TECNOLGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES SAN FELIPE DEL PROGRESO

Divisin De Ingeniera Qumica

Cuarto Semestre
GRUPO 401
Anlisis Instrumental

Ing. Guadalupe Lpez Garca

Tcnicas De Cromatografa

Alumno:
Pedro Morales Ruiz

SAN FELIPE DEL PROGRESO EDO. MEX. A 24 DE MARZO DE 2015

ndice
Objetivo________________________________________________________________2
ndice__________________________________________________________________2
Marco teorico__________________________________________________________2-16
Material empleado_______________________________________________________17
Sustancias______________________________________________________________17
Desarrollo de la practica_________________________________________________18-20
Resultados ___________________________________________________________21-23
Cuestionario_________________________________________________________24-25
Conclusiones__________________________________________________25
Bibliografa__________________________________________________25

Objetivo
Identificar la cromatografa en papel, placa, columna aplicando los conceptos
fundamentales de estas para la separacin de los componentes de una tinta y por otra
parte seleccionar el eluyente apropiado para separar una mezcla de violeta cristal y
anaranjado de metilo aplicando cromatografa en placa, y separar por cromatografa en
columna de una mezcla de violeta cristal y anaranjado de metilo.
Introduccin
En general, hay muy pocos mtodos para los anlisis qumicos que son especficos para
una sola especie. En el mejor de los casos, los mtodos analticos son selectivos para unas
pocas especies o para una clase de ellas. Por consiguiente, la separacin del analito de las
Posibles interferencias suele ser una etapa de vital importancia en los procedimientos
analticos. Hasta mediados del siglo XX, las separaciones analticas se llevaban a cabo con
mtodos clsicos, como precipitacin, destilacin y extraccin.
Ahora, las separaciones analticas se realizan mediante cromatografa y electroforesis, en
especial cuando las muestras estn formadas por varios componentes y son complejas.
MARCO TEORICO
La cromatografa es un potente mtodo de separacin que tiene aplicacin en todas las
ramas de la ciencia. La tcnica fue inventada y denominada as por el botnico ruso Mikhail
Tswett a principios del siglo XX. El la utilizaba para separar varios pigmentos vegetales,
como clorofilas y xantofilas, haciendo pasar soluciones de estos compuestos a travs de
una columna de vidrio rellena con carbonato de calcio finamente dividido. Las especies
separadas aparecan como bandas coloreadas en la columna, lo que justifica el nombre
que eligi para el mtodo (del griego chroma que significa color, y graphein que significa
escribir). Las aplicaciones de la cromatografa han aumentado en forma explosiva en los
ltimos cincuenta aos debido no solo al perfeccionamiento de nuevos y diversos tipos de
tcnicas cromatografas, sino tambin a las necesidades crecientes de los cientficos de
mejores mtodos para la caracterizacin de mezclas complejas. La tremenda influencia de
esos mtodos en la ciencia se confirm cuando se otorg el Premio Nobel de Qumica de
1952 a A. J. P. Martin y R. L. M. Synge por sus descubrimientos en este campo. Muchos de
Los Premios Nobel concedidos desde entonces se han basado en trabajos en los que la
cromatografa desempea un papel vital.

DESCRIPCION GENERAL DE LA CROMATOGRAFIA

La cromatografa agrupa un conjunto importante y diverso de mtodos que facilitan la
separacin, identificacin y determinacin de componentes estrechamente relacionados en
mezclas complejas; muchas de dichas separaciones son imposibles por otros medios.
En todas las separaciones cromatografas la muestra se disuelve con una fase mvil que
puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico la cual se hace pasar a travs de una
fase estacionaria inmiscible fija en una columna o en una superficie slida. Las dos fases
Se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen en grados
distintos entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven con mucha lentitud con el flujo de
la fase mvil. En cambio, los componentes unidos dbilmente ala fase estacionaria se
mueven con rapidez. Como consecuencia de las distintas velocidades de migracin, los
Componentes de la muestra se separan en bandas o zonas distintas que se pueden
analizar en forma cualitativa y cuantitativa.
CLASIFICACIN DE LOS MTODOS CROMATOGRFICOS
Los mtodos cromatograficos se pueden clasificar de dos maneras. La primera de ellas se
basa en los medios fsicos por medio de los cuales las fases estacionaria y mvil se ponen
en contacto. En la cromatografa en columna, un tubo estrecho contiene la fase
estacionaria a travs de la cual la fase mvil se fuerza a pasar por presin.
En la cromatografa en plano, la fase estacionaria se fija sobre una placa plana o en los
intersticios de un papel; en este caso la fase mvil se desplaza a travs de la fase
estacionaria por capilaridad o por gravedad. En el presente capitulo y en los tres que le
siguen el estudio se centra en la cromatografa en columna. Una clasificacin ms
fundamental de los mtodos cromatograficos se basa en los tipos de fases mviles y
estacionarias, y en la clase de equilibrios involucrados en la transferencia de los solutos
entre las fases.

