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CB Virtual 5

Universidade Federal da Paraba


Universidade Aberta do Brasil
UFPB VIRTUAL
COORDENAO DO CURSO DE LICENCIATURA EM CINCIAS BIOLGICAS DISTNCIA
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Fone: 3216-7781 e 8832-6059
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UFPB

Curso de Licenciatura em Cincias


Biolgicas Distncia

Reitor

Coordenador

Rmulo Soares Polari

Rafael Angel Torquemada Guerra


Coordenao de Tutoria

Pr-Reitor de Graduao
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Coordenao de Estgio

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Apoio de Designer Instrucional

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Romulo Jorge Barbosa da Silva
Departamento de Sistemtica e Ecologia

Apoio udio Visual

Chefe

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Juraci Alves de Melo

Ilustraes
Christiane Rose de Castro Gusmo

CB Virtual 05

C 569 Cadernos Cb Virtual 5 / Rafael Angel


Torquemada Guerra ... [Org.].Joo Pessoa: Ed. Universitria, 2010.
422p. : II.
ISBN: 978-85-7745-536-2
Educao a Distncia. 2. Biologia
I. Guerra, Rafael Angel
Torquemada Guerra.
UFPB/BC
CDU: 37.018.43

Este material foi produzido pelo curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas


Distncia da Universidade Federal da Paraba. A reproduo do seu contedo esta
condicionada a autorizao expressa da UFPB.

Imunologia III

APRESENTAO DA DISCIPLINA

A cincia Imunologia estuda os mecanismos de defesa dos seres vivos responsveis pela
eliminao dos agentes causadores de doenas como bactrias, vrus, fungos, parasitos e
substncias estranhas que aps invaso do organismo podem causar danos teciduais.
Com o grande nmero de descobertas na rea da Imunologia, atualmente esta cincia
apresenta vrias subreas que permitem o estudo mais profundo da imunidade.

A imunologia celular estuda as diferentes populaes de clulas envolvidas nas


respostas imunes como as clulas fagocitrias e os linfcitos conhecidos como as principais
clulas da resposta imunolgica;

A imunoparasitologia estuda os mecanismos de defesa contra os parasitos


helmintos e protozorios. Devido ao avano deste ramo da Imunologia algumas vacinas vm
sendo desenvolvidas contra a da doena leishmaniose;

A imunologia tumoral tenta elucidar como as respostas imunes controlam e


eliminam clulas em transformao e cancergenas. Atualmente existem algumas imunoterapias
para o cncer baseadas no uso de anticorpos, clulas manipuladas em laboratrio e substncias
produzidas por clulas da resposta imune, as citocinas;

Na imunofarmacologia estudam-se os efeitos de novas substncias com o potencial


de regular a resposta imunolgica. Um exemplo clssico da contribuio desta subrea para a
sade pblica foi a introduo dos medicamentos imunossupressores utilizados em pacientes
transplantados;

O estudo da imunogentica vem permitindo identificar os genes responsveis por


doenas importantes que afetam o sistema imunolgico como a artrite reumatide (AR), o lpus
eritematoso sistmico (LES) e o diabetes do tipo I;

Os mecanismos da auto-imunidade tm sido alvo de muita investigao pelos


imunologistas. H inmeras doenas do sistema imune que podem causar danos ao organismo
como o diabetes do tipo I, eclampsia, vasculites e anemias auto-imunes alm da AR e LES,
citados acima;

As doenas alrgicas tambm so de grande interesse dos imunologistas.


Centenas de milhes de pessoas no mundo sofrem de algum tipo de doena alrgica. A asma,
rinosinusite alrgica, urticrias e choque anafiltico so alguns exemplos.

Na imunologia clnica, o uso de vrias tcnicas de laboratrio como o ensaio


imunoenzimtico (ELISA) e a separao de clulas ativada por fluorescncia (FACS) permitem o
diagnstico preciso das doenas permitindo o incio da teraputica.
Como podemos observar o estudo da cincia Imunologia de fundamental importncia
para a formao dos profissionais da rea biolgica uma vez que as interaes entre os
microorganismos e substncias estranhas causadores de doenas com os organismos vivos (ex.
seres humanos), a instalao da doena ou manuteno da homeostasia dependem da
participao do sistema imunolgico.
Este livro apresenta os mecanismos da imunidade desde aqueles mais simples
imunidade intata at aqueles mais sofisticados como a resposta imune adaptativa.

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Imunologia III

IMUNOLOGIA III
Prof. Cladio Bezerra Santos
UNIDADE 1
O SISTEMA IMUNE ELIMINA OS ANTGENOS ESTRANHOS
1. OS ANTGENOS ESTRANHOS CAUSAM DOENAS
Podemos chamar de antgeno (Ag) qualquer agente infeccioso ou substncia capaz de
ser reconhecida pelo sistema imune. Os Ag estranhos so representados pelas bactrias, vrus,
parasitos, fungos e substncias estranhas que podem causar doenas (Figura 1). O sistema
imunolgico deve eliminar os Ag estranhos impedindo o desenvolvimento do processo infeccioso.
Para uma molcula seja considerada Ag estranho necessrio que esta apresente
algumas propriedades, tais como:

Ser estranho: o sistema imunolgico sadio deve se ativar apenas contra


substncias ou microorganismos patognicos e, tolerar as molculas e tecidos do organismo;

Alto peso molecular: molculas de baixo peso molecular no ativam a resposta


imune dependente de linfcitos T;

Imunogenicidade: um Ag estranho deve ser capaz de ativar o sistema imunolgico;

Antigenicidade: ser alvo dos mecanismos de defesa da resposta imune como os


anticorpos ou imunoglobulinas.

Figura 1. Antgenos estranhos.


Observamos trs tipos de Ag estranhos da esquerda para direita: bactrias na forma de cocos,
fungos leveduriformes e um parasito helminto. As imagens podem ser encontradas nos sites:
Fonte: http://www.naquelesite.com/profcharles/wp-content/uploads/2009/10/faecimg_monera5.gif,
http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/fungos/imagens/fungos-unicelulares.jpg,
http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/filo-asquelmintes/imagens/larva.jpg

Algumas substncias apresentam antigenicidade, porm no so capazes de ativar o


sistema imune, os haptenos (Figura 2). Eles so desprovidos de elevados pesos moleculares e
para se tornarem Ag estranhos devemm se ligar a protenas (carreador) do organismo. O conjunto
hapteno-carreador facilmente reconhecido pelo sistema imunolgico. Um exemplo clssico o
metal nquel que provoca dermatite de contato em alguns indivduos. O nquel se complexa com
protenas adquirindo o status de Ag estranho.

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Imunologia III
Figura 2. Hapteno
Observe

os

determinantes

haptnicos

ou

antignicos, estruturas que se ligam em protenas


prprias formando o complexo hapteno-carreador
que apresenta elevado peso molecular. O hapteno
no ativa o sistema imunolgico isoladamente.

Fonte: http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/chap3fig3web.gif

Os Ag estranhos podem ser classificados de acordo com a natureza em biolgicos


(microorganismos e transplantes no compatveis) e no biolgicos como metais (ex. nquel),
talco, cosmticos, medicamentos, pigmentos entre outros.
Os Ag de natureza biolgica ainda podem ser classificados de acordo com a natureza
qumica: proticos, sacardicos, lipdicos e nuclicos. Dependendo da natureza qumica do Ag, o
sistema imunolgico do indivduo pode desenvolver diferentes tipos de respostas de defesa. As
bactrias, vrus, fungos, parasitos helmintos e protozorios apresentam protenas, carboidratos,
lipdeos e cidos nuclicos nas suas constituies. Os tecidos e rgos transplantados no
compatveis tambm podem ser reconhecidos como estranhos pelo sistema imunolgico do
indivduo receptor levando a uma reao de rejeio ou morte do rgo enxertado.
Os Ags proticos so os mais importantes para o sistema imunolgico porque ativam
diferentes populaes de clulas de defesa especializadas em diferenciar os peptdeos presentes
nos microorganismos causadores de doenas com aqueles do nosso organismo. Nas prximas
sees deste livro estudaremos as clulas e como estas discriminam os peptdeos estranhos
daqueles prprios tambm chamados Ags prprios.
Os Ags sacardicos esto presentes em diversos microorganismos patognicos. As
bactrias gram-negativas apresentam uma grande quantidade de carboidratos de superfcie
facilitando o reconhecimento deste Ag pelo sistema imunolgico. Os lipdeos e cidos nuclicos
de microorganismos patognicos tambm so reconhecidos e eliminados. O lipopolissacardeo de
membrana externa de bactria (LPS) um exemplo de estrutura bastante conservada em vrias
bactrias e que serve de referncia para o reconhecimento pelo sistema imunolgico.
Vale a pena salientar que as protenas, carboidratos, lipdeos e cidos nuclicos presentes
em Ag estranhos apresentam estruturas diferentes das nossas molculas e por isso devem ser
atacadas e eliminadas pelo sistema imunolgico.
Por outro lado, alguns indivduos realizam respostas de defesa defeituosas contra Ag
geralmente inertes para a maioria da populao como o nquel presente em bijuterias, alguns ps
como o talco, pigmentos presentes em alimentos, cosmticos, materiais de prteses entre outros.
Nestes casos observa-se o desenvolvimento de doenas com alta prevalncia das alergias e
doenas auto-imunes.
Tanto nos casos dos Ag de natureza biolgica ou no, o sistema imunolgico desenvolve
diferentes estratgias de defesa para eliminao dos agentes infecciosos. Os mecanismos pelos
quais o sistema imunolgico do indivduo realiza as suas funes de proteo sero discutidos
mais adiante neste livro.

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Imunologia III

A primeira linha de defesa contra os Ag estranhos so as barreiras externas de defesa. A


seguir discutiremos como a pele, as mucosas, plos, unhas, queratina e outras barreiras naturais
de defesa atuam impedindo a penetrao, proliferao e at mesmo realizando a eliminao dos
Ag no organismo dos seres vertebrados inclusive os humanos.

2. A RESPOSTA IMUNE INATA FORMADA POR BARREIRAS DE DEFESA


2.1 AS BARREIRAS EXTERNAS DE DEFESA
O sistema imunolgico formado por barreiras de defesa externa e interna. As respostas
de defesa podem ser classificadas em respostas inatas ou adaptativas. As respostas inatas
apresentam baixa especificidade pelos Ag estranhos, apresentam sempre a mesma intensidade e
no tm memria o que significa que as respostas inatas no melhoram em qualidade ou
intensidade a medida que o indivduo se expe ao mesmo Ag ao longo do tempo. Por outro lado,
as respostas imunes adaptativas so capazes de discriminar diferenas estruturais mnimas entre
os Ag estranhos e, portanto realizam estratgias de defesa mais sofisticadas e eficazes. Alm
disso, as respostas adaptativas apresentam memria imunolgica que garante respostas de
defesa mais rpidas e intensas permitindo a eliminao dos Ag antes mesmo do aparecimento de
sinais e sintomas da doena.
Os seres vertebrados em geral apresentam barreiras externas de defesa que podem ser
classificadas de acordo com a natureza: fsica, qumica e biolgica (Figura 3).
2.2 BARREIRAS FSICAS
As barreiras fsicas so representadas principalmente pela pele, superfcies mucosas,
unhas e plos. Esses componentes de defesa so importantes barreiras que se contrapem a
entrada dos microorganismos porque servem para impor um limite entre o meio interno (clulas,
tecidos e rgos) e o meio externo.
A pele intacta quase que totalmente intransponvel a microorganismos com exceo da
forma infectante do parasito Schistosoma mansoni (cercria) causador da doena
esquistossomose popularmente conhecida como barriga dgua. Adicionalmente, os plos e
unhas funcionam como filtros reduzindo o nmero de partculas estranhas que entram em
contato direto com a pele. A descamao da pele bem como a produo de queratina representa
barreiras de defesa contra Ag estranhos.
Algumas respostas fisiolgicas so tipicamente respostas de defesa como o espirro que
consiste em uma resposta reflexa que elimina partculas estranhas presentes nas vias areas
superiores. Os processos diarricos tambm apresentam funo de defesa uma vez que o
aumento dos movimentos peristlticos acelera a eliminao de bactrias patognicas que esto
colonizando o trato intestinal e causando infeco. Adicionalmente, podemos citar o fluxo urinrio
como um importante mecanismo de defesa j que este responsvel pela eliminao de
microorganismos capazes de causar infeces urinrias.

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Imunologia III

2.3 BARREIRAS QUMICAS


Alm das barreiras fsicas, uma variedade de substncias como cidos graxos, enzimas e
peptdeos servem como barreiras qumicas de defesa. Um exemplo aplica-se aos cidos graxos,
produzidos por glndulas sebceas, que acidificam a pele. Esses cidos diminuem a proliferao
de bactrias e fungos impedindo o desenvolvimento das infeces cutneas. O cido clordrico
produzido no estmago tambm um exemplo de barreira qumica. Em meio extremamente cido
quase nenhum microorganismo sobrevive.
A presena da enzima lisozima na lgrima tambm exemplifica a importncia das barreiras
qumicas na preveno das infeces oculares. Esta enzima tem afinidade por ligaes Oglicosdicas presentes na parede bacteriana induzindo a quebra da estrutura e morte da bactria.
Isto explica porque nos expomos diariamente aos Ag estranhos presentes no ar e no
apresentamos infeces oculares com freqncia.
Alguns peptdeos de importncia biolgica apresentam funes de defesa a exemplo dos
interferons (IFN) do tipo I: IFN- e IFN-. Esses peptdeos so genericamente chamados de
citocinas e so secretados por clulas epiteliais infectadas por vrus. A produo e liberao
dessas citocinas induzem proteo s clulas circunvizinhas ainda no infectadas impedindo
assim a infeco de novas clulas pelos vrus e a disseminao destes pelo organismo. Assim, os
IFNs so importantes antivirais endgenos. Alm destes INFs, existe ainda o IFN- que tambm
induz imunidade contra vrus, mas que ser estudado nos prximos captulos deste livro.

Figura 3. Barreiras de defesa


Observa-se da esquerda para a direita: a pele e os plos (barreiras fsicas), clulas epiteliais
infectadas por vrus liberando IFN- e a estrutura da enzima lisozima responsvel pela clivagem da
parede bacteriana (barreiras qumicas).
Fonte: http://www.herbos.com.br/herbos/gerencia/docs/Image/pele_01.jpg,
http://www.asmabronquica.com.br/_images/Asma%20virus%202.jpg,
http://img.directoalpaladar.com/2008/09/lisozima.png

2.3.1 VIA ALTERNATIVA DO SISTEMA COMPLEMENTO


Outra importante barreira qumica interna de defesa o sistema complemento. Este
constitui em um conjunto de cerca de 20 protenas plasmticas de origem heptica com funo de
lise osmtica, estimulao da resposta inflamatria e facilitao do processo de englobamento de
partculas slidas, fagocitose. As protenas so representadas pela letra C seguido de um nmero,
ex. (C1, C2, C3-C9). Outras protenas com nomeclaturas diferentes completam o sistema. O

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Imunologia III

complemento se ativa na presena de Ag estranhos devido afinidade do componente C3b por


superfcies de bactrias e fungos. A ativao da via alternativa do complemento ocorre
rapidamente eliminando os Ag estranhos presentes no sangue (Figura 4).

Figura 4. Via de ativao do sistema complemento.


A fase inicial da cascata de ativao mostrada sobre a membrana do antgeno. Observe a clivagem
do Fator B pelo Fator D na presena de Mg2+ seguida pela hidrlise de C3 para formo da enzima
C3 convertase (C3bBb). A continuao da cascata de ativao resulta na formao da enzima C5
convertase (C3bBbC3b). Os demais componentes no so mostrados nesta figura.
Fonte: http://wikidoc.org/images/thumb/b/b2/Formowanie_MAC.svg/350px-Formowanie_MAC.svg.png

O componente C3 sintetizado e clivado, por hidrlise, em nveis basais constantemente


na corrente sangunea. O fragmento gerado a partir da clivagem denominado C3b tem afinidade
por componente da parede bacteriana e fungica (ex: zimosan). A ligao de C3b induz a ativao
da via alternativa (independente de imunoglobulinas) do sistema complemento. Uma segunda
protena chamada Fator B clivada pela protena Fator D gerando um fragmento Bb que se liga
ao fragmento C3b presente na membrana do Ag estranho. O dmero (C3bBb) formado recebe o
nome de enzima C3 convertase da via alternativa. A gerao desta enzima considerada
fundamental para o sucesso da ativao do complemento. A C3 convertase cliva o componente
C3 presente no plasma fornecendo elevados nveis do fragmento C3a e C3b sendo este ltimo
capaz de ligar-se em diferentes regies da membrana do Ag e servindo como ponto de partida
para a ativao de novas cascatas. Este processo denomina-se de ala de amplificao.
O fragmento C3b gerado tambm se liga na C3 convertase formando um trmero
C3bBbC3b denominado de enzima C5 convertase da via alternativa. Esta nova enzima tem
afinidade e cliva o componente C5 presente no plasma gerando os fragmentos C5a e C5b. Este
ltimo liga-se na C5 convertase. Em seguida os demais componentes C6, C7, C8 e C9 so
recrutados para membrana do Ag. A insero de vrios componentes C9 (poli-C9) leva a
formao de um poro que atravessa completamente a membrana do Ag. Este poro chamado de
complexo de ataque a membrana, MAC (Figura 5).
A funo do MAC promover a lise osmtica da clula bacteriana ou fngica. Ocorre um
grande influxo de gua e clcio provocando a lise e a ativao de vias apoptticas dependentes

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Imunologia III

de clcio. Imagens de micrografia eletrnica revelam a presena de milhares de MACs na


superfcie bacteriana indicando que esta barreira de defesa altamente eficaz na eliminao de
Ag estranho presente na corrente sangunea. Sabe-se que a produo diminuda de protenas do
complemento causa uma maior suscetibilidade a infeces bacterianas e fngicas, doena
chamada de imunodeficincia.

Figura 5. Complexo de ataque a membrana, MAC.


Na figura a esquerda osbervamos uma micrografia eletrnica da membrana de uma bactria com
vrios orifcios (MAC) na superfcie. direita, uma figura esquemtica dos componentes formadores
do complexo inseridos na membrana plasmtica.
Fonte: http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/H/Humphrey50.jpg,
http://www.helsinki.fi/~vakeva/mac.GIF

Outras vias de ativao do sistema complemento podem ser ativadas a exemplo das vias
das lectinas e a via clssica independente de anticorpo. Estas apresentam mecanismos de
ativao semelhantes via alternativa do complemento.
2.4 BARREIRAS BIOLGICAS
As barreiras biolgicas de defesa consistem na presena de bactrias e fungos no
patognicos (comensais) que colonizam toda superfcie da pele e trato digestrio. Esses
componentes de defesa competem por espao e nutrientes com aqueles microorganismos
patognicos impedindo assim a proliferao e desenvolvimento do processo infeccioso. Os
lactobacilos presentes na mucosa vaginal tambm secretam cidos que reduzem o pH vaginal
protegendo a mucosa de infeces. Em mulheres ps-menopausa observa-se uma reduo no
nmero destes lactobacilos justificando assim a maior incidncia de infeces na mucosa vaginal
e uretral.
:: HORA DE TRABALHAR!!! ::
Atividades
De que maneira as barreiras externas de defesa impedem a invaso dos
microorganismos patognicos?

