Introduccin

Enlanaturaleza,losmicroorganismosseencuentranformandopoblacionesmixta1scon
otrostiposdemicroorganismos.Loscultivosdeestasmezclassellamanporellocultivos
mixtos.Sinembargo,elconocimientodelosmicroorganismosseconsiguemedianteel
estudiodecepasaisladas,cultivadasenellaboratorioencultivospuros
Sinembargolaidentificacinbacterianaymicotica2yasuvezlacaracterizacincompleta
soloesposibletraselaislamientodedichosmicroorganismosylaobtencindecultivos
puros.Porelloelprimerproblemaalestudiardedosmuestrasdeaguadeterminarsus
posiblesprecensiasdebacteriasyhongos,queensuaislamientodelrestodelos
microorganismospresentes3(ennunamuestrapatolgica,deagua,desuelo,dealimentos,
etc.).paralograrelaislamientodemicroorganismosbacteriasnosdelosmicoticosse
procedearealizarmontajecorrespondienteasumediodefavorabilidadeleccindecultivo
selectivo,Unavezquesehalogradoelaislamientoesposibleobtenerlabacteriadeinters
encultivopuro.
Aislamiento4
Eslaseparacindeundeterminadomicroorganismodelrestodemicroorganismosquele
acompaan.Elmtodomsusualeslasiembraporestrasobreunmediodecultivo
slidoadecuadodispuestoenunaplacadepetri.
Paraellosetomaunapequeacantidaddemuestraconunasacurvayserepartesobrela
superficiedelmediodecultivo.Sobreelmedioquedanseparadaseinmovilizadaslas
clulasbacterianasymicoticas.5Traslaincubacinencondicionesadecuadas,cadaclula
viableoriginaunacoloniavisibleresultadodesucesivasdivisionescelulares.Cadacolonia
bacterianaymicoticapresentetendraunascaractersticasdeterminadasencuantoasu
forma,borde,elevacin,tamao,consistencia,etc
6
bacterias
Tamaoformayagrupacionesbacterianas
Entrelasprincipalescaractersticasdelasbacteriasseencuentransutamao,forma,
estructuraytipodeagrupacin.Todasestascaractersticasvanaconstituirlamorfologa
propiadelasclulasbacterianas
Existentambinalgunasespeciesdebacteriasquepresentanotrascaractersticasademsde
lasyamencionadasyquepuedenserdetectadasatravsdetcnicasespecficasdetincin,
comoeslapresenciadediferenteselementosfacultativos:flagelos,cpsulas,esporas,
corpsculosmetacromticos,etc.;yqueigualmenteformanpartedelamorfologadelas
bacterias,7
Lamorfologanosdaunainformacinprimariasobreeltipodebacteria,nodeforma
concluyenteperos
comopasoprevioacualquierprocesodeidentificacinyclasificacintaxonmica.
TAMAO

Lasbacteriassondepequeotamao,porloqueparasuobservacinesnecesarioel
microscopio.Sutamao
semideenmicras(1m=106m)yoscilaentre0,2mdealgunoscocosylas58mde
largopor1,5m
deanchodelosbacilos.Eltamaoesunacaractersticaparacadatipobacterianoyse
puedemedircon
granexactitudyfiabilidad.8
FORMA
Laformadeunabacteriacomoorganismoindividualvienedadaporlarigidezdesupared.
Esigualmente
unacaractersticadecadatipobacteriano.Lasbacteriassuelenadoptarfundamentalmente
algunadelas
formassiguientes:esfrica,cilndrica,helicoidal,filamentosaoformasintermediasdelos
casosanteriores9
AGRUPACIONMACROSCOPICA
Estasagrupacionessonvisualizadasasimplevistaycorrespondenalcrecimientoenun
puntodeunanicalneacelularhastaformarunacolonia(todaslasclulasquecomponen
lacoloniaprovienendeunanicaclula).10Elcultivoserealizaenunmediodecultivo
slidoparaformarcoloniasqueserndistintasycaractersticasparacadatipobacteriano;el
medioslidoimpideelposiblemovimientodelosindividuosdelacoloniayfavorecesu
agrupamiento
Lascaractersticasdelmediodecultivoslidodondesehadesarrolladolabacteria
constituyenuncriteriodegranimportanciaalahoradehacerunavaloracintaxonmicade
lamisma.
Eltipodebacteriaproblema:Lasbacteriasdemayormovilidadpresentanmayortendencia
adarcoloniasextendidasyplanasfrentealasquenopresentanestacaracterstica
Esimportanteconsiderarqueunmismotipodebacteriapuededarlugaradistintostiposde
coloniasdependiendodelmediodecultivoslidoempleado,eigualmente,distintostipos
bacterianospuedencrecerformandocoloniassimilares.11
DESCRIPCIONDEAGRUPACIONDECOLONIA
Enplaca,sembrndoloporestras.
Eltamao,formayaspectodelascoloniasobtenidasporestatcnicasueleserbastante
constanteparacada
gneroyespeciebacteriana,hechoquesepuedeutilizarcomocaractersticadiferencial.
Paraellodebemos
considerarlossiguientesaspectosdelascolonias:tamao,forma,superficie,consistencia,
transparenciay
coloracinypresenciaonodehalosdetransparencia.
Tamaodelascolonias.
Tamaopequeo:coloniaspuntiformesconaproximadamente0,5mmdedimetroo
inferiores.
Tamaomediano:de1a2mmdedimetro.
Tamaogrande:de4a6mmdedimetro.
Tamaomuygrande:coloniasextendidasenformadeveloinvadiendotodalasuperficie
delmediodecultivo.12

