Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
9, 1787-1793, 2012
Artigo
EFEITOS DAS CONDIES AMBIENTAIS SOBRE O TEOR E VARIABILIDADE DOS LEOS VOLTEIS DE
Dalbergia frutescens (Vell.) Britton (Fabaceae)
EFFECTS OF ENVIRONMENTAL CONDITIONS ON THE CONTENT AND CHEMICAL VARIABILITY OF VOLATILE OILS
OF Dalbergia frutescens (Vell.) Britton (Fabaceae). The volatile oils of Dalbergia frutescens were obtained by hydrodistillation
on a Clevenger-modified apparatus for every month of one year and assessed on GC/MS and GC/FID detectors for qualitative and
quantitative analyses. The influence on content of volatile oils was directly proportional to the environmental variables, temperature
and cloudiness, and inversely proportional to precipitation. Among the volatile compounds detected, linalool, -damascenone,
-ionone, geranyl acetone and -ionone were the main components, of which -damascenone and -ionone were found at the
highest concentrations.
Keywords: Dalbergia frutescens; seasonality; variation volatile compounds.
INTRODUO
A constante descoberta de compostos bioativos a partir de produtos naturais, aliada contnua ameaa biodiversidade pela destruio
dos ecossistemas terrestre e marinho justifica, irrefutavelmente, a
colaborao multidisciplinar e internacional para o conhecimento
e a explorao da natureza como fonte para o desenvolvimento de
novos agentes bioativos.1
Devido sua presena frequente nas espcies vegetais, facilidade
de acesso e variedade de composio qumica, os leos vm sendo
objetos de extensivos estudos visando a identificao de atividades
biolgicas, cujos resultados apontam para um potencial teraputico
importante.2
Na dinmica de crescimento, desenvolvimento e estdios fenolgicos das espcies vegetais, h alteraes bioqumicas e fisiolgicas
capazes de modificar a elaborao de substncias biologicamente
ativas, influenciando diretamente no teor e na qualidade dos leos
essenciais (fixos ou volteis).3 Por esse motivo, os leos no so
constantes em termos qualitativos e quantitativos, sendo diretamente
influenciados por fatores ambientais como nutrio, luminosidade,
temperatura, radiao, dficit hdrico, local e horrio de coleta.4
O gnero Dalbergia (Fabaceae) compreende cerca de 100 espcies de rvores, arbustos e lianas (cips e trepadeiras), sendo que no
Brasil ocorrem 40 espcies deste gnero, as quais so distribudas em
praticamente todos os ecossistemas, destacando-se as vegetaes de
Caatinga, Cerrado, Mata Atlntica e Campo Rupestre.5
Muitas espcies de Dalbergia so economicamente importantes
devido a sua valiosa madeira, entretanto, a destruio acelerada das
florestas tropicais, a fragmentao de habitats e a superexplorao extrativista tm inserido muitas destas espcies de interesse econmico
*e-mail: carol_engquimica@yahoo.com.br
1788
Mendes et al.
Quim. Nova
Tabela 1. Rendimento percentual do leo voltil de D. frutescens e valores mdios de temperatura, precipitao, insolao e nebulosidade, mensalmente ao
longo de um ano
Ms/ano
Rendimento [%]1
Precipitao [mm]2
Insolao [h]2
Nebulosidade [1/10]2
01/2011
0,0076
24,71
82,0
98,1
6,58
02/2011
0,0060
23,54
121,0
73,5
6,87
03/2010
0,0044d
22,00
159,9
57,5
7,05
04/2010
0,0038
20,21
183,8
51,3
6,90
05/2010
0,0032c
15,61
107,3
83,9
6,50
06/2010
0,0024
13,65
114,2
72,0
6,31
07/2010
0,0035c
15,39
102,0
82,0
6,63
08/2010
0,0019
12,68
95,4
57,8
5,30
09/2010
0,0025
17,54
104,9
86,6
5,74
10/2010
0,0039c
19,61
69,2
102,2
4,53
11/2010
0,0046
22,04
75,1
128,7
5,23
12/2010
0,0056e
23,30
23,5
121,9
4,80
Mdias seguidas de letra minscula diferente entre linhas diferem significativamente entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Valores mdios
da semana anterior coleta. Dados disponibilizados pela Empresa de Pesquisa Agropecuria e Extenso Rural de Santa Catarina EPAGRI de Chapec-SC.
