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Atividade Laboratorial: Fatores que afetam a atividade enzimtica

Biologia 12 ano
Nome:____________________________________________ Data: ____/____/____

OBJETIVOS:
Compreender o significado biolgico das enzimas
Conhecer o efeito de diversos fatores (concentrao da enzima,
concentrao do substrato, pH e temperatura) na atividade das enzimas
Relacionar o efeito da temperatura e do pH com a estrutura e o modelo de
ao das enzimas

Introduo:
As enzimas so macromolculas proteicas que atuam nas clulas como catalisadores
de reaes qumicas. As enzimas conseguem acelerar as reaes metablicas porque
possuem uma forma tridimensional que interage de um modo particular com o(s)
respetivo(s) substrato(s); essa interao d-se numa regio especfica da molcula
enzimtica designada por centro ativo.
As enzimas diminuem a energia de ativao das reaes que catalisam, pois a
formao do complexo enzima - substrato induz uma mudana conformacional no
centro ativo que cria condies (espaciais e energticas) favorveis quebra e /ou
sntese de ligaes qumicas nas molculas do (s) substrato(s)
Todos os fatores que afetam a estrutura das enzimas perturbam a eficincia da
sua atividade cataltica.

Figura 1 Enzima

Figura 2 Complexo Enzima-Substrato

Andr Silva e Francisco Monteiro, 2012

Problema1: Se o pH e a temperatura forem mantidos constantes, a velocidade da


reao ser afetada pela concentrao da enzima e do substrato.
Como varia a velocidade da reao, em funo da concentrao da enzima? E
do substrato?
Observe os grficos A e B da figura 3.
2. Compare a velocidade da reao, em funo da concentrao da enzima e do
substrato.
3. Explique a variao da velocidade, em funo da concentrao do substrato,
atendendo estrutura molecular das enzimas.
Figura 3- A

Figura 3- B

Problema 2- Qual o efeito da temperatura na atividade da catalase?


A catalase uma enzima presente nas clulas vegetais eucariticas contida nos
peroxissomas, pequenas vesculas esfricas (0,5 -1,5 m de dimetro) constitudas
por uma membrana simples e por uma matriz que contem grandes quantidades
desta enzima.
A catalase acelera a degradao intracelular do perxido de hidrognio (gua
oxigenada - H2 O2), um composto oxidante e txico formado nas clulas como
produto secundrio de muitas reaes metablicas.
2 H2 O2

2 H2 O + O2

Deste modo a catalase assume um papel importante no processo de desintoxicao


das clulas.
Materiais:
- Almofariz
- Balana de preciso
- Bisturi ou faca
- Copos de precipitao
- Placa eltrica
- Cronmetro
- gua
- Gelo
- Perxido de hidrognio 10%(v/v) em tampo fosfato (0,05 M, pH 7)
- Batatas (tubrculos de Solanum tuberosum)
Andr Silva e Francisco Monteiro, 2012

Procedimentos:
1. Prepare lotes de trs batatas nas seguintes condies:
batatas em gelo ( 4C) durante pelo menos 90 minutos
batatas cozidas (100C) durante 10 minutos
batatas imersas em gua durante 24 horas
batatas greladas
2. Retirar uma pequena poro de polpa da superfcie de cada uma das trs
batatas e esmag-las num almofariz 1
3. Depositar no interior de uma seringa de 10ml cerca de 0,15 gr de polpa
triturada (anotar o peso exato)
4. Aspirar 3ml da soluo de perxido de hidrognio e vedar rapidamente a
abertura da seringa com o dedo polegar; agitar suavemente rodando a mo duas
ou trs vezes. Aguardar um minuto.
5. Decorrido o tempo de reao, retirar o dedo do polegar da abertura da seringa
e estimar a variao de volume (distncia percorrida pelo embolo em resultado
da formao de espuma bolhas de oxignio.
6. Repetir os passos de 2 a 6 com os restantes lotes
7. Calcule a atividade enzimtica e conclua o preenchimento da tabela I .
Condies analisadas