Formadelacolonia.Atiendealaforma,elevacinybordedelacolonia.Segnlaformase
dividenen
puntiforme,circular,rizoide,filamentosa,irregularyfusiforme.
Segnlaelevacin:plana,convexa(semiconvexa),cncava(semicncava),umbiculada,
acuminada,planoconvexa,
papilada,enmeseta,semiesfrica,umbeliforme,elevada,etc
Segnlosbordes:entero,lobulado,rizoide,filamentoso,ondulado,aserrado,espiculado,
redondeado,etc
Superficiedelacolonia.Correspondealaspectodelacolonia.Puedenserlisas,rugosas,
planas,cuminadas,umbilicadas,mucosas,secas,etc.Esmuyimportanteladiferenciacin
entrecoloniaslisasyrugosas,dondelassegundassuelenpresentarcpsulasuotros
componentessuperficialesqueproporcionanunaspectomscompactoorugoso,
relacionandoestetipodebacteriasconunamayorvirulencia,lacualse
pierdecuandolabacteriasufreuncambioderugosaalisa(noobstanteexistenbastante
excepcionesenestehecho).
Consistenciadelacolonia.
13Lascoloniaspuedenserduras,viscosas,mucosas,secas,muysecas,cremosas,etc.En
general,almayorpartedelasbacteriasformancoloniasdeconsistenciamsomenos
cremosa,aunqueexistenmuchasexcepcionesytambin,conpocafrecuencia,puedentener
consistenciamucosacomoladelamayorpartedelaslevaduras.
Transparenciaycoloracin.
Engeneralesfrecuentealgntipodecolorenlascolonias;estopuedeserdebidoala
elaboracindealgntipodepigmento,alaformacindealgunasustanciaporpartedela
bacteriaoporlautilizacindealgnsustratodelmedioqueacidifiqueoalcaliniceastede
formaque,antelapresenciadeindicadoresdepHqueestnenelmedio,cambiadecolor,
hechoquenosayudaaconocerlautilizacindeesesustratoporpartedelabacteria
(tipificacinbioqumica).Latransparenciapuedesercompleta,encuyocaso,sehablade
coloniastranslcidas,semitransparentesocompletamenteopacas,dependiendodeltipo
bacterianoodelmediodecultivoutilizado.14
COLORACION
Cuandoserequiereconocerlosdetallesmorfolgicosdelasbacteriasesnecesariorecurrir
atcnicasde
coloracin.Loscolorantesempleadospuedensernaturalesosintticos.Entrelosnaturales
sueleutilizarseel
carmnylahemotalilinaperosonmsutilizadoslossintticos,ensumayoraderivadosde
laanilina.Lascoloracionespuedenserdirectas(contactodelasuspensinbacterianaconel
colorante)oindirecto(utilizacindemordiente).
LatcnicadecoloracindeGrambrindauncarctertaxonmicoquepermitedistinguir
empricamenteentrebacteriasgrampositivasygramnegativas.Ladiferenteestructura
qumicadelaparedcelulareslaresponsabledeestapropiedad.Lasbacteriasgrampositivas
formanuncompuestoestableconelvioletade
gencianamordenteadoporlugolyresistenladecoloracinconlamezclaalcoholacetona.
Lapreparacindelfrotisconsisteensuspenderunaporcindematerialbacterianoen
solucinsalinaisotnica.15