1
Tabela 2. Coeficientes estatsticos obtidos por regresso linear mltipla para a influncia das variveis temperatura mdia, precipitao, insolao e nebulosidade
sobre o rendimento do leo voltil foliar de Dalbergia frutescens
Modelo
Intercept
R2 ajustado
F(4,7)
0,9206
32,885
0,00047
Beta
Nvel p
0,00013
-0,004481
0,049688
Temperatura [C]
0,8738
0,000358
0,000081
Precipitao [mm]
-0,7253
-0,000029
0,007632
Insolao [h]
-0,2340
-0,000016
0,255272
Nebulosidade [1/10]
0,5309
0,001019
0,006997
Efeitos das condies ambientais sobre o teor e variabilidade dos leos volteis
1789
Tabela 3. Composio qumica do leo voltil de Dalbergia frutescens mensalmente, ao longo de um ano
Composto
Classe
(E)-2-hexenal
(Z)-3-hexenol
n-hexanol
(E,E)-2,4-hexadienal
Metanoato de hexila
-tujeno
Heptanol
1-octen-3-ol
(E,E)-2,4-heptadienal
Limoneno
Fenil-acetaldedo
(E)--ocimeno
Octanol
<Trans>-xido de linalol
Linalol
Nonanal
(E)-2,6-dimetil-1,3,7-octatrien-6-ol
2-metil-6-metileno-1,7-octadien-3-ona
-terpineol
Safranal
Beta-ciclo-citral
<Cis, para> menta-1(7)-,8-dien-2-ol
Pulegona
Geraniol
4-vinil-guaiacol
Acetato de citronelila
Acetato de verbanol
2-butil-2-octenal
-copaeno
Caproato de 3(z)-hexenila
(E)--damascenona
-cubebeno
-longipineno
-cidreno
(E)-cariofileno
(E)--ionona
Geranil-acetona
(E)-4-(2,3,6-trimetil-fenil)-3-buten-2-ona
(E)--ionona
<10, 11-epoxy> calameneno
Cubebol
-cadineno
<Trans>-calameneno
(R)-5,6,7,7--tetrahidro-4-4-7atrimetil-2(4h)-benzofuranona
-calacoreno
Epxido italiceno
(E)-nerolidol
(3-z)-benzoato de hexenila
Dendrolasin
Espatulenol
xido de cariofileno
-acorenol
ALD
ALC
ALC
HD
EST
MH
ALC
ALC
HD
MH
ALD
MH
ALC
MO
MO
ALD
MO
ndice de
Concentrao [%]3
Reteno
IRLC1 IRLL2 JAN FEV MAR ABR MAI JUN JUL AGO SET OUT NOV DEZ
859
855
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 1,89b n.d. 5,57c n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
861
859
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 11,73c 21,4d 7,69b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
871
871
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 30,74c 51,31d 9,54b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
910
910
n.d. 0,86b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
932
929
n.d. 0,18a n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
934
930
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 0,72b
970
967
n.d.
n.d. 0,46b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
979
979 0,50b 1,06c 1,51d n.d. 0,57b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1016 1013 n.d. 0,28b n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 1,00c n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1029 1029 n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 2,89b
1042 1042 n.d. 0,36b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1048 1050 n.d. 0,53b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1071 1068 n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 0,66b n.d.
n.d.
n.d.
1073 1073 n.d. 0,27b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 0,74c n.d.
n.d.
n.d.
1100 1097 8,47f 8,63g 10,43h n.d. 3,54b 4,65d 4,72d 3,79c 6,07e 12,43i 14,71k 13,76j
1103 1101 0,54b 1,11cd 1,28d n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 1,65e n.d. 1,06c n.d.
1112 1101 n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 1,39b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
MO
1119
1117
n.d.
0,68b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
MO
MO
MO
MO
MO
MO
ALC
EST
EST
ALD
SH
EST
NOR
SH
SH
SH
SH
NOR
NOR
1190
1201
1219
1234
1242
1256
1313
1340
1349
1376
1377
1383
1385
1390
1402
1415
1419
1430
1455
1189
1201
1219
1231
1241
1255
1309
1353
1344
1378
1377
1382
1385
1390
1401
1412
1419
1430
1455
0,83cd
n.d.
n.d.