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Imunologia III

3. RGOS E CLULAS DO SISTEMA IMUNE


3.1 BARREIRAS INTERNAS DE DEFESA
As barreiras internas de defesa so formadas por um conjunto de rgos, clulas e
substncias produzidas por clulas com a funo de eliminar qualquer agente causador de
doena. Esses agentes podem ser de natureza biolgica como as bactrias, vrus, parasitas e
fungos ou podem ser compostos considerados inertes para a maioria das pessoas como metais
(nquel), prteses e talco.
Os rgos do sistema imune ou linfides so classificados de acordo com a capacidade
destes em produzir e/ou realizar a maturao de clulas do sistema imune. A medula ssea e o
timo so denominados rgos linfides primrios ou geradores, pois so responsveis pela
produo e/ou maturao de linfcitos enquanto os linfonodos, bao e tecidos linfides
associados mucosa (do ingls mucosa associated linofoid tissue - MALT) so denominados
rgos linfides secundrios ou perifricos, pois so responsveis por armazenar clulas linfides
e facilitar o encontro destas com os agentes causadores de doenas permitindo assim a iniciao
e desenvolvimento das respostas de defesa capazes de eliminar tais microorganismos (Figura 6).

Figura 6. rgos linfides secundrios.


Observamos da esquerda para a direita um linfonodo, o bao localizado no quadrante superior
esquerdo da cavidade abdominal e detalhes da histologia deste rgo direita. O bao delimitado
por uma cpsula e dividido em duas regies: a polpa vermelha e a branca. Esta ltima considerada
o rgo linfide propriamente dito.
Fonte: http://www.virtual.epm.br/material/tis/curr-bio/trab2004/2ano/imuno/imagens/nodulos.gif,
http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/corpo-humano-sistema-linfatico/imagens/baco-1.jpg

3.2 HEMATOPOESE
O estudo dos rgos linfides inicia-se com a medula ssea responsvel por realizar a
hematopoese (Figura 7). Neste processo de formao das clulas sanguneas, o rgo de
aspecto esponjoso (medula) presente no interior dos ossos longos produz as clulas da srie
vermelha ou hemceas, as clulas da srie branca ou leuccitos e plaquetas. Os leuccitos so
clulas que realizam a funo de defesa no organismo. O ponto de partida para a hematopoese
ativao de uma clula pluripotente ou clula tronco que estimulada por citocinas liberadas

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Imunologia III

pelas clulas do estroma da medula ssea. Existe uma grande variedade de citocinas no interior
deste rgo sendo as interleucinas (IL)-3, IL-7 e o fator estimulante de colnia de granulcitos e
macrfagos (do ingls granulocyte and macrophages-colony stimulant factor - GM-CSF)
consideradas as mais importantes neste processo.
Figura 7. Hematopoese.
esquerda, imagem de um osso longo e a medula
localizada no interior. As principais clulas sanguneas
originadas a partir da clula progenitora hematopoitca
so apresetadas. Destacam-se os leuccitos: neutrfilo,
basfilo, eosinfilo, alm do macrfago e os linfcitos B
e T. Os eritrcitos e plaquetas no apresentam funo
de defesa.
Fonte: http://www.cacoarteiro.com/oque/medula.jpg

A estimulao via citocinas induz a


diferenciao da clula tronco em progenitor mielide
ou linfide, sendo a primeira precursora das
hemceas,
plaquetas,
granulcitos
neutrfilos,
eosinfilos, basfilos, moncitos e macrfagos enquanto a segunda d origem aos linfcitos B,
linfcitos T e clulas matadoras naturais (do ingls natural killer NK). Dentre as clulas da
linhagem mielide esto os fagcitos que exercem um papel fundamental nas respostas imunes,
j dentre as clulas da linhagem linfide encontramos os linfcitos que exercem funes de
defesa mais sofisticadas.
Dentre as clulas da linhagem mielide encontram-se os fagcitos: neutrfilos, moncitos,
macrfagos (residentes de tecidos) e clulas dendrticas. Estas apresentam um papel crucial
como barreiras internas de defesa tanto desempenhando a funo de fagocitar Ag estranhos
como tambm atuando na estimulao de respostas imunes complexas dependentes de linfcitos.
A fagocitose depende do reconhecimento do Ag estranho pelo fagcito via receptores de
membrana com afinidades por estruturas moleculares presentes nas membranas de bactrias,
fungos e alguns vrus. Tais estruturas so denominadas de padres moleculares como, por
exemplo, o carboidrato manose presente na membrana de vrias bactrias e fungos e o
lipopolissacardeo de membrana externa de bactria (LPS) (Figura 8).
Os fagcitos expressam receptores de manose e LPS em suas membranas plasmticas e
a partir desta interao receptor/padro molecular ocorre invaginao na membrana do fagcito
permitindo o englobamento do Ag estranho, processo conhecido por fagocitose. Este processo
pode ocorrer na corrente sangunea quando neutrfilos e moncitos principalmente reconhecem
Ag estranho solvel ou pode ocorrer nos tecidos quando macrfagos residentes de tecido
reconhecem e englobam tais partculas.

111

Imunologia III
Figura 8. Receptor de manose e
lipopolissacardeo.
Estrutura do receptor de manose inserido na
membrana plasmtica com o carboidrato ligado
na parte superior (esquerda) e estrutura do LPS
(direita) na membrana do antgeno. No detalhe
os componentes lipdico e sacardico/Ag O.
Fonte:
http://users.path.ox.ac.uk/~ptaylor/images/mr.gif
http://www.pediatriasaopaulo.usp.br/upload/
html/414/img/07f1.gif

A fagocitose no sangue pode ser melhorada caso o Ag esteja ligado ao fragmento C3b do
sistema complemento. Os fagcitos tambm expressam receptores para C3b facilitando o
reconhecimento do Ag pelos fagcitos. Portanto, podemos dizer que uma vez o Ag encontra-se
revestido por C3b a fagocitose ocorre com maior intensidade. O processo de facilitao da
fagocitose por fragmentos do complemento ou por outros componentes da resposta imune (ver
adiante) denomina-se opsonizao e, a partcula que reveste o Ag chama-se opsonina.
O mesmo processo de fagocitose pode ocorrer nos tecidos por macrfagos residentes
aps uma leso do tecido e invaso do mesmo por bactrias. Adicionalmente, fagcitos oriundos
da corrente sangunea tambm podem realizar fagocitose em tecidos, no entanto, para que isto se
torne possvel se faz necessrio que estas clulas migrem do interior de um vaso sanguneo em
direo ao tecido lesionado. Este processo denomina-se inflamao.

4. A RESPOSTA INFLAMATRIA
A resposta inflamatria iniciada aps injria tecidual e conseqente ativao de clulas
endoteliais presentes nas paredes dos vasos sanguneos. Diferentes estmulos podem causar
dano celular como: a) agentes fsicos trauma mecnico e radiao, b) agentes qumicos
cidos e bases fortes, venenos e, c) agentes biolgicos bactrias, vrus, fungos e parasitos.
Uma vez lesionado o tecido, as clulas epiteliais iniciam a clivagem enzimtica de
fosfolipdeos de membrana convertendo-os em cido araquidnico (AA) que serve como precursor
de molculas pr-inflamatrias. As enzimas ciclooxigenase e lipooxigenase convertem o AA em
prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos, respectivamente. Estes derivados lipdicos do AA
so liberados do interior das clulas epiteliais lesionadas e ativam receptores presentes no
endotlio (Figura 9).

112

Imunologia III

Figura 9. Derivados lipdicos do cido araquidnico.


A gerao de mediadores inflamatrios depende da atividade das enzimas fosfolipase A que
convertem os fosfolipdeos de membrana em AA. Este transformado em prostaglandinas,
tromboxanos e leucotrienos.
Fonte:
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/metabolismo%20araquidonico_archivos/image017.jpg

Os efeitos vasculares observados aps estimulao das molculas pr-inflamatrias so


aumento da permeabilidade vascular, vasodilatao, eritema, edema e dor. Alm disso, a
superfcie interna do endotlio at ento em repouso e desnuda comea a expressar molculas
de adeso representadas inicialmente pelas E-selectinas. Essas constituem em grupo de
glicoprotenas do endotlio com afinidade por receptores de leuccitos que devem reconhecer as
selectinas para iniciar o processo de transmigrao atravs da parede endotelial com o objetivo de
eliminar o microorganismo ou material estranho presente no tecido lesionado. Em seguida
descrevemos as etapas do processo inflamatrio: marginao, rolamento, adeso firme e
transmigrao.
4.1 ETAPAS DO PROCESSO INFLAMATRIO
A marginao consiste na aproximao dos leuccitos da margem da parede endotelial.
Na ausncia de estmulo e ativao de endotlio, os leuccitos encontram-se na luz do vaso
sanguneo, no entanto aps a ativao endotelial por derivados lipdicos do AA e liberao de
citocinas como o fator de necrose tumoral (tumor necrose factor - TNF-) no local da injria
tecidual e na corrente sangunea observa-se um aumento na viscosidade do sangue facilitando
assim a marginao dos leuccitos (Figura 10).

113

Imunologia III

Figura 10. Etapas do processo inflamatrio.


A inflamao ocorre em etapas. Acima observamos a marginao do leuccito, o rolamento e
adeso firme da clula na parede endotelial e a transmigrao celular. Esses eventos so
dependentes de molculas de adeso (selectinas e integrinas) que permitem a interao leuccitoendotlio. Tanto a iniciao da resposta inflamatria como a atrao dos leuccitos para o local da
leso tecidual dependem de estmulos como as molculas pr-inflamatrias derivadas do cido
araquidnico e fatores quimiotticos (para neutrfilos) derivados do endotlio a exemplo da IL-8.
Fonte: http://www.crono.icb.usp.br/glandp3.jpg

Os leuccitos se aproximam do endotlio de acordo com uma cintica de aparecimento


sendo os neutrfilos os primeiros a participarem deste evento. Os neutrfilos so considerados a
primeira linha de defesa celular ativada na resposta inflamatria. Estas clulas expressam
receptores para selectinas do endotlio e aps a marginao realizam as primeiras interaes
moleculares ainda no suficientes para que estas clulas estacionem na superfcie endotelial. Em
conseqncia deste reconhecimento, os neutrfilos comeam a realizar o movimento de
rolamento sobre a parede endotelial.
A etapa de rolamento permite que um nmero maior de selectinas e seus ligantes
presentes nos leuccitos interajam entre si provocando a adeso estvel da clula sobre o
endotlio. Os neutrfilos aderidos ao endotlio podem realizar o movimento de diapedese e a
transmigrao do interior do vaso para o tecido lesionado utilizando os espaos entre as clulas
endoteliais. Isto possvel devido ao aumento da permeabilidade vascular inicialmente induzido
pelas molculas pr-inflamatrias liberadas no incio da injria tecidual.
Uma vez no tecido, o neutrfilo poder se movimentar em direo ao agente invasor
utilizando uma estrada formada de protenas da matriz extracelular formada principalmente de
fibrina e fibronectina. O encontro do neutrfilo com aquelas partculas a serem fagocitadas
depende da liberao tanto das clulas endoteliais como tambm das clulas epiteliais de fatores
quimiotticos capazes de guiar os neutrfilos em direo ao local da injria tecidual. A IL-8 um
fator quimiottico para neutrfilos que liberado aps o incio do processo inflamatrio. Estas

114

Imunologia III

clulas se movimentam em direo a um gradiente de concentrao de IL-8 at encontrar o


agente invasor. Caso este agente seja uma bactria, o neutrfilo realizar o reconhecimento via
receptores como descrito acima.
Outros leuccitos tambm podem participar da resposta inflamatria caso o agente invasor
no seja eliminado nas primeiras oito horas. Neste caso a inflamao classificada como
inflamao aguda caracterizada pelo grande influxo de neutrfilos para o local da leso. Porm,
se o agente invasor persistir por mais de oito horas, a inflamao alcana o status de cronicidade
que se caracteriza pela presena de outros leuccitos como moncitos e mais tardiamente os
linfcitos.
:: SAIBA MAIS... ::
As inflamaes crnicas causam danos aos tecidos normais e por isso so
consideradas respostas patolgicas. Podemos citar como inflamaes crnicas a
asma alrgica, a artrite reumatide e o lpus eritematoso sistmico.

5. MECANISMOS DE MORTE DOS FAGCITOS


Tanto os neutrfilos durante a inflamao aguda como os moncitos na inflamao crnica
so capazes de reconhecer e fagocitar o agente invasor. O englobamento do agente invasor d
incio aos mecanismos de morte intracelular desenvolvidos pelos fagcitos. Estes produzem
intermedirios reativos do oxignio (do ingls, reactive oxigen intermediates ROIs), enzimas
lisossomais e xido ntrico, NO (Figura 11).
Aps a fagocitose, o leuccito mantm o microorganismo no interior de uma vescula
denominada fogossomo que por sua vez pode sofrer fuso com lisossomos presentes no citosol
levando a formao de uma nova vescula, o fagolisossomo. No primeiro caso, o microorganismo
permanece vivel no interior do fagossomo at que este inicie a gerao dos ROIs. Na superfcie
da membrana do fagossomo encontra-se uma enzima chamada fagcito oxidase capaz de
converter o oxignio molecular em nion superxido, perxido de hidrognio entre outros
intermedirios do oxignio.
Os ROIs so espcies reativas (radicais livres) que provocam danos irreversveis nas
estruturas de membrana, organelas e cidos nuclicos do microorganismo presente no interior do
fagossomo. A ao dos ROIs causa a morte do agente invasor e por isso os ROIs so
considerados como mecanismo de morte dos fagcitos. A importncia deste evento intracelular
fica evidente em pacientes com deficincia da enzima fagcito oxidase devido incapacidade de
eliminar bactrias e fungos. Estes pacientes apresentam infeces recorrentes e apresentam uma
baixa expectativa de vida. Um segundo importante mecanismo de morte intracelular so as
enzimas lisossomais. Estas so liberadas sobre o microorganismo fagocitado aps a formao do
fagolisossomo. Estas enzimas proteolticas e causam a morte do microorganismo.

115

Imunologia III

Figura 11. Produo de ROIs pelo fagcito.


Observe que a produo dos intermedirios reativos do
oxignio

ativada

pela

fagocitose

do

antgeno

(esquerda) ou mediada por receptor de fragmento (C3b)


de protena do sistema complemento que se liga em
receptor na membrana do fagcito (direita).
Fonte:
http://www.scielo.br/img/fbpe/rsbmt/v35n4/a14fig03.gif

Caso o microorganismo escape do fagolisossomo, o fagcito pode utilizar um terceiro


mecanismo de morte intracelular, a gerao de NO. Este composto um gs produzido a partir da
converso do aminocido L-arginina em NO e citrulina. A enzima responsvel pela reao a
sintase de xido ntrico (NO sintase). Existe a forma constitutiva e induzida da enzima sendo a
ltima produzida em grande quantidade durante a infeco. O NO o principal mecanismo de
morte contra protozorios como a leishmania.
:: SAIBA MAIS... ::
Pacientes com deficincia de NO so susceptveis a doenas do trato respiratrio
(asma), do aparelho cardiovascular (hipertenso arterial) e parasitoses como
leishmaniose e doena de chagas.

A intensidade das respostas dependentes de NO depende das caractersticas genticas de


cada indivduo. Isto significa que dentro de uma espcie heterognea como a humana
encontraremos pessoas com uma capacidade maior ou diminuda para eliminar parasitos de vida
intracelular como a leishmania e, portanto o grau de resistncia e susceptibilidade a doenas varia
dentro de uma populao. Nas ltimas sees deste texto iremos discutir quais os fatores que
influenciam nas respostas imunes dependentes de NO.
Como j discutido acima a fagocitose e os mecanismos de morte intracelular ocorrem
freqentemente na corrente sangunea e, diferentes tecidos do corpo. No entanto, h outros stios
anatmicos especializados em respostas de fagocitose, os rgos linfides perifricos.
Enquanto a medula ssea fornece as clulas sanguneas, o bao, os linfonodos e os MALT
servem como ambientes apropriados para o desenvolvimento das respostas imunes mais
complexas. Neste momento vamos enfatizar apenas a importncia destes rgos para realizao
da fagocitose enquanto que os demais mecanismos de defesa elaborados nestes rgos sero
discutidos adiante.
O bao um rgo de defesa porque serve para armazenar clulas da resposta imune e
facilitar o encontro destas clulas com Ag estranhos presentes na corrente sagunea. Este rgo

116

Imunologia III

bastante vascularizado dividido em duas regies anatmicas, a polpa vermelha e a branca. A


polpa branca contm as clulas de defesa como macrfagos, clulas dendrticas e linfcitos. Os
Ag estranhos que chegam no sangue sofrero o ataque dos fagcitos presentes na corrente
sangunea e parte dos Ag chegaro ao bao onde tambm sero reconhecidos, fagocitados e
eliminados pela ao dos ROIs, enzimas lisossomais ou NO. A importncia deste processo no
interior do bao consiste na ativao posterior dos linfcitos que so as clulas da resposta imune
adaptativa especializadas em desenvolver mecanismos de defesa de longa durao.
Os linfonodos tambm conhecidos como gnglios linfticos esto distribudos por todos
tecidos do corpo desde a regio cervical at os membros inferiores. Estes rgos esto
conectados por uma rede de vasos linfticos e tambm se comunicam com vasos sanguneos
especializados denominados de Vnulas do Endotlio Alto (do ingls High endotelial Venules
HEV). Os vasos linfticos apresentam uma extremidade que penetra no linfonodo chamada de
vaso linftico aferente e outra extremidade que sai do rgo, vaso eferente. Muitos vasos linfticos
desembocam nos tecidos perifricos o que facilita a drenagem dos Ag estranhos que tenham
penetrado no tecido a partir de uma leso da pele. A drenagem permite que os Ag sejam
transportados pela linfa presente no interior dos vasos linfticos para o interior dos linfonodos.
Observa-se tambm a migrao de fagcitos do tecido pelos vasos linfticos aps a fagocitose
realizada no local da infeco. Similarmente ao bao, os linfonodos tambm armazenam clulas
de defesa permitindo assim que respostas imunes sejam realizadas em qualquer tecido do corpo
alvo de infeco.
Os MALTs so responsveis pela proteo das mucosas. A estrutura anatmica destes
rgos semelhante do bao e linfonodos. Os Ag estranhos que colonizam as mucosas so
drenados para os MALTs onde sero fagocitados e eliminados.

:: HORA DE TRABALHAR!!! ::
Voc acha que a resposta inflamatria boa ou prejudicial a sade? Explique
baseado nos conhecimentos aprendidos na Unidade 1.

