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Ministrio da Sade

Fundao Oswaldo Cruz


Instituto Oswaldo Cruz
Programa de Ps-Graduao em Biologia Parasitria

Efeito de triflumuron - um inibidor da sntese


de quitina - sobre o desenvolvimento e a
reproduo de culicdeos vetores de doenas

Thiago Affonso Belinato


Orientadora: Dr Denise Valle (IOC/ Depto de Entomologia)

Rio de Janeiro; maro de 2007

Instituto Oswaldo Cruz


Programa de Ps-Graduao em Biologia Parasitria

Efeito de triflumuron - um inibidor da sntese


de quitina - sobre o desenvolvimento e a
reproduo de culicdeos vetores de doenas

Thiago Affonso Belinato


Dissertao apresentada como requisito obteno do ttulo de Mestre em
Biologia Parasitria, com rea de concentrao em Entomologia Mdica.

Orientadora: Dr Denise Valle (IOC/ Depto de Entomologia)

Rio de Janeiro; maro de 2007

ii

Belinato, Thiago Affonso


Efeito de triflumuron - um inibidor da sntese de quitina - sobre o
desenvolvimento e a reproduo de culicdeos vetores de doenas
Dissertao de Mestrado em Biologia Parasitria, rea de concentrao em
Entomologia Mdica
Instituto Oswaldo Cruz FIOCRUZ
Rio de Janeiro, 2007
Nmero de pginas: xi + 92
1. Culicdeos vetores 2. IGRs 3.inibidor de sntese de quitina 4. triflumuron

iii

Efeito de triflumuron - um inibidor da sntese de quitina - sobre o desenvolvimento e


a reproduo de culicdeos vetores de doenas

Dissertao submetida coordenao do


curso

de

Ps-Graduao

em

Biologia

Parasitria do Instituto Oswaldo Cruz como


parte dos requisitos para obteno de grau
em Mestre em Biologia Parasitria, rea de
concentrao: Entomologia Mdica.

Banca Examinadora

Dr. Ricardo Loureno de Oliveira - Revisor e Presidente


FIOCRUZ/ Instituto Oswaldo Cruz/ Departamento de Entomologia

Dr. Alexandre Afrnio Peixoto


FIOCRUZ/ Instituto Oswaldo Cruz/ DDBM

Dr. Marcos Henrique Ferreira Sorgine


UFRJ/ Instituto de Bioqumica Mdica

Dr. Pedro Lagerblad de Oliveira


UFRJ/ Instituto de Bioqumica Mdica

Dr. Ccero Brasileiro de Mello Neto


UFF/ Departamento de Biologia Geral

iv

Este trabalho foi realizado no Laboratrio de Fisiologia e Controle de Artrpodes


Vetores, Departamento de Entomologia, Instituto Oswaldo Cruz, sediado no
Laboratrio de Entomologia do Centro de Pesquisa General Dr Ismael da Rocha,
Instituto de Biologia do Exrcito. Foram utilizados recursos da Fundao Oswaldo
Cruz, da Fundao de Amparo Pesquisa do Rio de Janeiro (Faperj), do Conselho
Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) e da Secretaria de
Vigilncia em Sade (SVS-MS).

Aos meus pais, Pedro e Rosngela


pelo apoio incondicional durante
toda minha vida, tanto pessoal
quanto acadmica.
Aos meus irmos Andr e
Bernardo, por acreditarem em mim
e, simplesmente, por existirem.

vi

Agradecimentos
A todos os meus familiares e amigos que, muitas vezes sem saber, foram
muito importantes durante o decorrer deste trabalho.
Ana Carolina dos Santos Valente, caadora oficial de artigos quase
impossveis de serem encontrados. Sua ajuda foi imensurvel em todos os sentidos.
No existe espao aqui e nem palavras com as quais eu possa expressar toda a
minha gratido.
A todos os amigos do Laboratrio de Fisiologia e Controle de Artrpodes
Vetores (LAFICAVE), principalmente pelo esprito de unio, o que torna nosso grupo
especial: Denise, Bento, Jutta, Patrcia, Ademir, Gustavo, Mrcia, Isabela, Luana,
Camila, Priscila, Diogo, Aline, Nathlia, Eliane, Tnia, Gilberto, Diego, dula, Ciroulo
e Bianca. Valeu Mosquiteiros!! Trabalhar com vocs demais!!
A todos os amigos da turma da Biologia Parasitria 2005: Marcelo, Flvio,
Alexandre, Vigoder, Marcos, Gabriel, Cntia, Jaline, Cris, Tamara, Tatiane, Simone,
Raquel Canto, Karen, Camila, Lidiane e Carol pelos inmeros churrascos, amigos
ocultos, festas, quadras etc etc etc. Fiz grandes amigos durante esse perodo que,
com certeza, vo estar presentes em toda a minha vida!!!
A Luana e Camila, amigas desde a graduao.

Estas duas foram e

continuam sendo fundamentais em minha vida e formao. Escrever sobre elas


sempre foi uma tarefa difcil. Vejo nelas o verdadeiro valor da amizade.
Ao Ademir de Jesus Martins Jnior, amigo e orientador desde a Iniciao
Cientfica. Sempre foi paciente, presente em qualquer situao, colocando sempre
em prtica sua inteligncia singular atravs de sugestes e idias. Valeu Ademir!!!!

vii

Ao Gustavo Lazzaro Rezende, que alm de ser meu amigo uma pessoa
bastante prestativa. Suas sugestes e nossas conversas foram importantes no
decorrer deste trabalho.
querida "Mafaldinha" que possui uma capacidade gigantesca de ajudar
as pessoas! Muito obrigado por me ouvir, fazer companhia e me ajudar durante os
bioensaios na sala de resistncia.
Ao Diogo Bellinato, que me socorreu muitas vezes com sua ajuda durante
a realizao dos experimentos.
A Luana Rosa e Jaqueline Chaves pela reviso do portugus da
dissertao. Foi muito bom conhecer vocs duas, e sem dvida alguma, j fazem
parte da minha vida!
Dr Denise Valle, pela pacincia e orientao deste trabalho. Consideroa uma grande pessoa e excelente orientadora. O mais importante que, acima de
tudo, minha amiga!
Ao Dr Jos Bento Pereira Lima, pela orientao, conselhos e sugestes
durante estes dois anos de pesquisa.
Ao Dr Alexandre Peixoto, pelo uso de equipamento e orientao durante
os ensaios de atividade no Laboratrio de Biologia Molecular de Insetos.
Tamara Nunes de Lima Camara, pela amizade e orientao durante os
ensaios de atividade no Laboratrio de Biologia Molecular de Insetos.
Ao Instituto de Biologia do Exrcito (IBEx), onde todos os experimentos
foram realizados.
Ao Instituto Oswaldo Cruz (IOC) pelo apoio financeiro e tcnico para
realizao deste trabalho.

viii

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico


(Cnpq) pela concesso da bolsa de Mestrado.
Bayer CropScience pelo fornecimento da amostra de Triflumuron.

ix

ndice
Resumo .................................................................................................................................... 1
Abstract.................................................................................................................................... 2
1) Introduo........................................................................................................................... 3
1.1)

Os mosquitos ......................................................................................................... 3

1.1.1)

Aedes aegypti................................................................................................. 4

1.1.2)

Aedes albopictus........................................................................................... 5

1.1.3)

Culex quinquefasciatus ............................................................................... 6

1.2)

Controle de vetores .............................................................................................. 8

1.2.1)

1.2.1.1)

Organoclorados ..................................................................................... 9

1.2.1.2)

Organofosforados ............................................................................... 10

1.2.1.3)

Carbamatos........................................................................................... 11

1.2.1.4)

Piretrides ............................................................................................. 12

1.2.2)
1.3)

Inseticidas qumicos..................................................................................... 9

Resistncia a inseticidas........................................................................... 12

Alternativas de controle .................................................................................... 15

1.3.1)

Controle biolgico....................................................................................... 16

1.3.2)

Reguladores do desenvolvimento de insetos (IGRs)........................ 17

1.3.2.1)

Anlogos de hormnio juvenil......................................................... 18

1.3.2.2)

Agonistas da ecdisona ...................................................................... 20

1.3.2.3)

Inibidores da sntese de quitina ...................................................... 20

1.4) Apresentao da dissertao .................................................................................. 25


2) Objetivos ........................................................................................................................... 26
2.1)

Objetivo geral ....................................................................................................... 26

2.2)

Objetivos especficos......................................................................................... 26

3) Resultados........................................................................................................................ 27
3.1) artigo 1: Effect of a chitin synthesis inhibitor on Aedes aegypti populations
susceptible and resistant to the organophosphate temephos.................................... 27
3.2) artigo 2: Exposure of Aedes aegypti larvae to a chitin synthesis inhibitor sublethal dose: effects on the viability and reproduction of adults................................... 39
x

3.3) artigo 3: Avaliao do efeito de triflumuron sobre Aedes albopictus, Culex


quinquefasciatus e populaes de campo de Aedes aegypti em condies de
laboratrio ........................................................................................................................... 59
4) Discusso ......................................................................................................................... 77
5) Concluses....................................................................................................................... 81
6) Perspectivas..................................................................................................................... 82
7) Bibliografia ....................................................................................................................... 83

xi

Resumo
Aedes aegypti, Aedes albopictus e Culex quinquefasciatus so trs espcies de
mosquito difundidas principalmente nas regies tropicais e subtropicais do globo. No
Brasil, esto relacionadas com a transmisso de doenas como a dengue e a
filariose linftica e h grande preocupao com sua potencial participao na
transmisso de outras arboviroses, como o vrus do oeste do Nilo e o da febre
amarela. Atualmente, a principal forma de combate a vetores de doenas realizada
atravs do uso de inseticidas qumicos, cujo stio de ao o sistema nervoso
central do inseto. Como conseqncia do uso macio destes produtos, a freqncia
de indivduos resistentes em populaes de vrias espcies de insetos vetores tem
aumentado. Os reguladores do desenvolvimento de insetos aparecem como uma
nova alternativa de controle de mosquitos vetores. Neste grupo, encontram-se os
inibidores da sntese de quitina (CSI), substncias que prejudicam o processo de
muda, acarretando deficincias principalmente na cutcula dos insetos. No presente
trabalho, verificou-se que o CSI triflumuron foi eficaz contra estas trs espcies de
culicdeos vetores, em concentraes na ordem de g/L. Alm disso, foi investigado o
efeito da aplicao, em larvas, de dose parcialmente letal de triflumuron sobre vrios
aspectos da biologia de Ae. aegypti. De modo geral, a longevidade, aceitao do
repasto sangneo, volume de sangue ingerido, reproduo e postura so afetados
negativamente nos adultos sobreviventes ao tratamento na fase imatura. Triflumuron
foi eficaz contra diversas populaes de campo de Ae. aegypti, com diferentes nveis
de susceptibilidade ao organofosforado temephos e ao piretride deltametrina: no
houve emergncia de adultos viveis quando as larvas foram expostas IE99 de
triflumuron para a cepa-referncia Rockefeller. Embora no tenha sido detectada
resistncia cruzada entre aqueles inseticidas qumicos e o CSI, a mortalidade de
populaes resistentes ao temephos, mas no deltametrina, ocorreu mais
tardiamente. Estes resultados indicam que triflumuron pode ser considerado como
uma alternativa promissora para o controle de culicdeos no Brasil e apontam para a
necessidade de monitoramento constante do status de susceptibilidade das
populaes do vetor.

Abstract
Aedes aegypti, Aedes albopictus and Culex quinquefasciatus are three mosquito
species spread allover the world, mainly in the tropical and subtropical regions. In
Brazil these are implicated in the transmission of diseases such as dengue and
lymphatic filariasis, and there is a great concern related to their potential in
transmitting several other arboviruses, like those responsible for West Nile and
yellow fever. Presently, the major tools against disease vectors are chemical
insecticides, whose target site is the insect central nervous system. A consequence
of the massive use of these products is the frequence increasing of resistant
individuals in populations of several species of medical importance. The Insect
Growth Regulators represent a novel alternative of mosquito vectors control. The
chitin synthesis inhibitors (CSI), members of this group, interfere with the molting
process, resulting in a series of defects, mainly in the insect cuticle. In the present
work we verified that the CSI triflumuron was effective against three species of
culicidae vectors, in concentrations in the range of g/L. The consequences of
exposing Ae. aegypti larvae to partial lethal doses of triflumuron over several aspects
of their biology were also investigated. In general longevity, blood feeding
acceptance, size of blood meal, reproduction and egg laying are negatively affected
in triflumuron surviving adults. Triflumuron was effective against several Ae. aegypti
field populations, exhibiting different levels of resistance to the organophosphate
temephos and to the pyrethroid deltamethrin: no emergence of viable adults was
detected after exposure of larvae to the EI99 triflumuron Rockefeller (a reference
strain) dose. Although no cross resistance among those chemical insecticides and
the CSI has been detected, in general, mortality of temephos (but not deltamethrin)
resistant populations was observed later. These results indicate triflumuron can be
envisaged as a promising alternative to the control of culicidae in Brazil and point to
the need of the permanent monitoring of the insecticide susceptibility status of vector
populations.

1) Introduo
1.1)

Os mosquitos
Os mosquitos pertencem famlia Culicidae, grupo que se enquadra

dentro da ordem Diptera, que contm por volta de 151.000 espcies descritas
(Brusca e Brusca, 2003). Esta ordem, por sua vez, inclui os insetos portadores de
duas asas, como as moscas e os mosquitos (Ruppert e Barnes, 1996). Os
mosquitos so encontrados basicamente em todo o mundo, com exceo dos
lugares com clima muito hostil, que permanecem congelados o ano todo. A maior
parte das espcies de mosquitos vive nos trpicos e sub-trpicos, onde o clima
moderadamente quente e mido favorvel ao rpido desenvolvimento e
sobrevivncia dos adultos (Clements, 1992).
Atualmente, os mosquitos so classificados em trs subfamlias:
Toxorhynchitinae, Anophelinae e Culicinae. Entretanto, apenas as duas ltimas
apresentam importncia epidemiolgica, visto que os Toxorhynchitinae no realizam
hematofagia (Forattini, 2002). O ciclo de vida dos mosquitos holometablico, ou
seja, os insetos sofrem metamorfose completa. As fases imaturas compreendem os
estgios de ovo, larva e pupa, que alm de serem anatomicamente diferentes dos
adultos, vivem em habitats aquticos (Ruppert e Barnes, 1996).
As fmeas dos mosquitos, dependendo da espcie, so capazes de
colocar entre 50 a 500 ovos em um nico evento de oviposio. Em geral, os ovos
so depositados diretamente sobre a gua ou em locais midos que provavelmente
sero inundados em um futuro prximo (Clements, 1992). O desenvolvimento
embrionrio se inicia quase imediatamente aps os ovos serem depositados, dando
origem a uma larva entre um a sete dias, dependendo da espcie e da temperatura
ambiente. Na maioria das espcies, a larva eclode assim que formada. Entretanto,
ovos dos mosquitos da Tribo Aedini so capazes de resistir dessecao, de modo
que uma larva completamente formada no interior do ovo pode resistir por meses na
ausncia de gua, vindo a eclodir quando chuvas inundarem o stio de oviposio.
Muitos culicdeos so vetores de doenas, principalmente devido
necessidade de ingesto de sangue pelas fmeas, condio necessria para a
produo dos ovos na grande maioria das espcies. Dentre as principais doenas
transmitidas por culicdeos, pode-se destacar a malria, uma srie de arboviroses
(como a dengue e a febre amarela) e as filarioses.
3

1.1.1) Aedes aegypti


Mais de 500 espcies so reconhecidas como integrantes do gnero
Aedes, com distribuio que vai do Equador at as regies polares. Algumas
espcies do norte dos Estados Unidos e do Canad constituem pragas,
principalmente pelo grande tamanho de suas populaes locais. Muitas espcies do
gnero Aedes so primitivamente insetos florestais que se criam, geralmente, na
gua que fica coletada nos vertculos das folhas de bromlias ou em ocos de
rvores (Rey, 2001).
O culicdeo Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) originrio da frica, tendo
sido levado para as Amricas durante a colonizao. Essa espcie tem ampla
distribuio, encontrando-se geralmente entre as latitudes 35 Norte e 35 Sul. Em
geral, no encontrada em zonas acima de 1.000 metros, embora j tenha sido
detectada em locais com mais de 2.000 metros de altitude, como na ndia e na
Colmbia (OPAS, 1995).
Aedes aegypti um mosquito adaptado ao ambiente urbano, sendo
freqentemente encontrado no domiclio e no peridomiclio. Larvas desta espcie
podem ser facilmente encontradas em tanques de armazenamento de gua e
vasilhames temporrios dentro ou fora das casas, como potes, barris, pneus usados,
latas, garrafas e vasos de plantas (Nelson, 1986). Na fase adulta, o corpo escuro,
com manchas brancas. Sua identificao facilitada pela presena no escudo de
um desenho em forma de lira composto por escamas claras, que pode ser
distinguido mesmo a olho nu.
Aedes aegypti foi incriminado como transmissor da febre amarela em
1881 por Carlos J. Finlay (Bisset, 2002). Em 1906, Bancroft publicou as primeiras
evidncias de que Ae. aegypti tambm era vetor de dengue, confirmado
posteriormente por Agramonte, em 1906, e por Simmons em 1931 (Martinez, 1990).
Atualmente encontrado em ampla faixa do continente americano, desde o Uruguai
e Argentina at o sul dos Estados Unidos. No Brasil, est presente em todos os 26
estados da Federao e no Distrito Federal (SVS, 2003) e continua sendo o nico
vetor natural confirmado na transmisso de dengue no pas. Estudos recentes
confirmam elevada susceptibilidade de populaes brasileiras de Ae. aegypti aos
vrus da dengue e da febre amarela (Loureno-de-Oliveira et al., 2004).