Losportaobjetosdebenestarlibresdegrasa,pelusa,pegamento,rotuladosanteriores,etc.
Paraellodeben
limpiarseperfectamenteconalcoholydejarsecar.
esevidentequelaAfinidadtintorialdependedelanaturalezaycomposicinqumicadel
tipodepared.Enambostiposdebacteriasseformainicialmenteuncomplejoconla
coloracinprimaria(complejovioletadegencianalugol).16
Estecomplejoesretenidoporlasbacteriasgrampositivasresistiendoladecoloracin.Las
gramnegativas,sinembargo,sonmspermeablesalalcoholporsualtocontenidolipdicoy
estopermitequeelcomplejocoloreadoseaarrastrado.
Aslasgrampositivasconservanelcolorinicialdelcomplejoyseobservandecolorvioleta,
mientrasquelasgramnegativassedecoloranyaceptanelcolorantedecontraste
observndosedecolorrosado.
17
Morfologa de los hongos
Existen dos tipos de hongos: las levaduras y los mohos.
Las levaduras son hongos unicelulares, que se reproducen por
gemacin. Las levaduras son generalmente, clulas mayores que las
bacterias, aunque este parmetro puede variar dependiendo de la
bacteria y la levadura. Su tamao es muy variable, este se encuentra
entre 1 y 5 micras de ancho y 5 a 30 de largo. 18Los mohos son hongos
pluricelulares. Estos crecen formando un filamento llamado hifa, que
puede alcanzar varios cm. de largo. Las hifas pueden ser tabicadas o
continuas. Las tabicadas se dividen en una cadena de clulas mediante
la formacin de paredes transversas o tabiques. Las continuas carecen
de dichos tabiques. Las hifas crecen por elongacin de la punta pice.
Durante el crecimiento las hifas se entrelazan densamente
constituyendo el micelio.19 Existe un micelio tabicado y uno continuo.
Los tabiques presentan orificios que permiten el libre movimiento de
citoplasma y sus ncleos. El organismo completo (micelio) es una
estructura cenoctica, esto significa que es una masa citoplasmtica
continua multinucleada.
Hay dos tipos de micelio, de acuerdo a su funcin:20
Micelio vegetativo: formado por hifas que penetran en el medio de
cultivo o difunden en la superficie absorbiendo nutrientes.
Micelio areo: formado por hifas que se proyectan por encima de
la superficie del medio hacia el aire y que presenta la estructura
reproductora del hongo, que son las esporas, es el micelio de
reproduccin.
Ciertos hongos, entre ellos varios patgenos para el hombre, presentan
dimorfismo, es decir que pueden crecer como levaduras o como mohos,
de acuerdo a las condiciones ambientales.21

Elanlisismicroscpicoesdegranimportanciaenmicologaparalaobservacindelas
diferentesespeciesdehongosd.Sedebenutilizartincionesquelogrenpreservarla
integridaddelasestructurasfngicas.1Paralacorrectaidentificacindehongosdeinters
clnico,yaseaconfinesdediagnsticooestudiostaxonmicos,esnecesarioobservarlas
estructurasfngicasconunaaltacalidadycontraste;paraelloseutilizandiversos
compuestosqumicosquepermitanlatincinentrelaparedyelcitoplasmadelasclulas
fngicas.22Latincindeazuldelactofenolnoesconsideradaunatincindiferencial,sin
embargo,poseecaractersticastintorialesquepermitenobservarcadaunodelos
componentesfngicosyapreciarfcilmentelasestructurasparaunaadecuadaidentifi
cacin.Elfenolinactivalasenzimaslticasdelaclulaeimpidequestaserompa;de
igualforma,destruyelafloraacompaanteeinactivaalaclula,quitndoleelgradode
patogenicidad;comomordientecuandoseusaencombinacinconcolorantes.Elcido
lcticopreservalasestructurasfngicasalprovocaruncambiodegradienteosmticocon
relacinalinteriorfngico,loquegeneraunapelculaprotectora.Elazuldelactofenoles
uncolorantecido,quetieelcitoplasmaylaquitinapresenteenlasclulasfngicas,
mientrasqueelglicerolmantienehmedalapreparacin.23
1. P. R. MURRAY. Microbiologa Mdica. 2006. Mosby (Elsevier Science).
2.

http://www.md.huji.ac.il/microbiology/book/

3.

http://www.kcom.edu/faculty/chamberlain/Website/Lects/Content1.htm

4.

Taxonoma: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/taxonomyhome.html/

5.

Micologa: http://www.doctorfungus.org/index.htm

6.

Micologa: http://www.medmicro.wisc.edu/Resources/ImageLib/Mycology/in
dex.html

7. B. C. MIMS. Microbiologa Mdica. 2 Edicin. 2002. Mosby (Elsevier Science).

8. T.S. WALKER. Microbiologa. 2000. McGraw-Hill Interamericana (513 pginas).
9. M. GLADWIN y B. TRARRLER. Clinical Microbiology (made ridiculously simple) 2
Edicin.1999. MedMaster, Inc. P.O. Box 640028. Miami, FL 33164. USA. (270 pginas).
10. LUIZB.TRABULSIeFLVIOALTERTHUM.Microbiologia.5ed.Atheneu,2009DUNLAP;
11. MADIGAN;MARTINKO.MicrobiologiadeBrock.12Ed.Editora:Artmed.2010PELCZAR,
12. MICHAEL.MicrobiologiaConceptoseEplicacionesesVol.22Ed..Editora:MakronBooks,
2005.
13. Microbiologa.5ed.2004.Prescott,HarleyyKlein.Ed.McGrawHill.(**).
14. .BrockBiologadelosMicroorganismos.10ed.2003Madigan,MartinkoyParker.Ed.Prentice
Hall.Madrid.