117

Imunologia III

UNIDADE 2
RESPOSTA IMUNE ADPATIVA OU ADQUIRIDA
1. A RESPOSTA IMUNE ADAPTATIVA MAIS COMPLEXA E EFICAZ
O termo adaptativo deve-se ao fato que o sistema imune precisa se adaptar a uma nova
situao, a presena do Ag estranho. Esta resposta tambm conhecida como especfica porque
capaz de discrimiar cada espcie ou variante gentica de um microorganismo. Esta
especificidade adquirida ao longo da vida medida que o indivduo se expe aos agentes
infecciosos e por isso a resposta adaptativa tambm conhecida como resposta imune adquirida.
A resposta imune adaptativa depende da participao dos linfcitos originados a partir da
clula progenitora linfide da medula ssea. Estas clulas so responsveis por discriminar
pequenas diferenas entre os Ag estranhos presentes na natureza e montar respostas de defesa
mais eficazes do que aquelas realizadas pelo sistema imune inato. Existem trs grandes subpopulaes de linfcitos: linfcito B (LB), linfcito (T) e clulas matadoras naturais (do ingls,
natural killer cells clulas NK). Exceto as clulas NK que participam da resposta inata, os LB e
LT so clulas da resposta imune adaptativa. Os LB so as nicas clulas produtoras de
anticorpos ou imunoglobulinas (Ig) enquanto os LT so divididos em duas sub-populaes
celulares, os LT auxiliares (LTa) e os LT citotxicos (LTc).
Os LTa so clulas produtoras de citocinas que regulam uma infinidade de respostas
imunes enquanto os LTc realizam respostas de citotoxidade necessrias para eliminao de Ag
estranhos de vida intracelular como os vrus, algumas bactrias e protozorios alm de provocar a
morte de clulas em transformao e tumorais. Outras sub-populaes de LT vm sendo
estudadas, no entanto pouco se sabe sobre estas clulas. Algumas funes j descritas para as
novas sub-populaes de LT sero discutidas mais adiante neste livro.
1.1 AS PROPRIEDADES DA RESPOSTA ADAPTATIVA
As respostas imunes adaptativas apresentam propriedades. Abaixo so descritas aquelas
mais importantes, como:
1.
Especificidade: as respostas adaptativas so altamente especficas porque
discriminam a seqncia dos eptopos presentes em cada Ag estranho. Logo se houver diferenas
entre duas bactrias do gnero salmonela, os linfcitos so capazes de discriminar estruturas
moleculares das duas bactrias e montar uma resposta especfica para cada uma delas;
2.
Memria: o sistema imune adaptativo capaz de lembrar das estruturas de cada
um dos Ag estranhos expostos no passado. Os linfcitos so as nicas clulas que tm memria.
A vantagem das respostas imunes com memria permitir que a resposta de defesa seja
realizada mais rapidamente e com maior intensidade garantindo uma eliminao do Ag estranho
antes mesmo que ele prolifere causando infeco e os sinais e sintomas caractersticos da
doena;
3.
Auto-limitao: respostas adaptativas apresentam incio, meio e fim. O Ag estranho
o fator que determina a auto-limitao da resposta uma vez que eliminado o Ag, o sistema
imune deve retornar do status ativado para o seu estado de repouso. Esta propriedade garante

118

Imunologia III

que apenas o Ag estranho ser alvo da resposta imune e que os tecidos e rgos do indivduo
no sero atacados pela resposta imune;
4.
Diversidade: a capacidade de gerar uma infinidade de clones de linfcitos
especficos para os diversos Ag estranhos confere resposta adaptativa uma diversidade capaz
de eliminar qualquer agente infeccioso que penetre no organismo. Esta propriedade facilmente
observada quando avaliado as diferentes especificidades das imunoglobulinas produzidas pelos
seres vertebrados;
5.
No reatividade ao prprio: esta propriedade garante que o sistema imune
adaptativo discrimine os Ags prprios daqueles no prprios/estranhos. Esta sem dvida uma
das mais notveis propriedades da resposta imune, pois garante a no agresso dos tecidos
normais pelos mecanismos efetores do sistema imunolgico. O mecanismo de tolerncia central e
perifrico, discutidos mais adiante, so fundamentais neste processo.
1.2 AS FASES DA RESPOSTA ADAPTATIVA
As respostas adaptativas ocorrem em fases: reconhecimento do Ag estranho, ativao dos
linfcitos e fase efetora (Figura 12).
A primeira fase realizada por clones de linfcitos pr-existentes que selecionam o Ag
estranho utilizando receptores de membrana a partir de um processo denominado de Seleo
Clonal. Este foi postulado com base no conhecimento de que os clones de linfcitos gerados na
medula ssea expressam diferentes receptores para Ag estranhos determinados por rearranjos
aleatrios dos genes dos receptores de LB e LT. Portanto, cada Ag estranho que entra no
organismo seleciona um clone especfico de linfcito de acordo com a afinidade qumica do Ag e a
estrutura dos receptores de linfcitos (Figura 13).
Inicialmente, o Ag reconhecido pelos LB e/ou LT provocando a ativao dos linfcitos.
Isto implica na ativao de genes que controlam a diviso celular e outros genes de citocinas
como a IL-2 conhecida como um fator de crescimento de linfcitos T. Uma vez ativados, os
linfcitos proliferam gerando vrios clones com a mesma especificidade para o Ag. Esses clones
sofrem diferenciao celular adquirindo o fentipo de clula efetora.

Figura 12. Fases da resposta imune adaptativa.


O Ag apresentado pela clula apresentadora de
antgeno (do ingls, Antigen Presenting Cell
APC) e reconhecido pelo LT (1 fase) que se ativa
(2 fase) e produz IL-2. Esta citocina induz a
proliferao celular e gerao dos clones efetores
(3 fase) e de memria Ag-especficos. Estes
clones tambm produzem IL-2 favorecendo ainda
mais a expanso clonal.
Fonte:
http://www.rbi.fmrp.usp.br/imunobiol/aulas/t14_12
504200.jpg

119

Imunologia III

Figura 13. Seleo clonal


O Ag-X estranho penetra no organismo e
seleciona um clone de linfcito prexistente

expressando

receptor

com

especificidade para o Ag determinada


aleatoriamente por recombinao gnica.
O clone selecionado (ao centro) se ativa e
sofre

expanso

encontra-se

clonal.

Nesta

representado

um

figura
LB

produzindo anticorpo anti-X. A seleo


clonal tambm ocorre para os LT.
Fonte:
http://www.nature.com/nature/journal/v421
/n6921/images/nature01409-f1.2.jpg

Os LB se diferenciam em clulas produtoras de Igs chamadas de plasmcitos. Estas


clulas so maiores e apresentam um maquinrio de sntese protica incrementado para fornecer
grandes quantidades de imunoglobulinas. As Igs so responsveis pela neutralizao e
colaboram para eliminao dos Ag estranhos como discutido mais adiante.
Por outro lado, os LT ativados tambm geram clones especficos para o Ag. A ativao do
LT depende necessariamente da participao de clulas acessrias ou apresentadoras de Ag (do
ingls, Antigen Presenting Cell APC) como macrfagos e clulas dendrticas. As clulas
acessrias so capazes de fagocitar o Ag estranho e posteriormente apresentar fragmentos deste
Ag aos LT, processo denominado de apresentao de Ag. Os mecanismos de gerao dos
fragmentos (processamento) e apresentao de Ag sero descritos mais adiante.
De acordo com a natureza do Ag e o stio anatmico onde ocorre a resposta imune esses
LT podem se diferenciar nas sub-populaes auxiliar ou citotxica. Estas clulas produzem
citocinas ou toxinas, respectivamente, importantes na regulao da resposta imune ou na
eliminao do Ag, fase efetora da resposta imune.
Aps a eliminao do Ag observa-se uma reduo no nmero de linfcitos, citocinas e Igs
secretados pelas clulas. Esta fase caracterizada por um intenso processo de morte celular /
apoptose em conseqncia da ausncia do Ag estranho que representa um estmulo fundamental
para sobrevivncia e gerao dos clones de linfcitos. O retorno ao estado de repouso chamado
de fase de auto-limitao da resposta imune adaptativa. No entanto, podemos observar que
algumas clulas ou molculas geradas no incio da resposta permanecem em nveis basais isto
porque as respostas adaptativas apresentam clulas de memria.
Estas clulas so geradas juntamente com os clones efetores de linfcitos, mas no
participam efetivamente da eliminao do Ag neste primeiro momento. As clulas de memria

120

Imunologia III

permanecem no organismo no interior dos rgos linfides perifricos onde se encontram viveis
por tempo indeterminado. Dependendo do Ag que estimula o linfcito, este pode gerar clulas de
memria com uma meia vida de meses, anos ou dcadas. Baseado na gerao de clones de
memria a partir da administrao de Ag estranhos modificados em laboratrio tenho sido
possvel induzir proteo/imunizao de indivduos a partir das vacinas.
:: FIQUE DE OLHO!! ::
As vacinas induzem a gerao de clones de memria que garantem o
reconhecimento rpido e o desenvolvimento de respostas adaptativas mais
eficazes na eliminao dos patgenos ao longo do tempo.

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividades
Imagine que voc sofreu um ferimento no p e depois apareceu uma ngua na
virilha. Como voc explicaria a formao da ngua baseando-se nas fases da
resposta imune adaptativa?

2. LINFCITOS B E A RESPOSTA IMUNE HUMORAL


Os linfcitos B (LB) se originam a partir de uma clula progenitora linfide da medula ssea
e sob o principal estimulo de diferenciao dos precursores do LB, a IL-7. Antes de atingir o status
de clula madura, vrios estgios de diferenciao celular so observados como: Pr-B, Pr-B,
clula B imatura e LB maduro. A concluso do processo de maturao ocorre na periferia onde o
LB utiliza os receptores de membrana para exercer a sua funo de defesa (Figura 14).
Inicialmente a clula Pr-B expressa os marcadores de superfcie CD10, CD19 e CD 43.
No prximo estgio, a clula Pr-B inicia a recombinao dos genes da cadeia pesada de
imunoglobulina (Ig), uma cadeia citoplasmtica e receptor da clula Pr-B associado cadeia .
Esta clula CD43+ e expressa o marcador B220. A clula B imatura CD43-, expressa baixos
nveis de IgM de membrana (receptor do LB) e realiza recombinao dos genes de Ig. Ainda neste
estgio de diferenciao, ocorrem os processos de seleo negativa e edio do receptor do LB
denominado BCR (do ingls, B Cell Receptor). A seleo negativa determina a morte dos LB
defeituosos enquanto a edio do receptor consiste na internalizao e nova sntese do receptor
em LB defeituosos.

121

Imunologia III

Estes dois mecanismos garantem a qualidade dos LB que saem da medula ssea
impedindo que clulas potencialmente nocivas alcancem a corrente sangunea e o interior dos
rgos linfides perifricos citados anteriormente.
:: FIQUE DE OLHO!! ::
Os LB nocivos ou autorreativos podem reconhecer e se ativar contra Ag prprios
provocando leso nos tecidos e rgos causando as doenas autoimunes.

Figura 14. Receptor do linfcito B.


O receptor para o antgeno do LB (BCR)
expresso

na

membrana

plasmtica.

Podemos observar a estrutura do receptor


(Ig de membrana) e os co-receptores Ig- e
Ig-.
Fonte:
http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/cha
p4-10.GIF

Na periferia a clula B conclui o processo de maturao. Neste ambiente o LB expressa


elevados nveis de IgM de membrana alm da IgD de membrana. Esta clula capaz de
reconhecer Ag estranhos via BCR e realizar a funo de eliminar o Ag, funo efetora.
O LB maduro tem a funo de reconhecer Ag estranhos e desenvolver a resposta imune
humoral. Nesta resposta h produo das Igs solveis ou anticorpos. As melhores respostas
humorais so aquelas realizadas contra Ag proticos, porm os LB tambm produzem Igs
especficas para Ag estranhos de origem sacardica, lipdica e nuclica. Os Ag no proticos so
conhecidos como Ag timo independente ou T independente (TI) porque no dependem de
linfcitos T para serem reconhecidos e eliminados. O LPS o principal componente das bactrias
gram-negativas e estimula fortemente os LB de animais roedores ou murinos, porm em seres
humanos o LPS um potente ativador de macrfagos.
A presena de Ag polissacardicos e glicolipdeos em bactrias encapsuladas como
pneumococo, meningococo e haemophilus estimula os LB a produzirem elevados nveis de IgM, a
primeira Ig a ser produzida durante o processo infeccioso. Em pacientes com deficincia na
resposta imune humoral observa-se uma maior susceptibilidade a infeces por bactrias
encapsuladas. As respostas TI so caracterizadas pela produo de IgM e baixos nveis de IgG.
Os Ag estranhos de origem protica induzem a produo de diferentes classes de Ig em seres
vertebrados.

122

Imunologia III

As Igs so glicoprotenas da frao gamaglobulinas presentes no soro dos seres


vertebrados e receberam o nome de imunoglobulinas devido a sua funo de defesa do
organismo contra os agentes infecciosos. As Igs so sintetizadas por clulas especializadas
denominadas plasmcitos. Estes consistem num estgio de diferenciao de LB aps o
reconhecimento do Ag e ativao. Os mesmos mecanismos implicados na sntese protica so
observados na produo de Igs que ocorre com a traduo de RNA mensageiro em protena
utilizando os ribossomos, retculo endoplasmtico rugoso e aparelho de golgi como as principais
organelas envolvidas na sntese das Igs.
2.1 AS CLASSES DE IMUNOGLOBULINAS
Os mamferos produzem cinco classes e algumas subclasses de Ig como: IgM, IgG (IgG1,
IgG2, IgG3, IgG4), IgA (Ig-1A, Ig-2A), IgD e IgE (Figura 15).
Figura 15. Classes de imunoglobulinas.
As IgG, IgE e IgD so monmeros enquanto a IgA pode
apresentar-se na forma de monmero, dmero ou trmero.
A IgM a nica com estrutura pentamrica.
Fonte:
http://www.karstenfaehnrich.de/Immunosensors/Immuno
globulins.jpg

A IgM pentamrica formada por cinco


monmeros de IgM ligados em nica estrutura por um
composto orgnico denominado cadeia J. Esta Ig
produzida durante a fase aguda da infeco e apresenta uma elevada capacidade de
neutralizao de Ag. A IgM tambm ativa o sistema complemento colaborando desta forma para
lise osmtica de bactrias e fungos. A deteco desta Ig no soro do paciente utilizando-se
tcnicas imunolgicas vem sendo utilizada na rotina de laboratrios para diagnstico de vrias
doenas como as hepatites.
A IgG produzida durante a fase crnica das infeces e podem apresentar quatro
subtipos ou subclasses: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. Similarmente a IgM, a IgG tambm ativa o
sistema complemento alm de estar presente no leite materno e atravessar a barreira placentria
conferindo imunidade ao feto em desenvolvimento. A determinao dos nveis sricos de IgG em
pacientes pode revelar infeces que aconteceram no passado a exemplo das hepatites.
A IgA est presente em maior quantidade nas mucosas e no leite materno conferindo
imunidade ao recm nascido. Esta Ig pode apresentar dois subtipos a Ig-1A e Ig-2A. A unio dos
monmeros de IgA feita pela cadeia J produzida por clulas epiteliais da mucosa.
Pouco se sabe a respeito da IgD. Esta existe apenas na forma ligada a membrana e tem
funo de co-receptor de LB sendo importante na ativao desta clula.

123

Imunologia III

A IgE ocorre em menor quantidade no soro no entanto encontra-se em nveis elevados


durante as infeces por parasitos helmintos (papel de defesa) e nos processos alrgicos onde a
IgE exerce o seu papel patolgico. Este ltimo caso iremos discutir mais adiante neste livro.
2.2 A ESTRUTURA DA IMUNOGLOBULINA
As Igs apresentam uma estrutura bsica responsvel pela funo de proteo desta
molcula (Figura 16). Existem duas grandes regies da molcula de Ig, uma que liga o Ag (do
ingls, Fraction of antigen biding Fab) e outra regio constante (do ingls, Fraction constant
Fc). A regio Fab pode ligar dois eptopos do Ag estranho e formada tanto por cadeias leve e
pesadas. A regio de extremidade da regio Fab denominada de hipervarivel devido as
diferentes seqncias de aminocidos que esta regio pode apresentar de acordo com a estrutura
qumica do Ag estranho para o qual ela foi produzida. As diferenas estruturais da molcula de Ig
conferem diversidade s respostas imunes adaptativas, pois garante que os seres vertebrados
tenham a capacidade de produzir uma grande variedade de Igs para a defesa do organismo.
A regio Fc formada apenas por resduos de aminocidos presentes em cadeias
pesadas e numa seqncia constante para cada classe de Ig. Isto significa que as IgM
apresentam regies Fc diferentes das IgG e demais molculas de Ig. A regio Fc no liga Ag, mas
por outro lado responsvel pela funo efetora (eliminao do Ag) da Ig.
A descoberta das regies da molcula de Ig foi possvel graas a estudos utilizando
enzimas como a pepsina e papana que apresentam afinidade por diferentes resduos de
aminocidos presentes na Ig. Ambas as enzimas clivam esta molcula nas regies Fab e Fc.
Esses mesmos estudos revelaram que uma vez incubadas na presena de Ag estranhos, apenas
a regio Fab foi capaz de ligar ao Ag enquanto que a regio Fc tinha afinidade por receptores de
clulas como os fagcitos.
A Ig tambm apresenta uma regio de dobradia localizada no ponto de separao das
regies Fab e Fc. A funo destra estrutura na molcula de Ig conferir mobilidade facilitando a
interao entre a Ig e o Ag estranho. Adicionalmente, as Igs apresentam resduos de carboidratos
ligados estrutura, da chamarmos as Igs de glicoprotenas de defesa.
Figura 16. Estrutura da imunoglobulina.
As Igs apresentam uma estrutura bsica com
duas cadeias polipeptdicas pesadas (CH) e duas
cadeias leves (L), as regies que ligam o Ag/Fab
(superior) e constante/Fc (inferior). Observamos
os domnios ao longo de toda a estrutura,
ligaes dissulfeto (S-S) e a dobradia na
fronteira entre Fab e Fc. H presena de resduos
de carboidratos no mostrados na figura.
Fonte:
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d
/d2/Adalimumab_structure.png

124

Imunologia III

A presena de duas cadeias polipetidcas pesadas e duas cadeias polipeptdicas leves


formam o arcabouo desta molcula. As cadeias pesadas apresentam um nmero maior de
resduos de aminocidos e uma massa molecular maior enquanto as cadeias leves apresentam
um nmero menor de aminocidos. A molcula de Ig apresenta vrias ligaes dissulfeto
intercadeias e intracadeias conferindo estabilidade qumica estrutura bsica da Ig. Os domnios
da Ig so regies presentes ao longo de toda a molcula de Ig e que podem apresentar-se em
nmeros diferentes de acordo com a classe de Ig. Alguns domnios apresentam funo de
receptor para protenas do sistema complemento.
As molculas de Ig no so capazes de eliminar Ag estranhos isoladamente, mas
conseguem ligar e neutralizar estes Ag para posteriormente ativar mecanismos efetores
representados por clulas ou protenas do complemento. Vrias clulas como macrfagos,
basfilos, eosinfilos, clulas NK entre outras expressam receptores de membrana com afinidade
para regio Fc de Ig. Esta ligao ativa clulas que, por conseguinte iro eliminar o Ag causador
da infeco.
2.3 MECANISMOS EFETORES DAS IMUNOGLOBULINAS
Os principais mecanismos efetores de Ig so a opsonizao e fagocitose, a citotoxidade
dependente de anticorpo (do ingls, antibody-dependent cellular citotoxity ADCC) e, a ativao
da via clssica do sistema complemento (Figura 17). As Igs se ligam e revestem (opsonizam) os
Ag estranhos facilitando o reconhecimento do Ag pelos fagcitos via receptores com afinidade
para regio Fc de Ig. Os moncitos e macrfagos expressam receptores para Fc de IgG e uma
vez ocorra o reconhecimento estas clulas se ativam realizando fagocitose ou desgranulando
substncias txicas sobre o alvo a ser eliminado, ADCC.