1.1.2) Aedes albopictus


Durante as ltimas duas dcadas, Aedes albopictus (Skuse, 1895) tem se
dispersado do Oeste do Pacfico e Sudeste da sia para diversas regies do globo,
tais como alguns pases da Europa, frica, e das Amricas (Gratz, 2004).
Popularmente conhecido como Mosquito Tigre, sua introduo em pases nos
quais no se encontrava anteriormente considerada um grande problema, j que
um vetor em potencial de diversas arboviroses (Shroyer, 1986). De acordo com
Knudsen (1995), esta espcie considerada o segundo principal vetor de dengue e
dengue hemorrgica para o homem, perdendo apenas para o culicdeo Ae. aegypti.
Sob condies experimentais, Ae. albopictus apresenta competncia
vetorial para 23 arbovirus, incluindo os quatro sorotipos da dengue, o vrus da febre
amarela e o vrus da febre do Nilo (Moore e Mitchell, 1997). Embora em alguns
pases (como nos EUA) no existam evidncias diretas da relao dessa espcie
com a transmisso de doenas ao homem, vrios arbovrus tm sido isolados em
espcimes de campo, tais como o vrus da encefalite eqina do leste (Moore e
Mitchell, 1997) e os vrus dengue (Serufo et al., 1993; Ibnes-Bernal et al., 1997).
Alm de estar relacionado com a transmisso de arboviroses, Ae. albopictus vetor
natural de Dirofilaria immitis, nematdeo de ampla distribuio geogrfica, causador
de uma infeco cardaca em ces, gatos e candeos silvestres, que infecta
ocasionalmente o homem (Sulaiman e Jeffery, 1986; Konishi, 1989). Nayar e Knight
(1999) verificaram que pequena taxa de uma populao americana de Ae. albopictus
susceptvel a D. immtitis. Os mesmos autores verificaram a presena deste
nematdeo nos tbulos de Malpighi de fmeas coletadas no campo, o que indica
que o mosquito tem potencial na transmisso do patgeno nos Estados Unidos.
O primeiro registro de Ae. albopictus no Brasil ocorreu no Rio de Janeiro
em 1986. Neste mesmo ano, foi encontrado em So Paulo (Brito et al., 1986) e em
Minas Gerais, e no ano seguinte no Esprito Santo (Consoli e Loureno de Oliveira,
1994). Em 2003, a espcie estava presente em 20 dos 26 estados brasileiros (dos
Santos, 2003). De acordo com Kambhampati (1990), as linhagens de Ae. albopictus
do Brasil tm origem japonesa, assim como as linhagens dos Estados Unidos.
Entretanto, a origem exata desta espcie no Brasil no est totalmente clara.
Lounibos et al. (2003) sugerem que as populaes brasileiras de Ae. albopictus
possuem origens distintas.

Aedes albopictus se destaca pela grande habilidade adaptativa, uma vez


que pode ser encontrado tanto em habitats silvestres quanto em locais suburbanos
ou urbanos (Hawley, 1988). No Brasil, sua distribuio nas zonas suburbanas tem
aumentado significativamente (Gratz, 2004), o que considerado um fato bastante
preocupante, j que esta espcie pode atuar como uma ponte na transmisso de
patgenos silvestres ao ambiente urbano (Turell et al., 2001; Loureno-de-Oliveira et
al., 2004; Juliano e Lounibos, 2005). Neste sentido, Mondet et al. (1996) alertam
sobre a possibilidade de uma reurbanizao da febre amarela em locais onde
vetores como Ae. aegypti e Ae albopictus estejam presentes.
No Brasil, sua importncia vetorial tem sido amplamente discutida
(Honrio e Loureno-de-Oliveira, 2001; Lounibos et al., 2002). Em 1993 foi isolado,
pela primeira vez no pas, o sorotipo DEN-1 do vrus dengue em larvas de Ae.
albopictus coletadas na cidade de Campos Altos, MG (Serufo et al., 1993). Vale
ressaltar que nesta cidade houve registro de dengue, mas no do vetor Ae. aegypti.
Sugere-se, portanto, que Ae. albopictus possa ter um papel secundrio na
transmisso de dengue no Brasil.

1.1.3) Culex quinquefasciatus


Culex quinquefasciatus (Say, 1823), tambm conhecido como mosquito
das casas um culicdeo com colorao levemente amarelada e de origem africana
(Juliano e Lounibos, 2005). Atualmente est distribudo praticamente em todo o
mundo (Forattini, 2002), embora seja encontrado principalmente nas regies
tropicais e subtropicais (Rey, 2001). Este culicdeo altamente domstico e
antropoflico, j que tanto os machos como as fmeas buscam o domiclio humano
como local de abrigo e as fmeas realizam o repasto sangneo preferencialmente
no homem (Forattini et al., 1987). Forattini et al. (2000) verificaram alto grau de
sinantropia em Culex quinquefasciatus, quando em comparao com outros
culicdeos.
Com grande capacidade de vo, Cx. quinquefasciatus pode se dispersar
por vrios quilmetros de distncia se necessrio; entretanto, raramente os
mosquitos se dispersam por grandes distncias dentro do ambiente urbano
(Reissen, 1991). um culicdeo bastante ecltico quanto aos tipos de criadouros,
podendo realizar a oviposio na gua da chuva que se acumula em recipientes
6

artificiais, reservatrios ou canais, ou em fossas e esgotos, onde existe alta


concentrao de matria orgnica (Forattini, 2002). Durante a maior parte do dia as
fmeas permanecem em repouso, comeando sua atividade no crepsculo e se
alimentando durante todas as horas da noite (Deane, 1961).
Culex quinquefasciatus o principal vetor da filariose linftica (Forattini,
2002), uma doena cujos agentes so espcies de nematdeos: Wuchereria
bancrofti, Brugia malayi e Brugia timori (Rocha e Fontes, 1998). A filariose linftica
endmica em vrias regies tropicais da sia, frica e Amricas, sendo considerada
um problema de sade pblica em pases como China, ndia e partes leste, central e
oeste da frica (WHO, 2000). Estimativas indicam que cerca de 120 milhes de
pessoas encontram-se infectadas com esses nematdeos, e aproximadamente 40
milhes de pessoas esto incapacitadas ou desfiguradas pela doena (WHO, 2000).
No continente americano, esta enfermidade causada por W. bancrofti, que
provavelmente foi introduzida nas Amricas, incluindo o Brasil, com o trfico de
escravos africanos durante o perodo colonial (Rocha e Fontes, 1998). De acordo
com Dreyer e Coelho (1997), a prevalncia de filariose linftica vem aumentando
nos pases tropicais e subtropicais, principalmente em funo da expanso urbana
no organizada.
Alm de ser o principal vetor de W. bancrofti, Cx. quinquefasciatus pode
estar relacionado com a transmisso de D. immitis (Ahid et al., 2000). Pode tambm
estar relacionado com a transmisso do vrus da encefalite de So Luis em alguns
pases, como sugere o fato de ter sido encontrado infectado com o vrus na
Argentina (Mitchell et al., 1985).
Diante da expanso recente do Vrus do Nilo Ocidental (VNO) nas
Amricas e devido perspectiva e preocupao de sua possvel introduo no Brasil
(Luna et al., 2003), grande ateno deveria ser dada s reas urbanas infestadas
por Cx. quinquefasciatus, j que os mosquitos do gnero Culex esto entre os
vetores mais eficientes na transmisso deste arbovrus (Goddard et al., 2003). Uma
srie de autores observou que Cx. quinquefasciatus moderadamente susceptvel
ao Vrus do Nilo Ocidental (Sardelis et al., 2001; Godsey Jr et al., 2005; Hayes et al.,
2005). Alm disso, j foi encontrado naturalmente infectado com VNO em alguns
locais nos EUA (Godsey Jr et al., 2005).

1.2)

Controle de vetores
Alguns mtodos de controle de insetos datam de muitos sculos atrs,

como o uso de preparaes feitas atravs de produtos naturais (WHO, 1984). Antes
da 2 Guerra Mundial, as substncias qumicas usadas no combate aos insetos
eram produtos inorgnicos, como por exemplo, os compostos arsnicos. Apenas
algumas substncias orgnicas de origem vegetal eram usadas para o controle de
pragas naquele perodo, como a nicotina, piretrina e rotenona (WHO, 1997).
A dcada de 1940 representou o incio da era moderna dos pesticidas
orgnicos, conhecida tambm como a poca da revoluo dos pesticidas, quando
o DDT (diclorodifeniltricloroetano) foi usado pela primeira vez como inseticida
(DAmato et al., 2002). Essa substncia havia sido sintetizada originalmente por
Zeidler em 1874, mas suas propriedades de inseticida s foram descobertas por
Paul Mller em 1939, o que rendeu a este pesquisador o prmio Nobel de medicina
em 1948 (DAmato et al., 2002). A partir de ento, o DDT passou a ser o principal
inseticida utilizado at a dcada de 1970, quando seu uso foi proibido em diversos
pases, principalmente devido aos problemas causados ao meio ambiente (DAmato
et al., 2002).
De modo geral, o controle de mosquitos pode ser voltado tanto para as
larvas quanto para os adultos. Os mtodos mais utilizados no controle de larvas so:
1) fsico, 2) qumico e 3) biolgico (Neves et al., 2001). O controle fsico consiste na
eliminao dos criadouros das larvas visando interrupo do ciclo dos mosquitos.
O controle qumico baseia-se na aplicao de produtos capazes de eliminar de
modo eficaz os espcimes. Finalmente, o controle biolgico consiste na utilizao de
organismos que, de modo natural, controlam as populaes de mosquitos.
Atualmente, tem sido dada bastante nfase ao controle integrado de
vetores (WHO, 2006). Essa modalidade consiste na utilizao de dois ou mais
mtodos de controle de forma simultnea ou seqencial (Neves et al., 2001; WHO,
2006). De modo geral, inclui a vigilncia entomolgica, reduo dos criadouros,
controles qumico e biolgico, manejo da resistncia a inseticidas, assim como
campanhas de educao voltadas para a populao (Rose, 2001).
O controle de vetores tem importncia fundamental no combate a uma
srie de doenas, como a malria (Rey, 2001), filariose linftica (Ottesen &
Ramachandran, 1995) e dengue (Gubler, 2002). Em muitas ocasies representa a
nica alternativa de diminuio da transmisso, principalmente nos casos de
8

enfermidades para as quais o desenvolvimento de uma vacina eficaz est em


andamento ou extremamente complicado.

1.2.1) Inseticidas qumicos


Os inseticidas podem ser definidos como uma nica substncia ou uma
mistura de substncias usada com a finalidade de eliminar ou reduzir determinada
populao de inseto (WHO, 1984, 2006). Os inseticidas so utilizados em diversos
campos de atividade humana; entretanto, as reas de agricultura e sade pblica
so as que recebem o maior aporte dessas substncias.
Todos os inseticidas, assim como qualquer pesticida, por natureza so
txicos em diferentes graus para diversas formas de vida, incluindo os mamferos.
Entretanto, eles tm lugar de destaque no que diz respeito ao controle de vetores,
pois o uso destas substncias est entre as metodologias mais usadas, tanto
sozinhas ou como parte de um manejo integrado (Rose, 2001). Alm disso, em
muitos casos, o uso de inseticidas qumicos representa a nica metodologia para o
controle da transmisso de doenas.
Existe uma srie de classes de compostos dentre os inseticidas. A
classificao em grupos baseada tanto nos efeitos fisiolgicos produzidos pela
substncia quanto pelo grau de similaridade qumica (WHO, 1984). Atualmente, os
principais inseticidas utilizados nos programas de controle de vetores esto
agrupados

em

quatro

grandes

classes:

organoclorados,

organofosforados,

carbamatos e piretrides. Todos tm como stio-alvo o sistema nervoso central do


inseto (Beaty e Marquardt, 1996; WHO, 2006).

1.2.1.1)

Organoclorados
Os organoclorados so inseticidas que contm carbono, hidrognio e cloro

em sua estrutura qumica. Estes compostos tambm so conhecidos como


hidrocarbonetos clorados, compostos orgnicos clorados ou tambm como
compostos clorados sintticos (Ware e Whitacre, 2004). Atualmente, a importncia
dos organoclorados principalmente histrica, j que cada vez mais esta classe
est em desuso. So os inseticidas mais persistentes dentre todas as classes. Eles
9

so rapidamente absorvidos pelo trato gastrointestinal; alguns podem ser


rapidamente absorvidos pelo simples contato com a epiderme. Devido a estas
caractersticas, tais substncias so altamente txicas aos seres humanos, a outros
animais e ao meio ambiente (WHO, 1997).
De modo geral, os organoclorados podem ser divididos em trs grupos: 1)
DDT e os anlogos do DDT, 2) Hexaclorohexanos e 3) Ciclodienos (WHO, 1997). O
modo de ao da maioria dos organoclorados nunca foi claramente estabelecido,
mas de algum modo complexo, eles impedem o balano de ons nos axnios dos
neurnios impedindo a transmisso normal do impulso nervoso, tanto em insetos
quanto

em

mamferos.

Aparentemente,

DDT,

seus

anlogos

os

Hexaclorohexanos agem diretamente no canal de sdio, impedindo o escoamento


dos ons. Por outro lado, os ciclodienos atuam no receptor de cido gamaaminobutrico (GABA) impedindo a entrada de ons cloreto nos neurnios (Ware e
Whitacre, 2004). Biologicamente, a ao dos organoclorados resulta em alteraes
de comportamento, distrbios sensoriais e do equilbrio, depresso dos centros
vitais, particularmente da respirao (DAmato et al., 2002).

1.2.1.2)

Organofosforados
Os osganofosforados (OPs) so assim chamados por possurem fsforo

em sua composio. Tambm so conhecidos como fosfatos orgnicos ou


inseticidas fosforados. A propriedade inseticida destas substncias foi primeiramente
observada na Alemanha na 2 Guerra Mundial durante os estudos dos gases
organofosforados, tais como sarim, somam e tabun (WHO,1997; Ware e Whitacre,
2004). Os OPs tm grande importncia no que diz respeito ao controle de vetores.
Os compostos deste grupo foram originalmente usados com o propsito de
combater pragas agrcolas, em funo da resistncia aos organoclorados; foram,
posteriormente usados no controle de vetores em Sade Pblica (WHO, 1997). Os
primeiros organofosforados utilizados com finalidade inseticida foram schradan e
tetraetil pirofosfato que, no entanto, apresentavam grande toxicidade para os
mamferos. Na dcada de 1950,

foi desenvolvido o malathion, primeiro

organofosforado com grande espectro de ao e baixa toxicidade aos mamferos.


