Diapositiva 1. Cartula.

Imagen de la tcnica de inmunofluorescencia en Drosophila melanogaster, con

el objetivo de estudiar su funcin a nivel molecular y celular, estudio de los
defectos ocasionados por la deplecin en los sistemas nervioso y reproductivo.

Diapositiva 2. Inmunofluorescencia.
Los procedimientos inmunofluorescentes se basan en el uso de anticuerpos,
conjugados con sustancias fluorescentes como el isotiocianato de fluresceina,
rodamina y ficoeritrina. Es un tipo de fotoluminiscencia en el cual las molculas
son excitadas por interaccin con fotones de radiacin electromagntica. Esta
tcnica es utilizada para visualizar la distribucin de los antgenos en clulas o
tejidos empleando anticuerpos especficos que dirigen marcadores
fluorescentes (fluorocromos) a las clulas diana.
En la imagen se observa una Neurona de hipocampo fusionada a una protena
que se visualiza de color verde fluorescente y marcada con faloidina para
revelar actina (en color rojo) y con un anticuerpo para un marcador de
dendritas (anti-MAP-2, en azul).

Diapositiva 3.

Si el antgeno esperado est presente se formar un complejo antgeno

anticuerpo emitiendo fluorescencia.
Diapositiva 4.
Ejemplo
La tcnica de rutina para el diagnstico de rabia es la
inmunofluorescencia directa, que se basa en la deteccin de protenas virales
en improntas de hipocampo, cerebelo o mdula por medio de anticuerpos
especficos (monoclonales o policlonales) contra las protenas virales
conjugados a fluorescena.

Diapositiva 5.
Inmunofluorescencia indirecta
Es una tcnica de doble capa en donde se aplica el anticuerpo sin marcar
directamente sobre el sustrato de tejido y se visualiza por tratamiento con un
suero anti -inmunoglobulina conjugado con fluorocromo

Diapositiva 6.
Se utiliza para la deteccin de anticuerpos IgG anti-Toxoplasma gondii, parsito
intracelular obligado, asintomtico en nios y adultos, casos graves en
pacientes inmunocomprometidos.

Diapositiva 8.
Un ejemplo a nivel clnico acerca de la tcnica de inmunofluoresencia es la
biopsia renal, sta se realiza por (IF) directa el fragmento destinado se congela
en fresco, ste debe tener un tamao
de aproximadamente 4 micras;
usualmente se fijan en acetona o etanol antes de teirse, y se procesan con
inmunoreactantes para IgG, IgA, IgM, complemento (C3 y C1q) y fi bringeno.
Las laminillas preparadas se conservan en refrigeracin a menos de 5C, hasta
que se examinen en el microscopio de campo obscuro con luz ultravioleta.
Estos estudios nos permiten conocer la inmunopatognesis en diferentes
glomerulopatas ( prdida de las funciones normales del glomrulo
renal. Se caracterizan por la aparicin de elementos formes o
protenas en la orina, con grados variables de insuficiencia renal),
siendo posible hacer el diagnstico de nefropatas como la enfermedad de
Berger ( La IgA se acumula en el interior de los pequeos vasos sanguneos del
rin)

Diapositiva 9. Aplicaciones
1. Tcnicas analticas (cuali-y cuantitativas) en Qumica y Bioqumica.
2.

Mtodos inmunolgicos de diagnstico mdico.

3. Anlisis poblacional de clulas (citofluorimetra de flujo)

4. Procedimientos microscpicos en Microbiologa, Gentica, Histologa,
Histoqumica, Biologa Celular, Biologa Molecular, Biologa del

Desarrollo, Patologa (sondas vitales, ensayos de viabilidad, indicadores,

inmunofluorescencia, FISH (Marcaje de cromosomas).
Diapositiva 10.

Diapositiva 11.
Inmunohistoqumica.
Tcnica que tiene sus bases en la inmunofluorescencia, pero su fundamento
son las reacciones enzima-sustrato para evidenciar la reaccin. Genera
productos coloreados insolubles observables el microscopio de luz.
El Esquema nos muestra el principio de marcaje inmunohistoqumico. El
anticuerpo primario (negro) reconoce el antgeno celular buscado. Sobre ste
se aplica un anticuerpo secundario (verde) que amplifica la seal y, finalmente,
una sustancia coloreable (avidina, estreptavidina, en rojo)
permite la
visualizacin de la seal en el microscopio ptico.

Diapositiva 12.
La principal aplicacin de las tcnicas de IHQ radica en la identificacin y
diferenciacin de tipos celulares, especialmente en el caso de neoplasias de
fenotipo dudoso o indeterminable mediante la valoracin habitual con tincin
de hematoxilina y eosina. Existen otras aplicaciones, como la valoracin
pronstica de ciertos tumores (marcadores de progresin) o la identificacin de
agentes infecciosos. Para ello se utiliza el Marcaje especfico para astrocitos
(en marrn) en un corte de tejido nervioso. El marcaje se limita de forma muy
especfica a las zonas que contienen el antgeno buscado. La tincin en azul de
fondo se emplea como contraste.

Diapositiva
13-18
inmunohistoquimica.

explicacion

preparacin

de

la

muestra

en

Diapositiva 19. Ejemplo preparacin de inmunohistoquimica.

Ganglio linftico de rata. Tincin de Alfa-Naftil-Acetato-Esterasa en Leucocitos
(ANAE, tpecnica citoqumica para diagnstico de leucemia), los puntos con
actividad esterasa aparecen de color marrn rojizo emplendose como sustrato
un ester simple, el alfa-naftil acetato.

Diapositiva 20. Aplicaciones:

Diagnstico de clulas anormales (cncer)
Desarrollo de frmacos (evaluar la eficacia del frmaco mediante la actividad
de las dianas de cada enfermedad)
Investigacin biolgica para conocer la ubicacin y la colocalizacin de una
protena dentro de las diferentes partes de una clula.

Diapositiva 21. Diferencias a grandes rasgos.

Finalmente estas dos tcnicas no pueden confundirse dado que, por lo
anteriormente mencionado y como conclusin, La inmunohistoqumica se basa
en la inmunofluorescencia, sin embargo la IHQ es empleada para el estudio de
poblaciones celulares en tejidos biolgicos y en comparacin con la IF , emplea
enzimas como marcadores y no fluorocromos. En la imagen es una muestra de

piel humana en la cual un anticuerpo que reconoce exclusivamente la Keratina10 se ha incubado con el corte de piel al ponerse en contacto con el anticuerpo
secundario marcado con Alexa Fluor 466, que emite luz verde al ser estimulada
con una determinada longitud de onda. Para contraste los ncleos de las
clulas han sido teidos con DAPI, que emite luz azul.