Figura 17. Mecanismos efetores de Ig ADCC.


esquerda a clula alvo sofre opsonizao por Ig e posteriormente a clula NK utiliza seu receptor
para regio Fc de Ig para se ligar ao alvo. A ativao de NK induz a liberao de grnulos
citoplasmticos contendo toxinas que eliminam o alvo, direita. Os fagcitos tambm realizam a
resposta de ADCC.
Fonte: http://www.microvet.arizona.edu/Courses/MIC419/Secure/CaseEBV/figure%209-34.jpg

Os principais alvos da opsonizao e fagocitose so bactrias, fungos ou vrus enquanto


as respostas de ADCC so ativadas contra Ag bem maiores como os parasitos helmintos ou
tumores slidos. Os mecanismos de morte utilizados na eliminao destes Ag estranhos so os
mesmos descritos acima. Por outro lado, na ADCC o principal mecanismo de morte so as toxinas

125

Imunologia III

presentes no interior dos grnulos citoplasmticos dos fagcitos e outros leuccitos como
eosinfilos que apresentam grande importncia na destruio dos helmintos na luz intestinal.
Como sabemos a IgE tem como funo de defesa a eliminao dos helmintos. A ligao
desta Ig no epitlio do helminto causa a neutralizao do mesmo. O parasito perde a sua
capacidade de se manter aderido mucosa ficando livre na luz intestinal o que facilita a sua
eliminao pelos movimentos peristlticos. Alm disso, a regio Fc da IgE pode ser reconhecida
por receptores de alta afinidade (FcRI) presentes nas membranas dos eosinfilos. Esta ligao
ativa os eosinfilos que desgranulam os seus grnulos citoplasmticos sobre o parasito. A
protena bsica principal a principal toxina do eosinfilo e tem a capacidade de causar danos no
epitlio, fragmentao do parasito e morte. A chegada dos eosinfilos at a luz intestinal depende
de IL-5 uma citocina que induz quimiotaxia de eosinfilo e hematopotica porque estimula a
diferenciao da clula progenitora mielide em eosinfilos. A IL-5 tambm um fator de
crescimento de eosinfilos, pois importante na maturao destas clulas. A principal fonte de IL5 so linfcitos T que sero estudados no prximo captulo.
:: PERGUNTA?? ::
Atividades
Por que as imunoglobulinas (IgG) so mais eficientes na proteo do organismo
quando comparamos com a pele, mucosa e outras barreiras naturais de defesa?

2.4 A VIA CLSSICA DO SISTEMA COMPLEMENTO


A via clssica do sistema complemento um poderoso mecanismo efetor ativado pelas
classes IgM e IgG. O termo via clssica foi designado devido esta via ter sido a primeira a ser
descoberta, porm bem conhecido que a via chamada alternativa, descoberta posteriormente,
filogeneticamente mais antiga. Os Ag estranhos presentes no sangue que so neutralizados por
Igs especficas pr-existentes sofrem a ao do sistema complemento por um mecanismo
semelhante quele descrito anteriormente para via alternativa.
Neste caso o primeiro componente a ser ativado se chama C1, uma protena formada por
cadeias polipeptdicas denominadas C1q, C1r e C1s (Figura 18).
O componente C1 se liga aos domnios da regio Fc de duas molculas de IgM ou IgG
resultando na ativao da protena e iniciao da cascata de ativao da via clssica. Uma vez
ativado, C1 adquire atividade enzimtica e realiza a clivagem do componente C4 e C2 presente no
soro do indivduo. Como resultado ocorre a gerao de dois fragmentos C4b e C4a e, C2b e C2a.
Os fragmentos maiores so codificados pela letra b enquanto os fragmentos menores so
codificados pela letra a. Os fragmentos C3b e C2b se ligam a C1 originando a enzima C3
convertase da via clssica. Esta enzima por sua vez cliva o componente C3 em dois fragmentos,
uma maior (C3b) que se liga na C3 convertase originando uma segunda enzima denominada C5

126

Imunologia III

convertase da via clssica e, outro fragmento menor (C3a) que liberado para a corrente
sangunea.

Figura 18. O componente C1 do sistema complemento.


C1 consiste em um complexo protico representado pelas
protenas C1q, C1r e C1s. No detalhe os braos longos de C1q so
responsveis pela ligao nos domnios da regio Fc das IgM ou
IgG.
Fonte: http://2.bp.blogspot.com/_8xg6npjRLj8/Sz6D0btwDqI/
AAAAAAAAAYI/xwJzRDs7CPc/s320/complemento.jpg

:: FIQUE LIGADO!! ::
As enzimas C3 convetase e C5 convertase da via clssica apresentam estruturas
diferentes daquelas enzimas da via alternativa, no entanto as enzimas de ambas as
vias tm as mesmas funes: clivar C3 e C5, respectivamente.

Assim como na via alternativa, a clivagem de C3 e gerao de C3b so importantes no s


para formao da enzima C5 convertase como tambm para a iniciao de novas cascatas de
ativao da via alternativa uma vez que C3b tem afinidade por eptopos presentes nas
membranas dos Ag estranhos.
Aps a formao da enzima C5 convertase, a via clssica converge para a mesma fase de
resoluo descrita anteriormente. H o recrutamento dos componentes C5 a C9 (poli-C9) at a
gerao do MAC que provoca a lise osmtica da clula bacteriana ou fngica. As vias de ativao
do sistema complemento so finamente reguladas por um conjunto de protenas plasmticas.
2.5 A REGULAO DO SITEMA COMPLEMENTO
As cascatas de ativao do sistema complemento devem ser reguladas com o objetivo de
impedir que os produtos de degradao provoquem danos aos tecidos normais. Para isso as
protenas chamadas de reguladoras da atividade do complemento (do ingls, Regulators of
Complement Activity RCA) exercem um papel crucial na regulao do complemento (Tabela 1).
Tabela 1. As principais protenas reguladoras do complemento

Protena

Regula a atividade

Funo

Inibidor de C1

C1r, C1s

Dissocia C1r e C1s de C1q

Fator I

C4b, C3b

Clivagem dos fragmentos

Fator H, DAF

C3b, (C3b, C4b)

CD59

C7, C8
127

Desorganiza
convertase

C3

Impede a formao do MAC

Imunologia III

:: SAIBA MAIS... ::
A deficincia de protenas do sistema complemento causa doenas caracterizadas
pela maior susceptibilidade a infeces bacterianas e fngicas.

3. LINFCITO T E A RESPOSTA IMUNE CELULAR


Os linfcitos T (LT) tambm so originados na medula ssea a partir de uma clula
progentitora. No entanto, o timcito ou clula Pr-T migra para o interior do timo onde realiza o
processo de maturao. Os estgios de diferenciao celular do LT so: Pr-T, Pr-T, Duplo
positivo, Positividade nica e clula T virgem madura.
A clula tronco expressa as molculas de superfcie c-kit, CD44 enquanto a clula Pr-T
tambm expressa o CD25. A entrada no timo determinante para o incio do processo de
maturao. A clula Pr-T no apresenta DNA recombinado e no expressa o receptor para o Ag
do LT (do ingls, T Cell Receptor TCR). A clula Pr-T inicia a recombinao gnica e
expresso do receptor pr-T. A clula duplo-positiva expressa ambos os co-receptores CD4 e
CD8 alm do TCR e baixos nveis do complexo CD3 enquanto a clula de positividade nica
expressa apenas o CD4 ou CD8 na superfcie alm do TCR. Os estgios de diferenciao
denominados duplo-positivo e de positividade nica dependem da presena de Ag prprios. A
clula T virgem expressa TCR, CD4 ou CD8, elevados nveis do complexo CD3 e deve sofrer
ativao na periferia.
3.1 O PAPEL DO TIMO NA MATURAO DO LINFCITO T
O timo uma glndula localizada na regio do mediastino (Figura 19). A atividade do timo
bastante elevada aps o nascimento at o final da puberdade que representa o perodo de
grande proliferao e maturao de LT nos seres vertebrados. Aps a entrada no timo, os
timcitos recebem vrios estmulos necessrios para a sua sobrevivncia, proliferao e
locomoo no interior deste rgo. A presena de hormnios (ex. timosina) produzidos por clulas
do estroma tmico e quimiocinas que atraem os timcitos da regio do crtex at a medula tmica
so considerados cruciais para o sucesso da maturao dos linfcitos T.
Inicialmente os timcitos penetram no crtex tmico onde se inicia a proliferao destas
clulas e a recombinao dos genes das cadeias polipeptdicas que formam o receptor TCR. A
maior parte dos timcitos expressa o TCR e ambos os co-receptores CD4 e CD8 tornando-os
capazes de reconhecer Ag no interior do timo. Os LT so as nicas clulas que dependem do
reconhecimento de Ag na superfcie de outra clula. Estas clulas so as APCs do timo como as
clulas epiteliais, macrfagos e clulas dendrticas. As APCs tmicas apresentam Ag prprios
associados s molculas do complexo principal de histocompatibilidade (do ingls, Major
Histocompatibility Complex MHC). Estas molculas esto presentes na superfcie da APC
ligadas a fragmentos do Ag e podem ser de dois tipos: molcula de MCH de classe I e MHC de
classe II. Como mencionado anteriormente, os Ag tmicos so prprios porque este rgo
128

Imunologia III

totalmente livre de contaminao. As APCs expressam genes de Ag rgo-especficos


capacitando-as a apresentar molculas originalmente localizadas em diferentes stios anatmicos
como corao, pulmo, fgados e demais rgos do corpo.
Figura 19. A glndula timo.
Este rgo linfide primrio localizado na regio do
mediastino o local de maturao do LT. No detalhe a
anatomia do timo mostrando a cpsula, crtex, medula,
septo interlobular e o corpsculo de Hassal. Os timcitos
penetram no crtex e migram em direo a medula tmica
durante a aquisio dos receptores de superfcie entre eles o
TCR,

CD4

ou

CD8

principalmente.

Este

processo

estimulado por hormnios e quimiocinas necessrias para a


viagem do LT pelo timo.
Fonte: http://www.ogrupo.org.br/imagens/mensagens/
glandula_timo.jpg

O objetivo de apresentar Ag prprios aos timcitos induzir um processo de tolerncia ou


no reatividade ao prprio. Isto porque os LT devem realizar respostas de defesa apenas contra
os Ag estranhos. Para que a tolerncia seja induzida aos timcitos alguns eventos devem ocorrer
durante a maturao no timo: a determinao da positividade nica dos timcitos e a eliminao
dos LT defeituosos.
Os LT duplo-positivos expressando TCR reconhecem Ag prprios na superfcie das APCs.
Caso o LT reconhea via TCR Ag prprio associado ao MHC de classe I, o co-receptor CD8 que
tambm apresenta afinidade pelo MHC I se ligar resultando na permanncia do CD8 na
membrana do LT. Neste caso o CD4 deixa de ser expresso e o LT torna-se uma clula de
positividade nica denominada LTCD8+ ou LT citotxico. Por outro lado, se o LT reconhecer via
TCR o Ag prprio associado ao MHC de classe II, o co-receptor CD4 se ligar ao MHC II para o
qual tem afinidade determinando a diferenciao desta clula em LTCD4+ ou LT auxiliar.
Aqueles LT que no expressam TCR ou apresentam o receptor defeituoso incapaz de
reconhecer Ag prprio associado ao MHC morrem por apopotose. J aqueles LT que reconhecem
Ag prprio (seleo positiva) com elevada intensidade da ligao TCR-peptdeo antignico-MHC
tambm devem sofrer apoptose atravs de um processo denominado seleo negativa. A
eliminao de LT no timo via seleo negativa garante que apenas LT saudveis e que toleram
Ag prprios devem sobreviver e ser encarregados de realizarem as respostas imunes protetoras
na periferia do corpo (Figura 20).

129

Imunologia III

Figura 20. Seleo dos linfcitos T.


Os timcitos migram do crtex at a medula (crculo abaixo) durante a maturao. Observe que a
maior parte dos timcitos no conclui o processo de maturao devido seleo negativa que
elimina as clulas defeituosas. Ao final da maturao tmica, os LT migram para a corrente
sangunea e rgos linfides perifricos (no mostrado).
Fonte: http://www.sfb405.uni-hd.de/Kyewski_files/thymus.jpg

A ativao do LT aps o reconhecimento do Ag est condicionada a intensidade ou avidez


da ligao TCR-peptdeo-MHC. Sabe-se que as interaes com avidez intermediria entre LT e os
Ag prprios apresentados no timo no ativam os LTs. Este comportamento dos LT fundamental
na induo da tolerncia no timo, tolerncia central. Por outro lado, se a avidez do
reconhecimento antignico no timo for elevada o LT receber um sinal de morte o que determina a
sua eliminao. As interaes com elevada avidez so necessrias para a ativao dos LT o que
resulta na destruio do Ag. Aqueles LT que reconhecem Ag prprio com elevada avidez so
considerados clulas potencialmente nocivas (LT autorreativo) ao organismo porque uma vez
liberadas do timo para a periferia estes LT poderiam reconhecer e agredir tecidos e rgos
causando doenas autoimunes.
Atualmente no conhecido nenhum mecanismo de reparao do TCR defeituoso para as
clulas T autorreativas, no entanto, acredita-se que algumas destas clulas podem se diferenciar
em LT regulatrios que consistem em uma nova sub-populao de LT responsveis pela
regulao das respostas imunes. Uma provvel fonte de citocinas envolvidas no processo de
diferenciao em LT regulatrios seria o corpsculo de Hassal conhecido como um marcador
histolgico do timo e que at recentemente no se conhecia alguma funo especfica desta
estrutura na maturao do LT.
Uma vez concludo a maturao no timo, os LTa e LTc migram do interior deste rgo para
a periferia representada pela corrente sangunea, linfonodos, bao e MALTs. No interior destes
rgos linfides perifricos os LT tero o primeiro contato com os Ag estranhos apresentados por
APCs profissionais. Para melhor entendermos os processos de apresentao e reconhecimento
de Ag estranhos pelos LT se faz necessrio conhecer a funo das molculas do MHC.

130

Imunologia III

4. O COMPLEXO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDADE - MHC


O MHC (do ingls, Major Histocompatibility Complex) consiste em um conjunto de genes
altamente polimrficos localizados no DNA dos seres vertebrados. Nos seres humanos este
complexo gnico chamado de antgeno leucocitrio humano (do ingls, Human Leucocyte
Antigen HLA). Os principais genes do HLA so denominados de HLA-A, HLA-B e HLA-C. Em
camundongos o MHC chamado de H2. Esta espcie animal a mais estudada em Imunologia
devido grande semelhana ao MHC humano quanto a localizao cromossmica, estrutura e
funo das molculas do MHC. O termo MHC deve-se aos estudos realizados com transplantes
que demonstraram a participao destas molculas nos processos de aceitao ou rejeio dos
enxertos. As molculas do MHC so expressas nas superfcies de todas as clulas nucleadas na
forma de heterodmeros. As molculas do MHC so classificadas em molculas de classe I e
classe II (Figura 21).
A molcula de classe I apresenta-se na forma de duas cadeias polipeptdicas sendo a
primeira chamada de cadeia e a segunda cadeia 2-microglobulina. A cadeia apresenta
regies extracelular, transmembranar e intracelular enquanto que a 2-microglobulina uma
cadeia extracelular. As duas cadeias polipeptdicas esto unidas por foras no covalentes e
formam uma fenda na regio extracelular onde se liga o peptdeo antignico.
A molcula de classe II apresenta uma estrutura semelhante molcula de classe I, no
entanto ambas as cadeias polipeptdicas e apresentam as trs regies extracelular,
transmembranar e intracelular. As regies denominadas 1 e 1 formam a fenda para a ligao
do peptdeo antignico.

Figura 21. Estrutura das molculas do MHC.


A molcula de classe I apresenta uma cadeia com regies extracelular, transmembranar e
citoplasmtica enquanto ambas as cadeias da molcula de classe II apresentam as trs regies
acima. Observar que a regio da fenda de ligao com o peptdeo antignico na molcula de MHC de
classe I formada pelas subunidades 1 e 2 enquanto a fenda da molcula de classe II formada
por 1 e 1.
Fonte: http://www.funpecrp.com.br/GMR/year2006/vol4-5/images/gmr0218fig2.jpg

131

Imunologia III

:: PERGUNTA?? ::
Atividades
O que pode acontecer a uma pessoa que perdeu o timo na infncia? O que voc
acha?

4.1 O PROCESSAMENTO E A APRESENTAO DE ANTGENO


Na periferia do corpo as APCs esto preparadas para fagocitar, processar (fragmentar) e
apresentar os peptdeos antignicos para os LT. Os mecanismos de processamento e
apresentao antignica dependem da natureza do Ag influenciado as respostas de defesa
realizadas pelos linfcitos T. Os Ag denominados de natureza endgena como os vrus e algumas
bactrias e protozorios so aqueles de vida intracelular obrigatria porque so capazes de
proliferar no interior de clulas. J os Ag chamados de exgenos so aqueles fagocitados como a
maioria das bactrias de vida extracelular (ex. salmonela e E. coli). Os Ag endgenos so
processados e apresentados pela via endgena do MHC (Figura 22).
Se imaginarmos um vrus penetrando uma clula poderemos observar que inicialmente o
vrus adere membrana plasmtica e em seguida inocula o seu material gentico no citosol. Os
vrus utilizam o maquinrio gentico da clula hospedeira para sintetizar as suas prprias
protenas resultando na formao de novas partculas virais. Parte destas partculas recm
sintetizadas sofre a ao de um complexo enzimtico, presente no citosol das clulas nucleadas,
chamado de proteassomo. As enzimas do proteassomo degradam protenas citoslicas que
tenham sido ubiquitinizadas o que significa desnaturao aps a ligao da protena ubiquitina
presente no citosol. As protenas virais desnaturadas penetram no proteassomo onde podem ser
clivadas gerando peptdeos. Em seguida os peptdeos solveis no citosol so bombeados para o
interior do retculo endoplasmtico rugoso (RER) pela ao do transportador de peptdeos (do
ingls, Tranporter of Antigenic Peptides TAP) presente na membrana desta organela. Os
peptdeos que apresentarem uma seqncia de aminocidos com tamanho adequado e afinidade
pela fenda de ligao do Ag da molcula de MHC de classe I, sintetizada no interior do retculo, se
ligar formando o complexo MHCI-peptdeo viral. Este complexo migra para o aparelho de golgi
localizado prximo ao retculo e em seguida transportado em vesculas at a superfcie da clula
apresentadora. O complexo facilmente inserido na membrana plasmtica onde permanecer
exposto para o reconhecimento pelo LTCD8+.
:: FIQUE POR DENTRO!! ::
Importante!
O transporte dos peptdeos virais por vesculas do aparelho de golgi at a
membrana plasmtica da APC se faz necessrio para evitar o ataque de enzimas
proteolticas citoslicas sobre o complexo MHC-peptdeo. A destruio do
complexo impediria a apresentao dos peptdeos ao LT implicando na falta de
resposta imune.