Desde este perodo, muitos outros OPs foram desenvolvidos e muitos so,

10

atualmente, utilizados em programas de controle de mosquitos, como o fenthion,


temephos e fenitrothion (WHO, 1997).
Os OPs agem atravs da inibio da ao da Acetilcolinesterase, uma
importante enzima do sistema nervoso. A inibio da funo desta enzima resulta no
acmulo de acetilcolina nas sinapses neuronais e neuro-musculares, provocando
rpidas contraes nos msculos voluntrios, que levam paralisia seguida de
morte (WHO, 1984; Ware e Whitacre, 2004).
No Brasil, desde 1967 OPs vm sendo usados no combate ao Ae. aegypti.
Seu uso intensivo, durante dcadas, principalmente do larvicida temephos, culminou
com a perda da efetividade desta classe de inseticidas em vrias regies do pas,
devido ao desenvolvimento de resistncia do vetor (Lima et al., 2003; Braga et al.,
2004).

1.2.1.3)

Carbamatos
Os

carbamatos

so

inseticidas

derivados

do

cido

carbmico,

desenvolvidos em 1947 na Sua (WHO, 1997). O primeiro produto desta classe


utilizado com sucesso foi o carbaril que, por possuir baixa toxicidade aos mamferos
e um amplo espectro de ao no que concerne o controle de insetos, tornou-se o
mais popular dos carbamatos (Ware e Whitacre, 2004). Alm do carbaril, outros
integrantes deste grupo desempenham importante papel em Sade Pblica.
Propoxur, por exemplo, tem sido amplamente utilizado nos programas de controle da
malria, particularmente em reas onde a resistncia aos OPs verificada (WHO,
1997).
Assim como os organofosforados, os carbamatos so inibidores diretos da
Acetilcolinesterase. Entretanto, a inibio da enzima pelos carbamatos reversvel e
bastante rpida, raramente excedendo mais de uma hora. Desse modo, embora os
sintomas da ao dos carbamatos sejam rpidos e severos, so curtos em relao
aos efeitos dos oranofosforados (WHO, 1984).

11

1.2.1.4)

Piretrides
Os piretrides compreendem a mais antiga classe de inseticida de origem

natural usada atualmente, alm de estarem entre os compostos mais seguros ao


meio ambiente (WHO, 1984). Os piretrides compreendem uma mistura de vrios
steres chamados piretrinas, que so substncias extradas de flores pertencentes
ao gnero Chrysanthemum, particularmente, Chrysanthemum cinerariaefolium (Ware
e Whitacre, 2004). Embora as piretrinas naturais sejam bastante instveis luz e
temperatura, os piretrides sintticos foram desenvolvidos no sentido de possurem
maior estabilidade frente aos fatores abiticos, assim como maior atividade
inseticida (WHO, 1984).
O primeiro produto comercial, allethrin, foi bastante utilizado no mercado
de Sade Pblica, especialmente no combate aos mosquitos. A primeira gerao
dos piretrides sintticos (phenothrin e tetramethrin) era relativamente instvel luz,
assim como as piretrinas naturais. Durante a dcada de 1970, houve grande
progresso na produo de piretrides estveis luz solar, como a permetrina e a
cipermetrina (WHO, 1997). Estes compostos, bastante eficazes, podem ser usados
em pequenas concentraes, causando pouca contaminao do meio ambiente.
Quando comparados com os organoclorados e organofosforados, apresentam baixo
grau de toxicidade ao homem e a outros animais (Beaty e Marquardt, 1996).
A maioria dos piretrides apresenta mecanismo de ao similar ao do
DDT. Aparentemente, mantm o canal de sdio aberto nas membranas neuronais.
Isso faz com que as clulas nervosas produzam descargas eltricas repetitivas,
causando eventualmente paralisia e morte (Ware e Whitacre, 2004).

1.2.2) Resistncia a inseticidas


A evoluo da resistncia de insetos aos inseticidas tem se tornado um
dos grandes entraves aos programas de controle de vetores envolvendo o uso de
produtos qumicos. Os casos registrados de resistncia se intensificaram com a
introduo dos inseticidas organo-sintticos por volta de 1940. Na dcada de 1990 j
havia registro de mais de 500 espcies de insetos e caros resistentes a pelo menos
uma classe de composto qumico (IRAC-BR, 2006). Atualmente, j foi detectada

12

resistncia

praticamente

todos

os

grupos

de

inseticidas,

incluindo os

organoclorados, organofosforados, carbamatos e piretrides.


Dentre as conseqncias drsticas da aquisio da resistncia esto a
aplicao mais freqente de inseticidas, o aumento na dosagem, o uso de misturas
indevidas de produtos e a substituio por outros compostos, geralmente de maior
toxicidade (IRAC-BR, 2006). Estes fatores esto relacionados com a maior
contaminao do meio ambiente, destruio de organismos benficos e elevao
nos custos dos programas de controle.
A resistncia aos inseticidas pode ser funcionalmente definida como a
habilidade de uma linhagem de insetos de sobreviver a doses de um composto
txico, letais para a maioria dos indivduos de uma linhagem susceptvel da mesma
espcie (Beaty e Marquardt, 1996). No incio, estima-se que a freqncia de alelos
que conferem resistncia em uma populao bastante baixa (Roush e Mckenzie,
1987). Com o uso contnuo e massivo de um mesmo produto, a freqncia de
indivduos resistentes pode alcanar nveis em que a eficcia do produto
comprometida naquela populao especfica (ffrench-Constant, 2006).
A resistncia de um determinado organismo pode ser manifestada para
dois ou mais compostos qumicos distintos atravs da resistncia cruzada ou
resistncia mltipla. A primeira ocorre quando um nico mecanismo confere
resistncia a dois ou mais compostos. Por outro lado, a resistncia mltipla ocorre
quando pelo menos dois diferentes mecanismos coexistentes conferem resistncia a
dois ou mais compostos qumicos (IRAC-BR, 2006).
A resistncia a inseticidas pode se dar atravs de diferentes mecanismos,
sejam eles fisiolgicos ou bioqumicos. De modo geral, pode ser dividida em quatro
categorias:
a) comportamental: A resistncia comportamental resulta de uma srie
de aes que conferem a uma populao de insetos habilidade para evitar uma dose
letal de um inseticida (Lockwood et al., 1984). Esta habilidade, que pode ou no
estar ligada a fatores genticos (Sparks et al., 1989), em geral estmulodependente, ou seja, est relacionada com o fato de uma populao de insetos
evitar determinado ambiente aps a deteco do inseticida. Tal forma de resistncia
geralmente ocorre com inseticidas que so aplicados em iscas ou em superfcies,
tais como o DDT (Lockwood et al., 1984). Estudos de campo na frica, ndia, Brasil
e Mxico apresentam muitos indcios de resistncia comportamental de vetores de
malria ao DDT: os mosquitos evitavam o inseticida, no freqentando as casas
13

onde havia sido aplicado o DDT, ou saam rapidamente delas (Roberts e Andre,
1994).
b) penetrao reduzida: a reduo da penetrao cuticular outro
mecanismo fisiolgico que pode permitir a sobrevivncia do inseto quando exposto a
determinado inseticida. Neste caso, como a taxa de penetrao do inseticida atravs
da cutcula reduzida, menor quantidade do xenobitico alcana o organismos e os
mecanismos de detoxificao internos presentes no inseto tm maior probabilidade
de metabolizar o inseticida (IRAC-BR, 2006). Apesar da penetrao reduzida
raramente ocorrer, ela responsvel por nveis dramticos de resistncia a diversas
classes de inseticidas. No existem relatos dos processos fisiolgicos ou dos
mecanismos moleculares envolvidos neste tipo de resistncia (Raymond et al.,
1989).
c) metabolizao dos inseticidas: a metabolizao dos inseticidas est
relacionada com o aumento da eficincia dos mecanismos enzimticos de
detoxificao naturais do inseto (resistncia metablica). Este aumento de eficincia
promove a inativao e eliminao do inseticida, impedindo que o mesmo alcance o
sistema nervoso, seu stio final de ao (Brogdon e McAllister, 1998; Hemingway e
Ranson, 2000). Trs principais grupos de enzimas, quando alteradas, so
responsveis pela resistncia metablica: Esterases, Oxidases de funo mista (ou
Monoxigenases P450), e Glutationa-S-Transferases (GSTs).
A superproduo de Esterases considerada uma resposta presso de
seleo por organofosforados ou carbamatos. Este fenmeno tem sido verificado em
uma srie de artrpodes, tais como mosquitos, carrapatos e baratas (Hemingway et
al., 2004). As Esterases amplificadas podem rapidamente seqestrar o inseticida,
impedindo-o de chegar ao stio-alvo (Karunaratne et al., 1993). Adicionalmente,
mudanas qualitativas na enzimas podem ser responsveis pela rpida hidrlise e
detoxificao de inseticidas (Hemingway et al., 2004).
As Oxidases de funo mista (MFO), comumente citadas como
Monoxigenases P450, constituem uma grande famlia de enzimas encontradas
desde bactrias at mamferos. Estas molculas esto envolvidas no metabolismo
de compostos endgenos e exgenos (Ren, 1999). Existem relatos que
demonstram que intensa atividade de Monoxigenases P450 est relacionada com
resistncia a inseticidas em mosquitos (Berg et al., 1998). Experimentos de
presso de seleo com Ae. aegypti tm sugerido que as P450 representam a
principal classe enzimtica envolvida na resistncia metablica a piretrides (Kumar
14

et al., 2002). Alm disto, como as P450 podem estar envolvidas com o metabolismo
de virtualmente todas as classes de inseticidas, levando ativao de xenobiticos
ou, mais freqentemente, sua detoxificao (Berg et al., 1998; Hemingway e
Ranson, 2000), esta famlia de enzimas a mais importante no fenmeno da
resistncia cruzada. Por exemplo, presso de uma populao de A. aegypti, em
laboratrio, com o OP temephos, por algumas geraes sucessivas, aumentou sua
resistncia ao piretride deltametrina em mais de 300 vezes. Ensaios com
sinergistas indicaram o envolvimento das P450 neste fenmeno (Rodriguez et al.,
2002).
Assim como as Monoxigenases P450, as Glutationa S-transferases
(GSTs) so amplamente difundidas entre os seres vivos e tambm tm como funo
primria a detoxificao de compostos endgenos e exgenos (Hemingway et al.,
2004). A elevada atividade das GSTs tambm est envolvida na resistncia a
inseticidas. Em geral, ocorre devido ao aumento quantitativo de um ou mais tipos de
GSTs, resultado de amplificao de genes, do aumento dos nveis transcricionais ou
de mudanas qualitativas nas enzimas (Ranson e Hemingway, 2005).
d) modificao do stio-alvo do inseticida: pequenas modificaes,
como uma mutao pontual no stio-alvo dos inseticidas, podem diminuir ou anular a
afinidade entre o inseticida e seu receptor no organismo do inseto (Beaty e
Marquardt, 1996). A Acetilcolinesterase, por exemplo, quando alterada, est
relacionada com resistncia a organofosforados e carbamatos (Ayad e Georghiou,
1979; Penilla et al., 1998). Mutaes pontuais nos receptores de GABA esto
relacionadas resistncia a ciclodienos, tais como dieldrin (Hemingway et al., 2004).
Da mesma maneira, alteraes no canal de sdio dos insetos podem ser
responsveis pela resistncia aos piretrides (Soderlund e Kniple, 2003).

1.3)

Alternativas de controle
Com o intuito de contornar o problema da resistncia a inseticidas, vrios

outros caminhos tm sido estudados, objetivando solues alternativas e racionais


no que diz respeito ao controle de vetores. Alguns exemplos so o controle biolgico
e o uso de reguladores do desenvolvimento de insetos (IGRs, do ingls Insect
Growth Regulators), que compreendem, entre outros, os hormnios juvenis (JHs, do
15

ingls juvenile hormones) e seus anlogos sintticos (JHAs, do ingls juvenile


hormone analogues) e os inibidores da sntese de quitina (CSIs, do ingls chitin
synthesis inhibitors).

1.3.1) Controle biolgico


Existem diversos relatos na literatura sobre o uso de fungos, predadores
naturais e bactrias no controle de mosquitos (Donalseo e Glaser, 2002; Federici et
al., 2003; Polanczyk et al., 2003; Scholte et al., 2004). Entretanto, merece destaque
na rea da Sade Pblica a bactria Bacillus thuringiensis (Bt). As bactrias
pertencentes ao gnero Bacillus possuem uma fase de esporulao caracterstica no
seu desenvolvimento, na qual o esporo bacteriano e cristais proticos so
simultaneamente formados. Tais cristais, tambm chamados de -endotoxinas ou
ICPs (do ingls, insecticidal crystal proteins), so codificados pelos chamados
genes cry (Schnepf et al., 1998).
As ICPs ligam-se a receptores especficos no tubo digestivo das larvas,
modificando sua conformao e causando o vazamento de ons, com conseqente
dano osmtico das clulas. Estes fenmenos levam degradao do intestino e
morte do inseto. Tal efeito txico no se estende a outros organismos que no
tenham tais receptores compatveis, como seres humanos, peixes e animais
selvagens (Hofte e Whiteley, 1989). Sugere-se que a especificidade destas toxinas
deve-se a uma co-evoluo com protenas receptoras de superfcie no intestino
mdio dos insetos-alvo sensveis (Crickmore et al., 1998). Vrias formas destas
ICPs so sintetizadas por diferentes cepas de Bacillus thuringiensis j identificadas
e catalogadas, as quais possuem distintos espectros, especificidades e eficincia de
ao inseticida (Crickmore et al., 1998). Apesar de Bacillus thuringiensis apresentar
excelente seletividade, sua persistncia em campo relativamente baixa, o que
pode comprometer consideravelmente o controle de vetores em Sade Pblica
(Lima et al., 2005).

16

1.3.2) Reguladores do desenvolvimento de insetos (IGRs)


Uma nova metodologia de controle de insetos baseia-se no uso de
substncias que alteram seu crescimento e desenvolvimento normal (Tunaz e
Uygun, 2004). Substncias qumicas que interferem ou so capazes de induzir
alteraes nestes processos so comumente conhecidas como reguladores do
desenvolvimento dos insetos, ou somente pela sigla IGR, do ingls Insect Growth
regulator (Siddal, 1976; Mian e Mulla, 1982; Graf, 1993; Mulla, 1995; Mondal, 2000;
Tunaz e Uygun, 2004; WHO, 2006).
O incio das pesquisas sobre fisiologia e biologia com hormnios de
insetos comearam com o trabalho pioneiro de Wigglesworth na dcada de 1930.
Foi demonstrado que os processos de muda e metamorfose de ninfas do barbeiro
Rhodnius prolixus Stl, 1859 (Hemiptera: Reduviidae) eram regulados por hormnios
(Wigglesworth, 1934 apud Mian e Mulla, 1982). Posteriormente, com a extrao bem
sucedida de hormnio juvenil do abdmen de Hyalophora cecropia (Linnaeus, 1758),
e sua caracterizao em 1956, levantou-se a possibilidade de que estes compostos
pudessem ter um grande potencial no controle e manejo de populaes de insetos
prejudiciais ao homem (Williams, 1956).
Na dcada de 1970, Staal (1975) criou oficialmente o termo IGR para
descrever uma nova classe de compostos denominados bio-racionais. Estes
compostos, definidos com base no seu mecanismo de ao, compreendem qualquer
substncia capaz de acelerar ou inibir processos fisiolgicos regulados, essenciais
ao desenvolvimento normal do inseto ou sua prognie (Siddal, 1976). Os inseticidas
qumicos tradicionais no podem ser includos nesta classe, j que seus
mecanismos de ao no esto relacionados com a interferncia na regulao do
crescimento dos insetos (Siddal, 1976; Tunaz e Uygun, 2004). Alm disso, os IGRs
no so necessariamente txicos aos insetos-alvo, pois no tm como efeito
primrio a morte. Os IGRs atuam principalmente durante o desenvolvimento do
inseto, incluindo o desenvolvimento embrionrio e larval, prejudicando a muda e a
metamorfose (Beaty e Marquardt, 1996). Dessa maneira, na maioria dos casos, tais
compostos requerem mais tempo para reduzir populaes de insetos, quando
comparados aos inseticidas convencionais (Graf, 1993). Apesar dos IGRs afetarem
principalmente os estgios imaturos dos insetos, existem alguns registros que
apontam uma srie de problemas nos adultos resultantes de doses subletais, de

17

modo que sua viabilidade extremamente reduzida (Vasuki, 1992; Vasuki e Rajavel,
1992; Vasuki, 1999).
Os IGRs tm sido utilizados no controle de mosquitos vetores de doenas
em Sade Pblica (WHO, 2006). Em geral, so seguros para peixes, pssaros,
mamferos e para a maioria dos organismos aquticos no-alvo (Mian e Mulla, 1982;
WHO, 2006). Alm disso, apresentam toxicidade extremamente baixa para os seres
humanos.
Com base no modo de ao, os IGRs so classificados em trs categorias
principais: (1) hormnios juvenis e seus anlogos, tambm conhecidos como
juvenides ou mmicos, (2) agonistas da ecdisona (hormnio envolvido na muda) e
(3) inibidores da sntese de quitina (CSI, do ingls chitin synthesis inhibitor) (Staal,
1975; Marx, 1977; Graf, 1993; Boudjelida et al., 2005).