TABLA 1 Clasificacin de los mtodos cromatograficos en columna.

En la tabla 1 se enlistan las tres categoras generales de cromatografa: cromatografa de
gases (CG), cromatografa de lquidos (CL) y cromatografa de fluidos supercrticos (CFS).
Como su nombre lo indica, las fases mviles en las tres tcnicas son gases, lquidos y
fluidos supercrticos, respectivamente. Como se muestra en la columna 2 de la tabla, las
dos primeras clases generales comprenden varios mtodos cromatograficos especficos.
Vale la pena hacer notar que solo la cromatografa de lquidos puede llevarse a cabo en
columnas o sobre superficies planas; por otra parte, tanto la cromatografa de gases como
la de fluidos supercrtico estn restringidas a los procedimientos en columna, de tal manera
que las paredes de la columna contienen la fase mvil.
Son clasificados segn el estado fsico de la fase, el mecanismo de separacin y el tipo de
soporte.
La fase mvil puede ser un gas o un lquido, y la estacionaria u lquido o un slido. Se
pueden establecer cuatro tipos de cromatografia: gas-lquido, lquido-lquido, gas-slido,
lquido-slido.
Los mecanismos por los que los diferentes componentes son separados en los procesos
cromatograficos son variados. En algunos casos participan ms de un mecanismo en un
mismo proceso de separacin por lo que dificulta la clasificacin. Los principales
mecanismos que intervienen en la separacin cromatografica son:
Adsorcin: Gases o lquidos contenidos en la fase mvil son retenidos por una adsorcin
selectiva en la superficie del slido que constituye la fase estacionaria. En la interfase

slido-fase mvil hay un aumento de concentracin respecto a la inicial. Este mecanismo

controla la cromatografia gas-slido y lquido-slido.
Reparto: Los componentes de la fase mvil son retenidos por la fase estacionaria liquida en
funcin de su solubilidad en ella. Si las dos son liquidas se tiene un proceso de extraccin
en continuo.
Intercambio Ionico: La fase estacionaria constituida por un slido intercambiando iones con
iones contenidos en la fase mvil, liquida. El intercambio de iones slido-solucin esta
regulado por la afinidad quimica de los iones con ambas fases y por sus respectivas
concentraciones.
Tamao Molecular: Especies neutras de alto peso molecular pueden ser separadas en
virtud de su tamao donde la fase estacionaria es un gel hidrofilico altamente poroso que
retiene las molculas de menor tamao al de los poros. Las molculas de mayor tamao
son retardadas en su paso por pequeas fuerzas de adsorcin de la superfie externa del
gel que luego son excluidas de la fase estacionaria.
Migracin Elctrica: Los componentes inicos de una muestra son separados por su
diferente velocidad y sentido con que se desplazan en un campo elctrico. La fase
estacionaria puede ser un papel saturado por un electrolito. La aplicacin de un campo
provoca un movimiento diferencial de los iones dependiendo de su carga y de su movilidad
ionica.
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
La cromatografa en papel es la tcnica de separacin e identificacin de sustancias
qumicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro.
Se toma una pieza de papel de filtro y cerca de uno de sus extremos se deposita una gota
de la solucin que contiene la mezcla de las sustancias que se quieren separas. Se deja
secar la gota y quedara la mancha de las sustancias mezcladas. El extremo del papel mas
prximo a la mancha se introduce en un disolvente apropiado, pero sin que la mancha
llegue a introducirse en l.
Existen muchos tipos de cromatografia sobre papel, una primera divisin de las variadas
clases podra ser:
1 Cromatografia ascendente: el disolvente se encuentra en el fondo del recipiente que
sostiene al papel y va subiendo a traves de el por capilaridad.

