TCNICAS DE REPRODUCCIN ASISTIDA EN OVINOS

INTRODUCCIN
En los ltimos aos las tcnicas modernas de reproduccin asistida han cobrado
inters, debido a los beneficios productivos y sanitarios que generan. Estas
tecnologas permiten disminuir los intervalos entre generaciones e introducir
elementos mejoradores que aumentan la eficiencia de la produccin. De otra
manera, este mejoramiento se dificultara debido a las barreras existentes en la
comercializacin e importacin de animales en pie, debido a la presencia de
enfermedades como la fiebre aftosa. Por otra parte, debemos recordar que bajo
condiciones naturales, slo podemos obtener de 6 a 7 cras de una reproductora a
lo largo de su vida productiva.
La ovulacin mltiple y transferencia de embriones (OMTE) es una tcnica que
permite aumentar la productividad de las especies domsticas, asegurar la
conservacin de los recursos genticos, difundir material gentico de alto valor
comercial, adems de reducir riesgos en la transmisin de enfermedades, debido a
que en los primeros estados de su desarrollo los embriones presentan una
proteccin natural contra los agentes infecciosos (Gibbons y Cueto, 1995). Sin
embargo, a pesar de sus beneficios, la introduccin de nuevas tecnologas en la
reproduccin de ovinos y caprinos, muchas veces se dificulta debido al bajo nivel
tcnico de la mayora de los criadores.
Por otra parte, el uso prctico de OMTE est limitado por la gran variabilidad que se
observa en la respuesta al tratamiento superovulatorio adems del variable y bajo
nmero de embriones recuperados transferibles. Segn Gonzlez-Bulnez et al
(2004), esta variabilidad est relacionada tanto a factores extrnsecos, como el
origen y pureza de las hormonas superovulatorias utilizadas y del protocolo de
administracin, e intrnsecos como la raza, edad, estado nutricional y reproductivo
de la hembra.
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QU ES LA OVULACIN MLTIPLE Y LA TRANSFERENCIA

DE EMBRIONES?

En pequeos rumiantes, esta tcnica usualmente incluye la administracin de un

tratamiento hormonal que permite aumentar el nmero de ovulaciones (tratamiento
superovulatorio), fecundacin y la obtencin de varios embriones generados por
una hembra donante, los cuales sern luego inoculados en hembras receptoras.

TCNICA PARA LA OBTENCIN, RECUPERACIN Y TRANSFERENCIA

DEL EMBRIN:

La tcnica consta de varios pasos:

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1.- Sincronizacin de celo

El celo ovino se puede sincronizar farmacolgicamente con el uso de hormonas

como la prostaglandinas, PGF2, o de dispositivos intravaginales impregnados con
progesterona.
Se han utilizado esponjas intravaginales conteniendo 40 mg de Acetato de
Fluorogestona, con un recambio de esponja a los 8 das (Gonzalez-Bulnez, 2005)

(Figuras 1, 2 y 3). A los 4 das del recambio se coloca PGF2 y hormona Folculo
Estimulante (FSH) (Gonzalez-Bulnez et al., 2004).

Figura 1. El operador mantiene en Figura 2. Introduccin del

su mano el dispositivo para
dispositivo en la vagina de la
colocar la esponja.
oveja.

Figura 3. Introduccin de la
esponja intravaginal.