1.3.2.1)

Anlogos de hormnio juvenil


A ocorrncia de hormnios juvenis (JHs) em insetos foi primeiramente

observada por Wigglesworth na dcada de 1930 (Graf, 1993). Os JHs so


produzidos, na maioria das espcies de insetos, pelo corpus allatum, um pequeno
rgo situado na base do crebro, e tm a funo de inibir a metamorfose at que a
larva esteja em momento fisiolgico adequado (Williams, 1956, 1958).
Existem vrios tipos de JHs conhecidos (JH1-3; JH-0 e iso JH-0), de modo
que qualquer distrbio no balano normal desses hormnios pode resultar em uma
desordem crucial no crescimento e desenvolvimento do inseto. Os JHs so
responsveis pela regulao de processos-chave no inseto, como a embriognese,
muda, metamorfose, reproduo e diapausa (Chapman, 1998). Com base nestas
informaes, Williams (1956) postulou que os hormnios de insetos poderiam ser
uma ferramenta excelente de controle, j que seria muito improvvel que os insetos
desenvolvessem resistncia aos seus prprios hormnios (Williams, 1958).
Entretanto, apesar de os JHs terem um grande potencial para o controle de insetos,
sua instabilidade e dificuldade de sntese interferiram com sua utilizao efetiva e
em larga escala (Tunaz e Uygun, 2004). Posteriormente, uma srie de anlogos dos
JHs foram sintetizados e se tornaram grandes atrativos para uso em controle de
vetores, principalmente por serem fceis de sintetizar e relativamente seletivos. O
primeiro anlogo de hormnio juvenil (JHA) introduzido no mercado foi methoprene
18

(Tunaz e Uygun, 2004); hoje outros JHAs, como piriproxifen e fenoxicarb, esto
disponveis (Mulla et al., 1985; Schaefer et al., 1987; Vythilingam, 2005; Seng;
2006).
Os JHAs interferem com importantes mecanismos bioqumicos, tais como
a secreo e o transporte dos hormnios juvenis naturais do stio de secreo para o
stio de ao, ou para os locais de degradao e excreo (Retnakaran et al., 1985).
Seus efeitos biolgicos so muito complexos e variam de acordo com o tipo de
anlogo utilizado. Por exemplo, o JHA hidroprene pode estimular a sntese de JH
endgeno quando presente em baixas doses, mas pode ter efeito contrrio quando
administrado em grandes quantidades (Tobe e Stay, 1979).
Apesar de o efeito dos JHAs ocorrer principalmente nos estgios imaturos
(Axtell et al., 1979; Ali et al., 1995; Braga et al., 2005), existem alguns relatos que
evidenciam que adultos sobreviventes de exposio a pequenas doses possuem
alteraes fisiolgicas que comprometem sua sobrevivncia e reproduo (Arias e
Mulla, 1975; Sawby et al., 1992; Ritchie et al., 1997). Ritchie et al. (1997) verificaram
que baixas doses de methoprene diminuram a capacidade de Aedes vigilax (Skuse,
1889) de realizar o repasto sangneo. De modo geral, os adultos sobreviventes se
soltam da exvia com dificuldade (Kramer et al., 1993), apresentam longevidade
reduzida (Sawby et al., 1992), problemas morfolgicos (Arias e Mulla, 1975) e
reprodutivos (Sithiprasasna et al., 1996).
Em um dos poucos relatos sobre o efeito de JHA administrado diretamente
aos adultos, Divakar e Rao (1975) verificaram que cerca de 80% de ovos de
Anopheles stephensi alimentados com soluo de methoprene eram pequenos,
frgeis e esbranquiados. Os autores sugeriram que methoprene provavelmente age
nas clulas foliculares do ovrio, interferindo com a formao normal do crion e o
desenvolvimento do ocito. Apesar destas evidncias, Braga et al. (2005), no
constataram problemas em ovos de Ae. aegypti resultantes de tratamento com
methoprene.
Trabalhos que tratam do desenvolvimento de resistncia a JHAs em
campo tambm so escassos. Dame et al. (1998) verificaram que uma linhagem de
Aedes taeniorhynchus (Wiedemann, 1821) da Flrida era 14,9 vezes mais resistente
ao methoprene do que uma linhagem susceptvel de laboratrio. Em alguns casos, a
resistncia prvia a outros inseticidas pode estar relacionada com algum nvel de
resistncia ou tolerncia aos JHAs (Ortega et al., 1991).

19

Methoprene e hidroprene, ambos desenvolvidos na metade da dcada de


1970, so os mais representativos dentre os JHAs. Methoprene, inclusive,
recomendado pela Organizao Mundial de Sade (WHO) para uso em gua
potvel, para o controle de Ae. aegypti (Chavasse e Yap, 1997). Entretanto,
formulaes de methoprene avaliadas em simulado de campo por Lima et al. (2005),
apresentaram baixo efeito residual nas condies climticas do Brasil.

1.3.2.2)

Agonistas da ecdisona

Os zooecdisterides (hormnios envolvidos na ecdise) tm funes


essenciais na ativao de genes que atuam na formao da cutcula, crescimento do
espermatcito e induo da diapausa (Chapman, 1998). Desta forma, a
administrao de seus agonistas acarreta uma srie de problemas fisiolgicos no
inseto exposto, tais como sntese prematura da cutcula (especialmente ao redor da
regio ceflica), que pode resultar, por exemplo, na ocluso de peas bucais e,
conseqentemente, em dificuldade de alimentao nos insetos (Boudjelida et al.,
2005). Esta classe de inseticidas relativamente nova, e inclui compostos como
tebufenozide, halofenozide, methoxyfenozide e chromafenozide (Ware e Whitacre,
2004). Os agonistas da ecdisona exercem toxicidade atravs de ligao no receptor
de ecdisona (do mesmo modo que a ecdisona natural), ativando assim a transcrio
gnica e o incio da muda em um momento fisiolgico no adequado ao inseto
(Boudjelida et al., 2005).
Assim como ocorre com a maioria dos IGRs, os adultos resultantes de
doses sub-letais de agonistas da ecdisona, apresentam longevidade reduzida,
diminuio do peso corporal e problemas reprodutivos (Darvas et al., 1992; Heller et
al., 1992). Os agonistas da ecdisona tambm so considerados seguros ao meio
ambiente e para a maioria dos organismos no-alvos, como macro-invertebrados e
insetos aquticos (Kreutzweiser et al., 1994; Addison, 1996).

1.3.2.3)

Inibidores da sntese de quitina


A quitina um dos polissacardeos mais difundidos na natureza,

juntamente com a celulose. Ela encontrada principalmente no exoesqueleto de


20

artrpodes, paredes celulares de fungos e tambm em nematdeos (Chapman,


1998). Este polissacardeo composto por resduos de N-acetilglicosamina ligados
entre si atravs de pontes glicosdicas. Os polmeros de quitina formam microfibrilas
com cerca de 3nm de dimetro que so estabilizados por pontes de hidrognio. De
modo geral, a quitina pode ser encontrada em trs formas, , e , que diferem
entre si principalmente no grau de hidratao, na disposio e no nmero de
microfibrilas (Merzendorfer e Zimoch, 2003). As trs formas so encontradas em
estruturas quitinosas dos insetos, sendo que a forma est mais presente nas
cutculas e a principalmente em casulos. A matriz peritrfica possui em sua
composio tanto a forma , quanto a forma (Merzendorfer e Zimoch, 2003).
A quitina considerada um dos principais componentes do exoesqueleto
dos artrpodes, conferindo-lhe forte rigidez e, em conseqncia, capacidade limitada
de crescimento corporal (Chapman, 1998). Portanto, para crescer e se desenvolver,
o inseto troca periodicamente sua cutcula por outra nova, durante processo
denominado muda ou ecdise. Antes da esclerotizao, os insetos expandem sua
nova cutcula e liberam seu antigo exoesqueleto, agora chamado de exvia (Carlson
e Benthey, 1977). Anlises da exvia de insetos revelaram, em algumas espcies, a
presena de pelo menos 40% de quitina em sua composio. A quitina encontrada
na exo- e endocutcula, mas no na epicutcula, a camada mais externa da cutcula.
Alm de estar presente no exoesqueleto, a quitina tambm componente
fundamental da matriz peritrfica (MP), estrutura que funciona como uma barreira de
permeabilidade entre o alimento ingerido e o epitlio intestinal. A MP desempenha
importantes funes, pois participa do processo digestivo e tambm da proteo do
epitlio intestinal contra danos mecnicos, assim como do ataque de toxinas e
patgenos (Terra, 2001). A MP consiste de um complexo de protenas,
glicoprotenas e proteoglicanas que se associam a microfibrilas de quitina
(Clements, 1992). Alguns insetos cessam completamente a produo da matriz
peritrfica durante os perodos de jejum ou muda. Desta forma, a matriz peritrfica
expelida ou reabsorvida e outra matriz se forma quando o animal volta a se
alimentar (Merzendorfer e Zimoch, 2003).
Uma vez que o desenvolvimento, o crescimento e muitos aspectos
fisiolgicos dos insetos so dependentes de sua capacidade de remodelar as
estruturas quitinosas, a sntese e a degradao da quitina so processos sob
regulao estrita, o que garante que a ecdise e a regenerao da matriz peritrfica
ocorram nos momentos apropriados (Merzendorfer e Zimoch, 2003). Ou seja, a
21

quitina representa um componente fundamental e singular para o desenvolvimento


dos artrpodes. Conseqentemente, a inibio ou a interferncia com processoschave relacionados ao metabolismo da quitina so consideradas importantes
alternativas para o desenvolvimento de inseticidas com novos mecanismos de ao.
Um grande nmero de substncias capaz de inibir a sntese de quitina in
vitro e in vivo, como, por exemplo, alguns fungicidas, herbicidas, hidrocarbonetos
clorados, fenilcarbamatos e as benzo-fenil-urias (BPUs) (Hajjar, 1985). Em relao
ao controle de insetos, os BPUs merecem destaque. Seu potencial de inibio da
sntese de quitina foi descoberto acidentalmente pelo cientista Philips-Duphar no
incio da dcada de 1970, durante suas pesquisas com herbicidas (Graf, 1993). O
primeiro BPU averiguado tinha baixo potencial herbicida, mas, curiosamente, larvas
de insetos que se alimentavam de plantas tratadas realizavam a muda com
dificuldade, alguns dias depois da alimentao. Este resultado inesperado culminou
com o desenvolvimento do diflubenzuron, o primeiro BPU usado comercialmente
(Graf, 1993), que foi a princpio utilizado no controle de pragas agrcolas, sendo
posteriormente utilizado em Medicina Veterinria para o controle de moscas. O
sucesso do diflubenzuron estimulou o desenvolvimento de outros BPUs por vrias
companhias qumicas. Alguns exemplos so o teflubenzuron, flufenoxuron e o
clorfuazuron, todos usados no controle de pragas agrcolas, assim como o
diflubenzuron.
O mecanismo de ao preciso dos CSIs ainda no completamente
conhecido (Cohen, 2001). Alguns autores sugerem que atuam principalmente
interferindo ou bloqueando a ao da Quitina-Sintase, enzima chave na
polimerizao da quitina (Cohen, 1987). Entretanto, outras hipteses sugerem que
possam impedir a translocao das microfibrilas de quitina na membrana plasmtica
(Nakagawa e Matsumura, 1994) ou ainda interferir com a regulao hormonal da
sntese de quitina, por influenciar a produo de ecdisterides (Fournet et al., 1995).
De modo geral, a maioria dos CSIs age principalmente sobre as larvas,
que geralmente tornam-se incapazes de sobreviver prxima muda, em razo de
deficincias em sua nova cutcula (Tunaz e Uygun, 2004). Alm do exoesqueleto,
outras estruturas com constituio quitinosa podem ser afetadas, como a matriz
peritrfica dos insetos e os ovos (Clements, 1992). Existem vrios relatos na
literatura sobre a eficincia destes compostos, principalmente a respeito do
diflubenzuron (Mian e Mula, 1982; Graf, 1993), do lufenuron (Wilson e Cryan, 1997),

22

do novaluron (Su et al., 2006) e do triflumuron (Sulaiman et al., 1994; Smith e Wall,
1998; Rehini e Soltani, 1999).
Alm de interferir com a sntese de quitina, os CSIs provocam uma srie
de efeitos secundrios que prejudicam o desenvolvimento dos insetos. Parween
(1998) verificou que larvas do coleptero Tribolium castaneum (Herbst, 1797),
quando tratadas com triflumuron, se alimentavam significativamente menos quando
comparadas com as no tratadas, apresentando desenvolvimento reduzido, alm de
um comprimento corporal menor. Vasuki (1992) verificou que a longevidade de
adultos de Cx. quinquefasciatus, An. stephensi e Ae. aegypti sobreviventes ao
tratamento com hexaflumuron era drasticamente reduzida. Em um trabalho posterior,
Vasuki (1999) tambm observou que estes trs culicdeos vetores ingeriam menos
sangue do que os indivduos no tratados, e, consequentemente, colocavam uma
quantidade menor de ovos. Em outros estudos, nos quais fmeas foram alimentadas
diretamente com CSIs, tambm se observou a diminuio da oviposio, alm de
uma menor viabilidade dos ovos (Miura et al., 1976; Wilson e Cryan, 1997; Senzde-Cabezn et al., 2006). Vasuki e Rajavel (1992) verificaram que hexaflumuron
provocou anormalidades visveis nos imaturos e adultos de Cx. quinquefasciatus,
Ae. aegypti e An. stephensi, muitas das quais relacionadas com a mortalidade
precoce dos adultos. Os adultos sobreviventes apresentavam asas e tarsos
defeituosos que dificultavam sua locomoo. Amir e Peveling (2004) tambm
observaram menor atividade de vo e comprometimento da prole em colnias de
abelhas, quando expostas ao triflumuron.
O inseticida Starycide (Bayer), cujo composto ativo o triflumuron, tem
sido usado no controle de diversos artrpodes. Como os CSIs tm alvo diferenciado
dos inseticidas clssicos, pode-se considerar seu uso como uma possvel alternativa
ao combate de populaes de culicdeos vetores, incluindo aquelas resistentes aos
inseticidas comumente utilizados.
Espera-se, portanto, que triflumuron provoque uma srie de problemas
que resultem na morte das larvas ou na emergncia de adultos fisiologicamente
debilitados. Neste contexto, no presente trabalho larvas de Ae. aegypti, Ae.
albopictus e Cx. quinquefasciatus foram expostas a vrias concentraes de
triflumuron, um inibidor da sntese de quitina. Alm disto, investigou-se o efeito de
doses subletais de triflumuron, aplicadas a larvas de Ae. aegypti, sobre os adultos
sobreviventes. Finalmente, investigamos a eficincia deste CSI sobre populaes de
campo de Ae. aegypti provenientes de diferentes localidades do Brasil, com distintos
23

nveis de susceptibilidade aos inseticidas qumicos utilizados em campanhas


nacionais de combate ao vetor.

