Bacteriologa Especial

PRACTICA 3
PRCTICA DE IDENTIFICACIN DE GRAM
NEGATIVOS
(PARTE I)
Los bacilos Gram Negativos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae son los microorganismos ms frecuentes hallados
en el laboratorio de microbiologa clnica. Como indica el nombre de la
familia, muchos miembros de este grupo son naturales del tracto
gastrointestinal. Hoy las enterobacterias se pueden recuperar en
infecciones de virtualmente todos los sitios anatmicos.
La
clasificacin
de
las
enterobacterias
est
basada
principalmente en la determinacin de la presencia o ausencia de
diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma
bacteriano. Estas enzimas guan el metabolismo de las bacterias a lo
largo de una de las diversas vas que pueden detectarse a travs de
medios especiales utilizados en las tcnicas de cultivo in vitro.

1. PRUEBA DE LA CATALASA
La catalasa es una hemoprotena cuyo grupo prosttico est formado
por
Cuatro tomos de hierro trivalente por molcula que retiene su estado
oxidado durante la actividad enzimtica. Es capaz de descomponer el
agua oxigenada (H202) en agua y oxgeno molecular. Esta enzima se
encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas que contienen citocromo.
El perxido de hidrgeno se forma como un producto terminal
oxidativo de la descomposicin aerbica de los azcares. La
flavoprotena reducida reacciona directamente con el oxgeno
molecular por medio de la reduccin de electrones para formar
perxido de hidrgeno y no por accin directa entre l hidrgeno y el
oxgeno molecular. El perxido de hidrogeno, si se deja acumular, es
txico para las bacterias y provoca su muerte. La catalasa descompone
el perxido de hidrgeno u oxida los substratos secundarios; sin
embargo, no tiene accin sobre otros perxidos.
La descomposicin del perxido de hidrgeno se produce a travs de la
accin de dos enzimas: (1) catalasa (xido reductasa del perxido de
hidrogeno y (2) una peroxidasa (NAD+, NADPH+, citocromo c,
glutacin). En la descomposicin del perxido de hidrgeno una
molcula acta como el substrato y la otra como una dador; el
substrato reducido por los tomos de hidrgeno cedidos por el dador,
da como resultados un substrato reducido y un dador oxidado.

Materiales:

Perxido de hidrgeno al 3%
Tubos de TSA con cultivo fresco de: Escherchia coli, Vibrio
cholerae y Pseudomona sp.

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Lminas portaobjetos

Procedimiento:

Cultivos en placa con agar TSA.

Colocar una gota de H202 sobre una lmina porta objetos y
agregar una colonia del microorganismo en prueba. Hacer la
lectura inmediatamente.

Interpretacin:

Si despus de adicionar el H202 se liberan algunas burbujas de gas,

considerar que la reaccin es positiva.

2. PRUEBA CITOCROMO OXIDASA

La prueba de la citocromo oxidasa utiliza ciertos reactivos colorantes
como el tetrafenil-p-fenilendiamina, que sustituye al oxgeno como
aceptor artificial de electrones. En el estado reducido el colorante es
incoloro; sin embargo, en presencia de la citocromo oxidasa y oxgeno
atmosfrico, el p-fenilendiamina es oxidado, formando indofenol azul.

Materiales:

Tetrafenil-p-fenilendiamina-HCI al 1% (Reactivo Oxidasa)

Cultivos en placa con Agar soya Tripticasa (TSA) de (E. coli,
.Vibro cholerae y Psedomonas sp.
Trozos pequeos de papel filtro
Palitos de madera estriles

Procedimiento:

Tcnica directa: sobre una tira de papel impregnado con el

reactivo, y con la ayuda de! palito de madera se toma una
colonia de la cepa y se extiende en la zona de reactivo.
No debe emplearse asas de inoculacin o alambre de acero o
micrn, porque los productos de oxidacin de sus superficies,
formados cuando se flamean pueden resultar en reacciones
falso positivas

Interpretacin

Las colonias bacterianas que tienen actividad de citocromo

oxidasa desarrollan un color azul intenso en el sitio de la inoculacin en
los primeros 30 segundos.