132

Imunologia III

Figura 22. A via endgena do MHC


As protenas virais so processadas no proteassomo fornecendo os peptdeos bombeados pelo TAP
para o interior do retculo endoplasmtico rugoso. No interior dessa organela ocorre a ligao MHC
I-peptdeo e migrao do complexo para o aparelho de Golgi e depois para a membrana plasmtica
da APC. Acima observamos o LTC reconhecendo o Ag endgeno.
Fonte: http://www.rbi.fmrp.usp.br/imunobiol/aulas/t10_12220300.jpg

A via exgena de processamento e apresentao antignica se inicia com a fagocitose do


Ag de natureza extracelular (Figura 23). No caso de uma salmonela, inicialmente APCs
localizadas no trato intestinal fagocitam a bactria utilizando os receptores da resposta inata como
descrito na Unidade I. Posteriormente, observa-se a formao de uma organela chamada de
fagossomo que tem a mesma constituio da membrana plasmtica da APC. O fagossomo
apenas aprisiona a bactria, mas sem a capacidade de processamento, no entanto, quando
ocorre a fuso do fagossomo com lisossomos presentes no citosol origina-se uma nova organela,
o fagolisossomo.
O fagolisossomo contm enzimas lisossomais que contribuem para a digesto da bactria
gerando os peptdeos antignicos. Neste caso, os peptdeos no podem ser bombeados para o
interior do RER, pois se encontram no interior do fagolisossomo sendo assim necessria outra
estratgia para ligao nas molculas do MHC. Concomitantemente a gerao dos peptdeos,
molculas de MHC de classe II so sintetizadas no RER e transportadas em vesculas do
aparelho de golgi em direo a membrana plasmtica da APC. Caso ocorra o encontro do
fagolisossomo com a vescula contendo o MHC de classe II, as duas vesculas sofrem fuso
facilitando o preenchimento da fenda de ligao para o peptdeo. Sabe-se que a molcula de
MHC de classe II, no interior do RER, apresenta a fenda protegida por uma cadeia polipeptdica
denominada cadeia invariante. A funo desta cadeia impedir que peptdeos de natureza
endgena bombeados pelo TAP se liguem a fenda da molcula de MHC de classe II. Portanto,
aps a fuso do fagolisossomo com a vescula do golgi contendo o MHC ligado a cadeia
invariante, ocorre a degradao desta ltima pelas enzimas lisossomais liberando assim, a fenda
de ligao para o Ag que se associa com o peptdeo bacteriano de natureza exgena. Em seguida

133

Imunologia III

o complexo MHC de classe II-peptdeo migra para a superfcie da membrana plasmtica da APC
onde permanecer exposto para o reconhecimento pelo LTCD4+.

Figura 23. A via exgena do MHC


O Ag exgeno fagocitado e processado no interior de vesculas. A fuso com vesculas do Golgi
contendo molculas de classe II anteriormente sintetizadas no retculo permitem a formao do
complexo MHC II-peptdeo que reconhecido na superfcie da APC pelo LTCD4+ (LT auxiliar).
Fonte: http://pathmicro.med.sc.edu/bowers/fig2-mhc2.jpg

Esses dois principais mecanismos de processamento e apresentao antignica


dependentes do MHC permitem que as APCs realizem uma triagem da qualidade dos peptdeos
endgenos e exgenos presentes no organismo. Se os peptdeos apresentados forem oriundos
de Ag prprios (ex. albumina do sangue) certamente os linfcitos reconhecero, mas no sero
ativados, pois estas clulas foram treinadas no timo para tolerar estes Ag. No entanto, se os
peptdeos apresentados forem de natureza estranha, os linfcitos reconhecero e sero ativados
devido alta avidez do complexo trimolecular TCR-peptdeo-MHC como determinado na seleo
tmica. O reconhecimento dos peptdeos estranhos via TCR induz a ativao do LT como descrito
adiante.
4.2 ATIVAO DO LINFCITO T
Os LT reconhecem peptdeos estranhos associados ao MHC. Ambas as populaes de LT
virgens tm o primeiro contato com Ag estranhos nos rgos linfides perifricos. A presena de
APCs profissionais como os macrfagos e as clulas dendrticas garantem o processamento e
apresentao dos peptdeos antignicos. Durante o reconhecimento o LT interage o TCR com a
regio polimrfica da molcula de MHC onde se encontra ligado o peptdeo. Alm da interao
com o TCR, os co-receptores CD4 ou CD8 tambm interagem com regies no polimrficas do
MHC. Os LTCD8+ apresentam TCR com afinidade pelo MHC de classe I enquanto o LTCD4+ tem
afinidade pelo MHC de classe II.
A especificidade do TCR dos linfcitos por diferentes molculas do MHC garante a
ativao de diferentes populaes celulares contra Ag estranhos diferentes. Logo as clulas T
CD8+ devem se ativar apenas contra Ag de natureza endgena enquanto as clulas T CD4+ se

134

Imunologia III

ativam contra Ag exgenos. Esta estratgia do sistema imunolgico se relaciona com as funes
efetoras de cada sub-populao de linfcitos T uma vez que os LTCD8+ apresentam funo de
citotoxidade necessria para eliminao de Ag endgenos enquanto os LTCD4+ so clulas
exclusivamente produtoras de citocinas.
A ativao dos LTCD4+ implica na liberao de citocinas como a IL-2 que age de maneira
autcrina induzindo proliferao dos linfcitos (expanso clonal), gerao de clones efetores e de
memria. Os clones efetores produzem citocinas que auxiliam nas respostas de eliminao dos
Ag estranhos.
A formao do complexo trimolecular, primeiro sinal para a ativao do LT, no suficiente
para a total ativao do LT e, portanto se faz necessrio demais interaes moleculares,
segundos sinais, entre os linfcitos e as APCs. O segundo sinal para ativao do LT consiste em
vrias interaes s vezes denominadas de sinais coestimulatrios. Os mais importantes so as
molculas B7 expressas na superfcie das APCs que interagem com o CD28 presente na
membrana plasmtica dos LT. Este sinal coestimulatrio crucial para ativao dos linfcitos
assim como a interao entre o CD40 das APCs com o ligante do CD40 (CD40L) nos linfcitos. O
CD40 uma molcula constitutiva nas APCs enquanto o CD40L induzido aps a formao do
complexo trimolecular. Por outro lado, o CD28 constitutivo nos LT enquanto as molculas B7
so induzidas nas APCs aps a entrada do Ag nesta clula. Sabe-se que APCs como as clulas
dendrticas apresentam altos nveis de molculas B7 na membrana e por isso esta clula a
principal APC envolvida na ativao de LT virgens. Vrios estudos demonstraram a importncia
dos coestmulos na ativao dos LT.

APCs deficientes de molculas coestimulatrias falham em induzir ativao dos LT


que se tornam no responsivos aos Ag estranhos, processo denominado anergia;

Se as APCs deficientes forem transfectadas com genes de B7 os LT recuperam a


capacidade de ativao, proliferam e se diferenciam em cultura de clulas;

Caso as culturas de clulas contendo as APCs deficientes forem estimuladas com


Ig anti-CD28 (mimetiza o papel de B7) os LT tambm se ativam;

Porm se as culturas no tiverem APCs apresentando peptdeos estranhos e os LT


forem estimulados com Ig anti-TCR os LT no se ativam e desenvolvem anergia. Isto demonstra
que apenas o primeiro sinal no suficiente para ativar os LT;

Por outro lado se os linfcitos em cultura forem estimulado como Ig anti-TCR e Ig


anti-CD28 os LT se ativam, prolilferam e se diferenciam.
A ativao do LT depende de uma srie de eventos intracelulares iniciados pelos sinais
enviados pelo TCR para o citosol do linfcito. A participao de protenas adaptadoras, ativao
das vias das enzimas fosfolipase C1, ERK e JNK bem como a gerao dos fatores de transcrio
NFAT, NFB e AP-1 j foram descritos. Em seguida descreveremos as fases efetoras dos
linfcitos T ativados.
4.3 O LTCD8+ E A RESPOSTA DE CITOTOXIDADE
As clulas T CD8+ ativadas so capazes de eliminar Ag estranhos de natureza endgena
via mecanismos de citotoxidade.

135

Imunologia III

Adicionalmente, estas clulas dependem da citocina IFN-, segundo sinal, produzida por
LTCD4 para adquirirem o status de clula ativada ou LT citolticos. A necessidade deste segundo
sinal ocorre apenas para as respostas primrias do LTCD8+ e levanta um questionamento
importante.

Como os LTCD8+ que reconhecem Ag endgenos via MHC de classe I sero


estimulados por IFN- se esta citocina produzida por LTCD4+ que reconhece Ag exgeno
apresentado via MHC de classe II?
A resposta para este questionamento encontra-se no conhecimento de uma terceira via de
processamento de Ag denominada via cruzada (Figura 24). As clulas infectadas por Ag
estranhos de natureza endgena so fagocitadas permitindo que estes Ag alm de serem
apresentados pela via do MHC de classe I para os LTCD8+ tambm sejam apresentados pela via
exgena, dependente de fagocitose e formao de fagolisossomo, do MHC de classe II para os
LTCD4+ produtores da citocina IFN-. Agora as clulas citotxicas na presena do coestmulo
(IFN-) esto prontas para exercer a sua funo biolgica de eliminar Ag endgenos.
+

Figura 24. Via de apresentao cruzada.


As clulas infectadas sofrem fagocitose por APCs que processam e apresentam peptdeos virais
pela via exgena do MHC de classe II. Os LT auxiliares produzem a citocina IFN- necessria para
ativao do LT citotxico (citoltco / estado ativado). Th - linfcito T auxiliar; CTL linfcito T
citoltico (CD8+).
Fonte: http://www.oliphant.org.au/april2008/images/khanna/Slide2.JPG

Os LT citotxicos apresentam uma rica granulao citoplasmtica contendo vrias toxinas


como a perforina e a granzima que so liberadas sobre as clulas infectadas. O contato entre a
clula citotxica e a clula alvo infectada muito prximo levando a formao de um espao
virtual chamado de sinapse imunolgica. Estudos recentes de imagem do sistema imunolgico
revelaram uma concentrao dos grnulos do LT citotxico na regio da sinapse garantido que o
contedo txico ser eliminado apenas sobre a clula infectada. Aps a desgranulao do
linfcito, as perforinas que receberam este nome devido semelhana estrutural com o
componente poli-C9/MAC do sistema complemento so inseridas na membrana plasmtica da
clula infectada formando poros no alvo a ser eliminado. Os poros de perforina facilitam a entrada
das granzimas que tm a capacidade de ativar a via das enzimas caspases que iniciam o
processo de morte celular programada denominado de apoptose (Figura 25).

136

Imunologia III
Figura 25. Os poros de perforina
O LTC ativado libera os grnulos contendo a
perforina que forma poros na membrana da
clula alvo. A morte pode ser induzida por lise
osmtica ou apoptose ativada granzimas ou
clcio extracelular.
Fonte: http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/
chap12-8a.GIF

O LT citotxico se distancia da clula


infectada aps a liberao das toxinas para
no ser a alvo do seu prprio mecanismo de
citotoxidade. Esta clula considerada o principal mecanismo antitumoral presente no organismo
e, responsvel pela vigilncia imunolgica que consiste em um processo de verificao
fenotpica das clulas nucleadas do corpo. Caso alguma transformao celular esteja ocorrendo,
isto implicar em alteraes de determinantes antignicos expressos nas superfcies celulares.
Tais alteraes devem ser reconhecidas como estranhas e provocar o reconhecimento com alta
avidez via TCR.
A ativao dos LT citotxicos e eliminao dos Ag transformados um bom exemplo da
competncia da resposta citotxica na preveno do desenvolvimento de tumores malignos.
O papel marcante dos LT citotxicos como clulas da imunidade antitumoral bem
conhecido. Porm alguns pacientes apresentam deficincia na produo e/ou ativao destas
clulas e ainda assim no so mais susceptveis ao crescimento de tumores malignos. Este fato
nos leva a pensar que deva existir um segundo mecanismo antitumoral. Um componente da
resposta inata responsvel por esta funo, as clulas NK.
4.4 NK: CLULAS CITOTXICAS DA RESPOSTA INATA
As clulas NK so linfcitos, porm no expressam TCR nem alta capacidade de
discriminar Ag estranhos e, por isso so consideradas clulas da resposta imune inata. Estas
tambm participam da vigilncia imunolgica e so capazes de eliminar clulas infectadas,
transformadas ou tumorais. Para tanto, as NK utilizam dois receptores de membrana sendo um de
ativao e o outro inibitrio (Figura 26).
Figura 26. Ativao da clula NK
Acima, a clula NK em repouso aps o engajamento de
ambos os receptores de ativao e inibitrio. Abaixo, a
ausncia do MHC de classe I impede a ligao do receptor
inibitrio favorecendo a ativao, liberao de grnulos
contendo toxinas e morte da clula alvo. KIR receptor
inibitrio de morte (do ingls, Killer Inhibitory Receptor);
HLA antgeno leucocitrio humano (MHC humano).
Fonte: http://www.scielo.br/img/revistas/jped/v84n4s0/4s1a09f1.gif

137

Imunologia III

As clulas nucleadas do corpo expressam constitutivamente um ligante de clula NK que


interagem com o receptor de ativao. Esta interao molecular envia sinais de ativao para o
citosol da NK dependente de enzimas cinases que iniciam as cascatas bioqumicas que levam a
desgranulao da clula. Por outro lado, a interao simultnea do receptor inibitrio com
molculas de MHC de classe I bloqueia a ativao da NK j que esta segunda interao ativa
enzimas fosfatases que desfosforilam o receptor de ativao da clula NK impedindo a liberao
dos grnulos contendo as toxinas semelhantes quelas liberadas pelos LT citotxicos.
O sinal de ativao para as clulas NK depende da ausncia das molculas de MHC de
classe I na superfcie de clulas transformadas ou infectadas. Nestes casos a falta de expresso
do MHC est associada a mecanismos de escape dos tumores e/ou patgenos intracelulares que
inibem a sntese das molculas de classe I na tentativa de silenciar a resposta imune adaptativa e
favorecer a proliferao dos patgenos e a infeco. Clulas nucleadas com baixos nveis de
MHC sofrem o ataque das clulas NK devido falta de interao do receptor inibitrio com as
molculas de classe I. Em seguida observa-se a ativao das NK que liberam so grnulos
txicos causando a morte da clula alvo juntamente com o patgeno. As clulas NK ativadas alm
de destruir clulas infectadas tambm secretam citocinas como o INF- que um potente ativador
de macrfagos.
As clulas NK infiltrantes de tumores tm sido utilizadas como ferramentas no tratamento
de alguns tumores malignos. Inicialmente se remove uma bipsia do tumor e se realiza a
separao das clulas NK utilizando-se anticorpos especficos para marcadores de superfcie das
NK que posteriormente so estimuladas em meio de cultura com a citocina IL-2. Como resultado
se obtm as clulas matadoras ativadas por linfocinas (do ingls, Linfokine Activated Killers
LAK) que so reintroduzidas no paciente e apresentam um elevado potencial citotxico. A
diferenciao de clulas NK em LAK uma de muitas tcnicas de laboratrio j disponveis na
Clnica para o tratamento de doenas.
A resposta imune mediada por LT altamente complexa e necessria para a montagem de
respostas imunes adaptativas apropriadas para cada tipo de Ag estranho que venha penetrar no
organismo. As respostas inatas tambm so afetadas pelas citocinas secretadas pelos LT
principalmente a populao de clulas T CD4+.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividades
Quais as clulas responsveis pela destruio dos tumores? Elas agem da mesma
maneira? Explique.

138

Imunologia III

UNIDADE 3
REGULAO DA RESPOSTA IMUNE
1. AS SUBPOPULAES Th1 E Th2
De acordo com a natureza do Ag e stio anatmico ou microambiente imunolgico onde
ocorre a apresentao e o reconhecimento antignico, os LTCD4+ podem se diferenciar nas subpopulaes de clulas T auxiliar do tipo I ou II (do ingls, T helper cell clula Th1 ou Th2).
1.1 AS CLULAS TH1 SECRETAM IFN-
As clulas Th1 so originadas a partir de LTCD4+ virgem aps o primeiro reconhecimento
antignico. As clulas T virgens esto localizadas no interior dos rgos linfides perifricos onde
tm o primeiro contato com os Ag estranhos. Aps a ativao da clula T ocorre a diferenciao
em clones efetores e de memria de perfis Th1 quando a apresentao antignica ocorrer na
presena de elevados nveis da citocina IL-12. Esta uma citocina da imunidade inata cujas
principais fontes so os macrfagos. Portanto estas APCs so fundamentais em induzir a
diferenciao dos clones de perfil Th1 (Figura 27).
A clula Th1 apresenta fentipo semelhante s demais clulas T, no entanto secreta um
conjunto de citocinas caracterstico desta sub-populao celular. Os clones Th1 so produtores
das citocinas IL-2 e INF-, sendo a primeira um fator de crescimento de clulas T e a segunda
responsvel pela ativao de macrfagos, LB e LTCD8+.
Figura 27. Clulas Th1
Clula Th1 secreta a citocina IFN- que consiste em um potente ativador de
macrfagos. Estes fagcitos apresentam uma atividade microbicida
aumentada aps ativao mediada pelo interferon indicando que a
resposta Th1 melhora o papel de respostas inatas como a fagocitose e
morte intracelular de Ag estranhos.
Fonte: http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/chap12-3.GIF

A IL-2 foi descoberta no incio da dcada de 80 durante estudos


que resultaram no cultivo de clulas T em laboratrio. Aps este achado
a pesquisa na rea da Imunologia celular se desenvolveu fortemente
contribuindo para o entendimento das funes das clulas T e da
descoberta sobre o principal reservatrio para a infeco do vrus HIV, o
+
LTCD4 . O IFN- uma citocina de mltiplas funes sendo um potente ativador de macrfagos
que liberado logo aps a apresentao do Ag por esta APC. Os macrfagos expressam
receptores de superfcie para o INF- e so ativados por um mecanismo dependente de CD40 que
envia sinais intracelulares que resultam no aumento da produo de vrias protenas e leva a
ativao dos fatores de transcrio NF-B e AP-1. Na tabela abaixo podemos observar algumas
das funes dos macrfagos ativados.

139

Imunologia III

A ativao de macrfagos pelo IFN- (Tabela 2) crucial na eliminao de patgenos de


vida intracelular como observado na doena leishmaniose. Nesta patologia os indivduos
susceptveis infeco pelo protozorio produzem nveis reduzidos de interferon resultando numa
ativao ineficaz dos macrfagos. Os moncitos do sangue e os macrfagos nos tecidos so
alvos da infeco pela leishmania que inoculada no ser humano por mosquitos do tipo flebtomo
durante o repasto sanguneo das fmeas infectadas.
Como os fagcitos de indivduos susceptveis no conseguem eliminar completamente a
leishmania, o sistema imunolgico monta uma potente resposta inflamatria no local da infeco
causando leses no tecido e aparecimento de feridas na pele conhecidas como lceras
leishmaniticas caracterizadas por bordas bem definidas e bastante doloridas. Inmeros estudos
demonstraram a deficincia de IFN- nesses indivduos atravs de testes laboratoriais capazes de
quantificar a citocina no soro do paciente. O NO importante na eliminao de patgenos
intracelulares presentes no citosol de clulas e serve como um importante marcador biolgico na
doena causada pela leishmania. Este intermedirio do oxignio representa o principal
mecanismo de morte intracelular contra parasitos como a leishmania.
Tabela 2. Funes dos macrfagos ativados pelo INF-
Macrfago ativado

Funo biolgica

Aumento na produo de NO, ROIs e

Morte dos microorganismos no citosol e

enzimas lisossomais

fagolisossomos, respectivamente.