24

1.4) Apresentao da dissertao

Aedes aegypti, Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus so trs espcies de


mosquitos difundidos principalmente nas regies tropicais e subtropicais do globo.
No Brasil, so exticas e esto relacionadas com a transmisso de doenas como a
dengue e a filariose linftica. Existe ainda grande preocupao com a possibilidade
de participao de tais vetores na transmisso de arboviroses emergentes e reemergentes, como o vrus do oeste do Nilo e o da febre amarela. Esta dissertao
apresenta o estudo, desenvolvido durante os ltimos dois anos, da eficcia de
triflumuron - um inibidor da sntese de quitina sobre estas trs espcies de
culicdeos vetores, visando contribuir com futuras estratgias de controle de
mosquitos de importncia sanitria no pas.
Na introduo foram apresentadas as principais classes de inseticidas
qumicos

utilizados

no

controle

de

culicdeos,

as

formas

de

resistncia

desenvolvidas e os mtodos alternativos de controle, com destaque aos reguladores


do desenvolvimento dos insetos (IGRs) e, entre estes, aos inibidores da sntese de
quitina. Na prxima seo encontram-se trs manuscritos em preparao que,
juntos, compem os resultados obtidos durante os ltimos dois anos de pesquisa. O
primeiro ser submetido ao peridico Pest Management Science e trata do efeito de
triflumuron sobre Ae. aegypti, cepa Rockefeller, e sobre duas populaes de campo,
uma susceptvel e outra resistente ao temephos. O segundo relata os efeitos
causados em Ae. aegypti sobreviventes ao tratamento com dose subletal de
triflumuron. Este texto ser submetido revista Medical and Veterinary Entomology.
Por fim, no ltimo manuscrito, a ser traduzido para o ingls e submetido ao peridico
Memrias do Instituto Oswaldo Cruz, avaliamos a eficcia de triflumuron sobre Ae.
albopictus e Cx. quinquefasciatus. Adicionalmente, foi avaliado o efeito da dosediagnstica (DD) e da IE99 (dose que inibe 99% da emergncia de adultos) para a
linhagem Rockefeller, sobre diversas populaes brasileiras de Ae. aegypti
resistentes, em graus variveis, aos dois principais inseticidas utilizados no pas.

25

2) Objetivos
2.1)

Objetivo geral

Avaliao do efeito de triflumuron sobre Aedes aegypti, Aedes albopictus e Culex


quinquefasciatus, em condies de laboratrio.

2.2)

Objetivos especficos

1) Avaliao do efeito de triflumuron sobre o desenvolvimento de larvas de Ae.


aegypti, Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus. Parmetros analisados:
1.1) cintica do desenvolvimento;
1.2) inibio da emergncia de adultos.
2) Avaliao do efeito de triflumuron sobre populaes de Ae. aegypti, oriundas do
campo, com diferentes nveis de susceptibilidade ao larvicida organofosforado
temephos e ao adulticida piretride deltametrina.
3) Estudo do efeito de doses parcialmente letais de triflumuron, aplicadas em larvas
de terceiro estdio de Ae. aegypti, sobre adultos sobreviventes. Parmetros
avaliados:
3.1) proporo sexual dos adultos resultantes;
3.2) longevidade;
3.3) atividade locomotora;
3.4) aceitao de repasto sangneo e quantidade de sangue ingerido pelas
fmeas;
3.5) sobrevivncia das fmeas aps ingesto de sangue;
3.6) aspectos da reproduo:
- taxa de fmeas inseminadas;
- taxa de fmeas que colocam ovos;
- quantidade de ovos colocados por fmea;
- taxa de fmeas que sobrevivem postura;
- viabilidade dos ovos.

26

3) Resultados
3.1) artigo 1: Effect of a chitin synthesis inhibitor on Aedes aegypti populations
susceptible and resistant to the organophosphate temephos

Autores: Ademir Jesus Martins, Thiago Affonso Belinato, Jos Bento Pereira
Lima, Denise Valle

27

Effect of a chitin synthesis inhibitor on Aedes aegypti populations susceptible


and resistant to the organophosphate temephos

Ademir Jesus Martins, Thiago Affonso Belinato, Jos Bento Pereira Lima, Denise
Valle
Laboratrio de Fisiologia e Controle de Artrpodes Vetores Departamento de
Entomologia Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ

Abstract: In Brazil, control of the dengue vector is impaired due to resistance of field
Aedes aegypti populations to organophosphates. Insect Growth Regulators are a
promising alternative, since their mechanisms of action are distinct from conventional
insecticides. We verified that triflumuron, a chitin synthesis inhibitor, arrests
development and induces mortality of the insecticide-susceptible strain Rockefeller in
a dose-dependent way (ED50 and ED90 of 0.8 and 1.8 g/L, respectively). A direct
relationship between triflumuron concentration and the precocity of its effects was
noted. The efficacy of triflumuron against two Ae. aegypti field populations was
equivalent, irrespective of their organophosphate resistance status: TemS and TemR
resistance ratios (RR90) against temephos was 4.5 and 13.8, while RR90 against
triflumuron was 1.0 and 1.3, respectively. These results point chitin synthesis
inhibitors as potential alternatives in the control of Ae. aegypti.

1 INTRODUCTION
In the last two decades the number of dengue and dengue hemorrhagic fever cases
increased in Brazil.

In addition, several reports point to the risk of yellow fever re-

urbanization in the country2,3. Both situations are correlated to the presence and the

28

high infestation levels of Aedes aegypti mosquitoes in a growing number of localities,


since its reintroduction in Brazil.4-6
In Brazil, the use of organophosphate (OP) insecticides against Ae. aegypti was
intensified since 1986, when the first recent dengue outbreak took place.7 The OP
temephos was the sole larvicide utilized at that time. Mosquito resistance to
temephos was confirmed 10-15 years later,8-10 mostly as a result of the Brazilian
Aedes aegypti Resistance Monitoring Network, established in 1999.11 As a
consequence, the Brazilian Health Ministry substituted temephos for the biolarvicide
Bacillus thurigiensis var israelensis (Bti) in the localities with resistant Ae. aegypti.9
However, the low residual effect of Bti formulations available to the Brazilian Dengue
Control Program12,13 pointed to the need of novel formulations, or larvicides.
The conventional insecticides employed in Public Health act on the insect central
nervous system and are subjected to redundant enzymatic detoxification pathways, a
situation that favors cross resistance among compounds of different classes. In this
sense, Insect Growth Regulators (IGR) emerge as a promising alternative, since their
target sites and mechanisms of action are distinct from the classical insecticides.14
This is the case of benzoylphenylurea (BPU) compounds, IGRs that inhibit chitin
synthesis, and can potentially interfere with the metamorphosis process, as well as
with insect digestion and reproduction.15,16
In the present work the effect of triflumuron, a BPU compound, on the mortality and
reproduction of a laboratory Ae. aegypti strain was analyzed. Subsequently two
Brazilian Ae. aegypti populations, one resistant and one susceptible to the OP
temephos, were exposed to triflumuron and lethal concentrations were compared.
The results point to the perspective of utilization of this IGR class in the control of the
dengue vector populations resistant to conventional insecticides.

29

2 MATERIALS AND METHODS


2.1 Mosquitoes
Mosquitoes from the insecticide susceptible Rockefeller (Rock) strain, reared
continuously in the laboratory, were used to evaluate triflumuron effects and to
compare with field populations. Temephos resistant (TemR) and susceptible (TemS)
field populations derived from Rio de Janeiro, RJ and Porto Velho, RO cities,
respectively10. In both cases F1 mosquitoes, obtained as described by Braga et al
2004,10 were employed.

2.2 Insect Growth Regulator


The chitin synthesis inhibitor triflumuron (Starycide SC 0.48, BayerCropscience) was
utilized in all cases. Aliquots of 150ng/L were prepared in dechlorinated water and
diluted to specified concentrations.

2.3 Bioassays
In order to synchronize larvae age, eggs were allowed to hatch for one hour. Groups
of 1,000 larvae were reared in 33 X 24 X 8 cm plastic containers with 1L of
dechlorinated water and small amount cat food (Friskies, Purina, Camaqu/RS),
added only once. Larvae were kept at 26C into a BOD incubator (Electrolab) during
three days, when the beginning of L3 instar was reached.
Four replicas of transparent plastic cups filled with 150 mL dechlorinated water
(control) or triflumuron solutions of varying concentrations (0.5 to 5.0 g/L) and a
small amount of food, added on the first day, were prepared. Each replica contained
20 L3 larvae and each assay was performed four times.

30

Dead and alive larvae, pupae and adults were scored daily until death or adult
emergence of all individuals. Dead specimens and alive adults were removed from
the test cups daily. Adults that survived less than 24 hours were considered dead.

2.4 Evaluation criteria and statistical analysis


Trifumuron dose-response assays were submitted to log-probit transformation and
effective doses (mortality and emergence inhibition, EI) were calculated through
linear regression analysis with a confidence interval of 95%17. Resistance ratios were
calculated by comparison with results obtained with the reference strain, Rockefeller.
The criteria proposed by Mazzarri and Georghiou (1995)18 were used to classify
resistance ratios in high (>10 fold), moderate (between 5 and 10) and low (<5). The
total mortality and EI dose-dependent curves were compared by ANOVA, performed
using GraphPad Prism version 4.00 for Windows, GraphPad Software.

3 RESULTS AND DISCUSSION


Figure 1 shows EI and mortality non-linear regression curves obtained from data at
the 14th day of triflumuron exposure. Triflumuron inhibits the development and
induces mortality of Ae. aegypti Rockefeller strain in a dose-dependent way.
Although no significant difference between both curves was noted (F.05[4,58] P>0,05),
EI was the parameter considered for subsequent evaluations: it was reasoned that,
since chitin synthesis inhibitors (CSI) interfere with cuticle formation, insects become
more susceptible to physical injuries, infections and other physiological constraints
that can be directly responsible for their death, instead of the CSI itself. Similarly, the
main effect of the juvenile hormone analog methoprene, another IGR, is to disturb
development, mortality being an indirect consequence.19 It is precisely for this reason
that CSI bioassays need several days to be accomplished.

31

A direct relationship between triflumuron concentration and the precocity of its effects
was noted: the proportion of dead larvae increased in high triflumuron
concentrations, while the opposite was observed with the rate of adults (Figure 2).
The same has been previously observed for other IGR compounds.19-21
Table 1 and Figure 3 show results obtained with the exposure of mosquitoes from
two Ae. aegypti field populations to temephos or triflumuron. According to the criteria
proposed by Mazzari and Georghiou (1995),18 one population, TemR, is highly
resistant and the other, TemS, susceptible to temephos (Table 1). Triflumuron
induced a dose-dependent adult emergence inhibition effect in both populations.
However, comparison with results obtained for the insecticide susceptible strain
Rockefeller revealed no triflumuron resistance, even in the TemR population. In
opposition to temephos induced mortality, no significant difference was noted for
triflumuron EI lines shown in Figure 3 (F.05 [2,16]; P>0,05).
Chitin synthesis inhibitors are a good potential alternative against Ae. aegypti
populations resistant to conventional insecticides. We showed that two Brazilian field
populations, one of which resistant to the OP temephos, are as susceptible to the
BPU triflumuron as one insecticide-susceptible laboratory strain. Considering
triflumuron acts on chitin synthesis, this compound is not expected to be harmful to
vertebrates. Although the use of another CSI in potable water has already been
approved by WHOPES,22 when triflumuron is taken into account, toxicological assays
are still needed. We are presently evaluating the effects of sublethal triflumuron
concentrations on the development and reproduction of resulting Ae. aegypti adults.

ACKNOWLEDGEMENTS
This work was supported by the Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e
Tecnolgico (CNPq), Fundao de Amparo Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro

32

(Faperj),

Fundao

Oswaldo

Cruz

(FIOCRUZ)

and

Coordenao

de

Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (Capes). We are grateful to


BayerCropscience for the triflumuron sample.

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33

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34

17. Raymond

M.

Presentation

dune

programme

danalyse

logprobit

pour

microordinateur cahiers Orstrom. Sr Ent Med Parasitol 22: 117-121(1985).


18. Mazzari

MB

and

Georghiou

GP.

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to

organophosphate, carbamate, and pyrethroid insecticides in field populations of


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35

Legends to figures:

Figure 1. Effect of the chitin synthesis inhibitor triflumuron on the mortality and adult
emergence inhibition (EI) rates of Aedes aegypti, Rockefeller strain. The non-linear
regression curves shown were obtained after 14 days of exposure of L3 larvae.

Figure 2. Stage-specific induced mortality of Aedes aegypti exposed to different


triflumuron concentrations at the L3 larva instar.

Figure 3. Linear regression curves of Aedes aegypti (A) mortality after 24 hours
exposure to temephos or (B) adult emergence inhibition (EI) after 14 days in contact
with triflumuron.

36

Figure 1
100
80

60
40

EI
mortality

20
0
0

g/L triflumuron

Figure 2:

% Mortality

100
80
60

larvae
pupae
adult

40
20
0
0.0 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 2.0 5.0

g/ L triflumuron

Figure 3
B
100

100

80

80

60

60

% EI

% mortality

40

40

Rock

20

20

TemS

0
-4

-3

-2

log [temephos] (
g/L)

-1

TemR
-1

log [triflumuron] (
g/L)

37

Table 1. Resistance ratios to temephos and to triflumuron of Ae. aegypti F1 larvae from field populations. Comparison with results
obtained for the insecticide susceptible reference strain Rockefeller.

temephos

triflumuron

ED50

RR50

ED90

RR90

slope

ED50

RR50

ED90

RR90

slope

Rock

0.00139

0.00198

8.32 0.39

0.864

1.804

4.01 0.34

TemS

0.00581

4.2

0.00893

4.5

6.84 0.27

1.142

1.3

1.882

1.0

5.91 0.51

TemR

0.01522

10.9

0.02733

13.8

5.04 0.25

1.588

1.8

2.304

1.3

7.92 1.31

In all cases, ED50 and ED90 are expressed in g/L.

38

3.2) artigo 2: Exposure of Aedes aegypti larvae to a chitin synthesis inhibitor sublethal dose: effects on the viability and reproduction of adults

Autores: Thiago Affonso Belinato, Ademir Jesus Martins, Jos Bento Pereira
Lima, Tamara Nunes de Lima-Camara, Alexandre Afrnio Peixoto, Denise Valle

39

Exposure of Aedes aegypti larvae to a chitin synthesis inhibitor sub-lethal


dose: effects on the viability and reproduction of adults

Thiago Affonso Belinato, Ademir Jesus Martins, Jos Bento Pereira Lima, Tamara
Nunes de Lima-Camara, Alexandre Afrnio Peixoto, Denise Valle

Abstract. Control of Aedes aegypti is impaired due to development of resistance to


chemical insecticides. Insect Growth Regulators (IGR) exhibit distinct mechanisms of
action and are considered potential vector control alternatives. Studies regarding the
effects of IGR sublethal doses on the viability of resulting adults will contribute to
evaluate their impact in the field. We analyzed several aspects of Ae. aegypti adults
surviving exposure to a partially lethal dose of triflumuron, a chitin synthesis inhibitor.
A highly significant difference in the proportion of males and females was noted in
the triflumuron-exposed (65.0% males) group, compared to the controls (50.2%
males). Triflumuron affected adult longevity, in particular females: after 16 days, only
29.2% males and 13.8% females were alive, in contrast with 94% survival of control
mosquitoes. The locomotor activity was reduced and the blood feeding ability of
treated females was also affected (90.4% and 48.4% of control and triflumuronexposed females, respectively, successfully ingested blood). Triflumuron-surviving
females ingested roughly 30% less blood and laid 25% less eggs than control ones.
Treated males and females exhibit a diminished ability to copulate, resulting in less
viable eggs.
Key words. Triflumuron, Aedes aegypti, Sublethal effects, Chitin synthesis inhibitor.

