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Respuesta inmune celular 2008

(Transcrito por Katia Corral Halal)

Cuando los antgenos, ya sea de forma soluble o mediante clulas presentadoras, llegan a
los linfonodos, son reconocidos por recetores de Linfocitos B o T, inducindose la
expansin clonal de la clula que tiene este receptor especifico; se produce un proceso de
diferenciacin que implica un cambio de funcin. Los LB se transforman en clulas
plasmticas capaces de secretar anticuerpos y los LT se transforman en clulas efectoras
capaces de secretar citoquinas.
Cuando se produce esta respuesta (luego de aproximadamente 7 das) se comienzan a
eliminar los antgenos o patgenos debido a que se desata la inmunidad humoral y celular.
Para el da 14 ya hay un descenso en el nivel d patgenos, lo que induce que las clulas que
se activaron entren en apoptosis y que otras queden como clulas de memoria. No se sabe si
stas se originan luego de la activacin ya nombrada como una subpoblacin independiente
de las clulas efectoras o si stas ltimas, luego del proceso se diferencian a clulas de
memoria.
Lo importante es q las clulas de memoria permiten que se produzca una respuesta ms
rpida si hay un nuevo ataque de este antgeno (fundamento de vacunas).
Generacin de la respuesta inmune.
Para que se genere respuesta inmune, sobre todo en tejidos perifricos (piel y mucosas), se
generan seales d peligro que atraen macrfagos y clulas dendrticas al sitio de de
inflamacin; estas clulas poseen receptores de membrana que pueden reconocer patrones
conservados en distintos tipos de microbios (bacterias, parsitos, etc.) llamados PAMPs,
que son reconocidos por receptores PRRs (receptores d reconocimiento de patrones), los
que han coevolucionado con los patgenos y son capaces d reconocer una variedad amplia
de stos. Este reconocimiento permite que se activen las clulas, comenzando as su
diferenciacin, su capacidad d secretar citoquinas, de movilizarse, de capturar antgenos,
etc.

Hay varios tipos de receptores que reconocen PAMPs:


1) Receptores tipo TOLL (TLRs) Es una familia que se expresan en APC
(macrfagos y clulas dendrticas) y son capaces de reconocer estructuras
conservadas y mediar seales intracelular.
2) Receptor n-formil metionil Es otro tipo de receptor PRR. Reconoce otras
estructuras asociadas a patgeno.
3) Receptores de manosa

4)

Receptores scavengers Tambin reconocen estructuras conservadas en los


patgenos. Esta familia de receptores son los que constituyen los primeros
reconocimientos y sensibilizacin d neutrfilos.

Los receptores TLRs (hay del 1 al 9) reconocen cada uno estructuras distintas (pptidos
bacterianos, peptidoglicanos bacterianos, lipoprotenas, LPS, elementos de los fungi,
proteinas virales, flagelina, etc). Lo importante es entender que hay una amplia variedad de
estos receptores y que todos ellos reconocen distintas estructuras presentes en patgenos y
son capaces de generar activacin de clulas en las que estn presentes. Cuando estos
receptores se activan producen reclutamiento de protenas intracelulares y se genera una
cascada d fosforilaciones y desfosforilaciones que activan factores d transcripcin. Estos
provocan que se active la transcripcin de genes d citoquinas, quimoquinas, molculas de
adhesin, molculas coestimuladoras, citoquinas antivirales, etc.
Existen otros receptores que se encuentran en el intracelular y que son capaces de captar,
por ejemplo, cido nucleico, RNA de una hebra u otro tipo de material gentico
probablemente proveniente d un virus que infect la clula. Estos receptores tambin
generan activacin de APC.
Es importante que recuerden que dentro de los PRRs estn los TLRs, todos los TLRs son
PRRs, pero no todos los PRRs son TLRs.
Qu cambios induce dentro de la APC la activacin de TLRs?
Se induce expresin de molculas coestimuladoras (B7), por lo que se produce la capacidad
de presentar antgeno asociado a una segunda seal. Esto lleva a q se genere expansin
clonal y diferenciacin d linfocitos.
Cuando se activan los linfocitos se comienza a expresar en ellos el CD40L (presente solo en
linfocito activado). El CD40L es el principal mediador de seales para las APC que poseen
receptor CD40 (macrfagos, clulas dendrticas y LB), por los tanto, los linfocitos
activados pueden interactuar con clulas que tienen CD40 y activarlos, sto genera que se
induzcan ms molculas coestimuladoras en ellas. (Amplificacin d respuesta).
ltimamente se le ha dado mucha importancia a molculas que podran ser homologas a los
PAMPs, llamadas DAMPs. Estas molculas son patrones asociados a dao y son
producidas por las clulas tumorales, clulas infectadas por virus, etc. que generan estados
de estrs, producindose exposicin de proteinas que generalmente no se encuentran
expuestas, por ejemplo, heat shocks proteins que generalmente no se expresan a menos
que se est en un estado de emergencia o irritacin debido a calor, irradiacin, toxicidad,
etc y pueden unirse a receptores d APC y producir una RI; proteinas nucleares que son
proteinas asociadas a ADN, sin embargo, en clulas alteradas pueden ser expuestas e
interactan con receptores TLR o de otro tipo q active a APC; o calreticulina, protena
chaperona que est asociada a presentacin antignica en contexto MHC clase I, pero que
tambin se moviliza la membrana y es capaz d inducir activacin de clulas dendrticas, por
ejemplo, nosotros tenemos un lisado tumoral que es capaz d inducir maduracin de clulas
dendrticas y esta maduracin esta asociada solo a clulas tumorales, las normales no
inducen maduracin, esto se debe a que molculas como calreticulina ante ciertos factores
irritantes (en este caso una droga de quimioterapia), hace q se migre a la membrana e
interacte con APC.