Produo das citocinas TNF, IL-1 e IL-12

TNF e IL-1: recrutamento de leuccitos


(inflamao) e IL-12: diferenciao de Th1

Aumento da expresso de coestimuladores

Amplificao das respostas de LT

B7 e molculas do MHC

Estudos utilizando cobaias de laboratrio foram pioneiros na descoberta das respostas Th1
e a sua contrapartida regulatria, as respostas Th2. Nestes experimentos a utilizao de
camundongos isognicos da linhagem C57bl/6 resistentes a leishmaniose foram injetados na pata
com a forma infectante do protozorio. Aps algumas semanas foi observado que os animais
eram capazes de controlar o crescimento da leso e a carga parasitria. Isto se deve ao fato que
os camundongos C57bl/6 apresentam um perfil gentico resistente a leishmaniose caracterizado
por elevada produo de NO cuja funo eliminar o parasito. Os nvies de NO e IFN- no soro
dos animais estavam aumentados justificando a sobrevivncia dos animais.
De maneira similar ao camundongo resistente aqueles seres humanos e demais
vertebrados que so resistentes a doena apresentam perfis de respostas imunes semelhantes ao
do camundongo citado nos estudos. Esses achados foram de grande relevncia para o melhor
entendimento das respostas imunes contra patgenos intracelulares e, tm contribudo para a
pesquisa de novas estratgias teraputicas para o tratamento da leishmaniose e outras doenas
causadas por protozorios como a doena de chagas e malria.

140

Imunologia III

:: SAIBA MAIS... ::
Os flebtomos so contaminados aps se alimentarem do sangue de animais
silvestres infectados com o protozorio e, ao migrarem para as regies habitadas
transmitem a leishmania para os seres humanos e animais domsticos que se
tornam os reservatrios do protozorio nas zonas urbanas.

A liberao de IFN- por Th1 tambm ativa e induz a troca de isotipo de imunoglobulina
nos LB. Como descrito anteriormente, as clulas B apresentam funo de APC e, portanto podem
sofrer a estimulao via citocinas das clulas Th1. Os LB esto localizados em grande quantidade
no interior dos folculos dos LN, bao e MALTs. Estas clulas expressam ambas as molculas de
MHC de classe I e II sendo capazes de apresentar peptdeos para diferentes clulas T.
Posteriormente a apresentao antignica, as clulas B so estimuladas pelo IFN- que
representa um sinal importante para a transcrio do gene da cadeia pesada das IgGs
originando os clones de LB produtores de IgG especficas para aquele Ag particular. Portanto, a
produo da classe IgG depende da colaborao das clulas Th1 a partir das citocinas
secretadas. As IgGs ativam respostas de ADCC, opsonizao e fagocitose, protegem o feto e o
recm nascido de infeces alm de conferir imunidade duradoura nos seres vertebrados como
descrito na Unidade II deste livro.
As respostas Th1 so fundamentais na ativao do LT citotxico. Estudos demonstraram
que clulas TCD8+ virgens cultivadas com APCs infectadas reconhecem os peptdeos estranhos,
mas no so capazes de eliminar via mecanismos de citotoxidade a clula alvo. No entanto, a
adio de LTCD4+ na cultura resulta na diferenciao em Th1, produo de IFN-, ativao dos LT
citotxicos e destruio da clula alvo infectada. A adio da citocina diretamente na cultura
tambm estimula as clulas citotxicas demonstrando a importncia do interferon na induo das
respostas de citotoxidade dependente de linfcito T.
:: SAIBA MAIS... ::
A deficincia de IFN- no organismo prejudica a imunidade contra microorganismos
patognicos intracelulares (ex. vrus) e a eliminao de tumores malignos. Esta
citocina tambm importante na ativao de macrfagos em diferentes rgos e
tecidos.

1.2 AS CLULAS TH2 SECRETAM IL-4


A clula Th2 morfologicamente semelhante s clulas Th1, porm apresentam um perfil
de citocinas completamente diferente (Figura 28). A diferenciao em Th2 depende de um
microambiente imunolgico rico em IL-4 cujas principais fontes so os mastcitos e as prprias
clulas Th2. Quando as clulas T CD4+ virgens reconhecem Ag estranhos associados ao MHC de
classe II e estas clulas so estimuladas por IL-4 observa-se a diferenciao celular resultando
em clones Th2 efetores e de memria. Estas clulas secretam citocinas como IL-4, IL-5, IL-9, IL

141

Imunologia III

10, IL-11 e IL-13 cujas funes so distintas e necessrias para induzir uma gama de respostas
imunes.
Figura 28. A clula Th2
Clula Th2 secretora de citocinas ativadoras de LB (IgE),
mastcito e eosinfilos
Fonte:

Fonte:

http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/chap12-

3.GIF

Os clones Th2 efetores estimulam a diferenciao de


clulas B a partir da liberao das citocinas IL-4 e IL-13
consideradas fundamentais para a troca de isotipo de IgM para
IgE. Estas citocinas induzem a sntese da cadeia pesada da
IgE que apresenta um papel crucial nas respostas imunes contra
parasitos helmintos via mecanismos de ADCC como descrito
anteriormente.
A liberao da IL-5 conhecida como fator quimiottico para eosinfilos permite a migrao
destes leuccitos para a mucosa intestinal onde se encontra o helminto. Este processo facilita a
ao dos eosinfilos na eliminao dos parasitos na resposta de ADCC. Estudos anteriores
mostraram que animais tratados com Ig anti-IL-5 no eram capazes de eliminar parasitos
helmintos devido a uma reduo no nmero de eosinfilos no sangue e por conseqncia a falta
de resposta na mucosa intestinal. A IL-5 tambm um fator de crescimento e diferenciao de
eosinfilos na medula ssea. Como podemos observar a realizao de uma nica resposta imune
depende de clulas e um conjunto de citocinas que orquestram os mecanismos de eliminao do
parasito no trato intestinal.
A IL-10 produzida por clones Th2 apresenta funo antiinflamatria sendo liberada nos
momentos tardios da inflamao com o objetivo de regular a resposta. Em estudos utilizando
macrfagos infectados com Tripanosoma cruzi e estimulados com o alcalide wariftena, um
potente indutor de IL-10, observou-se uma proliferao intensa do protozorio no interior do
macrfago.
O aumento da carga parasitria foi diretamente proporcional produo de IL-10 nas
culturas de macrfagos peritoneais de camundongos mostrando que a citocina interfere nos
mecanismos inflamatrios do fagcito. Adicionalmente, o estudo citado demonstrou que as
culturas de macrfagos apresentavam baixos nveis de NO confirmando a atividade
antiinflamatria da IL-10.
A deficincia de IL-10 no organismo est associada ao aparecimento de inflamaes
crnicas a exemplo da asma brnquica. De fato a produo desta citocina est associada ao
controle das inflamaes prevenindo a cronicidade destas respostas que podem levar a danos
teciduais e doenas.

142

Imunologia III

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividades
Qual a melhor resposta imune para prevenir a leishimaniose? A resposta Th1 ou
Th2? Explique.

1.3 AS CITOCINAS IFN- E IL-4 REGULAM A RESPOSTA IMUNE


Os clones Th1 e Th2 apresentam funes regulatrias. O IFN- inibe os clones Th2
enquanto a IL-4 inibe os clones Th1 isto significa que estas respostas imunes no ocorrem
simultaneamente com a mesma intensidade. Um exemplo marcante desta regulao aquela
observada em animais resistentes ou susceptveis a leishmaniose. No primeiro caso, os
macrfagos dos camundongos C57bl/6 resistentes - quando infectados com o protozorio
produzem NO e nveis sricos elevados de IFN- (Th1) que um potente ativador de macrfagos
como descrito acima. No segundo caso, a infeco de macrfagos de camundongos BALB/c
susceptveis produzem baixos nveis de NO e elevadas concentraes de IL-4, uma citocina de
perfil Th2.
Em seres humanos observamos perfis de respostas imunes semelhantes aos
camundongos C57bl/6 e BALB/c. Aqueles indivduos infectados que no apresentam a
sintomatologia da doena conseguem controlar a proliferao da leishmania no interior dos
moncitos e macrfagos porque desenvolvem respostas de perfil Th1 responsveis pelo aumento
na produo de interferon e ativao de macrfagos que produzem NO e eliminam o parasito. Por
outro lado, aqueles pacientes susceptveis a leishmaniose montam respostas de perfil Th2 com
aumento de IL-4. Esta resposta no ativa as respostas imunes celulares e sim aquelas respostas
humorais produtoras de anticorpos que no conferem proteo contra Ag intracelulares como a
leishmania. O perfil gentico do indivduo o fator determinante no desenvolvimento de uma
resposta Th1 ou Th2 frente ao mesmo patgeno e, portanto podemos dizer que aqueles pacientes
susceptveis a leishmaniose apresentam uma resposta do sistema imunolgico inadequada para
eliminao do parasito.
A dicotomia / polarizao Th1 versus Th2 foi bem estabelecida no modelo de leishmaniose
e por dcadas se atribui a essas sub-populaes de LTCD4+ o papel de regulao para a maioria
das respostas imunes. No entanto, h vrias situaes onde no se consegue identificar uma
polarizao da resposta imune sugerindo a existncia de outros componentes celulares
envolvidos na regulao da resposta imunolgica. Recentemente, novas populaes de LT vm
sendo descritas dentre elas os LT regulatrios (Tregs) do tipo 1 produtores de IL-10 e as Tregs do
tipo 2 secretoras do fator de crescimento de transformao (do ingls, Transforming Growth
Factor - TGF-). Estas clulas regulam a atividade de clones Th1 e Th2 bem como inibem
clones de linfcitos autorreativos que no sofreram apoptose durante os processos de maturao
na medula ssea (LB) e no timo (LT). O TGF- conhecido como uma citocina imunossupressora
capaz de inibir todos os componentes do sistema imune a exemplo de LB, LT e APCs. A produo
basal desta citocina no contexto da regulao das respostas imunes causa efeitos benficos como

143

Imunologia III

a induo da auto-regulao da resposta imune. No entanto, a produo exacerbada de TGF-


pode causar efeitos prejudiciais ao organismo.
O crescimento rpido de alguns tumores malignos pode ser atribudo a produo de TGF-
pelas clulas cancergenas. Este fenmeno representa um dos mecanismos de escape dos
tumores da resposta imune. Sob o efeito imunossupressor da citocina os principais mecanismos
anti-tumorais como os LT auxiliares, LT citotxicos e clulas NK so regulados negativamente.
Outras clulas como os LB e as APCs tambm so inibidas pelo TGF- permitindo o crescimento
rpido e de mau prognstico do tumor. Em contrapartida a deficincia de Tregs produtoras tanto
de IL-10 quanto TGF- vem sendo apontada como a provvel causa para doenas crnicas como
a esclerose mltipla.
O uso de imunoterapias a base de citocinas a fim de regular a resposta imune vem sendo
aplicado em pacientes com cnceres e infeces virais como as hepatites. Os interferons
apresentam efeitos considerveis na ativao das respostas celulares protetoras, porm uma
limitao da terapia a base de citocinas seria os diversos efeitos colaterais.
O sucesso das respostas imunes depende de uma fina regulao das respostas por
citocinas de perfil Th1 e Th2 e qualquer descontrole deste processo pode causar doenas do
sistema imune. Essas patologias podem ser classificadas em dois grandes grupos: as respostas
de hipersensibilidade e as imunodeficincias.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividades
Qual a melhor resposta imune contra as viroses? Explique.

144

Imunologia III

UNIDADE 4
AS DOENAS DO SISTEMA IMUNOLGICO
1. AS REAES DE HIPERSENSIBILIDADE
As doenas do sistema imune denominadas de reaes de hipersensibildades so aquelas
caracterizadas por respostas exacerbadas contra Ag prprios (doenas autoimunes) ou estranhos.
As doenas autoimunes so mediadas por clones de linfcitos autorreativos pr-existentes
oriundos de falhas dos mecanismos de tolerncia central e perifrico.
A tolerncia perifrica consiste em um processo de eliminao ou inibio de clones
autorreativos que escaparam da medula ssea e do timo como descrito abaixo:

Ausncia do antgeno: As clulas autorreativas necessitam do Ag para se ativarem


podendo sofrer morte por apoptose na ausncia de apresentao e reconhecimento antignico;

Falta de coestmulo: Os sinais coestimulatrios (ex. molculas B7) so essenciais


para a ativao completa dos linfcitos. Linfcitos autorreativos podem reconhecer Ag prprios
com alta avidez, porm no se ativam devido a ausncia dos segundos sinais resultando em
clulas no responsivas ou anrgicas;

Expresso de receptores inibitrios: A expresso do antgeno tardio de clula T


(CTLA-4) pelas clulas alvo regula negativamente os clones autorreativos;

Excluso folicular: As clulas B autorreativas que no expressam receptor CCR7


para quimiocina so conseguem penetrar nos folculos presentes no bao onde ocorre a
maturao da afinidade das Igs levando os clones de LB apoptose;

Presena de Tregs: Os clones autorreativos so inibidos pelas Tregs produtoras de


TGF-.
Caso os mecanismos de tolerncia perifrica falhem os clones de linfcitos autorreativos
podem causar danos aos tecidos e rgos do corpo causando, geralmente, as doenas
autoimunes. Essas doenas so mediadas por autoanticorpos das classes IgM e/ou IgG e se
classificam imunologicamente como reaes de hipersensibilidade citotxica e do imunocomplexo.
1.1 HIPERSENSIBILIDADE CITOTXICA
As reaes de hipersensibilidade citotxica ocorrem em sua grande maioria contra Ag
prprios localizados nas superfcies de clulas ou tecidos do corpo (Figura 29). Existem vrias
doenas pertencentes a esta classe de hipersensibilidade como a miastenia gravis, a prpura
trombocitopnica autoimune, diabetes melitus do tipo I, anemia hemoltica auto-imune,
hipertireodismo ente outras doenas.
Na miastenia gravis ocorre um bloqueio, mediado por autoanticorpos, dos receptores da
acetilcolina (Ach) presentes na placa motora causando fraqueza muscular e paralisia. A ativao
desses receptores pela Ach induz a entrada de ons sdio na fibra muscular esqueltica e
conseqente resposta de contrao. Esta doena no tem cura e o seu tratamento realizado
com medicamentos anticolinestersicos que inibem a enzima acetilcolinesterase responsvel pela
degradao fisiolgica do neurotransmissor Ach no msculo esqueltico.

145

Imunologia III

A produo de autoanticorpos contra protenas das membranas das plaquetas causa


opsonizao destas clulas e fagocitose. O nmero reduzido de plaquetas favorece o
aparecimento de petquias que so pequenos pontos hemorrgicos em vrias partes do corpo.
Como toda doena autoimune, a prpura considerada incurvel e a principal forma de
tratamento feita com o uso de medicamentos imunossupressores como os antiinflamatrios do
tipo glicocorticides que tm o objetivo de inibir a atividade das clulas B autorreativas e reduzir a
produo dos autoanticorpos.

Figura 29. Hipersensibilidade citotxica Miastenia gravis


Na miastenia gravis h perda do tnus muscular causada pelo bloqueio mediado por Ig contra o
receptor da acetilcolina, ACh. Este receptor um canal de sdio fundamental para o processo de
contrao do msculo esqueltico.
Fonte: http://www.new-science-press.com/info/illustration_files/nsp-immunity-12-5-12_13.jpg

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


Durante sculos a prpura trombocitopnica autoimune foi considerada uma
maldio

entre

alguns

povos

europeus

que

sangravam

nas

mucosas

principalmente na boca e na lngua. Devido cor branca e plida da pele, os lbios


cor de sangue e os hbitos noturnos, esses indivduos eram chamados de
vampiros.

A anemia hemoltica autoimune mediada por autoanticorpos especficos para protenas


de membrana das hemceas (fator Rh) que opsonizam e induzem a fagocitose das hemceas. As
principais manifestaes clnicas desta doena so a hemlise e a reduo do nmero de clulas
vermelhas do sangue, anemia.
O diabetes do tipo I uma doena causada por autoanticorpos que se ligam nos
receptores de insulina bloqueando a ao deste hormnio. Como resultado os pacientes
apresentam hiperglicemia e cetoacidose. Nessa patologia tambm observada a destruio das
clulas pancreticas produtoras de insulina descartando qualquer possibilidade de cura para o
diabetes do tipo I. A reposio da insulina o principal tratamento disponvel at o momento.
No hipertireoidismo ou doena de graves o paciente produz autoanticorpos contra o
receptor do hormnio estimulante da tireide (TSH). Neste caso o anticorpo se liga e ativa por
tempo indeterminado o receptor que media a sntese dos hormnios tireoidianos T3 e T4. O
aumento na produo dos hormnios da glndula tireide provoca vrias alteraes do

146

Imunologia III

metabolismo como perda de peso e representa um fator desencadeante de doenas


cardiovasculares como a hipertenso arterial.
A transferncia de IgG materna via placenta o principal mecanismo de proteo ao feto.
No entanto, algumas mulheres podem produzir IgGs especficas para hemceas fetais caso
ocorra mistura do sangue da me com o sangue da criana durante o parto. Isto se explica
quando o feto apresenta fator Rh (Ag prprio) nas membranas das hemceas e o tipo sanguneo
da me Rh negativo. A presena das hemceas fetais na circulao sangunea materna deve
ativar o sistema imunolgico da mulher que desenvolver uma resposta imune adaptativa contra o
fator Rh fetal. Nas prximas gestaes h o risco de transferncia de IgGs fator Rh-especficas
serem transferidas via placenta podendo ativar os mecanismos efetores das imunoglobulinas
como opsonizao e fagocitose alm da via clssica do sistema complemento. A agresso do
sistema imune s hemcias fetais s ocorrer contra fetos Rh positivos. Essa reao
classificada como uma hipersensibilidade citotxica, porm difere das demais doenas citadas
acima porque o fator Rh fetal um Ag estranho.
1.2 HIPERSENSIBILIDADE DO IMUNOCOMPLEXO
Os imunocomplexos so formados por antgenos, prprios ou estranhos, e anticorpos prexistentes (Figura 30). A descoberta de reaes de hipersensibilidade envolvendo a participao
dos complexos foi evidenciada desde o incio do sculo XX quando as infeces diftricas eram
tratadas com soros de cavalos ricos em Ig antitoxina. Os soros eram transferidos passivamente
aos pacientes que apresentavam melhora dos sinais e sintomas da doena, mas aps uma
semana aproximadamente eram acometidos por dores nas articulaes, leses vasculares e
inclusive danos renais. Essa nova condio clnica dos pacientes recebeu o nome de doena do
soro ou do imunocomplexo. Atualmente, a doena do soro utilizada como modelo experimental
para o estudo dos mecanismos e possveis formas de tratamento para patologias classificadas
imunologicamente como reaes de hipersensibilidade mediada por imunocomplexos como o
lpus eritematoso sistmico (LES) e a poliarterite nodosa.
Figura

30.