3. PRUEBAS BIOQUMICAS EN KIA TSl

a) Fermentacin de carbohidratos:
El medio KIA (Kliger Iron agar) y el TSl (Triple sugar iron agar) son
medios diferenciales en tubo que sirven para dos propsitos: (1)
determinacin de la fermentacin de carbohidrato, y (2) determinacin
de la produccin de sulfuro de hidrgeno. El medio KIA contiene dos
carbohidratos: lactosa (concentracin 1.0%) y glucosa (concentracin
0.1%). El medio TSl contiene adems un tercer azcar, la sucrosa

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(concentracin 1.0%). Sin embargo, los principios bioqumicos son
similares en ambos medios diferenciales.
La fermentacin del carbohidrato puede ser con o sin produccin de
gas (C02+H2). La fermentacin es tanto aerbica (en la parte
inclinada) y anaerbicamente (en el fondo). En la parte inclinada la
glucosa es inicialmente catabolizada anaerbicamente por la va
Embden Meyerhof tanto por organismos aerbicos como anaerbicos
para producir el intermediario metablico cido pirvico. En seguida el
cido pirvico es degradado al entrar al ciclo de Krebs, por organismos
aerobios o anaerobios facultativos para producir CO2 (gas), H20 y
energa. Ambas vas metablicas, la de Embden Meyerhof y el cielo de
Krebs,
involucran
pasos
secuenciales
produciendo
muchos
intermediarios; donde cada reaccin es mediada por enzimas
especficas.
La lactosa es un disacrido (glucosa y galactosa) que antes de ingresar
a la fermentacin por la ruta de Embden Meyerhof deber ser
catabolizada previamente por la p-galactosidasa, a glucosa y
galactosa.
Las reacciones en KIA se utilizan primariamente para la identificacin
de los miembros de las Enterobacteriaceae que son por definicin
bacilos gramnegativos catalasa positivos, todos los cuales fermentan
la glucosa con produccin de cido. Se han observado tres formas
bsicas de fermentacin en el medio KIA: (i) fermentacin de la
glucosa solamente, (i) fermentacin de la glucosa y lactosa y (iii) no
fermentacin de la glucosa ni la lactosa.
Para fines de identificacin es esencial que se interpreta la
fermentacin de los carbohidratos en todos los tubos con KIA o TSI al
trmino de 18 a 24 horas de incubacin. Una interpretacin prematura
o tarda dar formas de fermentacin no vlidas que llevar a errores
en la identificacin.
b) Produccin de H2S:
Para la produccin de H2S. se debe tener en cuenta que la
protelisis de las protenas da aminocidos individuales. Algunas
especies bacterianas heterotrficas son capaces de liberar azufre
enzimticamente de los diferentes aminoacidos azufrados produciendo
sulfuro de hidrgeno. La peptona. la cisteina, la cistina y el tiosulfato,
todos son fuentes de azufre pero las diferentes especies utilizan
Distintos compuestos o aminocidos que contiene azufre para producir
H2S. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa. Un
organismo que produzca H2S cultivado en un medio orgnico como la
peptona, reduce el azufre por hidrogeneracin, produciendo el gas
H2S. cido pirvico y amonaco.
La prueba tiene dos etapas. (1) La bacteria reacciona con el
tiosulfato de sodio por medio de una reaccin de reduccin que da un
sulfito y un sulfato. Para que tenga lugar la reduccin del tiosulfato es
necesario que exista acidez en el medio, que en el medio KIA (o TSI) es
provisto por los azcares fermentables. (2) El H2S (gas incoloro)

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reacciona con una sal pesada (citrato frrico de amonio) para producir
un precipitado negro insoluble (sulfuro ferroso):

Materiales

Cepas microbianas:
Enterobacteriaceae : Escherichia coli, Shigella, Proteus
Pseudomonadaceae : Pseudomonas sp

Procedimiento

Sembrar por picadura profunda y estra en superficie cada una de las

cepas mencionadas en tres tubos diferentes que contengan el Agar KIA
TSI. Incubar a 37C por 18-24 horas.