Otros factores inductores de estrs, tales como luz ultravioleta y calor, genera que
calreticulina se mueva a membrana, ocurriendo una mayor activacin de clulas
dendrticas.
Entonces, tenemos en el ganglio linftico aparecen las clulas dendrticas capaces d
presentar antgeno en contexto de MHC que, junto con la coestimulacin, generan
activacin de LT, producindose:
1) Clulas efectoras que pueden migran a la periferia a cumplir funciones, como
por ejemplo, a activar macrfagos mediante CD40L.
2) Activacin de LB Algunos LT (dependiendo del tipo que sean) son capaces de ir
al sitio donde se encuentran agrupados los LB y mediante CD40L inducen
activacin de stos y su expansin clonal.
Por lo tanto los LT helper (CD4) pueden tener diversas funciones, sto depende del panel de
citoquinas que expresan. Lo importante es que estas clulas a travs d CD40L pueden
activar LB y macrfagos.
La activacin de LT CD4 y CD8 vrgenes ocurre mediante 2 seales (TCR y
coestimulacin). Luego de esta activacin comienza la secrecin d citoquinas,
principalmente de IL-2 que est asociada a la expansin de LT y tambin ayuda a la
proliferacin d los LB, es decir, puede actuar en forma autocrina (actuando sobre si misma)
o paracrina (actuando en otras clulas del mismo tipo o de otro tipo). Esto genera la
expansin clonal de CD4 y CD8. Por lo tanto, la IL2 es otro factor, adems de la
coestimulacin, que esta asociada a proliferacin de linfocitos