40

Introduction
The mosquito Aedes aegypti (L), widely distributed in the tropical and subtropical
regions, is highly adapted to the urban environment. It is frequently found inside or
near the houses, and it plays an important role in the transmission of arboviroses,
such as dengue and urban yellow fever (Consoli & Loureno-de-Oliveira, 1994;
Gubler, 2002).
Nowadays Ae. aegypti control is mainly performed with chemical larvicides that target
the insect central nervous system. However, the long historic of insecticide use has
led to the development of resistant populations all over the world. In this sense, the
study of novel tools to control Ae. aegypti and other insects of medical importance is
a major area of interest (Zaim & Guillet, 2002).
An alternative vectors control approach is the use of compounds with distinct
mechanisms of action and target sites, like the Insect Growth Regulators (IGR).
Those include the juvenile hormone analogs, the ecdysone agonists and the chitin
synthesis inhibitors (CSI) (Graf, 1993; Tunaz & Uygun, 2004).
Chitin synthesis inhibitors are benzoylphenylurea compounds discovered in the
decade of 1970 (Mian & Mula, 1982) that interfere with insect development,
disturbing the molt and resulting in deformations in the cuticle (Reynolds, 1987).
Additionally, adults deriving from CSI-exposed larvae can exhibit a series of
physiological constraints that ultimately lead to a diminished physical and
reproductive fitness (Mondal & Parween, 2000). These CSI effects vary according to
the species, developmental stage at the time of application, kind of compound and
administered dose (Wilson & Cryan, 1997; Mulla et al., 2003; Vasuki & Rajavel,
1992). Although several reports in the literature deal with CSI induced mortality or
adult emergence inhibition (Su et al., 2003; Rehini & Soltani, 1999; Batra et al.,

41

2005), CSI effects on the surviving adults and their implications in the vector fitness
are less exploited, especially when Culicidae are considered (Vasuki, 1992; Vasuki &
Rajavel, 1992; Vasuki, 1999).
Aedes aegypti is a domestic mosquito whose breeding sites, mostly water storage
recipients for human use, are subjected to frequent volume variations, resulting in
decrease of the insecticide residual effect. In this sense, detailed studies of CSI
effects of sublethal doses on the viability of resulting adults will contribute to evaluate
their impact in the field.
We confirmed the effectiveness of triflumuron against field Ae. aegypti populations,
including one strain resistant to the organophosphate temephos (Martins et al.,
2007). In the present study we evaluated the effects of exposure of Ae. aegypti
larvae to a partially lethal dose of the CSI triflumuron on the resulting adults. Several
parameters were investigated, such as the proportion of surviving males and
females, adult longevity and activity, blood feeding, mating and viability of the eggs.

Materials and methods

Mosquitoes
Mosquitoes from the Rockefeller strain, an insecticide susceptible reference lineage,
were reared according to standard procedures (Braga et al., 2005) at 25 1 C and
80% r. h.

Bioassays
Starycide SC 0.48 (Bayer) was employed to prepare a stock solution of triflumuron
at 48 g/mL in DMSO (dimethyl sulfoxide) and aliquots were stored at -80C.

42

Working solutions were prepared in dechlorinated water. Transparent plastic cups


with groups of 10 L3 larvae were exposed to 150 mL of 0.7-0.9 g/L triflumuron
solution, a concentration close to the EI50 dose (Martins et al. 2007). One milliliter of
a 2.5% (w/v) solution of grounded cat food (Friskies, Purina, Camaqu/RS) was
supplied once. Control larvae were exposed to the same DMSO volume used in the
triflumuron samples (2 l). Dead specimens and resulting adults were collected daily.
A total of 80 experimental and 30 control groups of ten larvae were used in each
assay. Unless stated, for each parameter evaluated three bioassays were performed.

Male/female rate
Newly emerged adults surviving from triflumuron exposure were daily removed from
the cages and numbers of males and females from both experimental and control
cages were scored.

Longevity
Triplicate pools of 15 newly adult emerged couples derived from triflumuron-exposed
or control larvae were placed in small carton cages (8.5 cm diameter X 8.5 cm high),
and fed continuously with a 10% sucrose solution. Mortality was daily registered
during 16 days.

Activity
The locomotor activity pattern of triflumuron-surviving and control Ae. aegypti
females was evaluated with a locomotor activity monitor (TriKinetics) (Gentile et al.,
2006). Two-day old mosquitoes were individually placed in glass tubes with a cotton
plug soaked in 10% sucrose solution and the tubes placed in a Locomotor Activity

43

Monitor inside a Precision Scientific Incubator Mod. 818 under a constant


temperature of 25 C and a photoperiod of 12 hours of light and 12 hours of dark (LD
12:12). The locomotor activity was individually registered every time a mosquito
crossed the middle of the tube, interrupting an incident infrared light. For every
mosquito, 48 data points representing the total locomotor activity of 30 minutes
intervals were obtained for every day of monitoring. This experiment was performed
twice. Only data from mosquitoes that were alive for the first two days of monitoring
were considered for analysis, performed through calculation of the Williams mean of
their activity.

Blood feeding
Three-day old adult females were exposed to an anesthetized guinea pig during 30
minutes. The number of blood-fed females was counted in both triflumuron-exposed
and control groups.
In order to quantify the amount of ingested blood, groups of 10 experimental or
control mosquitoes were weighed before or after the blood meal in an analytic
balance (APX-200, Denver Instrument). The amount of ingested blood was
calculated by subtraction of these values.

Egglaying
Egglaying was induced in individual females three days after the blood meal,
according to the procedure adapted from Valencia et al. (1996), in inverted Petri
dishes with a wet filter paper at the bottom, at 26C. The number of egglaying
females, eggs per female and the viability of the eggs were investigated.

44

Rate of inseminated females


Individual couples formed by triflumuron-surviving females and control males or,
reciprocally, by triflumuron surviving-males and control females, were placed in 50
mL transparent plastic tubes. Males and females were obtained from pupae reared
individually, in order to assure that virgin females would be used. After three days,
female spermathecae were dissected and sperm presence was observed with an
optic microscope (Nikon Biophot; 200x). Negative and positive controls consisted of
triflumuron-survivors or control adults, respectively.

Results
Several bioassays were performed to accomplish the analysis here shown. From a
total of 12,000 experimental specimens exposed to triflumuron, 43.6% of adult
emergence was obtained. Delay in larvae development was not noted in the
experimental group, when compared to controls: in both cases adult emergence took
5-7 days after onset of the assays.

Male/female rate
In the control group equivalent rates of males (50.2 4.1%) and females were
obtained, while males accounted for 65.0 7.6% of triflumuron-surviving adults, a
highly significant difference between both sexes (ANOVA, p<0,005). This
represented a male/female proportion of 1.01 and 1.86 in control and experimental
groups, respectively.

45

Longevity
Figure 1 shows daily mortality of males and females from control and experimental
groups up to 16 days after adult emergence. In opposition to the control group, with
total mortality below 6% of both males and females during this period, triflumuron
survivors exhibited a reduced longevity. Moreover, females were more affected than
males: after 16 days the rate of surviving males (29.2%) was twice that of females
(13.8%).

Activity
Aedes aegypti adults showed diurnal habits, with peaks of activity in the beginning
and in the end of the photophase. Their pattern of activity was not altered by
triflumuron exposure. However, the intensity of activity was reduced, as exemplified
in Figure 2.

Blood feeding
The ability to ingest blood as well as the feeding rate were significantly altered in CSI
surviving females: while 90.4% (85/94) control females accepted the blood meal, this
rate decreased to 48.4% (77/159) in triflumuron exposed ones (20.05, 1; p<0.005).
Moreover, control and triflumuron surviving females ingested, respectively, 2.57
0.42 and 1.79 0.17 times their weigh in blood, also a significant difference (tS test;
p<0.05). In spite of this, the weigh of control (7.37 0.66 g) and triflumuron
surviving (7.71 1.02 g) females after adult emergence is equivalent (tS test;
p>0.05).

46

Egglaying
Table 1 summarizes oviposition data of control and triflumuron-exposed females.
Approximately 10% of experimental blood-fed females died up to 24 hours after
blood feeding; even higher mortality (35%) was observed after egglaying. The
number of eggs per female was also significantly different in both groups (t test;
p<0.001).
Among the triflumuron-surviving females that accomplished oviposition, 14.4%
presented eggs that broke when immersed in water (Figure 3). Spermathecae
dissection revealed these females had not been inseminated. On the other hand, no
significant difference was noted in the viability of eggs derived from triflumurontreated females that had effectively been inseminated (96.3 10.2%) compared to
control ones (97.5 7.5%).

Matings
In order to verify if triflumuron preferentially interferes with the reproductive ability of
one sex, individual matings with one control partner and one triflumuron survivor
were performed. Although 75 couples have been done for each condition, at the end
of three days one or both specimens of several couples had died (Table 2). When
surviving couples were taken into account, a reduction in the rate of inseminated
females was noted in all groups bearing at least one triflumuron-treated mate (Table
2). Chi-square analysis revealed difference between the non treated control and all
the experimental groups containing triflumuron survivors (p<0.05). On the other hand,
no significant differences among these later groups were found (p>0.05).

47

Discussion
Our data indicate that exposure of Ae. aegypti larvae to sublethal doses of the CSI
triflumuron results in mosquito adults affected in several aspects of their viability and
reproductive ability.
Disequilibrium in the proportion between males and females derived from treatment
with the triflumuron EI50 was observed. The smaller proportion of females was
attributed to their slower development kinetics when compared to males (Clements,
1992). As a consequence females would be exposed to the CSI for a longer period of
time in the larval stage. Exposure of the Coleoptera Tribolium confusum to
triflumuron also resulted in a greater proportion of males (3:1) (El-Sayed et al., 1984).
Adult longevity was highly reduced in triflumuron treated specimens. Females were
more severely affected than males, probably due to their longer period of contact with
the CSI during the larval stage, as mentioned above. Tenebrio molitor exposed to the
CSI diflubenzuron also exhibit reduced longevity (Soltani et al., 1983). Although a
drastic reduction in the longevity of Culex quinquefasciatus, Anopheles stephensi
and Ae. aegypti adults derived from treatment with the EI50 of the CSI hexaflumuron
has been reported (Vasuki, 1992), no differences in longevity between both sexes
were noted in these cases.
Triflumuron also reduced Ae. aegypti activity. Many triflumuron surviving adults had
structural abnormalities, such as deformed wings or easily broken legs, which could
account for this reduced activity. There are reports of structural defects produced by
treatment with CSI in several insect orders (Demark & Bennet, 1989; Wilson &
Cryan, 1997; Da-Silva et al., 2004). Vasuki & Rajavel (1992) observed that treatment
of the mosquitoes Cx. quinquefasciatus, Ae. aegypti and An. stephensi with a CSI
resulted in several visible abnormalities that could hamper locomotion and that were

48

probably related to the reduced longevity of adults. Accordingly, Amir & Peveling
(2004) verified that triflumuron-exposed Apis mellifera specimens exhibited a lower
flight activity.
Triflumuron treatment interfered with the blood feeding ability of surviving females:
both the number of blood-fed females and the amount of ingested blood were
reduced in triflumuron-treated individuals. The same was reported by Vasuki (1999)
with other Culicidae species after treatment with the CSI hexaflumuron. In opposition
to this author, we observed mortality after egglaying in a high proportion of females,
probably due to their greater weakness.
Since blood feeding is a requisite to the production of eggs in hematophagous
insects, it was expected that oviposition of triflumuron-surviving females was
reduced. This was effectively the case: triflumuron-treated females laid roughly 25%
less eggs than control ones, a rate compatible with the 30% reduction in the amount
of blood ingested by this group when compared to the control. Reduction in the
oviposition of CSI-treated females of different insect orders has already been
reported (Miura et al., 1976; Wilson & Cryan, 1997; Senz-de-Cabezn et al., 2006).
However, Arias and Mulla (1975) did not detect any significant difference in the
amount of eggs laid by Culex tarsalis females treated with diflubenzuron, another
CSI. The number of eggs laid by methoprene-surviving Ae. aegypti females was also
equivalent to the control group.
A significative proportion of the eggs laid by triflumuron surviving females cracked
when immersed in water, and the remaining ones shrink (figure 3). Observation of
spermathecae confirmed the corresponding females had not been inseminated. We
asked if reduction of copula rates was due to preferential interference of triflumuron

49

with males or females, or if both sexes were affected. Crosses between control and
triflumuron-surviving adults revealed CSI interferes with both sexes.
Our results indicate that CSIs are a viable alternative to the control of Ae. aegypti.
Beyond its effectiveness against larvae (Martins et al. 2007), surviving adults exhibit
a series of physiological constraints that reduce their longevity and reproductive
ability. Hence, CSI survivors are expected to have a reduced vectorial capacity,
being less competent in the transmission of pathogens. Furthermore, the current
need of environmentally safer technologies requires the development of insecticides
with more selective target sites and with a reduced risk level to non-target organisms.
It was already verified that some CSI compounds have little or no effect on
mammals, birds and aquatic invertebrates (Mian & Mulla, 1982). Ecotoxicity studies
with triflumuron are a requisite towards its utilization against insect vectors of medical
importance.

Acknowledgements
We thank Diego de Lacerda Rosa, Nathalia Giglio Fontoura and Diogo Fernandes
Bellinato for technical assistance. This work was supported by Fundao Oswaldo
Cruz FIOCRUZ, Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico
CNPq and Fundao de Amparo Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro
FAPERJ. We are grateful to BayerCropscience for the triflumuron sample.

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54

Legends to figures
Figure 1: daily mortality of control (circles) and triflumuron-surviving (squares) Ae.
aegypti adults. Opened and closed symbols refer to females and males, respectively.

Figure 2: Aedes aegypti females activity rhythm during four days under a 12:12 light
/ dark (gray bars) regimen. Solid and dashed lines represent control and triflumuronsurviving females, respectively.

Figure 3: Eggs laid by Ae. aegypti triflumuron-surviving females. Broken eggs derive
from unfertilized specimens.

55

Figure 1

% mortality

100
80
60
40
20
0
0

10

12

14

16

days after adult emergence

Figure 2

meandaactivity
(W(Wx)
Mdia
atividade
X)

Atividade dos mosquitos


7,0
6,0
5,0

control

controle

4,0

triflumuron

triflumuron

3,0
2,0
1,0
0,0

Tempo (dias)

time (days)

56

Figure 3

57

Table 1. Oviposition of Aedes aegypti triflumuron-surviving adult females.


Group

Mortality after

Females

Mortality after

Mean

blood meal

without eggs

egglaying

eggs/females

Control

100

112.9 41.1

triflumuron

139

14

14

44

86.4 44.0

n, total of specimens tested.


Except for the last column, all data refer to the number of adult females.

Table 2. Rate of inseminated females resulting from individual matings between


control and triflumuron-surviving Ae. aegypti adults.
Group (*)

Surviving couples (**)

Inseminated females

n (%)

n (%) (***)

cont x cont

75 (100)

74 (99)a

cont x trif

45 (60)

15 (33)b

trif x cont

66 (88)

22 (33)b

trif x trif

44 (59)

8 (18)b

(*) cont: control; trif: adult surviving from triflumuron exposure, performed in the larval
stage.
(**) 75 individual couples were made for each experimental condition.
(***) values followed by the same letter do not differ significantly.