Interpretacin
a) Fermentacin de azcares:
K/A: Fermentacin de la glucosa solamente (reaccin: alcalina/acida):
La parte inclinada del tubo (pico de flauta) permanece roja. y la parte
profunda es amarilla.
A/A: Fermentacin de la glucosa y lactosa (reaccin acida/acida): La
parte inclinada del tubo se ha tornado amarilla al igual que la parte
profunda.
K/K: No fermentacin de ningn azcar (reaccin alcalina/alcalina). La
parte inclinada del tubo y la parte profunda permanecen de color rojo o
hubo mayor alcalinizacin.
b) Produccin de H2S:
La produccin de H2S se evidencia por ennegrecimiento del medio
como producto de la precipitacin del H2S con el citrato frrico de
amonio formndose sulfuro ferroso.
c) Produccin de Gas:
La produccin de gas se evidencia por la ruptura o se desplaza el
medio hacia la parte superior.

4. DESCARBOXILACION DE LYSINA Y ORNITINA

Las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas (especficas para
cada aminocido) son capaces de atacar a los aminocidos en su
grupo carboxilo (-COOH). dando una amina o una diamina y anhdrido
carbnico, con la consiguiente alcalinidad. En bacteriologa clnica, las
descarboxilasas importantes utilizadas para la identificacin bacteriana
son la que tienen por substrato a la lisina, ornitina y a la arginina. Estas
descarboxilasas son enzimas adaptativas o inducidas, sintetizadas por
un organismo solamente cultivado en un medio cido en presencia de
un substrato especfico, y los productos de la descarboxilacin
provocan una desviacin del pH hacia la alcalinidad.

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La descarboxilacin est limitada a aquellos aminocidos que poseen
por lo menos un grupo qumicamente activo que no sea una amina o
un grupo amina o un grupo carboxilo, y la descomposicin de los
aminocidos
se
produce
anaerbicamente.
El
proceso
de
descarboxilacin es irreversibte, no xidativo y requiere al fosfato de
piridoxal como coenzima comn. La L-Lysina sufre la descarboxiladn
para dar cadaverina (una diamina) y nhdrico carbnico por accin de
la lysina descarboxilasa. La L-ornitina es descarboxilada por la ornitinadescarboxilasa para dar la diamina putrescina y anhdrido carbnico.
La cadaverina y la putrescina son estables cuando son producidas en
condiciones anaerbicas.

Materiales:

Cepas microbianas: Enterobacteriaceae : E. coli, Shigella,

Proteus
Tubos con LIA (Lysina Hierro Agar)

Procedimiento:
Repicar por picadura profunda en el medio LIA, cada una de las
cepas
por separado, e incubar a 37C por 24 horas.

Interpretacin:
Alcalinidad en la parte superior e inferior (K/K): Evidencia
descarboxiladn de la lysina.
Alcalinidad en la parte superior y acidez en la parte inferior (K/A): No
hubo descarboxiladn de la lysina.
Alcalinidad en la parte superior y neutro en la parte inferior (K/N): No
hubo descarboxiladn de lysina.
Rojo en la parte superior y acidez en la parte inferior (R/A): Hubo
desaminadn de la lysina.

5. HIDRLISIS DE LA REA
La rea es una diamina del cido carbnico; a la que frecuentemente
se menciona como carbamida. La hidrlisis de la rea es catalizada por
La ureasa, para dos molculas de amonaco. La ureasa es una enzima
microbiana constitutiva clasificada cmo una amidasa. Por hidrolizar el
enlace entre el nitrgeno y el carbono. De esta forma la rea es
disociada en amonaco. Es

importante en la descomposicin de los compuestos orgnicos.

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Materiales:
Cepas microbianas: Enterobacteriaceae : E. coli, Proteus,

Klebsiella
Tubos con Agar rea Christensen pH 6,8

Procedimiento:

El crecimiento de un cultivo puro de 18 a 24 inocular por estras

en superficie sobre la parte inclinada del tubo. No hacer puncin a
capa profunda, porque ella sirve para control del color. Incubar a 37C
por 6 a 24 horas. De ser negativa, seguir observando hasta por 6 das:

Interpretacin:

La reaccin es positiva cuando cambia el color a fucsia en el pico

de flauta. El color puede penetrar en el agar.