0,70c
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1,84f
0,93c
15,83f
2,43d
n.d.
1,03b
1,76c
6,47j
3,00i
0,99d
n.d.
0,79b
n.d.
n.d.
0,86b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
0,82cd
n.d.
10,98c
1,11b
n.d.
1,57c
0,92b
3,38g
0,98c
0,50b
n.d.
n.d.
0,44b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
0,41b
n.d.
29,72l
2,67e
n.d.
5,33d
n.d.
5,88i
2,41h
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
21,70j
6,19g
n.d.
23,26h
n.d.
2,86e
1,55e
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
2,76c
n.d.
n.d.
n.d.
5,02g
n.d.
16,26g
1,63c
n.d.
7,70e
n.d.
1,46b
0,71b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
6,87c
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
11,48d
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
0,64bc
0,75b
n.d.
0,81c
n.d.
n.d.
2,16b
n.d.
1,28b
n.d.
n.d.
n.d.
23,58k
n.d.
4,07b
14,08g
n.d.
2,53d
2,16g
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1,87b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
18,38h
n.d.
5,29c
11,37f
n.d.
3,19f
4,35j
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1,09b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1,75b
0,93de
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
2,52d
1,44d
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
4,50b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
2,23c
n.d.
1,30e
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
0,65c
0,55b
13,59e
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
2,46d
1,77f
1,44e
n.d.
n.d.
1,45d
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1,10e
n.d.
21,39i
3,91f
n.d.
n.d.
n.d.
5,55h
4,67k
NOR
1488
1475
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1,78b
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
NOR
SO
SO
SH
SH
1489
1494
1521
1523
1529
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
FUR
1531
1525
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
2,84b
n.d.
SH
SO
SO
EST
SO
SO
SO
SO
1546
1552
1564
1573
1582
1585
1588
1636
1546
1549
1563
1573
1582
1578
1587
1636
3,57f
n.d.
1,16c
3,41d
2,06c
1,35b
1,27b
n.d.
0,36b
n.d.
0,57b
0,55b
50,84f
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
3,11e
3,17c
8,87d
2,08d
n.d.
n.d.
n.d.
0,72b
1,96d
n.d.
n.d.
1,74c
5,48c
2,37b
n.d.
n.d.
n.d.
0,67c n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
0,44b n.d.
n.d.
14,32f n.d.
n.d.
1,14b n.d.
n.d.
n.d. 10,79f 3,69e
n.d. 5,47c n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
1790
Mendes et al.
Quim. Nova
Tabela 3. continuao
Composto
Classe
ndice de
Reteno
IRLC1 IRLL2
1650 1647
1654 1654
1678 1677
1681 1680
1712 1711
1843 1841
1921 1921
1925 1925
Concentrao [%]3
JAN FEV MAR ABR MAI JUN JUL AGO SET OUT NOV DEZ
Cubenol
SO
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 1,44b n.d.
n.d.
n.d.
-cadinol
SO
4,23d 0,8b
n.d. 0,71b n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 8,22f 7,45e 3,87c 4,04c
Cadaleno
SH
0,80b n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 3,35c n.d.
n.d.
n.d.
Tetradecanol
ALC
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 1,14b 3,23c 6,86d n.d.
n.d.
n.d.
Pentadecanal
SO
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 2,71c 3,68d n.d. 1,39b n.d.
n.d.
Pentadecan-2-ona
SO
1,56d n.d. 0,66b n.d.
n.d.
n.d. 1,04c 6,14g 6,54h 4,66f 1,90e 1,64d
(E,E)-farnesil acetona
NOR
3,49e 0,27b 1,01c n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 3,52e 0,92c n.d. 0,99c 3,19d
Hexadecanoato de metila
EST
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d.
n.d. 9,78c 10,32d 0,58b n.d.