Diferenciacin de linfocitos T
1) Clulas efectoras

- CD4 Pueden activar macrfagos, LB o clulas dendrticas


- CD8 Capaces d secretar grnulos citotxicos y matar clulas afectadas
2) Produccin de clulas de memoria Que se quedan en linfonodos o van a mdula
sea, y generan una capacidad de reaccin ms rpido en 2 evento.
Presentacin cruzada
Las clulas infectadas por virus son capaces de producir antgeno asociado a MHC clase I,
sin embargo, para poder producir respuesta contra esta clula, ya q NO migra al ganglio,
tiene q ser capturada por una clula dendrtica (La clula dendrtica tiene la capacidad de
comerse clulas infectadas). Esta estructura permanece en un compartimiento exgeno y
luego es transportada al citoplasma para entrar a la va de presentacin MHC clase I y,
algunas veces, tambin a la de MHC clase II, por lo que APC puede activar LT CD8 o CD4.
Cuando se activan los CD8 vrgenes generan la respuesta citotxica contra este antgeno, es
decir, el LT citotxico es capaz d reconocer a la clula y destruirla, sto se conoce como
presentacin cruzada.
Activacin de linfocitos T
Se
requieren
dos
seales para activar a
un linfocito citotxico:
Presentacin
de
antgeno en contexto
MHC
(seal
1),
coestimulacin (seal
2).
Existe una tercera
seal, que es mediada
por citoquinas y que
se produce debido a
que los linfocitos
tienen receptores para
stas molculas. Al
activarse se producen
ms citoquinas que, a su vez, estimulan la activacin de los linfocitos.
Un linfocito CD8 reconoce entonces a una APC y a travs de las seales 1 y 2 se generan
secrecin de citoquinas por parte de las APC, sto estimula la diferenciacin de los
linfocitos.
La clula T citotxica virgen no tiene grnulos.
La clula activada, a diferencia de las vrgenes no necesita la coestimulacin para activarse.
Los linfocitos tambin se pueden activar en forma paracrina. Cuando una APC capta un
antgeno lo presenta. La clulas dendrticas tienen una estructura con muchas
prolongaciones, por lo que pueden generar interacciones con muchos linfocitos al mismo
tiempo y, por lo tanto, pueden generar que un linfocito CD4 reconozcan un antgeno en el
MHC clase II, secrete citoquinas como IL-2 o IFN y esto genere que otro linfocito virgen
(sin grnulos) que tambin est interaccionando con la clula dendrtica reciba las seales
1 y 2 y se active por las 3 estimulaciones posibles. (TCR, coestimulacin y citoquinas).

Los CD4 que son activados comienzan a expresar CD40L, ste es capaz inducir la
expresin de molculas coestimulatorias que facilita que LT virgen reciba seal 1 y 2, se
active y prolifere.
El Linfocito helper estimula a la clula dendrtica mediante CD40L, haciendo que aumente
la coestimulacin y liberacin d citoquinas, sto repercute en activacin de LT vrgenes, los
cuales se convierten en efector y proliferan.
Las clulas dendrticas pueden tener fenotipo y funciones distintas de acuerdo a los
estmulos que recibieron en la periferia (de los ligandos d los PRRs), por sto hay
poblaciones q inducen diferenciacin d LT a Th1 (que produce un tipo d citoquinas),
asociado a la respuesta inmune celular, activacin de macrfagos, Th2 (que produce otro
tipo d citoquinas), asociado a la respuesta inmune humoral y a Th17 (que produce otro tipo
d citoquinas), asociados a respuesta autoinmune.
La clulas dendrticas tambin pueden inducir otras poblaciones, q son los linfocitos T
reguladores. Existen distintos tipos de stos, tales como linfocitos que expresen TGFbeta
(llamados Th3), linfocitos CD4+CD5+Foxp3 (reguladores tradicionales) y linfocitos Tr1, q
expresan mucha IL-10.
Por lo tanto, dependiendo del tipo de clula dendrtica, de los niveles de MHC que tengan,
de los niveles de molculas coestimuladoras, de las citoquinas que secreten, etc. estas
clulas dendrticas van a producir que el linfocito T se diferencie a clulas efectoras (Th1,
Th2 o Th17) o van a producir respuestas reguladoras (Tr1, Th3, y reguladores
tradicionales).
Este tipo de respuesta se da porque generalmente cuando no hay infeccin las clulas
dendrticas estn constantemente migrando (ms lentamente) desde periferia a linfonodos y
van captando antgenos propios, en ausencia de seales d peligro el fenotipo de estas
clulas dendrticas es inductor de tolerancia, por lo que genera este tipo de clulas,
impidiendo enfermedades autoinmunes. En caso de que exista un patgeno, se genera una
activacin ms potente de estas clulas, ms rpida, con mayores niveles de molculas
coestimuladoras y de MHC, y eso genera q los linfocitos q se activan sean efectores.
TCR
Los linfocitos son fundamentales en RI celular y se caracterizan por tener una gran
variabilidad de receptores en su membrana, estos receptores son para un solo antgeno
(especfico).
La estructura del receptor T est formada por dos cadenas, una alfa y otra beta. Ambas
cadenas poseen un dominio conservado y otro variable. Los dominios variables generan
zonas de interaccin con MHC y con el pptido. Dentro de zonas variables se encuentran
zonas hipervariables, que generan especificidad del receptor por un antgeno y por un MHC
determinado.
Existe mucha similitud entre un receptor B y uno T, la estructura de la inmunoglobulina
tiene un segmento Fc y 2 segmentos Fab, el cual posee segmentos constantes, variables, e
hipervariable, ste ltimo se asocia con el antgeno. El receptor T tiene un segmento
parecido al Fab de la inmunoglobulina (es de la misma familia), pero siempre est asociado
a la membrana del LT, en cambio, el del LB puede ser secretado cuando la clula se
transforma en una clula plasmtica.
El receptor T no se encuentra solo en la membrana, est asociado a complejo TCR CD3.
Este complejo est constituido por las cadenas alfa y beta del TCR, por la cadena Epsilon y