6. UTILIZACIN DEL CITRATO

Algunas bacterias pueden obtener energa en ausencia de
fermentacin o produccin de cido lctico empleando el citrato como
nica fuente de carbono. Normalmente, el metabolismo del citrato
comprende una condensacin de acetilo con la coenzima A y
oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs, El metabolismo del citrato
por la mayora de las bacterias es rpido a travs del ciclo de
fermentacin del citrato. En las bacterias, el desdoblamiento de!
citrato comprende un sistema enzimtico sin la intervencin de la
coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa (citrato oxalacetatoliasa) o citrato desmolasa. la enzima requiere un catin para su
actividad, que es suministrado por el magnesio o el manganeso.
Los productos obtenidos de! metabolismo del citrato dependen del pH
aumenta (alcalino), se producen ms acetato y formato con una
disminucin de la
produccin de lactato y CO2. Por encima de pH 7 no hay produccin de
lactato y los productos son:
Citrato

CO2 + cido frmico + 2 cido actico

Con un pH cido el acetilmetilcarbinol (acetona) y el lactato son los

principales productos de utilizacin de! citrato. Independientemente de
los productos terminales producidos, el primer paso de la fermentacin
del citrato da por resultado la produccin de piruvato. La degradacin
del piruvato depende,
entonces, del pH del medio.

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PH alcalino:
Piruvato

acetato + formato

Ph cido:
2 Piruvato

acetato + CO2 + lactate

2 Piruvato

acetoina + 2 CO2

El indicador utilizado en esta prueba es el azul de bromotimol (pH 6

color amarillo; pH 7.6 color azul intenso; pH 6.9 color verde).

Materales:
Cepas rnicrobianas: Enterobacteriaceae : E. coli, Enterobacter,

Salmonella
Tubos con medio citrato de simmons pH 6.9

Procedimiento:
Sembrar con un asa de siembra sobre la superficie de! medio
inclinado del medio cada una de las cepas por separado.

Interpretacin:
La prueba es positiva cuando se observa crecimiento con un color azul
Intenso en el pico de flauta. La prueba es negativa cuando no se
observa crecimiento ni cambio de color (el medio permanece verde).

7. PRUEBA RM-VP
La prueba de rojo de metilo (RM) se basa en el empleo de un indicar
del pH, rojo de metilo, para determinar la concentracin de iones
hidrgeno (pH) presente cuando un organismo fermenta la glucosa. La
concentracin de hidrogeniones depende de la relacin gaseosa (C02,
N2), que a su vez es un ndice de los diferentes ciclos del metabolismo
de la glucosa que muestran diversos organismos. Las diferentes
formas de fermentacin se deben a variaciones en las enzimas
vinculadas con el metabolismo del cido pirvico que se encuentran en
el organismo.
Todos los miembros de la familia Enterobacteriaceae son por definicin
fermentadores de la glucosa. En el caldo RM-VP. despus de 18 a 24
horas de incubacin, la fermentacin resultante da productos
secundarios metablicos cidos; por lo tanto, inicialmente todos los
entricos son positivos a RM. Sin embargo, despus de ms tiempo de
incubacin como lo exige la realizacin de la prueba (2 a 5 das),
aquellos organismos que son RM positivos continan produciendo ms
cidos, y dan como resultado un bajo pH termina! menor a 4,2. Los
organismos RM negativos continan metabolizando los productos
iniciales de la fermentacin por descarboxilacin, produciendo
acetlmetilcarbinol (acetoina) neutro, lo que eleva el pH a ms de 6,0.
El rojo de metilo es un indicador que es cido e indicar los cambios en
el grado d acidez por reacciones de color, en una escala de pH de 4,4
o menos, el reactivo se mantiene rojo, mientras que con disminucin

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de la acidez y con un pH de 6, el indicador rojo de metilo vira a un
color amarillo, que denota asimismo acidez, pero la concentracin de
iones hidrgeno es mucho menor.
La reaccin de Vogues Proskauer (VP) se basa en la deteccin del
acetrnetilcarbinol (aoetona), un producto neutro derivado del
metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada en cido pirvico A
partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La
produccin de acetona es uno de los ciclos para la degradacin de la
glucosa en las bacterias.
La reaccin de VP para la acetona se usa sobre todo para separar a la
E.coli de los grupos de Klebsiella y Enterobacter, an cuando son
capaces de producir una reaccin de VP positiva.