58

3.3) artigo 3: Avaliao do efeito de triflumuron sobre Aedes albopictus, Culex


quinquefasciatus e populaes de campo de Aedes aegypti em condies de
laboratrio

Autores: Thiago Affonso Belinato, Ademir Jesus Martins, Jos Bento Pereira
Lima, Denise Valle

59

Efeito de um inibidor de sntese de quitina sobre Aedes albopictus, Culex


quinquefasciatus e populaes de campo de Aedes aegypti em condies de
laboratrio
Autores: Thiago Affonso Belinato, Ademir Jesus Martins, Jos Bento Pereira Lima,
Denise Valle
Laboratrio de Fisiologia e Controle de Artrpodes Vetores Departamento de
Entomologia Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ
Abstract
A resistncia aos inseticidas tradicionais dificulta o controle de vetores de
importncia mdica. Os reguladores do desenvolvimento de insetos (IGR), cujo
mecanismo de ao difere dos inseticidas clssicos, so uma alternativa vivel ao
controle de populaes de culicdeos vetores, incluindo aquelas onde tem sido
verificado o desenvolvimento da resistncia. Entre os IGRs esto os inibidores da
sntese de quitina (CSIs), compostos promissores que interferem com o processo de
muda. No presente estudo verificou-se que o CSI triflumuron eficaz na inibio da
emergncia de adultos de Culex quinquefasciatus (IE50 e IE90, respectivamente, de
5,28 g/L e 12,47 g/L) e de Aedes albopictus (IE50 e IE90 de 1,59 g/L e 2,63 g/L).
Triflumuron tambm foi eficaz contra amostras de sete populaes brasileiras de
Aedes aegypti resistentes ao organofosforado temephos, ao piretride deltametrina,
ou a ambos. Nestas populaes no houve emergncia de adultos viveis aps
exposio IE99 de triflumuron para a cepa referncia Rockefeller, sugerindo
ausncia de resistncia cruzada. No entanto, foi observada correlao positiva entre
a resistncia a temephos e tolerncia a triflumuron. Os resultados sugerem que
triflumuron pode representar uma importante ferramenta para o controle de vetores
de doenas em Sade Pblica, embora apontem para a necessidade de
monitoramento constante do status de susceptibilidade das populaes do vetor.
Key words: triflumuron - chitin synthesis inhibitors - Aedes albopictus - Culex
quinquefasciatus - Aedes aegypti

60

Introduo
O controle de mosquitos vetores de doenas tem sido dificultado em
decorrncia principalmente do desenvolvimento de resistncia aos inseticidas
tradicionais comumente utilizados (Bracco et al. 1999, Lima et al. 2003, Braga et al.
2004, Liu et al. 2004), assim como de problemas ao meio ambiente relacionados ao
uso indiscriminado dessas substncias (Zaim & Guillet 2002). Os reguladores do
desenvolvimento dos insetos (IGRs), com mecanismo de ao distinto e mais
seletivos quando em comparao com os inseticidas convencionais e, em
conseqncia, mais seguros para a maioria dos organismos no-alvo, so
considerados uma alternativa promissora (Mian e Mulla 1982, Graf 1993). Embora a
ao de muitos IGRs tenha sido testada contra uma variedade de insetos, um
nmero limitado destes compostos foi avaliado em culicdeos vetores (Estrada &
Mulla 1986, Su et al. 2003, Seng et al. 2006).
Os inibidores da sntese de quitina (CSI, do ingls chitin synthesis
inhibitors) so IGRs que interferem com o processo de muda nos insetos. Os CSIs
pertencem famlia das benzo-fenil-urias (BPUs), grupo qumico que tem sido
extensivamente estudado desde sua descoberta na dcada de 1970 (Mian & Mula
1982). De modo geral, a ao dos CSIs resulta em mal-formaes da nova cutcula
em desenvolvimento prejudicando principalmente as larvas, que geralmente tornamse incapazes de sobreviver prxima muda (Reynolds 1987, Tunaz & Uygun 2004).
Existem ainda relatos de sua eficincia sobre ovos (Wilson & Cryan 1997) e adultos
(Belinato et al. 2007, Vasuki 1992a,b, 1999).
Aedes aegypti, Aedes albopictus e Culex quinquefasciatus so trs
espcies

de

culicdeos

amplamente

difundidos

pelo

globo,

distribudos

preferencialmente nas regies tropicais e subtropicais (Juliano & Lounibos 2005). A


presena destas espcies considerada preocupante, j que participam da
transmisso de doenas ao homem, como a dengue e filariose linftica (Ottesen &
Ramachandran 1995, Gubler 2002). Alm disso, existe possibilidade da participao
das trs espcies na transmisso de doenas emergentes e re-emergentes, como o
vrus do oeste do Nilo e a febre amarela, respectivamente. Estes aspectos apontam
para a necessidade de controle efetivo e racional, uma vez que muitas populaes
se encontram resistentes aos principais inseticidas utilizados em Sade Pblica.

61

O CSI triflumuron, que tem sido usado no controle de diversos artrpodes,


mostrou ser eficiente contra Aedes aegypti (Martins et al. 2007); em doses subletais
interfere com vrios aspectos da viabilidade dos adultos resultantes (Belinato et al.
2007). No presente estudo, o efeito de diferentes doses de triflumuron sobre o
desenvolvimento de Culex quinquefasciatus e Aedes albopictus foi avaliado.
Populaes brasileiras de Ae. aegypti com diferentes nveis de resistncia a
piretrides (PI) e organofosforados (OP) tambm foram expostas a este CSI, que
parece ser uma alternativa vivel de controle.
Material e mtodos
Mosquitos
As cepas de Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus utilizadas, ambas
provenientes da cidade do Rio de Janeiro, so mantidas em laboratrio h,
respectivamente cinco e 13 anos.
Foram utilizadas amostras de sete populaes brasileiras de Ae. aegypti,
cuja resistncia monitorada rotineiramente, no mbito do Programa Nacional de
Controle da Dengue. Estas populaes do vetor foram escolhidas de acordo com
sua localizao geogrfica e os nveis de resistncia aos inseticidas temephos
(organofosforado) e deltametrina (piretride) (tabela 1), utilizados no pas no controle
de larvas e adultos de Ae. aegypti, respectivamente (Valle 2006, Valle et al. 2006).
Em todos os casos a gerao F2 foi utilizada para os ensaios com triflumuron, com
exceo de Macei (AL) cujos testes foram feitos com a gerao F3. Como controle,
foi utilizada a cepa Rockefeller, referncia internacional de susceptibilidade a
inseticidas.
Criao das larvas
A criao de larvas de Ae. aegypti (cepa Rockefeller), Ae. albopictus e Cx.
quinquefasciatus foi feita a 25 1C. No caso de ovos de Aedes a ecloso foi
induzida por 1 h. As larvas foram transferidas para bacias de plstico transparente
(33 X 24 X 8 cm) contendo um litro de gua desclorada e rao para gatos
(Friskies, Purina, Camaqu/RS). As larvas foram utilizadas para os ensaios
aproximadamente trs dias depois, ao atingirem o terceiro estdio, tamanho
recomendado pela WHO (WHO 1981).
62

Bioensaios com Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus


Starycide SC 0.48 (Bayer) possui 0.48% de triflumuron em emulso.
Alquotas de triflumuron a 4,8 x 10-3% em DMSO (dimethyl sulfoxide) estocadas a 80C foram usadas para preparar as solues de uso. Para cada condio foram
usadas oito rplicas, cada qual contendo 10 larvas de terceiro estdio em copos
plsticos transparentes, com 150mL de soluo. As concentraes variaram de 0,25
g/L at 4,5 g/L para Ae. albopictus e de 2,5 g/L a 50 g/L para Cx.
quinquefasciatus. Larvas mantidas sob as mesmas condies, em gua e com 2L
de DMSO, foram usadas como controle. Em cada copo foi adicionado, no primeiro
dia, 1mL de uma soluo a 2,5% (p/v) de rao. A mortalidade de cada estgio foi
verificada diariamente. Cada bioensaio foi repetido no mnimo trs vezes. As doses
efetivas que inibem em 50% e 90% a emergncia de adultos foram calculadas por
anlise Probit com o auxlio do software Polo PC (Raymond 1985).
Bioensaios com populaes de campo de Ae. aegypti
Para avaliar a susceptibilidade das populaes de campo ao triflumuron,
foram realizados bioensaios com a dose que inibe a emergncia de adultos da cepa
susceptvel Rockefeller em 99% (IE99) (Martins et al. 2007) e o dobro desta
concentrao. Esta ltima condio equivale, nos ensaios com larvas, dosediagnstica (DD) (WHO 1981).
As mesmas condies experimentais descritas no item anterior foram
empregadas, com oito rplicas por condio experimental. A IE99 e a DD de
triflumuron usadas foram 3,95 g/L e 7,9 g/L, respectivamente.
Resultados
Efeito de triflumuron sobre Ae. albopictus
Triflumuron apresentou efeito dose-dependente sobre a inibio de
emergncia de Ae. albopictus (figura 1A). As doses efetivas que inibiram a
emergncia em 50% e 90% (IE50 e IE90) foram respectivamente 1,59 g/L e 2,63
g/L. A partir de 3,0 g/L no houve mais emergncia de adultos viveis. A
mortalidade no grupo controle foi baixa, nunca alcanando 4%.

63

A figura 1B representa a mortalidade de Ae. albopictus em cada estgio e


indica que a precocidade dos efeitos deste CSI diretamente proporcional dose
administrada: quanto maior a dose, maior foi a proporo da mortalidade no estgio
larvar; a mortalidade no estgio de pupa ocorreu principalmente nas concentraes
intermedirias, entre 1,25 g/L e 3,5 g/L. Por outro lado, a mortalidade dos adultos
recm-emergidos ocorreu principalmente em doses menores, at 3,0 g/L.

Efeito de triflumuron sobre Cx. quinquefasciatus


A exemplo de Ae. albopictus, o efeito de triflumuron sobre Cx.
quinquefasciatus tambm foi dose-dependente (figura 2A). As IE50 e IE90 de
triflumuron para esta espcie foram, respectivamente, 5,28 g/L e 12,47 g/L. A
partir de 15,0 g/L no houve emergncia de adultos viveis. A mortalidade mdia
no grupo controle foi de 4,7%.
A mortalidade por estgio obedeceu ao mesmo padro de Ae. albopictus
(figura 2B): a mortalidade das larvas foi diretamente proporcional dose utilizada,
enquanto a mortalidade nos estgios de pupa e de adulto foi maior nas doses
intermedirias (entre 5,0 g/L e 20,0 g/L) e nas doses menores (at 15,0 g/L),
respectivamente.
Efeito de triflumuron em populaes de campo de Ae. aegypti
Triflumuron foi eficiente contra todas as populaes de campo avaliadas,
incluindo aquelas resistentes a temephos (OP) e deltametrina (PI). A mortalidade
nos grupos controle foi extremamente reduzida, menor que 3%, em todos os casos,
incluindo a cepa referncia Rockefeller. Entre o stimo e o dcimo dias aps o incio
dos experimentos, todo o controle j havia emergido em adultos viveis. Neste
mesmo perodo, em todos os grupos expostos a triflumuron, entre 86,3 e 99,2% das
larvas estavam mortas, tanto na IE99 como na DD. No houve emergncia de
adultos viveis em nenhuma das populaes expostas a este CSI (Tabela 1). Apesar
disso, nas duas concentraes utilizadas, uma pequena taxa de larvas permanecia
viva durante um longo perodo de tempo. Em funo disto, a mortalidade total
observada com a IE99 variou entre 18 (cepa Rockefeller) e 24 (Montes Claros/MG)
dias aps o incio do experimento. Com a DD, a mortalidade total variou entre os
dias 17 e 52, em Macei e Montes Claros, respectivamente.

64

As figuras 3A e 3B mostram a mortalidade por estgio em todas as


populaes expostas IE99 e DD, respectivamente. Como esperado, a mortalidade
no estgio de larva foi maior aps exposio DD, quando comparada com a IE99. A
mortalidade de pupas do municpio de Aracaju/SE diferiu significativamente de todas
as outras populaes (ANOVA; p<0.05). Tambm foram observadas, para as duas
doses de triflumuron testadas, diferenas significativas na mortalidade de pupas
oriundas dos municpios de Macei/AL e Montes Claros/MG em relao cepareferncia, Rockefeller (ANOVA; p<0.05). A mortalidade de pupas de Cuiab/MT
tambm diferiu de Rockefeller quando a DD foi utilizada. Todas estas populaes,
com exceo de Cuiab/MT, apresentam alta resistncia a temephos, como mostra
a Tabela 1 (RR95 > 10.0). Houve correlao positiva entre a resistncia a temephos e
tolerncia a triflumuron (r2=0,7293; p<0,05). A mesma correlao no foi observada
em relao resistncia ao piretride deltametrina, usado no combate a adultos no
Brasil.
Discusso
Triflumuron, em condies de laboratrio, foi bastante eficiente contra
larvas de Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus em concentraes da ordem de
g/L, provocando inibio dose-dependente da emergncia de adultos nas duas
espcies. Efeito dose-dependente sobre mosquitos foi tambm observado para
outras classes de IGRs (Boudjelida et al. 2005, Braga et al. 2005). Verificou-se que,
quanto maior a dose de triflumuron, mais precoce a mortalidade. Este padro de
mortalidade estgio-especfica tambm foi observado para Ae. aegypti e Cx.
quinquefasciatus expostos ao CSI novaluron (Mulla et al. 2003, Su et al. 2003).
As IE50 e IE90 encontradas para triflumuron contra Cx. quinquefasciatus
foram 3,3 e 4,7 vezes maiores que as de Ae. albopictus. Esta ltima espcie, por
sua vez, apresentou doses efetivas em torno de 1,5 1,8 vezes maiores que Ae.
aegypti (IE50 e IE90 de 0,86 g/L e 1,8 g/L, respectivamente) (Martins et al. 2007).
No temos conhecimento de registro na literatura de avaliao do efeito de
triflumuron sobre Ae. albopictus em condies de laboratrio. Com relao a Cx.
quinquefasciatus, nossos resultados diferem ligeiramente de outros autores, que
relataram IE50 e IE90 de 2,0 e 7,0 g/L respectivamente, aps exposio a este CSI
(Mulla & Darwazeh 1979, Mulla 1995). Variaes nas doses efetivas de IGRs entre

65

diferentes laboratrios so bastante comuns na literatura e derivam, em parte, da


utilizao de protocolos distintos, como discutido por Braga et al. (2005).
Variaes nas doses efetivas de diferentes CSIs tambm so relatadas.
Diflubenzuron,
comercialmente,

primeiro

usado

inibidor
no

da

controle

sntese
de

de

diversas

quitina
espcies

disponibilizado
de

insetos,

principalmente no combate a pragas agrcolas (Mian & Mulla 1982). Concentraes


de 0,3 g/L e 0,5 g/L deste composto induziram 50% de mortalidade em larvas de
Culiseta incidens e Cx. quinquefasciatus, respectivamente (Mulla & Darwazeh 1979).
Contra Ae. albopictus, Ali et al. (1995) verificaram que as IE50 e IE90 de diflubenzuron
eram respectivamente, 0,45 g/L e 0,84 g/L. Hexaflumuron, outro CSI, tambm foi
eficaz contra Ae. albopictus, com IE50 de 0,2 g/L (Montada et al. 1994). Novaluron,
outro IGR promissor sob avaliao contra mosquitos de importncia mdica,
apresentou IE50 e IE90 para Cx. quinquefasciatus de 0,16 g/L e 0,60 g/L,
respectivamente (Su et al. 2003).
Apesar das doses efetivas de triflumuron serem mais altas que as de
outros IGRs, Mian & Mulla (1982) destacam a grande atividade deste CSI contra
mosquitos vetores, o que confirmado por sua eficcia em ensaios de campo.
Sulaiman et al. (1994) verificaram que triflumuron, na concentrao de 14,0 mg/L em
condies de simulado de campo, inibiu a emergncia de Ae. albopictus por at 168
dias. Da mesma maneira, Batra et al. (2005) verificaram que triflumuron foi eficaz
contra Cx. quinquefasciatus e Anopheles stephensi por um perodo de at sete
semanas.
Triflumuron tambm foi eficaz contra populaes oriundas do campo de
Ae. aegypti, com diferentes graus de resistncia a dois inseticidas, um
organofosforado e um piretride. Mortalidade mais acentuada em larvas nas
populaes tratadas com a DD quando comparadas com a IE99 confirma que a
concentrao deste CSI diretamente proporcional precocidade de seus efeitos,
como j havia sido demonstrado para a cepa Rockefeller (Martins et al. 2007). No
houve, em nenhuma das concentraes de triflumuron utilizadas, emergncia de
adultos viveis das populaes de campo, o que sugere ausncia de resistncia
cruzada entre aqueles compostos e triflumuron. Embora, em todas as populaes
testadas, o estgio larvar tenha sido o principal afetado, houve correlao positiva
entre as taxas de mortalidade em pupas aps exposio a triflumuron e as razes de

66

resistncia para temephos. Os resultados apontam para potencial tolerncia a


triflumuron em populaes resistentes a este OP.
Provvel tolerncia ao triflumuron das populaes avaliadas pode ser
funo da maior atividade de enzimas relacionadas resistncia metablica, j
detectada em uma srie de populaes de Ae. aegypti do Brasil (Braga et al. 2005,
Montella et al. 2007). Apesar de existirem poucos registros na literatura sobre a
resistncia a IGRs, tolerncia a diflubenzuron associada a Oxidases de funo mista
j foi encontrada em moscas (Kotze et al. 1997). Entretanto, no existe nenhum
relato sobre resistncia a IGRs associada ao aumento da atividade de enzimas
detoxificantes em mosquitos vetores.
Nos ensaios com as populaes de campo uma pequena taxa de larvas
permaneceu viva por muitos dias, confirmando que a ao primria dos CSIs no
a induo de mortalidade, e sim a interferncia com o desenvolvimento.
Os resultados aqui obtidos indicam que triflumuron foi eficiente contra trs
espcies de mosquitos. Alm disso, este CSI foi bastante eficaz contra diversas
populaes brasileiras de Ae. aegypti, algumas das quais resistentes a pelo menos
um dos principais inseticidas usados atualmente no controle desse vetor no pas.
Embora triflumuron ainda no tenha sido aprovado para uso em gua potvel,
requisito para sua utilizao nos programas de controle de Ae. aegypti, sabido que
os IGRs em geral apresentam baixa toxicidade para os mamferos, incluindo o
homem (Mian & Mulla, 1982). Nossos resultados sugerem que este CSI pode
representar uma opo no manejo de mosquitos vetores de importncia mdica em
reas urbanas.
Agradecimentos
Agradecemos o Dr. Ricardo Loureno de Oliveira pelo fornecimento da cepa de
Aedes albopictus estabelecida em seu laboratrio. Esta pesquisa teve apoio
financeiro do Programa de Desenvolvimento Tecnolgico em Sade Pblica
(PDTSP),

Fundao

Oswaldo

Cruz

FIOCRUZ,

Conselho

Nacional

de

Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico CNPq e Fundao de Amparo


Pesquisa

do

Estado

do

Rio

de

Janeiro

FAPERJ.