2 Cromatografia descendente: el disolvente esta en un recipiente esta en un recipiente del

que cuelga el papel, fluye por l hacia abajo por una combinacion de capilaridad y
gravedad.
En ambos casos el disolvente avanza a lo largo del papel pasando por encima de la
mancha, al avanzar disuelve y arrastra las sustancias de la mancha, cada una de ellas se
mueve, por lo general a distinta velocidad que las otras.
Se deja actuar el disolvente un tiempo determinado, se seca el papel y se observan las
sustancias separadas si tienen color, o en caso de no tener color se procede al revelado
por una reaccin quimica apropiada.
Esta tcnica se conoce como cromatografa monodimencional y el papel resultante recibe
el nombre de cromatograma monodimencional.

La resultante de las fuerzas:

Cuando el disolvente avanza sobre las manchas de las sustancias, comienzan a actuar dos
tipos de fuerzas opuestas: unas que arrastran y otras que retardan. Las fuerzas propulsoras
actan apartando las sustancias de su punto de origen y desplasandolas en direccin del flujo de
origen. Las fuerzas retardantes tratan de impedir el movimiento de las sustancias,

llevndolas fuera del disolvente que fluye y hacia atrs en el papel.

La distancia recorrida por cada sustancia a partir del origen, en un tiempo dado, es la
resultante de estas dos clases de fuerzas.

Fuerzas propulsoras:Cuando se realiza un cromatograma en papel, las fuerzas propulsoras

ms importantes son: el flujo de disolvente y la solubilidad de cada sustancia en le
disolvente.
Flujo del disolvente:
Si la sustancia cromatografiada fuera completa e instantneamente soluble en el
disolvente que avanza, por ejemplo agua y azcar, y no actuaran fuerzas de retardo la
sustancia ascender desde el origen hasta donde llega el diluyente. En cambio si la
sustancia fuera completamente insoluble en el disolvente en movimiento no se movera del
origen.
La corriente del disolvente es la misma para todas las sustancias de la mancha, as pues, si
el disolvente fuese capaz de disolver instantnea y completamente todas las sustancias,
estas avanzaran juntas hasta el final de la trayectoria del disolvente y terminaramos donde
empezamos con todas las sustancias juntas.

Solubilidad: Una fuerza diferencial es, en efecto, la solubilidad. Pocas son las
sustancias que ofrecen la misma solubilidad en cualquier disolvente. La particular
solubilidad de una sustancia en la corriente del disolvente es una fuerza
propulsora que tiende a desplazarla, manteniendola en movimiento a lo largo del
papel.
Fuerzas retardantes:
Hay tambin dos fuerzas retardantes principales: la adsorcin y el reparto.
Adsorcin: La celulosa de la que esta hecho el papel de filtro, posee propiedades
adsorbentes. Las sustancias depositadas en el papel, en cromatografa, pueden ser ms o
menos adsorbidas en el papel.
La adsorcin es otra de las fuerzas diferenciales, esto significa que unas sustancias son
adsorbidas ms que otras y, por consiguiente, la liberacin de las sustancias de las
manchas variar de una sustancia a otra. Esto contribuye de nuevo a la separacin.
Mientras que se va realizando el cromatograma, las sustancias mas fuertemente
adsorvidas se van quedando atrs, mientras que las adsorvidas con menos fuerza avanzan
hacia el frente.
Reparto: La cormatografia se basa, en una medida considerable, en la presencia de dos
fases liquidas individualizadas. Una de ellas es la corriente del disolvente circulando por el
papel de filtro. La otra es la fase acuosa contenida en el mismo papel de filtro. Una hoja de
papel de filtro aparentemente seca contiene entre un 6 y 12% de agua firmemente adherida
a la celulosa. Aqu es donde entra en funcin el reparto.
Cuando una sustancia que es soluble en dos disolventes no mezclados es expuesta al
mismo tiempo a ambos, se repartir entre ellos. La cantidad que se encuentre en cada