Gamma de CD3 y por las cadenas Epsilon Delta tambin de CD3, adems, el complejo est
asociado a un segmento intracelular llamado Cadena z.
TCR CD3 genera que cuando se produce interaccin de TCR con MHC unido a antgeno,
se generan cambios conformacionales que desencadenan una cascada de fosforilacin y
desforforilacin
(mediadas
por
quinasas) que producen seales
intracelulares que activan factores d
transcripcin, estos factores van al
ncleo y producen transcripcin de
genes de citoquinas, genes asociados a
proliferacin, etc.
Los receptores T y B son
reordenamientos genticos que se
producen en cada clula de un
individuo. Generalmente, en LT
inmaduros los genes que van a
codificar receptores T se encuentran
completos y alineados; en un
momentos determinado se produce una recombinacin y genera combinaciones q van a dar
una diversidad enorme de receptores. Una vez que se genera esta recombinacin ste ya no
puede cambiar porque hay segmentos que se han perdido, a diferencia de los receptores
B, no hay mutaciones puntuales, por lo q no cambia su afinidad a lo largo del tiempo.
Las recombinaciones (que suceden de forma similar en los LB), generan que se elijan al
azar segmentos variables que se unen a segmentos J y que despus se unen a segmentos
constantes, generando un receptor. Lo mismo pasa con la cadena B, producindose una
variabilidad gigante d receptores.
De esta enorme gama d receptores mas del 90% son eliminados porque se generan
combinaciones que no tienen ninguna afinidad por el MHC propio, por lo tanto, al no tener
ninguna afinidad no puede tener funcin y es eliminado en el timo durante la seleccin.
Un receptor T no es que reconozca un antgeno 100%, puede ser que reconozca ms fuerte
un MHC-pptido que otro MHC-pptido, etc. si lo reconocen demasiado fuerte no
reacciona, si lo reconoce demasiado dbilmente tampoco, la afinidad tiene q ser intermedia.
Es importante saber que reconoce tanto MHC, como al pptido. Si se mantiene el
pptido y se cambia MHC no hay reconocimiento
Mediacin de seales intracelulares
La idea central est en que al producirse la interaccin, se generan seales de activacin
que generan fosforilacin de la cadena z, esto produce una serie de eventos: Se fosforila
una protena y eso permite que tenga afinidad por otra protena, se fosforila esta otra
protena, se activa, etc. y termina en generar factores de transcripcin, tales como NFkB,
AP-1, nfat? que tienen capacidad de migrar al ncleo y asociarse al ADN formando
complejos. Debido a sto, se puede asociar protenas de diversos tipos para generar
complejos que generan transcripcin. Dependiendo del tipo de seal en la membrana se
generan diferentes factores de transcripcin y compiten entre ellos generando complejos
activadores, inhibidores, generando citoquinas de un tipo u otro, etc.

