EMB

Utilizado para el aislamiento

selectivo
de
bacilos
Gram
negativos de rpido desarrollo y
escasas exigencias nutricionales.

Fundamento
La
diferenciacin
entre
organismos capaces de utilizar la
lactosa y/o sacarosa, y aquellos
que son incapaces de hacerlo,
est dada por los indicadores
eosina y azul de metileno; stos
ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram
positivas. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro
oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que
no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento
de Candida spp como colonias rosadas y puntiformes; la
siembra en profundidad permite el desarrollo de
clamidosporas en C. albicans. En este medio se obtiene
adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y
Shigella.
Frmula (g/L)
Peptona
Lactosa
Sacarosa
Fosfato dipotsico
Agar
Eosina
Azul de metileno

Instrucciones
10.0 Suspender 36 g del polvo
en un litro de agua
5.0
destilada.
Reposar
5
5.0
minutos;
mezclar,
2.0
13.5 calentando a ebullicin
durante 1 o 2 minutos
0.4
su
disolucin.
0.065 hasta
Esterilizar en autoclave a
no ms de 121C durante
15 minutos. Enfriar a 45C
y
distribuir
agitando
suavemente.
pH final: 7.2 0.2

En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso,

para obtener colonias aisladas.

Incubacin
De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Manitol Salado

Medio de cultivo selectivo y

diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de
estafilococos.

Fundamento

Los
estafilococos
coagulasa
positiva hidrolizan el manitol
acidificando
el
medio;
las
colonias aparecen rodeadas de
una zona amarilla brillante. Los
estafilococos
coagulasa
negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o
prpura. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la
pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno,
vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta
concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo
de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin
de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se
modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color
rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y
pueden o no fermentar el manitol.

Frmula (g/L)
Extracto de carne
Pluripeptona

Siembra

Instrucciones
1.0
10.0

Suspender 111 g de polvo

por litro de agua destilada.

d-Manitol

10.0

Cloruro de sodio

75.0

Agar

15.0

Rojo de fenol

0.02
5

Reposar
mezclar
ebullicin
minutos.
esterilizar
118-121C
minutos.

5
minutos
y
calentando
a
durante 1 o 2
Distribuir
y
en autoclave a
durante
15

pH final: 7.4 0.2

anaerobia, permite el crecimiento de Clostridium spp y

anaerobios no esporulados.

Frmula (g/L)
Triptena

15.0

Peptona de soya

5.0

Cloruro de sodio

5.0

Agar

Siembra

Instrucciones

15.0

Disolver 40 g de polvo deshidratado

por litro de agua destilada. Mezclar y
dejar reposar 5 minutos. Calentar
suavemente
agitando
y
hervir
durante 1 2 minutos hasta su
disolucin. Distribuir y esterilizar en
autoclave durante 15 minutos a 118121C.

Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.

pH final: 7.3 0.2

Incubacin

De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

TSA

Siembra

Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la

superficie del medio de cultivo.

Medio utilizado para propsitos

generales,
favorece
el
desarrollo y aislamiento de una
gran
variedad
de
microorganismos aerobios, y
anaerobios
facultativos
y
estrictos.

Fundamento
La triptena y la peptona de
soya aportan nutrientes ricos en
pptidos, aminocidos libres,
bases pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La
peptona de soya aporta tambin carbohidratos que estimulan
el crecimiento de muchos microorganismos. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico.
Adicionado con 5-10 % sangre, se logra un medio enriquecido
y adecuado para observar reacciones de hemlisis.
Cuando se prepara como agar chocolate, es til para el
cultivo de Neisseria spp, Haemophilus influenzae y
microorganismos exigentes similares. Incubado en forma

Saboraud Glucosado
Medio
utilizado
para
el
aislamiento, identificacin y
conservacin
de
hongos
patgenos
y
saprfitos.
Tambin es til para el cultivo
de levaduras.

Fundamento
Medio de cultivo recomendado
para el aislamiento y desarrollo
de hongos, particularmente los
asociados
con
infecciones
cutneas (piel, pelo, etc.).

En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los

nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto
contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH
cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de
bacterias. Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse
otros agentes selectivos de crecimiento.

Frmula (g/L)

Instrucciones

Pluripeptona

10.0

Glucosa

40.0

Cloranfenicol

0.05

Agar

15.0

Suspender 65 g del polvo por litro

de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar hasta uniformar.
Calentar agitando frecuentemente
y hervir 1 minuto hasta disolver.
Distribuir y esterilizar 15 minutos a
118-121C. Mantener en lugar
fresco, pues la exposicin al calor
hidroliza
los
componentes.
Distribuir en placas o en tubos con
cierre hermtico

pH final: 5.6 0.2

Frmula (g/L)

Depende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa.

Consultar referencias de mtodos recomendados.

Salmonella-Shigella
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella
spp y de algunas especies de Shigella spp a partir de heces,
alimentos y otros materiales.

Instrucciones

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

5.0

Lactosa

Siembra

Fundamento

Es un medio de cultivo selectivo y

diferencial.
La selectividad, est dada por la
sales biliares y el verde brillante,
que inhiben el desarrollo de
bacterias Gram positivas, de la
mayora de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.
Es
diferencial
debido
a
la
fermentacin de la lactosa, y a la
formacin de cido sulfhdrico a
partir del tiosulfato de sodio.Los pocos microorganismos
fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el
medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose
colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.

10.0

Mezcla de sales
biliares

8.5

Citrato de sodio

8.5

Tiosulfato de sodio

8.5

Citrato frrico

1.0

Agar
Verde brillante

13.5
0.0003
3

Suspender 60 g del polvo por

litro
de
agua
destilada.
Reposar 5 minutos y mezclar
hasta homogeneizar. Calentar
a ebullicin durante 2 o 3
minutos. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C
y distribuir unos 20 ml por
placa. Secar la superficie del
medio unos minutos en la
estufa.

Rojo neutro

0.025

Cloruro de sodio

pH final: 7.0 0.2

Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Incubacin

Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

TSI
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de
enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa,
lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,
aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de
carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato
de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+ , los cuales se
combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de
hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y
el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por
fermentacin de azcares, se producen cidos, que se
detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al
color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se
reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una
sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de
color negro.

Frmula (en gramos por litro)

Extracto de carne
Pluripeptona

Lactosa

10.0

Sacarosa

10.0

Glucosa

1.0

Sulfato de hierro y
amonio

0.2

Tiosulfato de sodio

0.2

Rojo de fenol
Agar

Fundamento

3.0
20.0

Instrucciones
Suspender 62,5 g del polvo por
litro de agua destilada. Mezclar

5.0

bien y calentar con agitacin

frecuente, hervir 1 o 2 minutos
hasta disolucin total. Llenar
hasta la tercera parte de los
tubos de ensayo. Esterilizar a
121C por 15 minutos. Enfriar
en pico de flauta profundo.

0.025
13.0
pH final: 7.3 0.2

Siembra
Sembrar picando el fondo y extendiendo sobre la superficie
del medio.

Incubacin

A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.

MEDIOS DE CULTIVO

Yel-Zn