Materiales:
Cepas microbianas:Enterobacteriaceae : E. coli, Klebsiella,

Enterobacter
Tubos con caldo RM-VP (2 por cada cepa)
Solucin alcohlica de alfa-naftol 5% KOH 40% ( NaOH 40%)
Solucinalcohlica de rojo de metilo 0.05%

Procedimiento:

1.
2.
3.
4.

Inocular una asada de cada cepa bacteriana en dos tubos con

RM-VP.
Incubar a 37C por 24 a 48 horas.

Fermentacin homolactica
fermentacin Alcoholica
Fermentacin Formica
Fermentacin Acetonita

Lectura e interpretacin
a) RM
- Aadir unas gotas del indicar rojo de metiio a un tubo de
cada cepa inoculada en el medio RMVP.
- La reaccin se considera positiva cuando se mantiene un
color rojo definido en la superficie del medio. Cuando la

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reaccin da anaranjado, continuar la incubacin hasta 4 das
y repetir la prueba.
b) VP
- Aadir 4 gotas de alfa-naftol al 5% y luego 4 gotas de KOH al
40%
- Agitar el tubo suavemente para exponer el medio a! oxgeno a
fin deoxidar la acteona y obtener una reaccin cromgena.
- Dejar reposar el tubo por lo menos durante 10 a 15 minutos
antes de hacer la interpretacin.
- La reaccin se considera positiva cuando se forma un anillo rojo.

7.

PRUEBA SIM

El med|o SIM es un medio semislido que permite evaluar la capacidad

de producir H2S e indol, adems de si el microorganismo es mvil.
a) Produccin de H2S
La protelisis de las protenas da aminocidos individuales; algunas
especies bacterianas heterotrficas son capaces de liberar azufre
enzimticamente de los diferentes aminocidos que las contiene,
produciendo el gas N2. La peptona, la cistena, la cistina y el tiosulfato,
ison fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos
compuestos o aminocidos que contienen azufre para producir H2S La
enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa. Los aminocidos
que contiene azufre son: Metionina, cistina y cistena. Un organismo
que produzca H2S cultivado en un medio orgnico como la peptona,
reduce el azufre por hidrogenacin.
b) Produccin de Indol
El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas
bacterias para formar tres metabolitos indlicos principales: indol,
escatol {metilindol) e indolactico. Diversas enzimas intracelulares que
intervienen en este proceso reciben el nombre colectivo de
triptofanasa, que remueven el radical del aminocido. El principal
intermediario en la degradacin del triptfano es el cido indolpirvico,
del cual puede formarse indol por desaminacin, y escalo! por
descarboxilacin del cido indolactico.
La presencia de peptona en el medio, constituye una fuente de
triptofano
para la produccin de indol a partir de este aminocido.
c) Motilidad
La baja concentracin de agar en el medio (0,3%), permite que los
microorganismos mviles puedan difundir a partir de la picadura hacia
los costados laterales mostrando un crecimiento difuso o turbio. Los no
mviles
muestran un crecimiento slo en el trayecto del asa de siembra que se
hizo en la inoculacin.

Materiales:
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-

Cepas microbianas: Enterobacteriaceae : E. coli, Salmonella,

Shigella
Tubos con medio SIM
Reactivo de Kovacs

Procedimiento:
Sembrar con el asa de siembra en punta, introduciendo y retirando el
asa por el mismo lugar del medio, evitando la diseminacin. Incubar a
37C por 24 a 48 horas.

Lectura Interpretacin
a) H2S
La presencia de un precipitado negro a travs de la siembra o
difundida en el medio indica que el microorganismo produce H2S.
b) Indol
Aadir 2 gotas del reactivo de Kovacs a! cultivo previamente incubado.
Agitar suavemente e! tubo. La reaccin es positiva cuando se produce
un color rojo en la superficie del tubo.
c) Motilidad
Si el crecimiento se ha diseminado hacia los costados del lugar
inoculado, si hay turbidez en e! tubo, el microorganismo inoculado se
considera mvil

