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Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI)

1 - SINONIMO
- Coombs indireto, teste indireto de antiglobinas.
2 - INTRODUO
- A pesquisa de anticorpos irregulares, demonstra anticorpos
antieritrocitrios irregulares, livres no soro ou plasma de doadores e
pacientes, que possam provocar reaes ps-transfusionais. Deve ser
realizada tambm no soro de gestantes, como forma de preveno da
doena hemoltica do recm nascido. So utilizadas suspenses de
hemcias de triagem do grupo sanguneo O, previamente
fenotipadas e que apresentam a maioria dos antgenos de
importncia na clnica transfusional.
3 - EXECUTANTES:
- Tcnico de laboratrio.
4 - INDICAES MDICA DO EXAME
- Exame til no pesquisa de anticorpos contra protenas de membrana
de eritrcitos (em especial D), em exames pr-transfusionais ou prnatais.
5 - AMOSTRA
- Soro. Plasma obtido do sangue total c/ EDTA. Volume mnimo de 0,5
mL.
6 - METODOLOGIA
- Reao de aglutinao
7 - PREPARO DO PACIENTE
- Jejum obrigatrio de 8 horas.
8 - MATERIAIS NECESSRIOS:
- Estante de metal porta tubos
- Pipetas 100l e 2,0mL
- Tubos de ensaio 120 x 100 mm
- Soluo salina 0,9%
- Soro de Coombs
9 - EQUIPAMENTOS
- Centrifuga
10 - DESCRIO DO PROCEDIMENTO:
a) Em um tubo de ensaio adicionar 100 L de soro da paciente Rh
negativo a ser testado,

b) Adicionar em seguida 100 L de hemcias O Rh positivas;


c) Incubar por 5 minutos a temperatura ambiente;
d) Encher o tubo com aproximadamente 2,0mL de soluo salina para
retirar excesso de anticorpos no ligados;
e) Centrifugar o tubo a 1.000rpm por 2 minutos temperatura
ambiente;
f) Desprezar o sobrenadante na pia com cuidado para no jogar fora o
boto de hemcias;
g) Adicionar em seguida 100L de anti-IgG humana (soro de
Coombs);
h) Centrifugar o tubo a 1.000rpm por 2 minutos temperatura
ambiente;
i) Para visualizar com maior preciso se houve aglutinao, derramar
o sangue centrifugado em uma lmina de microscpio.
11 - CLCULOS
- No se aplica
12 - RESULTADOS
- Se aglutinar sinal que a paciente tem anticorpos anti-D classe IgG
em seu soro que esto de forma perigosa atravessando a placenta e
se ligando s hemcias Rh positivas do beb promovendo sua lise e
fagocitose. Se no aglutinar, porque no houve sensibilizao da
me com este antgeno em gestaes ou transfuses anteriores.
13 - AES CORRETIVAS EM CASO DE NO CONFORMIDADES
- O soro de Coombs: verificar a sua potncia, pois pode estar
diminuda para a captao do anticorpo; alm disso, poder estar
inespecfico, contendo uma contaminao para outro anticorpo. Isto
acarreta um falso positivo, dependo o anticorpo contaminante.
14 - LIMITAES DO PROCEDIMENTO
- Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: Quando as hemcias
no forem apropriadamente lavadas ou globulinas humanas
estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das
antiglobulinas humanas. Quando os anticorpos se eluem das
hemcias durante incubao inadequada, no permitindo uma
apropriada sensibilizao dos glbulos. Quando hemcias e/ou
reagente no so adequadamente conservados na temperatura
indicada, perdendo a reatividade. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de
Coombs) foi omitido durante o teste.
- Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer: Quando hemcias
com teste de Coombs Direto positivo so usadas durante o
procedimento tcnico do teste de Coombs Indireto. Quando so
utilizadas amostras de sangue contaminado. Quando for realizada
uma centrifugao excessiva. Quando o soro, as hemcias e o Soro

Anti-IgG(Soro de Coombs) estiverem


detectando a presena de aglutininas frias.

excessivamente

frios,

15- SIGNIFICADO CLNICO


- Anticorpos ditos irregulares so aqueles formados por imunizao
devido a transfuses, gestao ou ingesto constante de material
imunognico, sendo de classe IgG ou IgM. um teste de triagem
onde em casos de pesquisa positiva, deve-se identificar a classe e
especificidade do anticorpo. O teste emprega um KIT contendo no
mnimo duas suspenses de hemcias O (hemcias de triagem), as
quais possuem a maioria dos antgenos estudados em rotina de
banco de sangue. Havendo presena de anticorpos irregulares no soro
a ser testado, estes reagiram com os antgenos correspondentes,
presentes nas hemcias de triagem. Anticorpos da classe IgM so
normalmente detectados em meio salino e temperatura ambiente,
enquanto que anticorpos da classe IgG so detectados atravs da
utilizao do soro antiglobulina humana aps a incubao a 37C.
Quanto s enzimas proteolticas, sabe-se que modificam os antgenos
presentes na membrana eritrocitria, podendo retir-los ou torn-los
aglutinveis em suspenses salinas. Os antgenos sensveis ao
enzimtica so os dos sistemas MNS Duffy Xga. Os anticorpos cuja
reatividade aumentada pela ao de enzimas so os dos sistemas
Rh, Kidd, Lewis e P. A ao enzimtica inclui ainda modificaes nas
propriedades fsicas da suspenso de hemcias, podendo causar
auto-aglutinao sem presena de processos auto-imunes. As
tcnicas enzimticas podem ser associadas ao soro anti-gama
globulina humana (soro anti IgG) e podem ser utilizadas em tcnicas
de 1 ou 2 estgios. Na primeira adiciona-se a enzima diretamente
mistura soro + hemcias, sendo mais bem indicada para testes de
triagem enquanto que no segundo procedimento as hemcias so
previamente tratadas com enzimas e depois misturadas ao soro teste,
sendo mais bem indicado para identificao de anticorpos. As
principais enzimas utilizadas em testes imunohematolgicos so:
BROMELINA (abacaxi), PAPAINA (mamo), TRIPSINA (estmago de
porco) e FICINA (ficus). As alquotas de soluo enzimticas devem
ser mantidas em freezer, devendo-se desprez-las aps o
descongelamento e utilizao.
16 - REFERNCIA
AGNCIA TRANSFUSIONAL - HOSPITAL UNIVERSITRIO JLIO MULLER
Procedimento operacional padro nas provas pr transfunsionais.
Disponivel
em:<
http://www.ufmt.br/ufmt/site/userfiles/file/hujm/Comissoes%20e
%20Comites/POP%20-%20Provas%20pr%C3%A9%20%20transfusionais.pdf>. Acessado em 02/07/2012.

HEMOCENTRO DE CAMPINAS. Manual bsico de orientaes


transfunsionais.
Disponivel
em:<
http://www.hemocentro.unicamp.br/pdfs/manualtecnicotransfusional2010.pdf>. Acessado em 02/07/2012.
LABORATORIO DE ANALISES CLINICAS SANTA CLARA. Manual de
exames.
Disponivel
em:<
http://www.laboratoriosantaclara.com/manual.aspx>. Acessado em
02/07/2012.
Laboratrio
de
Imuno-hematologia.
Disponivel
em:<http://www.famema.br/hemocentro/hematologia.htm>.
Acessado em 02/07/2012.
Normas e rotinas operacionais do laboratrio de anlises clnicas.
Disponivel
em:<
http://pt.scribd.com/doc/28239025/Normas-eRotinas-Operacionais-Do>. Acessado em 02/07/2012.