TOTAL
90,69 96,42 93,20 92,04 94,58 95,71 94,73 93,36 93,93 95,3 90,87 92,76
ALD: Aldedos
0,54 1,47 1,28 0,00 1,89 0,00 5,57 0,00 3,40 0,00 1,06 0,00
ALC: Alcois
0,50 1,06 1,97 0,00 45,8 72,71 20,53 3,23 7,52 0,00 0,00 0,00
HD: Hidrocarbonetos
0,00 1,14 0,00 0,00 0,00 0,00 1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
NOR: Norisoprenoides
50,63 21,98 52,94 45,62 25,31 11,48 36,14 40,76 25,38 59,05 35,24 60,56
FUR: Furanonas
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,84 0,00 0,00 0,00
EST: steres
4,34 0,73 14,32 0,00 0,00 0,00 1,28 5,04 9,78 10,32 13,61 0,00
MH: Hidrocarbonetos monoterp0,00 0,53 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,61
nicos
MO: Monoterpenos oxigenados
10,00 12,22 11,37 0,00 3,54 11,52 8,31 3,79 7,90 12,43 16,01 16,65
SH: Hidrocarbonetos sesquiterp12,39 5,08 9,08 29,45 14,35 0,00 18,15 16,66 6,01 0,00 2,22 6,26
nicos
SO: Sesquiterpenos oxigenados
12,29 52,21 2,24 16,97 3,69 0,00 3,75 23,88 31,10 13,50 22,73 5,68
1
ndice de Reteno Linear calculado com base em uma mistura padro de hidrocarbonetos C7-C30. 2 ndice de Reteno Linear da literatura, obtido para
coluna RTX-5 em ADAMS.26 3 Concentrao percentual calculada com base nas reas dos picos, sendo os valores mdios de trs injees. Mdias seguidas
de letra diferente entre colunas, diferem significativamente entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. n.d. No detectado pelo mtodo empregado.
Efeitos das condies ambientais sobre o teor e variabilidade dos leos volteis
1791
CONCLUSES
Figura 1. Anlise classificatria e de componentes principais para os componentes caractersticos do leo voltil foliar de D. frutescens em funo
das variveis ambientais
Este o primeiro relato sobre a composio qumica do leo voltil de Dalbergia frutescens e a influncia das condies ambientais na
espcie. Foram identificados 60 compostos volteis, sendo detectados
como compostos caractersticos da espcie, linalol, -damascenona,
-ionona, geranil-acetona e -ionona. Observou-se que os compostos
caractersticos so biossintetizados atravs da degradao de carotenoides, resultando em altos teores de -damascenona e -ionona.
O rendimento do leo voltil foi fortemente influenciado pelas
condies ambientais, apresentando um comportamento diretamente
proporcional temperatura e nebulosidade e inversamente proporcional precipitao.
Em relao influncia das condies ambientais sobre a composio qumica, observou-se que linalol, -ionona e -ionona,
compostos que caracterizaram a composio qumica da primavera,
sofreram influncia diretamente proporcional da temperatura e da
insolao. Observou-se ainda que as estaes do outono e inverno
foram caracterizadas pela ocorrncia de -damascenona e geranil-acetona compostos que, a princpio, no apresentaram relao com
as condies ambientais.
Por fim, o presente estudo contribuiu para o conhecimento do
potencial qumico da biodiversidade local, uma vez que caracteriza
parcialmente a composio qumica de Dalbergia frutescens.
1792
Mendes et al.
PARTE EXPERIMENTAL
Coleta e acondicionamento do material vegetal
As amostras de material vegetal da espcie Dalbergia frutescens
foram coletadas na cidade de Chapec-SC, sendo as coordenadas da
localizao: latitude 270329.8S e longitude 523936.4O. A exsicata da espcie encontra-se catalogada no herbrio da Universidade
Federal de Santa Maria, RS, sob o nmero de registro SMDB 12.936.
As amostras coletadas foram de folhas, coletando-se parcelas de
material vegetal novo e velho e em todo o entorno do exemplar da
espcie, visando a homogeneizao das amostras. As coletas foram
realizadas mensalmente de maro de 2010 a fevereiro de 2011,
sendo realizadas na segunda quinzena de cada ms, em horrios que
variaram das 14:00 s 15:00 h.
Aps a coleta, as amostras foram armazenadas em freezer
-10C at o momento da extrao dos leos volteis, com o intuito
de reduzir a perda dos constituintes e diminuir a atividade metablica
do material.