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PRACTICA 4
PRACTICA DE IDENTIFICACIN DE GRAM
NEGATIVOS
(PARTE II)
Un grupo de bacilos aerobios gram negativos no formadores de
esporas, diferentes de las enterobacterias comprende gneros como
Pseudomonas, Vibrio, Aeromonas, Campylobacter que comparten la
misma caracterstica, ser oxidasa positivos. Estn implicados en
diferentes enfermedades, por ejemplo la Pseudomonas aeruginosa se
involucra frecuentemente con infecciones intrahospitalarias mientras
que Vibrio cholerae es el agente causal del Clera.
Por otro lado el gnero Aeromonas se asocia con celulitis y tal
vez gastroenteritis alimentaria y Campylobacter jejuni est involucrado
con diarreas especialmente en nios. En la presente prctica se
estudiarn las principales caractersticas de especies de los gneros
Pseudomonas, Vibrio y Aeromonas

EJERCICIO 1: IDENTIFICACIN DE PSEUDOMONAS

AERUGINOSA
Materiales:

Agar Cetrimide
Agar tripticasa de soya
Reactivo de Oxidasa
Cultivo: Pseudomonas aeruginosa
Batera Bioqumica: TSI, LIA, SIM, Urea y Citrato

Procedimiento:

Realizar una siembra por agotamiento de Pseudomonas

aeruginosa en Agar Cetrimide y TSA.
Sembrar tambin en la batera bioqumica.
Incubar a 37C por 24 horas.
Observar las caractersticas de las colonias crecidas en las
placas y la batera bioqumica. Anote los resultados.
Realice un frotis y tincin gram. observe a inmersin y anote.
Realice la prueba de oxidasa, observe y anote.

EJERCICIO 2: IDENTIFICACION DE IDENTIFICACIN DE VIBRIO

CHOLERAE Y VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS

Materiales:

Agar TCBS. Agar TSA

Cepas: Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus en agua
peptonada

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Desoxicolato de sodio al 0.5%

Batera bioqumica: TSI. SIM. Citrato. Urea
Reactivo de Oxidasa
Caldo de Tripticasa de Soya al 0%. 3%. 6%, 8% y 10% de NaCl
Antisuero polivalente Anti Vibrio cholerae

Procedimiento:

Sembrar las cepas proporcionadas en Agar TCBS, TSA, en la

batera bioqumica proporcionada y en todos los caldos con
NaCI. Rotule correctamente.
Incubar a 37C por 24 horas.
Observe el crecimiento de las cepas en Agar TCBS y TSA, anote
sus resultados.
A partir de las colonias crecidas sobre TSA realice la prueba de
Oxidasa.
Haga frotis de las dos cepas y observe a inmersin luego de la
coloracin Gram.
Observe los resultados del crecimiento de las cepas en la batera
bioqumica y en los caldos con NaCI. Anote.
Realice la prueba de la cuerda para ambas cepas: Sobre una
lmina portaobjeto coloque una gota de desoxicolato de sodio al
0,5%, con el asa estril disuelva una colonia de Vibrio
cholerae obtenida de su placa de TSA y jale el asa hacia arriba.
La prueba es positiva si se forma un hilo mucoide entre la
lmina y el asa. Repita la prueba para la cepa de Vibrio
parahaemolyticus.
Enfrente las cepas al antisuero polivalente proporcionado. Para
la prueba coloque una gota del antisuero en una lmina
portaobjetos y con una asa estril disuelva una colonia en la
gota. Si aglutina se trata de Vibrio cholerae.
Anote sus resultados y no olvide de eliminar todo material
contaminado los contenedores con desinfectante.

1) Tabla de diferenciacin de vibrios y de otros organismos aislados de

muestras de Heces

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F = Fermentacin D = Diferentes reacciones

NC = No se observan cambios

O = Oxidacin

2) Caractersticas ms importantes de Pseudomonas aeruginosa

Citrato (+) , Oxidasa (+), Lactosa (-), Glucosa (Oxidacin), H2S (-),
Ureasa
(+80), Motilidad (+), Piocianina (+), Crecimiento en 6.5% NaCl (-)
3) Diferenciacin entre Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus
Vibrio cholerae
Sacarosa
Lactosa
Glucosa
Gas de glucosa
Indol
Motilidad
Citrato
Ureasa
Voges Proskauer
Lisina descarboxilasa
0% NaCl
3% NaCl
6% NaCl
8% NaCl
10% NaCl

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Vibrio
parahaemolyticus

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