Agradecemos

BayerCropscience pelo fornecimento da amostra de triflumuron e ao Julio Csar


Silva Ciroulo pela assistncia tcnica.

67

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71

Tabela 1: Nvel de susceptibilidade das populaes de Ae. aegypti ao organofosforado temephos e ao piretride deltametrina.
Regio

NE
SE

CW

Estado

temephosb

deltametrina

RR95

% mort DD

triflumuron, % mort
IE99

DDd

SE

Aracaju

19,3

88,1

100,0

100,0

AL

Macei

10,3

62,9

100,0

100,0

Belo Horizontea

5,4

74,5

100,0

100,0

Montes Claros

13,6

62,7

100,0

100,0

Dourados (Norte)

4,3

87,9

100,0

100,0

Dourados-(Sul)

7,1

61,9

100,0

100,0

Cuiab

4,0

89,2

100,0

100,0

MG
MS
MT

localidade

regio Centro-Sul da cidade


RR<5: populao susceptvel; 5<RR<10 resistncia moderada; e RR>10 resistncia elevada (de acordo com Mazarri e

Georghiou 1995)
c

A dose diagnstica (DD) de deltametrina usada foi de 5 g ug/garrrafa (metodologia de Da-Cunha et al. 2005). Neste ensaio,

mortalidade abaixo de 80% indica populao resistente (Davidson e Zahar 1973).


d

A dose diagnstica de triflumuron empregada, equivalente ao dobro da IE99, foi de 7,9 g/L.

72

Legendas das figuras:


Figura 1: efeito de triflumuron sobre larvas de Aedes albopictus. a) curva de
regresso no linear da inibio da emergncia (IE); b) mortalidade estgioespecfica.
Figura 2: efeito de triflumuron sobre larvas de Culex quinquefasciatus a) curva de
regresso no linear da inibio da emergncia (IE); b) mortalidade estgioespecfica.
Figura 3: efeito de triflumuron sobre populaes de campo de Aedes aegypti.
Mortalidade estgio-especfica nas sete populaes avaliadas expostas IE99 (painel
a) ou DD (painel b). Barras indicadas por letras iguais representam populaes
que no diferem significativamente.

73

Figura 1

100

100
Mortalidade (%)

IE (%)

80
60
40
20
0

larva
pupa
adulto

80
60
40
20
0

doses (ug/L)

0.9

1.25

1.5

1.75

2.5

2.75

3.5

doses (ug/L)

74

4.5

Figura 2

b
100

80

80

Mortalidade (%)

100

IE
(%)

60
40
20

60

la r va
pupa
a d u lto

40
20
0

0
0

10
doses (ug/L)

15

20

0 2.5 5 6.5 7.5 8.5 10 12.5 15 20 25 30 50


d o s e s ( u g /L )

75

Figura 3

Mortalidade (%)

100

a,b

a,b

a,b

a,b

c
larva
pupa

80
60
40
20
0

Rock

Cuiab D. Norte B. Horiz.

D. Sul

Macei M. Claros Aracaju

Mortalidade (%)

100

80

larva
pupa

60
40
20
0

Rock

Cuiab D. Norte B. Horiz.

D. Sul

Macei M. Claros Aracaju

76

4) Discusso
Aedes aegypti, Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus so trs espcies de
mosquitos amplamente difundidas pelo territrio brasileiro, cuja presena constitui
um fato extremamente preocupante, uma vez que podem participar da transmisso
de diversas arboviroses. Atualmente, existe uma grande preocupao com a
possvel entrada do Vrus do Oeste do Nilo (VNO) na Amrica do Sul, j que esse
vrus se difundiu rapidamente pela Amrica do Norte, provocando epidemias, como
a de Nova York em 1999 (Goddard et al., 2003). O VNO pertence famlia
Flaviviridae, gnero Flavivirus, no qual tambm esto classificados os vrus da
hepatite C (HCV), da febre amarela, da encefalite japonesa, da encefalite de So
Lus e da dengue. Algumas aves constituem o reservatrio natural, e o ciclo do vrus
mantido na natureza atravs da relao entre as mesmas e mosquitos do gnero
Culex sp (Campbell et al., 2002). Culex quinquefasciatus e Ae. albopictus podem
representar potenciais vetores no Brasil, uma vez que linhagens destas espcies
susceptveis ao vrus tm sido encontradas na Amrica do Norte (Moore e Mitchell,
1997; Hayes et al., 2005).
Preocupao adicional existe com Ae. albopictus, principalmente devido a
sua grande valncia ecolgica. Aedes albopictus pode ser encontrado tanto em
habitats silvestres quanto em locais suburbanos ou urbanos (Juliano e Lounibos,
2005), podendo ser responsvel pela urbanizao de arboviroses, como a febre
amarela, por exemplo. Epidemias de febre amarela no existem no Brasil desde a
dcada de 1950, apesar da existncia do ciclo silvestre (Mondet et al., 1996).
Mondet et al. (2001) relatam que o risco de reurbanizao da febre amarela no Brasil
grande, uma vez que Ae. aegypti est amplamente distribudo no pas e muitas
vezes co-existe com Ae. albopictus. De acordo com Massad et al. (2001), o risco de
novas epidemias de febre amarela no Brasil iminente. Loureno-de-Oliveira et al.
(2003) verificaram que populaes brasileiras de Ae. albopictus so passveis de
infeco com o vrus da febre amarela.
O culicdeo Ae. aegypti, por sua vez, alm de ser um potencial vetor de
febre amarela urbana, continua sendo o nico vetor confirmado na transmisso de
dengue no Brasil. Atualmente a dengue considerada uma das arboviroses mais
importantes, sendo endmica em mais de 100 pases, localizados em regies
tropicais e sub-tropicais, predominando em reas urbanas e semi-urbanas (WHO,
1997, 2002). No Brasil, tm ocorrido epidemias freqentes de dengue em grande
77

parte do pas, destacando-se o Estado do Rio de Janeiro em relao ao nmero de


casos da doena. Trs sorotipos circulam atualmente no pas: DENV-1, introduzido
em 1986 (Schatzmayr et al., 1986), DENV-2, em 1990 (Nogueira et al., 1990) e
DENV-3, em 2000 (Nogueira et al., 2001).
Os inseticidas qumicos continuam sendo um dos elementos mais
importantes e mais utilizados no controle de vetores. Entretanto, o arsenal de
produtos efetivos contra os vetores tem diminudo muito, principalmente devido ao
desenvolvimento de resistncia aos inseticidas comumente utilizados (Zaim e Guillet,
2002). Outro fator que tambm contribui para a limitao no uso de inseticidas o
aumento da demanda pblica por tecnologias seguras, o que implica no
desenvolvimento de produtos com stios-alvo mais seletivos e com baixo risco para
organismos no-alvo e o meio ambiente (Graf, 1993). Portanto, so de fundamental
importncia o desenvolvimento e o estudo de inseticidas alternativos seguros aos
ecossistemas, eficazes no combate s populaes de artrpodes vetores, e
principalmente, eficientes contra as populaes resistentes aos inseticidas
usualmente utilizados.
Neste sentido, pode-se considerar que os IGRs representam uma nova
estratgia para o controle de vetores em Sade Pblica, principalmente pelo fato de
possurem mecanismos de ao diferenciados dos inseticidas usualmente utilizados.
Alm disso, de acordo com Siddal (1976) e Wrigth (1976), os IGRs so compostos
que possuem grande nvel de segurana ao meio ambiente, principalmente quando
em comparao com os inseticidas convencionais. Mian e Mulla (1982) realizaram
uma extensa reviso sobre o efeito de diversos IGRs contra organismos no-alvo,
incluindo os inibidores de sntese de quitina. Esses autores concluram que vrios
IGRs e, em particular os CSIs, no afetam a maioria dos organismos no-alvo, como
algas, rotferos, platelmintos, nematdeos e moluscos. De acordo com Peveling
(1999), triflumuron foi um dos compostos com maior nvel de segurana contra
organismos no-alvo quando em comparao com organofosforados.
No estudo aqui apresentado, triflumuron mostrou ser eficiente na inibio
da emergncia de Ae. aegypti, Ae. albopictus e Cx. quinquefasciatus, em
concentraes na ordem de g/L (ppb), em condies de laboratrio (artigos 1 e 3).
Alm disso, verificamos que esse composto igualmente eficiente em populaes
de Ae. aegypti susceptveis ou resistentes ao organofosforado temephos; atua em
doses semelhantes s da linhagem de referncia Rockefeller, o que indica que o

78

mecanismo selecionado por temephos nas populaes avaliadas no conferiu


resistncia a triflumuron, ou seja, no ocorreu resistncia cruzada (artigo 1).
Avaliou-se tambm a eficcia de triflumuron (IE99 para Rockefeller e a
dose diagnstica, DD) sobre sete amostras de populaes brasileiras de Ae. aegypti,
com diferentes nveis de resistncia tanto ao organofosforado temephos quanto ao
piretride deltametrina, em condies de laboratrio (artigo 3). Nas duas doses
avaliadas, no houve emergncia de adultos viveis em nenhuma das populaes
estudadas, o que refora o fato de que no existe resistncia cruzada entre os
mecanismos de resistncia selecionados nestas populaes ao triflumuron. Estes
resultados so de extrema importncia, j que tem sido verificada a resistncia de
Ae. aegypti ao temephos em diversas localidades brasileiras (Braga et al., 2004),
indicando que o estudo de mtodos racionais de controle tornam-se cada vez mais
relevantes.
Uma vez que a maioria dos criadouros de Ae. aegypti, recipientes de
armazenamento de gua para fins domsticos, est sujeita a alteraes contnuas
nos nveis de gua em funo de sua utilizao ao longo dos dias, a diminuio da
quantidade do princpio ativo pode resultar em doses sub-letais. Para avaliar esta
situao, quantificamos uma srie de parmetros de viabilidade e reproduo de
adultos de Ae. aegypti sobreviventes ao tratamento com uma dose que inibe a
emergncia em 50% (IE50). De modo geral, assim como observado com outros IGRs
(Miura et al., 1976; Vasuki, 1992; Ritchie et al., 1997), os adultos sobreviventes
possuam uma srie de problemas que resultavam em mortalidade precoce ou
menor capacidade reprodutiva (artigo 2). Dentre os adultos sobreviventes, a maioria
correspondia a machos. Ambos os sexos tinham longevidade reduzida, efeito mais
pronunciado em fmeas (artigo 2), provavelmente porque seu desenvolvimento
larvar mais lento, o que teria aumentado o tempo de exposio ao CSI.
Uma vez que a longevidade de um vetor est diretamente relacionada com
a sua capacidade de transmisso de uma infeco (Clements, 1992), espera-se que
adultos sobreviventes de tratamento com triflumuron na fase imatura, menos
longevos que adultos controle, tenham sua capacidade vetorial reduzida. Tambm
foi verificado que, embora o ritmo circadiano no tenha sido alterado, a atividade
locomotora de fmeas sobreviventes foi muito inferior aos controles, provavelmente
resultado da freqente quebra de seus tarsos ao longo dos dias. Como a locomoo
destas fmeas est comprometida, a busca por alimentao sangnea deve ocorrer
com mais dificuldade. Aqui, verificamos que uma menor quantidade de fmeas
79

sobreviventes ao triflumuron conseguiu realizar o repasto sangneo e que estas


ingeriram menor quantidade de sangue. Com isto, a produo de ovos foi
prejudicada (artigo 2).
Com relativa freqncia, ovos de algumas fmeas estouravam quando
postos a eclodir. As espermatecas destas fmeas no continham espermatozides,
sugerindo que a ruptura dos ovos seja conseqncia da ausncia de embrio.
Cruzamentos com casais isolados onde apenas um dos parceiros havia sido exposto
a triflumuron confirmaram que tanto machos quanto fmeas adultos sobreviventes a
este CSI realizam a cpula com dificuldade: em todos os pontos experimentais,
quando havia pelo menos um indivduo tratado, a taxa de espermatecas positivas foi
menor (artigo 2).
Os resultados obtidos sugerem fortemente que triflumuron pode ser
considerado como uma ferramenta potencial para o controle de culicdeos vetores
no pas. Alm de ser ativo, em pequenas concentraes, contra os trs culicdeos
avaliados, mostrou-se bastante eficiente contra populaes de campo com
diferentes nveis de resistncia a duas classes de inseticidas. Alm disso, adultos
que sobrevivem a doses subletais possuem uma srie de problemas fisiolgicos que
provavelmente diminuem sua capacidade vetorial.
Entretanto, evidente que o uso de apenas uma metodologia de controle,
independente do produto qumico utilizado e de sua eficincia, com poucas chances
alcanar sucesso. essencial o investimento em campanhas que conscientizem a
populao sobre a real importncia do problema, aliado ao maior direcionamento de
recursos em saneamento bsico. Programas de monitoramento da resistncia a
inseticidas tambm so fundamentais na tomada de decises, pois possibilitam que
seja feita a troca de inseticidas de forma racional. O resultado dessas aes, em
conjunto, fator crucial para a reduo no s da dengue e filariose linftica, mas
tambm da maioria das doenas transmitidas por artrpodes.

80

5) Concluses


Triflumuron, aplicado s larvas de Aedes aegypti, Aedes albopictus e Culex


quinquefasciatus, inibe a emergncia de adultos, de forma dose-dependente,
na ordem de g/L (ppb).

Triflumuron eficiente em populaes de campo resistentes e susceptveis ao


organofosforado temephos, em doses semelhantes s da cepa Rockefeller.

Os mecanismos de resistncia selecionados por temephos nas populaes


avaliadas no propiciam resistncia a triflumuron, ou seja, no ocorre
resistncia cruzada.

A IE99 e a DD de triflumuron definidas para a cepa susceptvel Rockefeller


inibem totalmente a emergncia de adultos de diversas populaes de Ae.
aegypti, resistentes e susceptveis ao organofosforado temephos e ao
piretride deltametrina.

A maioria dos adultos de Ae. aegypti resultantes da IE50 de machos.

Adultos de Ae. aegypti sobreviventes ao tratamento com IE50 de triflumuron


possuem uma srie de problemas, tais como:
- longevidade reduzida;
- atividade locomotora reduzida;
- aceitao de repasto sangneo prejudicada;
- volume de sangue ingerido menor;
- postura reduzida;
- mortalidade expressiva at 24 horas aps a oviposio;
- dificuldade para a realizao de cpula em ambos os sexos.

81

6) Perspectivas
Nosso

Laboratrio

investiga

diversos

aspectos

da

fisiologia

do

desenvolvimento de culicdeos vetores e, entre eles, o papel da quitina nesses


processos. Tendo em vista as caractersticas singulares da quitina e sua sntese,
esta molcula considerada um alvo em potencial para o controle de artrpodes
vetores de doenas. Neste contexto, tem sido verificado que molculas pertencentes
classe das benzoil-fenil-urias inibem de forma eficaz a formao de cutcula em
diversas espcies de vetores. Pretendemos prosseguir esta linha de pesquisa
analisando o efeito de um CSI sobre o desenvolvimento de Aedes aegypti. Em
particular, a expresso do gene que codifica a Quitina-Sintase durante o
desenvolvimento larvar ser estudada em indivduos expostos ao triflumuron.
Tambm ser avaliada a influncia de triflumuron sobre a estrutura do exoesqueleto
de formas imaturas..Esperamos, com estes resultados, contribuir para viabilidade da
implementao de CSIs como estratgia alternativa de controle.

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