Necessidade do meio de cultura.

Na maior parte das vezes, o estudo da morfologia, arranjo e a

interpretao das propriedades de colorao so insuficientes
para a identificao do agente bacteriano. Recorre-se ento
cultura, para se conseguir um elevado nmero de microorganismos, para estudar as caractersticas culturais
da bactria como a capacidade de crescer em meio seletivo e o
aspecto das colnias. Atravs da cultura em meios slidos,
pode-se tambm quantificar a presena bacteriana no material
analisado (importante para diferenciar infeco de colonizao
em determinadas situaes), obter colnias para a realizao
de testes de identificao, bem como obter inoculo para
suspenso (em soluo salina) para a realizao de
antibiograma.

Meio de cultura.
Assim, para a realizao de uma cultura bacteriana,
precisamos de um inoculo e de um meio de cultura. O meio de
cultura uma substncia lquida ou gelificada, simples ou
complexa, que permite a nutrio, o crescimento e a
multiplicao dos micro-organismos. Com efeito, o meio de
cultura deve oferecer condies o mais prximas possvel das
condies naturais.

Composio: normalmente contm 80% de gua, 0.9%

de cloreto de sdio e o restante dependem do micro-organismo
em questo.

PH: entre 6.8 e 7.8, ou seja, prximo da neutralidade. Mas de

lembrar que outras bactrias podem ter outro PH timo,
diferente da neutralidade.

Esterilidade: a esterilizao do meio de cultura efetuada

aps a sua preparao, para assim eliminar os microorganismos contaminantes. Conseguido geralmente por
esterilizao na autoclave.

Acondicionamento: tentando, a todo o custo, evitar a

contaminao (recipientes rolados ou placas de Petri).

Aula pratica laboratrio.

Tema: semear bactrias em meio de cultura. Foram usados
dois tipos de meio de cultura para realizar a pratica,
Macconkey e Muller HInton.
gar MacConkey um meio de cultura destinado ao
crescimento de bactrias Gram negativas e indicar a
fermentao de lactose. Colnias bacterianas que fermentam
lactose tornam o meio rosa choque e as bactrias que no so
fermentadoras de lactose tornam o meio amarelo claro.
gar Mueller-Hinton um meio de cultura microbiolgico que
freqentemente usado para testes de susceptibilidade
antimicrobiana. Tambm usado para isolar e
cultivar Neisseria eMoraxella.

Primeiro passo.
Recolher o material microbiolgico bactrias de qualquer
objeto, para semear no meio de cultura, os objetos utilizados
na nossa pratica, foi um celular e sua capa, do celular foram
retirados o material e inserido no meio de cultura Macconkey,
o material da capa sendo inserido no meio de cultura Muller
hinton, atravs de um cotonete molhada com gua salina,
passando lentamente no meio de cultura para no perfura, tudo
isso em meio temperatura adequada, dentro de uma capela
com a chama do bico de Bunsen, para criar um ambiente
adequado, sendo as bactrias j semeadas no meio de cultura,
fecha a placa, enrola no papel alumio, para no haver
contaminao dentro da estufa, onde ficara por 24:00H, esse
ser seu perodo de crescimento.

Segundo passo colorao de Gram.

um mtodo de colorao de bactrias, que consiste no

tratamento sucessivo de um esfregao bacteriano, fixado pelo
calor, com o reagente cristal violeta, lugol, lcool-acetona e
fucsina bsica. Essa tcnica permite a separao de amostras
bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a
determinao da morfologia e do tamanho das amostras
Analisadas.

Sobre a lmina, colocou-se o material bacteriolgica e fez o

esfregao sobre a superfcie da lmina com uma ala que foi
utilizada pra retira o matria bacteriolgico do meio de cultura,
em seguida aqueceu-se a lmina sobre a chama do bico de
bunsen para fixar o material passou-se o esfregao na chama
do bico de Bunsen trs vezes a fim de fixar o material.
Posteriormente cobriu-se o esfregao seco com (cristal violeta)
e deixar por um minuto, lavou-se com gua corrente, esgotouse a lmina, e a cobriu com soluo de lugol e deixar por um
minuto, esgota-se a lmina e mantendo a mesma inclinada,
pingaram-se gotas de lcool-acetona at que no se desprenda
mais corante da preparao, lavou-se com gua corrente,
cobriu-se a lmina com soluo de fucsina e deixar por trinta
segundos, lavou-se a lmina e secagem da lmina, em seguida
examinou-se ao microscpio com a objetiva de imerso.Gram.
(+) coram de roxo, Gram. (-) coram de rosa.
Visualizao no microscpio ptico.

Na lmina que havia o material que foi semeado no meio de

cultura Macconkey, foi visualizado colnias de bactrias Gram
negativas e poucas bactrias Gram positivas expensas e

cocos.J na lmina que havia o material que foi semeado no

meio de cultura Muller HInton, foi visualizado varias bactrias
Gram positiva expensas e poucas Gram negativas expensas e
cocos.

Concluso.
O mtodo da colorao de Gram. baseado na capacidade das
paredes celulares de bactrias Gram-positivas de reterem o
corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento
com lcool-acetona enquanto que as paredes celulares de
bactrias Gram-negativas no o fazem.
Resumindo, as bactrias Gram. positivas coram-se de roxo e
as Gram. negativas coram-se de vermelho. Esta tcnica de esta
tcnica de colorao permite ento a distino entre bactrias
com parede celular mais ou menos rica em peptidoglicanos.

PRATICA
DE
MICROBIOLOGIA
TEMA: SEMEAR BACTERIAS EM MEIO DE
CULTURA E COLORAO DE GRAM.

CURSO: FARMCIA N/B

PARTICIPANTES DA PRATICA PROFESSORA E

ALUNOS.
PROFESSORA: JOYCE
EQUIPE:
FRANCISCO GAUBER DE ARAUJO

HELEKILSON COELHO

MARIA SOCORRO BRITO DA SIVA

MANOEL MARQUES DA CUNHA

TALITA KEZIA MACHADO SILVA

ANTONIO DUARTE DE PAULO

JOSE RENATO DE SOUSA SILVA

CARLA RAYANE

MARCELO MARQUES

ANA PAULA ROSEIRA

DILVANIA ALVES
RAFAELA MARQUES
GAUBER QUEIROZ DA ROCHA

SAMANTA FREITAS
MAYARA JESSICA