2.- Tratamiento Superovulatorio

Despus, se contina con un protocolo de aplicaciones de FSH cada 12 horas. Es

importante sealar, que la manera como se administra el tratamiento
superovulatorio tiene una gran influencia sobre la respuesta ovrica. El uso de dosis
decrecientes de hormona FSH parece dar los mejores resultados, en trminos de
tasa de ovulacin y nmero de embriones recuperados viables, comparado con el
protocolo de dosis constantes (Gonzlez-Bulnez et al., 2004)
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3.- Fecundacin

Una vez realizado el tratamiento hormonal superovulatorio, se debe fecundar las

clulas obtenidas (ovocitos). Podemos utilizar el servicio de monta natural o la
inseminacin artificial (IA) con semen fresco, refrigerado o congelado. Es
importante recordar que bien sea el semen o los machos a utilizar, estos deben ser
de alto valor gentico.
Segn Veiga-Lpez (2005), el servicio o monta natural, brinda los mejores
resultados en cuanto a ndices de preez obtenidos. El servicio natural debe
realizarse cada 12 horas, desde el comienzo del celo hasta la finalizacin (Gibbons y
Cueto, 1995).
Por otro lado, la IA consiste de un conjunto de operaciones y tcnicas aplicadas por
el hombre con el fin de conseguir la fecundacin de la hembra sin la intervencin
directa del macho. Se debe prestar particular atencin a la IA en la oveja ya que
hay que considerar varios factores que interfieren con la fertilidad en esta especie.
As, debemos considerar por un lado los factores dependientes de la hembra como
es el propio manejo, la especial configuracin del cuello uterino, la necesidad del
empleo previo a la inseminacin de las tcnicas de induccin y sincronizacin del
estro. En el otro grupo de factores, que limitan la eficacia de la inseminacin
artificial ovina, involucran al macho, a travs de su produccin seminal y al igual
que en la hembra incluyen el manejo y seleccin de los animales, la diversidad de
caractersticas seminales de los individuos e inclusive las variaciones entre
eyaculados del mismo animal y de los procesos de dilucin-conservacin tanto del
semen fresco como del congelado.

La tcnica de inseminacin puede hacerse con deposicin cervical del semen, a la

entrada del crvix, para lo cual el tcnico se ayuda con un espculo y una fuente de
luz. Por lo general, los ndices de fertilidad obtenidos a travs de esta tcnica son
muy bajos.
Se han descrito otras tcnicas de IA (transcervical) en la cual, por medio de una
pipeta especial de inseminacin y un frceps se intenta atravesar el tortuoso cuello
uterino de la oveja para llegar al tero. Esta tcnica es dificultosa y, por lo regular,
no se llegan a penetrar la totalidad de los animales. La fertilidad obtenida flucta
entre 51 y 68%. La causa de esta baja tasa de fertilidad y preez se la asigna al
trauma cervical y uterino despus de la manipulacin (Steelflug et al. 2001)
La tcnica de inseminacin intrauterina, implica la deposicin del semen
directamente en los cuernos uterinos por medio de una laparotoma medio-ventral
o con la ayuda de un laparoscopio. Gibbons y Cueto (1995) recomiendan el uso de
la tcnica laparoscpica en caso de recurrir a la IA, ya que la deposicin del semen
en los cuernos uterinos, prximos al sitio de fertilizacin, aumentan las tasas de
fertilidad y reducen las dosis de inseminacin. La inseminacin intrauterina se debe
realizar entre las 51 a 53 horas despus de retiradas las esponjas intravaginales
(Gonzlez-Bulnez, 2005).
En general, los animales deben mantenerse en una dieta slida y lquida durante las
24 horas previas a la inseminacin para evitar punciones accidentales en el rmen o
en la vejiga urinaria. Las ovejas son colocados en camillas pivotantes con un
sistema que permite inmovilizar a la oveja en decbito dorsal e inclinarla hasta un
ngulo de unos 40-45 de tal forma que las vsceras se desplacen en sentido
craneal (Figura 4).
Una vez sujeto el animal, se depila la zona craneal a la ubre y se desinfecta con una
solucin yodada.
Para realizar la IA por endoscopa, se requiere de un laparoscopio rgido de 7 mm
de dimetro, conectado a una fuente de luz mediante un cable de fibra ptica y dos
cnulas con trcar. Tambin se requiere de un aplicador-palpador y una pipeta de
inseminacin.
Una vez inmovilizada la oveja en la camilla, se realiza la primera puncin con el
trcar (7 mm) unos 2-3 cm por delante de la ubre y 2-3 cm a la derecha de la lnea
media. Se introduce el laparoscopio y se insufla gas para distender las vsceras
abdominales contra la cara peritoneal y poder realizar fcilmente la inspeccin del
aparato genital. Luego se introduce el segundo trcar (5 mm) en el lado izquierdo
(Figura 5).