disolvente depender de la relativa solubilidad del soluto en cada uno. El grado de reparto,
una vez conseguido el equilibrio, se llama coeficiente de reparto o razon de distribucin.
Constante Rf:
El ltimo punto alcanzado por el disolvente en su avance se denomina frente del
disolvente. Puede usarse como punto de referencia para expresar las distancias relativas
recorridas por las diferentes sustancias en un cromatograma. El smbolo utilizado para
designar esta distancia relativa es Rf y se define mediante:
Distancia recorrida por el compuesto desde el origen
Rf =
Distancia del origen al frente del disolvente
Como el denominador es siempre mayor que el numerador en Rf debera ser un decimal.
Por razones de conveniencia se suele expresar como un porcentaje.
Asi un Rf de 50 indicara que el compuesto avanzo la mitad de la distancia del frente del
disolvente.
CROMATOGRAFA DE PLACA
La fase estacionaria est constituida por un slido que se empaqueta en una columna,
normalmente de vidrio.Los componentes a separar se aaden en forma soluble por la parte
superior de la columna, quedando retenidos en la misma. Posteriormente los componentes
se desplazan arrastrados por una fase mvil lquida. Dependiendo de la absorcin selectiva
de cada uno de ellos por la fase estacionaria se desplazan a distinta velocidad,
efectundose la separacin.
Para que haya una separacin efectiva de los componentes, su velocidad a travs de la
columna debe ser suficientemente diferente y la longitud de la columna, adecuada.Por
ejemplo, si por una columna con almina como absorbente se introduce una disolucin
conteniendo nitratos de Fe (III), Cu (II) y Co (II) y posteriormente se pasa agua ligeramente
acidulada con cido ntrico se observa la separacin de tres zonas diferenciadas (de arriba
abajo) pardo- rojiza de Fe (III), azul de Cu (II) y rosa de Co (II). Si se desean apreciar mejor
las distintas bandas se puede introducir una solucin de ferrocianuro potsico como
revelador. Se observan entonces coloraciones ms intensas; azul oscuro de Fe4 [Fe
(CN)6]3, pardo- rojiza de Cu2 [Fe (CN) 6] y verdosa de Co2 [Fe (CN) 6].

a) Anlisis frontal.- Supongamos una disolucin conteniendo tres componentes A, B y C,

que se introduce continuamente en una columna en la que la adsorcin sigue el orden C,
B, A. La especie menos adsorbida, A, emerge la primera por la parte inferior de la columna,
y sigue saliendo indefinidamente. Despus de un perodo en que slo sale A, comienza a
salir tambin B, obteniendo una mezcla A + B. Finalmente sale el componente ms retenido
C, junto con A y B.
b) Anlisis por desplazamiento.- La mezcla a ser separada se absorbe en una pequea
zona en la parte superior de la columna. Posteriormente se introduce un disolvente (o una
disolucin) que sea ms fuertemente absorbido que cualquiera de los componentes. El
efecto resultante es que los componentes son desplazados de la columna por el disolventedesplazante y, adems, cada uno de ellos desplaza al inmediatamente menos absorbido.
A la salida de la columna van saliendo consecutivamente todos los componentes y el
desplazador, separados pero uno junto al siguiente.
c) Anlisis por elucin.- Despus de fijar los componentes en la parte superior se pasa un
disolvente puro que no se adsorbe. Los componentes van avanzando por la columna
dependiendo de la fuerza con que son adsorbidos; cada uno de los cuales es distribuido en
una pequea zona. Si la columna es suficientemente larga y los valores de Rf difieren
bastante, se puede lograr la separacin de mezclas bastante complejas. En la Fig. VIII-12
se muestra un cromatograma desarrollado por este mtodo. Cada componente puede ser
recogido y analizado a la salida de la columna.
Adsorbente y eluyentes
Son muchos los slidos que se han utilizado como fase estacionaria en cromatografa de
adsorcin. Los ms importantes son almina, silicato de aluminio, silicagel, xido, silicato y
carbonato de magnesio, xido, carbonato y fosfato de calcio, como inorgnicos; y carbn,
almidn y azcares como orgnicos. Normalmente deben ser sometidos a un proceso
trmico de activacin superficial antes de su utilizacin.
Como eluyentes se utilizan agua, alcoholes, cetonas, steres, cloroformo, tetracloruro
de carbono, etc. Su capacidad de elucin depende de su polaridad, del absorbente y de las
especies a eluir.
CROMATOGRAFA DE REPARTO EN COLUMNA
Esta tcnica es semejante a la mencionada anteriormente en cuanto a materiales
utilizados, mtodos operativos, etc. La diferencia reside en la fase estacionaria utilizada y,
en consecuencia, en el mecanismo de separacin.

