reaccin slo tiene carcter cualitativo dado que
requiere que el polmero de lignina se halle en estado slido para que sea posible
la visualizacin de las estructuras lignificadas. El color rojo brillante se desarrolla
debido a la presencia de grupos coniferaldehdo en la lignina, sta junto con la
celulosa forman parte de la pared secundaria, lo que determina que haya menos
agua y menos capacidad de hidratacin, al impregnar los poros sus molculas se
forma por la polimerizacin de tres alcoholes (p-cumaril, coniferil y sinapil) que
difieren en el grado de metoxilacin en la posiciones C3 y C5 en sus anillos
aromticos luego de que estos alcoholes se incorporan en el polmero de lignina
reciben ciertos nombres; p-hidroxifenil (H), guayacil (G) y siringil (S). La estructura
polimrica de la lignina se entrelaza con las microfibrillas de celulosa, y tambin se
une a las hemicelulosas y pectinas mediante enlaces ster. El resultado es una
red hidrofbica que rodea los dems componentes de la pared a la que confiere
mayor resistencia y rigidez en dnde los alcoholes 4-0-alquil-4-hidroxicinamil de
las ligninas se condensan con el floroglucinol para dar similares compuestos, slo
en presencia de oxgeno.
Referencias:
http://www.biblio.colpos.mx:8080/xmlui/bitstream/handle/10521/383/Almaraz_Buen
dia_I_DC_Ganaderia_2011.pdf?sequence=1
https://es.scribd.com/doc/237361077/Analisis-Practica-4
http://www.oepm.es/pdf/ES/0000/000/02/06/94/ES-2069461_B1.pdf

Gram positivas y negativas.

El cristal violeta es un colorante catinico que penetra en todas las clulas
bacterianas (tanto gram positivas como gram negativas) a travs de la pared
bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 en equilibrio con KI y Sl
(Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de
mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared
de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en
solucin acuosa con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona que se
agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el
complejo I2/cristal violeta.

Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos
s lo hacen. Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una
coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como
la safranina o la fucsina. Al trmino del protocolo, las gram positivas se vern azulviolceas y las gram negativas se vern rosas (si no se hizo la tincin de
contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).
El fundamento de la tcnica se basa en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias gram positivas y gram negativas. La pared celular de las
bacterias gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, adems de
dos clases de cidos teicoicos: anclado en la cara interna de la pared celular y
unido a la membrana plasmtica se encuentran el cido lipoteicoico, y ms en la
superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano o
murena.
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin
distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de
peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana
exterior est hecha de protenas, fosfolpidos y lipopolisacridos.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas
diferencias constitutivas de la pared celular. La clave es el peptidoglicano, ya que
es el material que confiere su rigidez a la pared celular, y las gram positivas lo
poseen en mucha mayor proporcin que las gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la
membrana externa de las gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como
por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee
es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo
que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la
coloracin azul-violcea, por el contrario, las gram positivas al poseer una pared
celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son
susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este
acta deshidratando los poros, cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el
complejo cristal violeta/yodo y manteniendo la coloracin azul-violeta.