Figura 4. Oveja sujeta a camilla e inclinada en el Figura 5. Colocacin de los trcares.

ngulo correcto.

A travs de el segundo trocar, se introduce el aplicador-palpador con el cual se

localiza el tero y se realiza la puncin de la pared, a la altura de la curvatura
mayor de cada uno de los cuernos, depositndose la mitad de la dosis en cada uno
de ellos. Tras la intervencin se retiran las cnulas y se aplica una solucin
desinfectante en la zona de intervencin, generalmente no es necesario realizar
sutura (Figuras 6 y 7). Se han reportado porcentajes de fertilidad con la IA
intrauterina oscila entre 58,7% y 80%.

Figura 6. Pipeta de inseminacin colocada en la Figura 7. Manipulacin para realizar la

cnula.
inseminacin en la curvatura mayor del cuerno.

4.- Recuperacin de embriones

Una vez transcurridos 5 a 7 das de presentado el celo, o 5 das despus de

realizada la inseminacin intrauterina, podemos recuperar los embriones por va
quirrgica o por endoscopa (Gonzlez-Bulnez, 2005). Estos a su vez pueden ser
transferidos a hembras receptoras inmediatamente, o son congelados para su
transporte y posterior transferencia. Por lo general estas intervenciones se llevan a
cabo bajo anestesia general (Gibbons y Cueto, 1995).
Una vez que se visualizan los ovarios, mediante endoscopa, se pueden determinar
el nmero de ovulaciones (Cuerpos lteos presentes).
Se realiza una laparotoma media de 5 a 7 cm, y 3 cm por delante de la ubre
(Figura 8). Se expone el cuerno uterino (Figura 9) y a nivel de la unin tero
tubrica se coloca una sonda, la cual en su extremo dispone de una aguja con
punta no traumtica y con dos perforaciones laterales y una central.

Figura 8. Incisin para realizar

la recuperacin de embriones.

Figura 9. Exposicin del cuerno

uterino.

Figura 10. Colocacin y fijacin de

la sonda.

Se fija la sonda en el interior de la luz del cuerno uterino (Figura 10).

En la curvatura mayor del cuerno uterino se realiza una segunda puncin (Figuras
11, 12 y 13) para la inyeccin de 20 cc de una solucin tamponada de fosfato (PBS)
a 37C, la cual producir una corriente de arrastre hacia el oviducto la cual sale por
la sonda, moviendo los embriones hasta el envase de colecta (Figuras 14 y 15).

Figura 11. La flecha seala la

Figura 12. Jeringa con PBS a
segunda puncin en la curvatura 37C.
mayor del cuerno uterino.

Figura 14. Se seala la jeringa con PBS y el envase

de colecta de embriones.

Figura 13. Lavado con PBS y

recolecta de los embriones.

Figura 15. Colocacin de todos los

instrumentos para la colecta de embriones.

Una vez recuperados los embriones en un cuerno, se procede de igual manera con
el otro. Finalizada la colecta de embriones, se realiza la sutura de los planos
quirrgicos y se administran antibiticos.
Existe otra tcnica desarrollada por McKelvey et al. (1986) en ovinos, mediante la
cual se realizan tres punciones con trcares en la cavidad abdominal. La primera
puncin permite introducir el laparoscopio, la segunda una sonda de tres vas de las
cuales una sirve para la entrada del PBS, otra va para la salida del PBS y la tercera
va para la insuflacin del baln. La tercera puncin permite la introduccin de una
pinza no traumtica que permite la manipulacin del tracto reproductivo. Esta
tcnica requiere de un buen entrenamiento.
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5.- Bsqueda y clasificacin de los