Extrao e purificao do leo voltil
O leo voltil das folhas de D. frutescens foi obtido por hidrodestilao, utilizando-se um aparelho do tipo Clevenger modificado, com
capacidade de 6 L. Para o processo de extrao, o material vegetal
foi previamente triturado em liquidificador, pesado e inserido no
equipamento de extrao, no qual o material foi mantido submerso em
gua destilada at o trmino da extrao. Para este processo, fixou-se
um tempo de 3 h de extrao a contar do incio da ebulio da gua.
Aps o trmino da extrao, separaram-se os compostos volteis
da gua utilizando-se como solvente extrator ter etlico bi-destilado,
secou-se a mistura ter-leo com sulfato de sdio anidro e, posteriormente, evaporou-se o solvente em banho termosttico (Tecnal,
modelo TE-184) a 35 C. Aps a evaporao, o extrato voltil foi
pesado em balana analtica (Tecnal, modelo Mark 210A classe I),
para determinao do rendimento.
Anlise da composio qumica dos leos volteis
Anlise qualitativa
O leo voltil foi submetido anlise em um cromatgrafo gasoso
acoplado a um espectrmetro de massa, sendo a amostra (10 mg/mL)
injetada no modo split (1:10). O cromatgrafo (Shimadzu, modelo
GC-2010) estava equipado com coluna capilar de slica fundida modelo RTX-5MS (Restek, 30 m x 0,25 mm x 0,25 m). As condies
de anlise foram: velocidade linear de 1 mL/min com gs de arraste
Hlio (He); presso na coluna de 53 kPa; temperatura do injetor de
240 C e temperatura do forno de 50 a 290 C, com velocidade de
aquecimento de 4 C/min. O espectrmetro de massa foi utilizado
no modo de ionizao eletrnica a 70 eV, com varredura de m/z de
40 a 600 Da, em uma frequncia de 2,94 scan/s. A fonte de ons foi
mantida a 260 C e a interfase a 280 C.
Os dados obtidos foram processados utilizando o software GCMS
Postrun Analysis. A identificao dos compostos foi baseada na
comparao dos ndices de reteno da mesma coluna e espectro de
massa descrito por Mc Lafferty e Stauffer (Wiley) e por Adams.26 O
ndice de reteno foi obtido de acordo com o mtodo de van den
Dool e Kratz para padres de n-alcanos C7-C30 (Supelco Analytical).
Anlise quantitativa
A anlise quantitativa foi realizada em um cromatgrafo a gs
(CG) com detector de ionizao de chama (FID). O cromatgrafo
(Shimadzu, modelo GC-2010) equipado com coluna capilar de slica
Quim. Nova
Efeitos das condies ambientais sobre o teor e variabilidade dos leos volteis
1793
17. Baldermann, S.; Kato, M.; Kurosawa, M.; Kurobayashi, Y.; Fujita, A.;
Fleischmann, P.; Watanabe, N.; J. Exp. Bot. 2010, 61, 2967.
18. Simkin, A. J.; Underwood, B. A.; Auldridge, M.; Loucas, H. M.;
Shibuya, K.; Schmelz, E.; Clark, D. G.; Klee, H. J.; Plant Physiol. 2004,
136, 3504.
19. Yamamizo, C.; Kishimoto, S.; Ohmiya, A.; J. Exp. Bot. 2010, 61, 709.
20. Hatanaka, A.; Phytochemistry 1993, 34, 1201.
21. Rezende, C. M.; Corra, V. F. S.; Costa, A. V. M.; Castro, B. C. S.; Quim.
Nova 2004, 27, 414.
22. Fernandes, J. M.; Dissertao de Mestrado, Universidade Federal de
Viosa, Brasil, 2007.
23. Malerbo-Souza, D. T.; Nogueira-Couto, R. H.; Couto, L. A.; Souza, J.
C.; Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci. 2003, 40, 272.
24. Pham-Delegue, M. H.; Etievant, P.; Guichard, E.; Masson, C.; J. Chem.
Ecol. 1989, 15, 329.
25. Kite, G. C.; Leon, C.; Phytochemistry 1995, 40, 1093.
26. Adams, R.; Essential oil components by Quadrupole GC/MS, Allured
Publishing Corp.: Carol Stream, 2001.