Hipersensibilidade

do

imunocomplexo.
Os complexo Ag-Ig se depositam na
parede vascular ativando o sistema
complemento

ativando

clulas

inflamatrias que liberam enzimas


que digerem o endotlio causando
vasculites.
Fonte:
http://pathmicro.med.sc.edu/Portugue
se/chap17-4a.gif

No LES os Ag envolvidos so DNA e nucleoprotenas de leuccitos que induzem a


produo de autoanticorpos que mediam a resposta inflamatria dependente do sistema
complemento e pelo receptor Fc das Igs. Os imunocomplexos se depositam sobre as paredes dos
vasos sanguneos sobre tudo aqueles que sofrem alta presso hidrosttica como os vasos que
147

Imunologia III

irrigam os rins. As principais manifestaes clnicas no LES so a nefrite, artrite e vasculite


caracterizando assim o aspecto sistmico da doena.
H falha no transporte dos imunocomplexos pelas hemcias da corrente sangunea em
direo ao fgado onde ocorre a depurao dos complexos. As hemcias expressam receptores
para o fragmento C3b do sistema complemento que por sua vez encontra-se ligado as
membranas dos Ag estranhos devido ativao do sistema complemento induzida pelos
autoanticorpos. Caso haja deficincia na expresso do receptor de C3b, o transporte dos
complexos diminui favorecendo a deposio destes sobre os vasos sanguneos.
A glomerulonefrite ps-estreptoccica causa danos renais semelhantes queles
observados no LES. A endotoxina bacteriana pode aderir na membrana basal dos glomrulos e
ativar a resposta imune com a produo de Ig anti-endotoxina levando a ativao da resposta
inflamatria. Como a ligao a interao Ig-endotoxina ocorre na superfcie do glomrulo no
podemos classificar esta patologia como uma doena do imunocomplexo e, sim uma
hipersensibilidade citotxica. Adicionalmente, a sndrome de Goodpasture tambm mediada por
Ig contra Ag de membrana basal glomerular e dos alvolos pulmonares e, portanto essas
patologias no podem ser confundidas com as reaes do imunocomplexo.
Na poliarterite nodosa h produo de Ig contra Ag de superfcie do vrus da hepatite B. A
vasculite observada nesta patologia tambm mediada pelo sistema complemento e pelo
receptor Fc. Exames de imagem so teis para visualizao das reas afetas pelas reaes
mediadas por Ig anti-membrana basal e imunocomplexos. Esses mtodos de diagnstico sero
descritos mais adiante.
1.3 HIPERSENSIBLIDADE IMEDIATA
Na unidade II aprendemos que anticorpos da classe IgE participam de respostas de ADCC
contra parasitos helmintos. Mas existe um papel no protetor para estas Igs relacionado com o
desenvolvimento de reaes de hipersensibilidade imediatas ou anafilticas.
As doenas mediadas por IgE ocorrem em indivduos geneticamente pr-dispostos que
entram em contato com os fatores ambientais desencadeantes das reaes de hipersensiblidade.
Doenas como asma alrgica, rinosinusite alrgica, urticria, alergia alimentar e choque anafiltico
so induzidas na presena de Ag estranhos denominados de alrgenos por serem os causadores
das doenas alrgicas (Figura 31).
Os principais alrgenos ambientais so as fezes de caros, baratas, alimentos (ex.
amendoim e crustceos), pigmentos, medicamentos como a penicilina e dipirona entre outros. A
maioria dos indivduos tolera ou realizam respostas imunes protetoras contra estes alrgenos,
porm aqueles com pr-disposio gentica para produzir elevados nveis de IgE, conhecidos
como atpicos, montam respostas muito potentes que causam leses aos tecidos normais
causando doena.

148

Imunologia III

Figura 31. Hipersensibilidade imediata


O alrgeno induz a diferenciao de clones Th2 produtores de IL-4 e IL-13 necessrias para a troca
de isotipo (IgE) pelas clulas B. As IgE se ligam em receptores de mastcitos e a aps a reexposio ao alrgeno ocorre a desgranulao destas clulas liberando os mediadores inflamatrios
causadores dos sintomas clncos.
Fonte: http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/chap17-1.gif

Essas reaes de hipersensibilidade so chamadas de imediatas porque ocorrem poucos


minutos aps a exposio ao alrgeno. O mecanismo celular e molecular envolvido nessa reao
apresenta perfil do tipo Th2 que se inicia com a resposta primria no interior de um rgo linfide
perifrico. O alrgeno inicialmente sofre fagocitose por APCs profissionais e os peptdeos so
apresentados ao LTCD4+ virgem que reconhece o complexo MHC de classe II/peptdeo via TCR
na presena de sinais coestimulatrios. A ativao da clula T em microambiente rico em IL-4
induz a diferenciao dos clones Th2.
Os clones efetores secretam as citocinas IL-4, IL-5 e IL-3 necessrias para induo da
reao patolgica. A troca de isotipo de IgM para IgE por clulas B ativadas ocorre durante as
respostas secundrias a medida que o indivduo sofre novas exposies ao alrgeno e, depende
das citocinas IL4 e IL13. A IgE produzida em baixssimos nveis e se eleva em duas situaes
distintas, as infeces parasitrias e nas reaes alrgicas. Esta Ig apresenta afinidade por
receptores de leuccitos como os eosinfilos, basfilos e, mastcitos residentes de tecidos.
Os mastcitos so considerados as clulas efetoras das reaes de hipersensibilidade
imediata. Isto ocorre porque as IgE ligadas aos receptores de alta afinidade FcRI dos mastcitos
podem permanecer ligadas por tempo indeterminado. Este processo denominado de
sensibilizao dos mastcitos. Uma vez revestidos por IgE os mastcitos esto prontos para
mediar os processos patolgicos desta reao que dependem de um novo contato do paciente
com o alrgeno que desencadeou a produo da IgE.

149

Imunologia III

A ligao cruzada do alrgeno com duas molculas de IgE presentes na superfcie do


mastcito suficiente para ativar esta clula que libera os seus grnulos citoplasmticos ricos em
mediadores inflamatrios. Os mastcitos armazenam aminas biognicas como histamina e
serotonina, derivados lipdicos do cido araquidnico, citocinas inflamatrias e enzimas
proteolticas. O principal modelo de estudo das reaes imediatas a inflamao e a
hiperreatividade brnquica observados no pulmo asmtico.
1.3.1 ASMA ALRGICA
A asma alrgica acomete milhes de pessoas no mundo inteiro e vem sendo largamente
estudada por grupos de pesquisa com o objetivo de produzir novos medicamentos capazes de
minimizar a sintomatologia da doena. O pulmo asmtico o cenrio perfeito para estudar as
reaes de hipersensibilidade imediata devido riqueza de componentes celulares e moleculares
envolvidos na leso ao epitlio brnquico.
Os mediadores dos mastcitos so classificados como inflamatrios e espasmognicos. A
princpio h liberao imediata de histamina que induz aumento de permeabilidade vascular e
contrao do msculo liso brnquico e, em seguida ocorre a sntese dos derivados lipdicos do
cido araquidnico como prostaglandinas e leucotrienos que alm de induzirem inflamao
tambm so potentes broncoconstrictores. Citocinas inflamatrias como TNF- e enzimas
proteoltcas a exemplo das proteases de mastcitos colaboram para a leso tecidual.
A fase aguda na asma alrgica marcada por dificuldade respiratria induzida pelo
broncoespasmo enquanto a fase tardia consiste na entrada de leuccitos na luz do brnquio. Esta
resposta inflamatria permite que granulcitos neutrfilos migrem para o pulmo atingindo um pico
mximo por volta das seis horas aps a exposio ao alrgeno. Cerca de 24 horas aps a
exposio alergnica podemos observar um potente influxo de eosinfilos no pulmo o que
contribui para a agresso do epitlio.
Os eosinfilos so considerados os principais viles da asma alrgica porque so
capazes de desgranular substncias txicas sobre o epitlio brnquico (Figura 32).
Figura 32. Eosinfilos
Fotografia de um granulcito eosinfilo com destaque para o
ncleo bilobado e a rica e grosseira granulao citoplasmtica.
Fonte:
http://www.netprof.pt/biologia_Geologia/ApoioComplAula/TExpCam
po//gifs/Image35.gif

A desgranulao mediada por IgE uma vez que os


eosinfilos tambm expresso receptores do tipo FcRI de
superfcie. Estas clulas armazenam protenas catinicas como a protena bsica principal e a
protena catinica eosinoflica alm da enzima peroxidase eosinoflica envolvida no reparo dos
tecidos. Normalmente ocorre falha no processo de reparo (cicatrizao) do tecido com posterior
deposio de fibrina levando a fibrose do tecido. Estas reas do epitlio perdem a funo
biolgica de realizar trocas gasosas podendo causar no futuro a insuficincia respiratria e morte
dos pacientes.

150

Imunologia III

Semelhante ao mecanismo que rege a leso no pulmo asmtico, as demais reaes


imediatas diferem na localizao anatmica e evidentemente nos sinais e sintomas caractersticos
do rgo afetado.
Na rinosinusite alrgica a resposta inflamatria causa obstruo das vias areas
superiores, corrimento nasal e urticria, porm quando a desgranulao dos mastcitos ocorre na
mucosa ocular o paciente relata como manifestaes clnicas eritema, lacrimejamento dos olhos e
urticria sendo este ltimo sintoma comum nas reaes alrgicas imediatas que acometem a pele.
Nas alergias alimentares, os mediadores inflamatrios aumentam a motilidade intestinal causando
as diarrias.
Uma reao alrgica imediata potencialmente fatal o choque anafiltico. A presena do
alrgeno na corrente sangunea pode induzir a desgranulao de eosinfilos e principalmente
basfilos sensibilizados por IgE especfica para o alrgeno. Alguns medicamentos, pigmentos e
venenos de insetos so descritos como indutores desta reao em pacientes alrgicos. O choque
provocado pela liberao sistmica de histamina que aumenta a permeabilidade dos vasos
sanguneos causando uma drstica hipotenso e impossibilitando a circulao do sangue o que
caracteriza o choque circulatrio. Alm da estase sangunea, a histamina circulante causa
dilatao dos vasos sanguneos da glote causando edema. Este mediador tambm induz
broncoespasmo contribuindo para a dificuldade respiratria que pode causar morte por asfixia. A
nica maneira de se reverter os sintomas do choque anafiltico a administrao do hormnio
adrenalina que capaz de restaurar a presso arterial e liberar as vias areas do paciente
causando broncodilatao.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividade
Para pesquisar: Seria possvel o indivduo sofrer uma reao de choque anafiltico
aps uma nica exposio ao alrgeno? Explique.
Dica: Durante a sua pesquisa utiliza palavras-chaves como alrgeno, choque
anafiltico e reao cruzada

1.4 TERAPIAS DAS DOENAS ALRGICAS IMEDIATAS


Atualmente h inmeros estudos em andamento com o objetivo de produzir novos
medicamentos para o tratamento das doenas alrgicas do tipo imediato. O uso de substncias
como estabilizadores de membrana de mastcito (cromoglicato), inibidores das enzimas
fosfodiesterases (teofilina), agonistas -adrenrgicos (salbutamol e adrenalina), antiinflamatrios
glicocorticides (prednizolona) e inibidores de leucotrienos (montelukast e derivados) vm sendo
utilizados na clnica para bloquear os sinais e sintomas da doena. No entanto, as doenas
alrgicas continuam incurveis justificando uma intensa corrida em busca de novas formas de
tratamento.
As imunoterapias representam um novo mtodo de tratamento para as reaes alrgicas
imediatas. A injeo de alrgenos por via subcutnea utilizada na perspectiva de induzir
respostas imunes regulatrias e desviar o perfil imunolgico do paciente. Este conceito recebeu o

151

Imunologia III

nome de teoria da dessensibilizao porque capaz de alterar a resposta humoral de parte dos
pacientes submetidos a este procedimento. O tratamento consiste na administrao de sucessivas
injees do alrgeno em diferentes concentraes ao longo do tempo. Os resultados da terapia
podem ser observados em meses ou at anos e, induz proteo apenas em parte dos pacientes
no conferindo status de vacina a esta estratgia teraputica.
Naqueles pacientes que respondem positivamente a terapia de dessensibilizao podese
observar uma inverso nos nveis sricos de IgE (resposta Th2) com relao aos nveis sricos de
IgG (resposta Th1). Acredita-se que a mudana do perfil imunolgico dos pacientes se deva a
ativao de clones de clulas Treg que seriam as responsveis por regular negativamente a
resposta Th2 defeituosa dos pacientes. Recentemente a produo de medicamentos a base de
anticorpos anti-IgE vem permitindo o tratamento de pacientes com asma alrgica refratrios aos
medicamentos broncodilatadores e glicocorticides, porm o uso desta terapia continua bastante
restrito em virtude do seu elevado custo.
1.5 HIPERSENSIBILIDADE CELULAR
As doenas causadas por clulas Th1, LTCD8+ e macrfagos so classificadas com
reaes de hipersensibilidade celular ou tardia (do ingls, Delayed Type Hypersensitivity DTH).
Essas reaes ocorrem contra Ag prprios ou estranhos persitentes como alguns patgenos
intracelulares e substncias inertes (Figura 33). Podemos citar como exemplos a tuberculose
pulmonar, a hansenase, a esquistossomose, a encefalomielite auto-imune experimental, a
doena inflamatria intestinal e diabetes do tipo I.
A tuberculose pulmonar e a hansenase so causadas por micobactrias conhecidas como
patgenos de vida intracelular. Alguns indivduos no montam respostas celulares protetoras
contra estes Ag estranhos resultando em uma intensa reao inflamatria mediada por LT
secretores de IFN- e macrfagos, ativados por esta citocina, que causam leso tecidual via
liberao de ROIs e enzimas hidrolticas. A inflamao no pulmo (tuberculose) e na pele
(hansenase) contribui para a fibrose e perda da sensibilidade, respectivamente. A fibrose
induzida aps a formao de estruturas celulares denominadas de granuloma formada por LT,
macrfagos e fibroblastos que circundam o patgeno na tentativa de impedir a sua proliferao. A
liberao de citocinas como TGF-1 por macrfagos fundamental para deposio de fibrina
pelos fibroblastos e posterior fibrose do tecido que resultar em insuficincia respiratria naqueles
pacientes no tratados. Provavelmente esses pacientes apresentam um perfil de resposta Th2
que impede a ativao adequada da resposta imune celular necessria para eliminao das
micobatrias. De maneira semelhante s doenas causadas por micobactrias, as leses
causadas pela esquistossomose tambm so imunologicamente classificadas como reaes de
hipersensibilidade celular. Nesta patologia, a formao de granuloma e a fibrose heptica so
eventos marcantes da doena.

152

Imunologia III

Figura 33. Reao de DTH


Formao do conjugado hapteno-carreador
na epiderme e posterior fagocitose pelas
clulas de Langerhans. Estas migram via
circulao linftica para os linfonodos onde
ocorre a apresentao de antgeno para o LT
virgem que se ativa, diferencia e prolifera
como clones Th1 efetores e de memria. Os
clones

efetores

so

responsveis

por

respostas imunes intensas causando leso


nos rgos afetados.
Fonte: http://www.cdc.gov/niosh/topics/skin/
conference/s1t3_1.gif

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividades
O metal nquel considerado um Ag persistente. De que maneira este Ag poderia
estimular respostas de DTH? Explique.

Os LT e macrfagos tambm participam de respostas autoimunes. A encefalomielite


autoimune experimental conhecida como a contrapartida experimental da doena esclerose
mltipla induzida em animais vacinados com Ag proticos de mielina do sistema nervoso central
e adjuvantes. A resposta envolve a ativao de clones Th1 e macrfagos que circundam os
nervos do crebro e medula espinhal causando leses que resultam em dficit neurolgico. J a
doena inflamatria intestinal mediada por Th1 e uma produo excessiva de citocinas como
IFN- e TNF- que induzem inflamao e leso na mucosa intestinal. Estudos anteriores
demonstraram que animais nocautes para IL-10 desenvolvem a doena devido a ativao
exacerbada dos macrfagos contra bactrias presentes no intestino.
:: SAIBA MAIS... ::
Animais nocautes so aqueles que tiveram genes removidos utilizando-se tcnicas
sofisticadas. Esse mtodo permite o estudo de vrios produtos gnicos e suas
funes biolgicas a exemplo de citocinas como a IL-10.

153

Imunologia III

O diabetes do tipo I anteriormente descrito como uma doena classificada como


hipersensibilidade citotxica tambm considerada uma hipersensibilidade celular devido
presena de infiltrado de LT e macrfagos no pncreas do indivduo afetado.
Existem inmeras doenas do sistema imunolgico caracterizadas pela exacerbao das
respostas de LB, LT e macrfagos. Por outro lado, a diminuio ou at mesmo a falta de resposta
imune induz um grupo diferente de doenas denominadas de imunodeficincias.

2. IMUNODEFICINCIAS
A defesa do organismo contra os microorganismos patognicos depende da integridade do
sistema imunolgico. Caso ocorra alguma deficincia de componentes da resposta imune celular
e/ou humoral haver aumento na susceptibilidade a infeces por patgenos de vida extra e
intracelular. O conjunto de doenas causadas por respostas imunes diminudas chamado de
imunodeficincias. Estas podem ser classificadas como imunodeficincia congnita ou primria
quando a causa for de origem gentica provocando os sinais e sintomas geralmente na infncia e
adolescncia enquanto aquelas provocadas por desnutrio, cncer generalizado, tratamento com
medicamentos imunossupressores e por patgenos intracelulares, a exemplo dos vrus, so
conhecidas como imunodeficincias secundrias ou adquiridas.
2.1 IMUNODEFICINCIAS CONGNITAS
Essas doenas podem afetar a maturao e/ou diferenciao dos linfcitos B e T. As
principais caractersticas observadas no diagnstico clnico para os defeitos de LB so os nveis
reduzidos de Ig no soro, alterao dos folculos e centros germinativos e aumento da
susceptibilidade as infeces por bactrias piognicas causadoras de otites, pneumonia,
meningite e osteomielite alm de bactrias entricas, vrus e alguns parasitos. Quanto s
deficincias de LT podemos constatar nos exames clnicos uma reduo tanto nos nveis sricos
de Ig uma vez que os LTCD4+ auxiliam a produo de Ig via secreo de citocinas bem como
induzem a troca de isotipo de Ig. As reaes de DTH tambm se apresentam reduzidas porque
estas dependem exclusivamente da participao de clulas como os linfcitos T e, alteraes nas
regies parafoliculares, ricas em LT, dos rgos linfides perifricos podem ser encontradas. Isto
resulta no aumento da susceptibilidade a patgenos, em sua maioria de vida intracelular, como o
Pneumocystis carinii, muitos vrus, micobactrias e fungos. Os defeitos na maturao dos
linfcitos podem causar doenas como:

Agamaglobulinemia ligada ao X: Reduo do nmero de LB e todas as classes de Ig no


soro provavelmente devido ao bloqueio da maturao a partir da clula Pr-B em
conseqncia da mutao na tirosina cinase da clula B;
Delees da cadeia pesada das Igs: Ausncia das subclasses de IgG, IgA ou IgE
provocada pela deleo cromossmica no lcus da cadeia pesada de Ig em 14q32;
Sndrome DiGeorge: Reduo do nmero de LT e podendo apresentar alterao nos nveis
sricos de Ig devido ao desenvolvimento anormal da 3 e 4 bolsa branquial causando a
hipoplasia do timo;

154

Imunologia III

Imunodeficincia combinada severa: Reduo do nmero de LT com possvel alterao do


nmero de LB e diminuio de Ig srica provocada por mutaes do gene do receptor de
citocinas e maturao defeituosa de LT por deficincia nos sinais enviados pela IL-7;
Doena recessiva autossmica: Decrscimo de ambos os linfcitos por maturao
defeituosa e de causa ainda desconhecida.