Peso

Tempo de
reao

4c

Variao de
volume (ml)

Atividade da catalase
(mlO2/min.g PF*

Temperatura
ambiente
100C
Greladas
*PF= peso fresco

Tabela I Registo de resultados

Discusso dos resultados:


1. Por que razo a atividade da catalase pode ser considerada um indicador da
intensidade do metabolismo num determinado tecido?
2. Explique a baixa atividade da enzima a 4C.
3. Qual dos tratamentos (4C, 100C ou temperatura ambiente) serviu de controlo
da experincia?
4. A atividade da catalase maior nas batatas greladas. Justifique este resultado.
Problema 3 - Qual o efeito do pH na atividade da catalase?

no ensaio com as batatas a 4C, o almofariz, a seringa e a soluo de guaoxigenada devem estar previamente arrefecidos
Andr Silva e Francisco Monteiro, 2012

A catalase uma enzima presente nas clulas vegetais eucariticas contida nos
peroxissomas, pequenas vesculas esfricas (0,5 -1,5 m de dimetro) constitudas
por uma membrana simples e por uma matriz que contem grandes quantidades
desta enzima.
A catalase acelera a degradao intracelular do perxido de hidrognio (gua
oxigenada - H2 O2), um composto oxidante e txico formado nas clulas como
produto secundrio de muitas reaes metablicas.
2 H2 O2

2 H2 O + O2

Deste modo a catalase assume um papel importante no processo de desintoxicao


das clulas.
Materiais:
- Almofariz
- Bisturi ou faca
- Tubos de ensaio
- Varetas
- Pipetas
- Gobel
- Cronmetro
- gua destilada
- HCL
- Na OH
- Perxido de hidrognio 10%(v/v) em tampo fosfato (0,05 M, pH 7
- Batatas (tubrculos de Solanum tuberosum) ou fgado fresco
Procedimento:
1. Prepare a soluo de catalase: esmague um fragmento de fgado fresco com
10ml de gua destilada; filtre a soluo para um tubo de ensaio e dilua a soluo
com mais 10ml de gua destilada.
2. Prepare 10 tubos de ensaio e obtenha solues iniciais de perxido de
hidrognio tampo pH5, tampo pH7, tampo pH9, HCl 1mM e NaOH 1mM.
3. Adicione gua destilada e perxido, de acordo com a tabela. (Caso mea com
gotas saiba que 1ml corresponde a 20 gotas de tamanho mdio). Espere 2
minutos.
4. Adicione HCl aos respetivos tubos (segundo a tabela) e verifique se o pH 3
ou inferior. Proceda de igual modo para o Na OH, verificando se o pH igual ou
superior a 11. Adicione o tampo nos diferentes tubos, registando os valores
de pH nos diferentes tubos.
5. Adicione a catalase aos tubos correspondentes, agitando suavemente. Regista
a produo de bolhas de O2 (insignificante, mdia ou intensa).

Andr Silva e Francisco Monteiro, 2012

Tubo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Agua
destilada
5ml
4ml
2ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml

Tampo

H2O2

HCl

NaOH

1ml,pH7
1ml,pH7
1ml,pH7
1ml,pH5
1ml,pH7
1ml,pH7
1ml,pH7
1ml,pH7
1ml,pH7

pH

Soluo
de
catalase
1ml

3ml
3ml
3ml
3ml
3ml
3ml
3ml

1ml

1ml

1ml
1ml
1ml
1ml
1ml

1ml
1ml

Tabela II Condies Experimentais

Discusso:
1. Qual o propsito de completar todos os passos antes de adicionar a catalase?
2. Qual a importncia de utilizar os tubos 1,2,3,9 e 10?
3. Refira a importncia de utilizar um fragmento de carne fresca.
4. Indique o comportamento da catalase em funo do pH.

Andr Silva e Francisco Monteiro, 2012