embriones
Una vez recolectado el lavado uterino, con la ayuda de la lupa (Figura 16), se deben
localizar los embriones. A medida que se identifican, son aspirados con una
micropipeta (Figura 17) y colocados en una placa de Petri conteniendo PBS
enriquecido, con suero al 10% o albmina bovina (BSA al 4%), protegindolos de la
luz y a temperatura de laboratorio. Una vez finalizada la bsqueda, se procede a la
clasificacin de los embriones.

Figura 16. Envase de colecta bajo la lupa.

Figura 17. Aspiracin de embriones mediante

micropipetas.

La clasificacin de los embriones se realiza en base a sus aspectos morfolgicos. Se

deben observar desde distintos ngulos, por la integridad de la membrana pelcida
y la esfericidad de los mismos. El embrin debe tener un desarrollo acorde con el
da de colecta; se tolera hasta un mximo de 48 horas de retraso. En el da 6to o
7mo, se deben descartar los embriones de menos de 32 clulas. Las clulas deben
ser claras y de contorno regular, siendo la opacidad un signo de degeneracin.
Una vez escogidos los embriones, estos pueden transferirse a una hembra
receptora o bien conservarse por enfriamiento a 4C por 24h, para transportarlos a
corta distancia (Gibbons y Cueto, 1995) o congelarse en nitrgeno lquido para la
conservacin durante perodos prolongados.
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Implicaciones

A pesar de la gran variabilidad de los resultados obtenidos y de lo costosas que

pueden resultar estas tcnicas, la aplicacin de nuevas tecnologas en la
reproduccin de pequeos rumiantes, estn en constante aumento. Estas prcticas
son esenciales para la conservacin de especies o razas en peligro de extincin y
para el comercio internacional de recursos genticos. Actualmente las tcnicas
modernas de reproduccin animal permiten que animales de alto valor gentico,
produzcan ms nacimientos que en condiciones naturales y, consecuentemente,
permiten la reduccin de los costos operativos. Este valor puede incrementarse al
mejorar la respuesta ovulatoria a la FSH, as como predeterminando las hembras
que respondern al tratamiento hormonal, mediante observacin laparoscpica.
No cabe duda que actualmente la transferencia embrionaria es el mtodo ms
seguro, en el aspecto sanitario, para prevenir las enfermedades exticas. Esto
permite realizar la importacin de los diferentes biotipos de alta produccin. Estas
consideraciones demuestran la importancia que tienen las tcnicas de reproduccin
asistida en pequeos rumiantes, como reaseguro sanitario y como herramienta para
el mejoramiento de la produccin animal.

Bibliografa citada

Gibbons A. y Cueto M. 1995. Transferencia de embriones en ovinos y caprinos.

INTA. EEA. Bariloche. Documento en lnea
http://www.inta.gov.ar/bariloche/info/documentos/animal/reproduc/pa290.htm
Gonzlez-Bulnez A., Baird D., Campbell B., Cocero M., Garca-Garca R., Inskeep E.,
Lpez-Sebastian A., McNeilly A., Santiago-Moreno J., Souza C. y Veiga-Lpez A.
2004. Multiple factors affecting the efficiency of multiple ovulation and embryo
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Gonzlez-Bulnez A. 2005. Comunicacin personal.
McKelvey W., Robinson J., Aitken R., Robertson I. 1986. Repeated recoveries of
embryos from ewes by laparoscopy. Theriogenology. 25: 855-865.
Stellflug J., Wulster-Radcliiffe M., Hensley E., Cowardin E., Seals R. y Lewis G. 2001.
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on laparoscopic artificial insemination. J. Anim. Sci. 2001. 79: 568- 573.
Veiga-Lpez A. 2005. Comunicacin personal.