Alm das imunodeficincias dos linfcitos T e B os componentes da resposta inata tambm


podem apresentar defeitos. Esta resposta constitui a primeira linha de defesa do organismo
contra os Ag estranhos e, portanto a reduo de seus componentes tais como fagcitos e
sistema complemento podem resultar em imunodeficincias.
2.2 DOENAS DOS FAGCITOS
A doena granulomatosa crnica causada por mutaes nos genes que codificam a
enzima fagcito oxidase. Em conseqncia da mutao, as clulas produzem ROIs em
quantidades diminudas favorecendo as infeces recorrentes provocadas por bactrias
intracelulares e fungos. Na deficincia de adeso leucocitria 1 ocorre a falta de expresso das
integrinas 2 necessrias na adeso dos leuccitos na parede vascular. As mutaes nos genes
que codificam as integrinas so apontadas com a causa da doena que se caracteriza por
aumento na incidncia de infeces fngicas e bacterianas. Por outro lado as mutaes nos
genes dos ligantes das selectinas E e P causam expresso deficiente destas protenas que so
necessrias para a transmigrao dos leuccitos da parede vascular em direo aos tecidos. A
maior incidncia de infeces tambm observada nesta patologia denominada de
imunodeficincia de adeso leucocitria 2. Os defeitos na funo lisossmica de neutrfilos,
macrfagos e clulas dendrticas e, dos grnulos das clulas NK esto presentes na Sndrome
Chdiak-Higashi cuja origem reside nas mutaes do gene associado funo dos grnulos
citoplasmticos. Semelhantemente s demais doenas dos fagcitos a Sndrome aumenta a
incidncia de infeces bacterianas e fngicas.
O sistema complemento tambm alvo de alteraes de origem hereditria. Os defeitos
envolvendo os componentes da via clssica como C1q, C1r, C2, C3 e C4 j foram descritos sendo
a deficincia de C2 e C4 a mais documentada. Nesta patologia o indivduo desenvolve sinais e
sintomas semelhantes ao lpus eritematoso sistmico. Uma justificativa para este fenmeno seria
o aumento da deposio de imunocomplexos sobre as paredes dos vasos sanguneos devido a
menor ativao do complemento e gerao do fragmento C3 fundamental para o transporte dos
imunocomplexos realizados pelas hemceas.
Os componentes da via alternativa (fator D e properdina) alm das protenas C5, C6, C7,
C8 e C9 podem apresentar nveis sricos reduzidos implicando em defeitos de ativao da via
alternativa ou na formao do MAC. Em ambas as situaes observam-se uma maior incidncia
de infeces piognicas nos pacientes. As bactrias do gnero Neisseria causadores de
meningite e gonorria causam infeces disseminadas nestes pacientes indicando que o sistema
complemento apresenta um papel fundamental na proteo do organismo contra estas bactrias.
As protenas regulatrias como inibidor de C1, Fator I e Fator H esto envolvidas no
desenvolvimento de doenas do complemento geralmente quando h ativao excessiva das vias
de ativao. Alm da maior incidncia de infeces, a ausncia do Fator I e H causam

155

Imunologia III

glomerulonefrite provavelmente devido a maior produo e deposio dos imunocomplexos nas


paredes endoteliais. A deficincia de receptores do complemento como CR3 e CR4 so raras e
est associada a adeso leucocitria defeituosa e, aumento na ocorrncia de infeces. Doenas
causadas pela ativao normal do sistema complemento como as leses descritas nas doenas
auto-imunes no se relacionam com defeitos dos componentes do sistema complemento.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Atividades
Para pesquisar: De que maneira alguns vrus utilizam componentes do sistema
complemento para escapar da resposta imune e causar infeco?

2.3 IMUNODEFICINCIAS ADQUIRIDAS


As doenas classificadas como imunodeficincias congnitas podem apresentar diferentes
causas como a desnutrio, infeces, tumores malignos e uso de medicamentos
imunossupressores. As clulas do sistema imune utilizam vrios micronutrientes tais como as
vitaminas A, B e C alm de minerais como o zinco para manuteno das suas funes bsicas. A
falta desses nutrientes prejudica diversas funes celulares desde a fagocitose at a produo de
imunoglobulinas.
As infeces podem ser a causa de imunossupresso em pacientes porque alguns
microorganismos a exemplo dos vrus oncognicos (formadores de tumores) so capazes de
escapar da resposta imune lanando mo de mecanismos tais como inibio da sntese ou
diminuio da expresso das molculas de MHC de classe I e II, bloqueio dos componentes de
processamento antignico da via endgena representados pelo proteassomo e TAP, falta de
expresso das molculas coestimulatrias B7 e CD40 ou falha no transporte dos complexos MHCpeptdeos para a membrana das clulas apresentadoras. Adicionalmente, os vrus oncognicos
muitas vezes secretam substncias imunossupressoras como o TGF- que inibe a funo de
todos os componentes celulares da resposta imune adaptativa: os linfcitos T e B, as clulas
apresentadoras e as molculas secretadas por estas clulas como as citocinas, as
imunoglobulinas e toxinas utilizadas nas respostas de citotoxidade.
Os corticides so medicamentos utilizados no tratamento de reaes alrgicas e rejeio
de transplantes cujo mecanismo de ao est associado com a inibio das respostas imunes
humorais e celulares e, portanto esses medicamentos tambm podem induzir imunodeficincia.
Em todos os casos mencionados at este momento vale salientar que a restaurao do status
nutricional do paciente, a eliminao do processo infeccioso e a interrupo do uso de
medicamentos imunossupressores restabelecem as funes normais do sistema imunolgico
indicando que esses quadros de imunodeficincia so transitrios. Por outro lado, a
imunodeficincia causada por alguns vrus pode ser lenta, progressiva e incurvel como no caso
das infeces pelo vrus HIV.

156

Imunologia III

2.4 INFECO PELO VRUS HIV E AIDS


O HIV um retrovrus da famlia dos lentivrus causadores da imunodeficincia bovina,
felina e smia. Em todas as espcies citadas o HIV provoca infeco latente, inicialmente
assintomtica e imunodeficincia podendo levar a morte. Existem os vrus HIV-1causador do
maior nmero de infeco e doena e, o vrus HIV-2 que provoca uma doena semelhante ao
primeiro vrus. Os vrus HIV apresentam uma estrutura bem conhecida formada por vrios genes
que codificam as protenas da capsula, as diferentes enzimas virais entre outras partculas
importantes para o processo de infeco e replicao viral nas clulas hospedeiras. Abaixo
podemos visualizar a estrutura um esquema de infeco viral. O ciclo de vida do HIV depende da
infeco de clulas hospedeiras que apresentam todo o maquinrio necessrio para que o vrus
se multiplique e amplifique o seu ciclo infeccioso (Figura 34).
Inicialmente O HIV adere na membrana de clulas CD4+ como LT, macrfagos e clulas
dendrticas. Estas clulas tambm expresso receptores para quimiocinas necessrios para o
processo de adeso do vrus. O HIV expressa a glicoprotena gp41 e gp120 sendo a primeira
responsvel pela ligao na molcula CD4 e o receptor de quimiocina da clula hospedeira. Em
seguida ocorre uma alterao conformacional da gp120 permitindo a insero da gp41 na
bicamada lipdica da clula alvo. Este evento facilita a fuso entre a membrana do vrus com a
membrana da clula e, por conseguinte ocorre a entrada do RNA viral.
No citosol da clula alvo a enzima transcriptase reversa do HIV catalisa a sntese do DNA
pr-viral que se integra ao DNA da clula onde pode ser transcrito em RNA mensageiro. A
transcrio do RNA viral no ncleo da clula depende da ativao da mesma por citocinas durante
as respostas imunes a outros patgenos. As protenas sintetizadas posteriormente so utilizadas
na montagem da estrutura central do vrus e as gp41 e gp120 so expressas quando os novos
vrus brotam na membrana plasmtica da clula. O brotamento de milhares de partculas virais em
uma nica clula provoca danos irreversveis membrana plasmtica causando morte
principalmente dos linfcitos e demais clulas alvo.
Figura 34. Ciclo de vida vrus HIV
O HIV adere na membrana da clula alvo
inserindo o seu material gentico. Aps a
sntese de DNA viral catalisada pela enzima
transcriptase reversa, o pr-vrus penetra no
ncleo e se recombina com o DNA da clula
alvo. Em seguida h sntese de protenas
virais

novos

vrus

que

brotam

na

membrana plasmtica favorecendo um novo


ciclo de infeco.
Fonte:
http://www.scottremley.com/viral_images/HIV
_Life_Cycle_Diagramm_BandW.gif

A evoluo da doena causada pelo HIV pode ser descrita em etapas. Nas primeiras
semanas ps-infeco tambm denominada de infeco primria, o paciente pode apresentar

157

Imunologia III

sinais e sintomas caractersticos de uma virose comum tais como febre, dor de cabea,
inflamao de garganta com faringite, linfadenopatia generalizada e erupes cutneas. Nesta
fase os vrus so instalados nos linfonodos, bao e MALTs. A presena do vrus no sangue
(viremia) elevada provocando uma queda rpida no nmero das clulas CD4+ principalmente as
clulas T auxiliares, porm o sistema imune responde produzindo anticorpos anti-HIV alm de
ativarem a resposta citotxica dos LTCD8+ permitindo um controle parcial da replicao viral.
Cerca de doze semanas ps-infeco se inicia o perodo de latncia caracterizado por baixssima
ou nenhuma viremia. Durante a infeco latente os vrus continuam se multiplicando nos rgos
linfides contribuindo para a reduo lenta e progressiva do nmero das clulas CD4+. As clulas
dendrticas e os macrfagos so importantes neste processo uma vez que so passveis de
infeco, no entanto estas clulas so mais resistentes a morte induzida pelo HIV. Essas clulas
so consideradas os principais reservatrios do vrus no organismo. A fase de latncia pode durar
anos ou at mesmo dcadas variando de acordo com o paciente.
A presena de anticorpos antienvelope do vrus e anti-p24 (protena viral) so facilmente
quantificados nos soros dos pacientes bem como LT citotxicos especficos para peptdeos do
HIV. Embora os anticorpos produzidos no apresentem atividade protetora, a presena destes na
circulao sangunea dos pacientes serve como marcadores de diagnstico. Ao longo do perodo
de latncia clnica pode-se evidenciar o decrscimo do nmero de LT auxiliares que corresponde
a aproximadamente 1000 clulas/ml de sangue em indivduos sadios, mas podendo ser reduzido
para menos da metade aps anos de infeco e na ausncia de tratamento.
O desenvolvimento de novas infeces durante a vida desses pacientes pode ser
determinante para o trmino do perodo de latncia clnica e aumento da replicao viral. A
literatura descreve inmeros casos de pacientes que aps sofrerem infeces bacterianas, virais
ou fngicas voltaram a apresentar elevados nveis de viremia contribuindo para a instalao de
um quadro clnico grave caracterizado por imunodeficincia. As respostas imunes contra os
patgenos fornecem uma srie de citocinas que ativam fatores de transcrio e estimulam a
replicao do genoma do HIV integrado ao DNA celular. Com o aumento da viremia o decrscimo
do nmero de clulas T atinge nveis crticos (cerca de 200 clulas/ml de sangue) que so
considerados insuficientes para garantir as repostas imunes protetoras contra os diversos
microorganismos patognicos.
A falta de sucesso das respostas imunes contra o HIV se deve ao fato que o vrus utiliza-se
dos mecanismos de reconhecimento antignico dos linfcitos T auxiliares para realizar a adeso e
infeco de novos linfcitos. Isto ocorre porque o processo de reconhecimento dos peptdeos
virais depende de um contato ntimo entre a clula infectada expressando o complexo MHC de
classe II-peptdeo viral (apresentao cruzada) e o LT auxiliar sadio permitindo a ligao das
gp120 com o CD4 e receptor de quimiocina e, depois a insero da gp41 na bicamada lipdica da
clula. Este processo induz a infeco e morte progressiva dos linfcitos T auxiliares e por
conseqncia uma reduo das respostas dos linfcitos T citotxicos que dependem de citocinas
como IFN- das clulas auxiliares para concluir o processo de ativao necessrio para a lise das
clulas infectadas pelo vrus HIV.
Na tentativa de compensar o decrscimo no nmero de linfcitos, a medula ssea produz e
repe essas clulas ao longo de todo o perodo de infeco impedindo que esta reduo ocorra
drasticamente, no entanto a capacidade de reposio da medula inferior a velocidade de
replicao viral causando um dficit no nmero de linfcitos que pode ser observado desde os

158

Imunologia III

primeiros meses da infeco at o final da latncia clnica. Adicionalmente, as respostas de


clulas NK no so eficazes na maioria dos pacientes, porm alguns estudos recentes mostram o
possvel papel anti-HIV de algumas populaes de clulas NK em indivduos atualmente
denominados de pacientes convivendo com o HIV.
Simultaneamente morte dos linfcitos observa-se tambm uma desorganizao e
destruio dos tecidos linfides perifricos contribuindo para uma falncia total da capacidade de
armazenar clulas linfides e organizar respostas imunes eficazes contra os diversos agentes
infecciosos caracterizando o quadro de imunodeficincia humana adquirida causada pelo HIV,
Aids. Esta fase conhecida como fase clnica da doena geralmente acompanhada por um
conjunto de patologias (Sndrome) representadas pelas infeces oportunistas (Figura 35).
A seguir alguns agentes infecciosos causadores da Aids e outras condies clnicas.

Protozorios Pneumocystis carinii, Cryptosporidium


Bactrias - Toxoplasma, Mycobaterium avium, Salmonela
Fungos Candida, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum
Vrus Citomegalovirus, Herpes simples, Varicela zoster
Tumores Linfomas (incluindo aqueles associados ao vrus Epstein-Barr), Sarcoma de
Kaposi, Carcinoma cervical
Encefalopatia
Sndrome caquetizante.
Figura 35. Infeco oportunista Sarcoma de
Kaposi
Cncer de pele em paciente com Aids
Fonte:
http://www.scielo.br/img/revistas/abd/v77n6/a
08f01.jpg

O tratamento da doena causada pelo


HIV feito com medicamentos inibidores
das
enzimas
transcriptase
reversa,
proteases e integrases consideradas cruciais
para o processo de infeco, gerao de DNA e organizao das novas partculas virais.
Anteriormente ao incio do tratamento da Aids e demais doenas que afetam o sistema
imunolgico se faz necessrio o diagnstico preciso utilizando-se tcnicas de laboratrio
baseadas em sua maioria no uso de anticorpos como ferramentas para deteco de antgenos
solveis ou presentes nas membranas das clulas obtidas nas amostras dos pacientes para
anlise.

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Imunologia III

:: PERGUNTA?? ::
Atividades
Pode-se dizer que um paciente HIV positivo tenha Aids? Explique com base no texto
acima.

3. TCNICAS DE LABORATRIO USADAS EM IMUNOLOGIA


Os mtodos de diagnstico usados em Imunologia tm como objetivo identificar e/ou
quantificar a concentrao de molculas presentes em amostras dos pacientes. O alvo dessas
tcnicas geralmente um antgeno ou anticorpo que uma vez marcado com uma substncia
indicadora como um radioistopo (radioimunoensaio) ou uma enzima (ensaio imunoenzimtico ELISA) permita a deteco da radioatividade emitida ou a quantidade do produto da reao
catalisada enzimaticamente.
3.1 ENSAIO IMUNOENZIMTICO - ELISA
A verso mais utilizada destes ensaios denominada de sanduche (Figura 36). Estes so
baseados no uso de dois anticorpos especficos para o Ag (concentrao desconhecida) presente
nas amostras para diagnstico ou Ag presente em solues padro de concentrao conhecida.
Inicialmente se adiciona o primeiro anticorpo (primrio ou de captura) para revestir a superfcie de
suportes slidos como placas de poliestireno contendo vrias cavidades (ex. 24 ou 96) e em
seguida se adiciona a amostra contendo o Ag para que se ligue.
Os Ag no ligados so removidos aps lavagem das placas com soluo tampo.
Posteriormente se adiciona o segundo anticorpo (secundrio) marcado com radioistopo ou
enzima para se ligar em determinantes antignicos no relacionados especificidade do anticorpo
de primrio formando uma estrutura chamada de sanduche onde o Ag est localizado ao centro e
os anticorpos ligados nas extremidades.
A leitura do ensaio realizada usando-se equipamentos para deteco de radiao ou
espectrofotmetro capaz de medir a intensidade de cor presente no meio colorido aps a
converso de um substrato da enzima na presena de uma substncia cromgena. A
concentrao do antgeno das amostras obtida a partir de uma curva padro. Atualmente o
mtodo do ELISA sanduche utilizado para deteco de anticorpos anti-vrus das hepatites A, B
e C e diagnstico da Aids confirmado pela presena de anticorpos anti-HIV nos soros dos
pacientes alm de outras doenas.

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Imunologia III

Figura 36. Mtodo do ELISA sanduche


As etapas do ensaio imunoenzimtico. 1) Adio do anticorpo de captura na placa de poliestireno, 2)
Adio da amostra, 3) Ligao de anticorpo secundrio na amostra/sanduche, 4) Complexo de
amplificao contendo enzima e 5) Adio do substrato e formao de um composto colorido.
Fonte: http://home.cc.umanitoba.ca/~umguerri/PLNT4600/mini3/640px-ELISA-sandwich.jpg

3.2 CITOMETRIA DE FLUXO E SEPARAO CELULAR


A expresso de molculas de superfcie ou intracelulares pode ser detectados com o uso
do mtodo de citometria utilizando-se um equipamento chamado de separador de clulas ativado
por fluorescncia (do ingls, Fluourescent Activator Cellular Sorter - FACS) (Figura 37). Este
equipamento capaz de detectar a emisso de fluorescncia emitida em uma suspenso celular
por um anticorpo/sonda marcado. Este mtodo largamente utilizado em pesquisa cientfica para
determinar o perfil celular em amostras de animais ou seres humanos portadores de doenas.

Figura 37. Separador de clulas ativado por fluorescncia - FACS


O uso de diferentes anticorpos com especificidades para
receptores celulares marcados com substncia fluorescente
facilita a separao das clulas.
Fonte: http://www.molecularstation.com/images/facs-1.jpg

O uso de sondas marcadas com fluorescncia tambm utilizado para determinar a


distribuio anatmica de um antgeno dentro de um tecido ou compartimento celular. Este
mtodo denominado de Imunohistoqumica usado rotineiramente na clnica para o diagnstico
de vrias doenas a exemplo do cncer (Figura 38).

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Imunologia III

Figura 38. Imunohistoqumica


esquerda, esquema mostrando a ligao do anticorpo primrio em determinantes antignicos
presentes no corte histolgico seguida da ligao do anticorpo secundrio marcado com substncia
fluorescente e complexo de amplificao avidina-biotina. direita, fotografia do corte histolgico
com pontos escuros mostrando a localizao das clulas marcadas com anticorpo.
Fonte: http://www.anticorpos.com.br/img/esquema-imuno3.png,
http://www.scielo.br/img/revistas/rcbc/v31n3/n3a07f1.gif

:: PERGUNTA?? ::
Atividades
Como o uso de anticorpos pode ajudar no diagnstico de doenas? D exemplos.

REFERNCIAS

ABBAS AK, LICHTMAN AH, PILLAI S. Imunologia celular & molecular. 6. ed. Rio de Janeiro:
Elsevier, 2008.
BALESTIERI, F.M.P. Imunologia. Editora Manole, 2006.
JANEWAY, C. A. et al. Imunobiologia O sistema imune na sade e na doena. 5. Ed. Porto
Alegre: Artmed, 2002.
ROITTI IM, DELVES, PJ. Fundamentos de Imunologia. 10. ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2004.

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