Activaciones aberrantes
Las activaciones aberrantes se producen por los super antgenos. Son estructuras
producidas por algunas bacterias o virus que codifican una protena que se expresa en la
membrana y lo que hace es mediar afinidad entre un MHC y un TCR, aunque entre ellos no
exista afinidad, produce efectos dainos, por ejemplo, infeccin descontrolada.
CTLA4
Cuando los macrfagos y las clulas dendrticas estn en reposo no expresan molculas
coestimulatorias, cuando estas clulas sin molculas coestimuladoras exponen antgenos a
linfocitos vrgenes se produce anergia. Por ejemplo, hay linfocitos q son especficos para el
tumor, pero son anrgicos.
Cuando las APC son activadas por receptores PRRs se comienzan a expresar ms
molculas coestimuladoras y esto genera las seales 1 y 2. Con sto, se produce secrecin
de citoquinas, secrecin d IL-2 (que acta de forma autocrina) y proliferacin de linfocitos.
A veces un mismo receptor puede tener acciones opuestas dependiendo de su ligando.
LT vrgenes expresan CD28 constitutivamente, pero una vez que se activan comienzan a
acumular CTLA4, que es un ligando competidor de B7. CTLA4 genera seales negativas
que producen anergia o apoptosis, es decir, es una molcula que genera que se apague la
respuesta. Se ha dicho que CTLA4 tiene mucha ms afinidad por B7 que CD28, por lo que
el linfocito queda sin seal 2. Cuando se activa CTLA4 se activa una cascada que inhibe la
cascada mediada por CD28 y se bloquea la activacin del linfocito. En resumen, hay que
asociar CD28 al linfocito virgen y CTLA4 al activo; ambos se unen a B7, generando
diferentes respuestas.
Existen muchas molculas coestimuladoras aparte de B7 (son una familia de protenas q se
expresa en APC en mayor o menor cantidad). Adems existen molculas de adhesin que
son capaces d actuar tambin como molculas coestimuladoras.
Sinapsis inmunolgica
La interaccin entre LT y APC se llama sinapsis inmunolgica; sta no solo se dada por
un receptor y un MHC, sino que por acumulacin de protenas en un lugar concreto del LT
que puede interactuar con otro grupo de protenas presentes en APC. En la parte central de
la sinapsis (csmac) se genera interaccin entre varios MHC y varios TCR; y en la zona
perifrica (psmac) hay interaccin de molculas coestimuladoras y de adhesin.
Una vez que los receptores T son utilizados envejecen y son degradados (como todas las
protenas), se genera ubiquitinizacin, la que puede ser detectada por proteosomas. Estas
protenas se reciclan y se utilizan para ser presentadas en MHC clase II (no son
intracelulares, ya que estn en membrana y deben endocitarse).
Activacin de LB
El primer nivel de activacin que tienen es a nivel del antgeno (soluble), el LB ahora es
capaz de recibir estmulos de LT a travs de CD40, mediante CD40L y, gracias a esta
interaccin, se genera expansin clonal de los LB. Esta expansin clonal tambin sufre
proliferacin y diferenciacin, producindose:
1) Clulas plasmticas Secretan anticuerpos

2) Cambio de isotipo Se comienza a generar IgG soluble q tiene que ver con la
respuesta 2
3) Maduracin de afinidad Los LB van mutando en el tiempo, seleccionndose los
que tienen alta afinidad (esto no pasa con los LT)
4) Clulas de memoria
Cada una de estas etapas requiere de diferentes estmulos.
Generalmente para q se produzca la respuesta de los LB (cuya sealizacin intracelular es
casi igual a la de los LT), se requiere de un cross linking. Varios receptores de
inmunoglobulinas tienen que interactuar con el mismo antgeno para que se enven
seales potentes, sino no se produce activacin.
Cuando una APC se encuentra con un linfocito y se producen las primeras interacciones
hay una condensacin (polarizacin) de molculas en un lado de la clula, por eso pueden
interactuar muchas molculas con muchos ligandos (pasa lo mismo en el LT)
El cross Linking tambin
se puede producir entre
receptores distintos, en vez
de haber 2 receptores d
inmunoglobulinas con el
mismo antgeno puede ser
que el complemento se
asocie a bacterias o
patgenos directamente o
mediado por anticuerpos
pegados al patgeno, as
van a haber segmentos del
complemento (como c3b),
que va a estar siendo
reconocido por un receptor
para esta molcula, que va
a
estar
asociada
al
patgeno y al lado puede haber una inmunoglobulina q reconozca al patgeno. Esto va a
generar ms de una seal y se activara el LB. (Vean el monito de arriba)
El cross Linking va producir un aumento en la proliferacin y sobrevida, en los niveles de
molculas coestimuladoras, en la expresin de receptores de citoquinas como IL-2 y IL-4
(inducen proliferacin del LB y aumento de expresin de CCR7 que hace que migre desde
los folculos hasta el rea del LT en el ganglio).
El LB recibe activacin a travs del antgeno que llega soluble, eso hace que migre hacia la
periferia del folculo (a su vez el LT migra hacia el folculo, activado por APC),
producindose la interaccin entre ambos. Para sta es necesario que el LT reconozca el
antgeno que le presenta el LB, al reconocerlo genera la interaccin CD40L CD40 que
permite el cambio de isotipo y la transformacin a clula plasmtica.
Por otro lado, existen dentro de la zona folicular otras clulas dendrticas que no son
presentadoras de antgeno, llamadas clulas dendrticas foliculares, stas no expresan MHC
de ninguna clase, y su funcin no es activar linfocitos. Las clulas dendrticas foliculares
son capaces de reconocer por fuera antgeno y los concentran en sus membranas,