En cromatografa de reparto la fase estacionaria es un lquido, poco miscible con la fase

mvil. Los solutos se distribuyen entre las dos fases dependiendo de su solubilidad en cada
una de ellas, es decir, segn su coeficiente de reparto.
Aunque el mecanismo fundamental de la separacin es la extraccin o reparto, es
prcticamente imposible evitar adsorciones por parte del slido soporte, por lo que muchas
de las separaciones son empricas, no pudiendo realizarse un exacto tratamiento terico.
Los slidos soportes ms utilizados son el silicagel, el polvo de celulosa y la tierra de
diatomeas; menos aplicacin tienen el almidn y el relleno de bolas de vidrio.
Cromatografa sobre geles porosos
Es un tipo de cromatografa que se aplica, fundamentalmente, a la separacin de productos
macromoleculares sobre geles hinchables por agua o por cualquier otro lquido
previamente escogido.
El fundamento de este tipo de cromatografa consiste en que al hincharse el gel queda
una cadena muy abierta con grupos terminales generalmente polares que son capaces de
adsorber agua u otros disolventes polares. Segn el nmero de ligaduras entre las grandes
cadenas existe un tamao crtico (lmite de exclusin) de molcula que puede entrar en el
interior del gel, mientras que las molculas de mayor tamao pasarn a travs del mismo,
con lo que, en principio, se origina una separacin de molculas de acuerdo con su
diferente tamao.
El fenmeno puede considerarse como una filtracin a travs de un tamiz molecular y por
eso a esta tcnica se la llama tambin cromatografa con tamiz molecular (ctm); as
mismo se la ha denominado, Penetracin sobre gel, exclusin molecular y tamizado
molecular.
Cromatografa de capa fina
La llamada capa fina consiste en una placa de vidrio, rectangular o cuadrada,
denominadas cromatoplacas, o simplemente placas sobre cuya superficie se deposita una
capa uniforme muy delgada (en ocasiones de algunas micras de espesor) de una
substancia absorbente, casi siempre silica gel o almina, en condiciones tales que resulte
uniformemente extendida y suficientemente adherida. En general, de hace una papilla
acuosa con el adsorbente, que se deposita sobre la placa mediante un aplicador adecuado.
Las placas se secan en estufa para activar la superficie del adsorbente y se encuentran
aptas para efectuar la cromatografa.

A las ventajas de resistencia a la temperatura y a los reactivos agresivos de la

cromatografa en capa fina, hay que aadir una mayor nitidez y sensibilidad de los
cromatogramas, as como una mayor rapidez en su desarrollo. Adems, los cromatogramas
obtenidos pueden conservarse indefinidamente y archivarse si se pulveriza la placa
revelada con una dispersin de un plstico transparente y especial donde quede grabado el
cromatograma sobre la pelcula endurecida del plstico, que se separa fcilmente del
soporte.
Las aplicaciones son semejantes a las de la cromatografa de papel.
Electroforesis
El fundamento de la tcnica consiste en depositar sobre un medio poroso una mezcla de
especies cargadas (algunas pueden ser neutras). Por aplicacin de un campo elctrico
entre los extremos del soporte poroso las especies se separan en funcin de su carga y su
movilidad inica en ese medio. Para favorecer el paso de la corriente se utilizan
disoluciones fondo conductoras (electrolitos), que son generalmente disoluciones
reguladoras en las que se empapa previamente el soporte poroso, debidamente escogidas
para que no formen precipitados con las especies del problema.
Como soportes se han utilizado almina, lana de vidrio, almidn, agar- agar, gel de
silice, etc. tanto en columna como en capa fina, pero quizs el mtodo ms utilizado es el
que emplea como soporte papel. Se suelen utilizar tiras de acetato de celulosa, casi
transparentes, que por poseer una estructura ms uniforme y un poro menor que el del
papel filtro, tienen un mayor poder de resolucin. A estas ventajas del acetato de celulosa
se aade su fcil solubilidad en cidos, lo que facilita la posterior determinacin de las
especies separadas.
La emigracin de las distintas especies en el papel depende de la magnitud y signo de
su carga, del tamao de la partcula, de las propiedades adsorbentes del soporte (que
deben atenuarse en lo posible), del voltaje aplicado y de la intensidad de corriente.
CROMATOGRAFIA DE GASES
Esta tcnica es similar a la cromatografia de columna, con la diferencia de que el sistema
es cerrado y la fase mvil es un gas. La separacin de los componentes gaseosos se
produce por adsorcin selectiva sobre un slido (C.G.S.) o por reparto entre un gas inerte
y un lquido no voltil que constituye la fase estacionaria (C.G.L.). En la actualidad esta
tecnica (C.G.L.) es la ms empleada, aplicandose el analisis de gases o de lquidos y
slidos que puedan volatilizarse a temperatura no superior a 400C.
L C.G.S. es anloga a la C.L.S.