permitiendo que los LB tambin puedan reconocerlos, as se testea su afinidad, los q tienen
baja afinidad son eliminados por apoptosis, seleccionndose los que afinidad alta.
Una forma de apagar la RI de los LB se regula por la capacidad de stos de reconocer una
gran concentracin de antgeno soluble, cuando se acumulan muchas inmunoglobulinas
secretadas se produce este efecto: el LB capta el antgeno, se produce cross linking, pero
hay segmentos Fc que reconocen segmentos Fc de las inmunoglobulinas solubles, que son
captadas y van a poder interaccionar con el antgeno generando seales negativas que
bloquean la activacin de linfocitos y apagan respuesta. Mientras mayor es la
acumulacin d inmunoglobulina ms posibilidades hay de apagar la respuesta.
Cuando los macrfagos capturan patgenos en la etapa de RII los mantienen en vesculas
sin destruirlos, ya que para poder generar la destruccin se deben activar y esto se hace a
travs de LT helper (CD40L CD40).
Por otro lado, los LT son capaces de reconocer clulas que han adquirido patgenos y los
presentan en MHC, gracias a esta seal se activan LT CD4 y CD8 vrgenes que son capaces
de salir a la periferia y reconocer lugares de inflamacin (gracias a molculas expresadas en
el endotelio), generndose la infiltracin de LT activados, que permite la interaccin de
estas con clulas infectadas, activacin de macrfagos y citlisis de clulas infectadas.
LT Th1 y Th2
Se habla ms de respuestas tipo Th1 o Th2, que de LT Th1 o Th2.
Estas se producen por un predominio de citoquinas que determinan si la respuesta es de un
tipo o del otro. Siempre hay presente una mezcla de clulas que tienen un predomino de
respuesta tipo Th1 o Th2, sin embargo, una predomina por sobre la otra. Estas clulas se
diferencian por las citoquinas que producen:
- Th1 (asociada a respuesta celular) Su citoquinas por excelencia es el IFN
gamma, tambin puede secretar receptores de IL-12 e IL-18 y otros tipos de
ligandos para selectinas.
- Th2 (asociada a respuesta humoral) Secreta IL-4, IL-5, IL-6 e IL-13.
El patrn de citoquinas que secrete el linfocito (Th1, Th1 o Th17) va a estar determinado
por el tipo de clula dendrtica que lo activ y por otros factores:
- Th1: IL-12 induce una respuesta de este tipo. Esta IL es secretada por la clula
dendrtica. Th1 hace que se secrete ms IFN gamma.
- Th2: Se induce este tipo de respuesta en ausencia de IL-12. (Puede ser que IL-14
tenga un papel en inducir esta respuesta, pero no est claro).
Los factores q inducen secrecin de IL-12 por clulas dendrticas son: receptores de
IFM gamma que es producido por la clula NK, algn tipo de TLR, y tambin
interaccin CD40L CD40.
Th1 puede ayudar a activacin de macrfagos, neutrfilos y LT CD8. Adems aumenta la
opsonizacin del complemento.
Cuando las clulas de memoria infiltran los tejidos y no est el antgeno que buscan
vuelven a circulacin, en cambio los LT efectores tienen receptores de adhesin que los
hacen permanecer en la periferia, mediando su interaccin con la clula infectada.