Los componentes del gas problema son sostenidos selectivamente por un slido
absorbente dispuestos en columna metlica, recta o en espiral. El gas problema es
inyectado en la corriente de un gas inerte que le conduce hasta la columna y que hace la
fase mvil. En la distribucin de los componentes del problema entre el gas portador y el
slido absorvervente se verifica una separacin por lo que emergen de la columna a
distintos tiempos pasando finalmente por un detector que los identifica y cuantifica.
En la C.G.L. la fase estacionaria es un lquido no voltil absorbido en un soporte slido que
rellena la columna. Los componentes del gas problema son desplazados selectivamente,
como en la cromatografia de reparto, por el gas portador que fluye de manera continua.
Los componentes de la muestra se separan de acuerdo con sus coeficientes de reparto
entre las dos fases.
INSTRUMENTACION
Esta cromatografia es tan sencilla como las dems, necesita un montaje instrumental ms
complejo debido al trabajo con gases, lo que obliga a trabajar en sistema cerrado y a
controlar caudales, presin y temperatura.
FASES MOVILES: como gases inertes portadores se utilizan H, He, N y aire. La eleccin
del gas portador depende del sistema en estudio y sobre todo del detector que se utilice.
FASE ESTACIONARIA: en C.G.S. los absorbentes mas utilizado son carbn, alumina,
silicagel y tamises moleculares. En el C.G.L. es necesario un slido soporte adsorvente y
un lquido no voltil, el slido soporte mas utilizado es la tierra diatomeas. Los lquidos que
constituyen la fase mvil son muchos, depende de la mezcla a separar y de la temperatura
de operacin (esteres, polioles, aceite de silicona, etc.).
DETECTORES: son muchos tipos de detectores, estos actan siempre por comparacin de
alguna propiedad fsica o quimica (densidad, calor de combustin, etc.) del gas portador
solo (antes de la introduccin de la muestra) y de la mezcla de gas portados y
componentes de problemas. Los detectores se diferencian principalmente por su
selectividad y sensibilidad, por destruir o no la muestra y por ser integrales o diferenciales,
los primeros miden continuamente la muestra acumulada desde el principio del analisis y
los segundos miden concentraciones instantneas. Se utilizan ms los detectores
diferenciales.
EVALUACION DE LOS CROMATOGRAMAS
Los distintos componentes de la muestra emergen de la columna a tiempos diferentes
dependiendo de su retencin en la misma, definido como volumen de retencin el volumen
de mezcla gaseosa que emerge de la columna entre la introduccin de la muestra y la
aparicin de un componente. Se calcula a partir del tiempo transcurrido y de flujo gaseoso.

V r = tr F
El volumen de retencin, asi como el tiempo de retencin (para un flujo constante) son
variables cualitativas que permiten la identificacin de especies. Normalmente se utilizan
los valores respecto al mximo del aire (V'r) o valores relativos frente a una especie
patron. Estas variables cualitativas solo son constantes cuando se producen exactamente
las condiciones, por lo que no son muy utilizadas para identificaciones directas. Utilizando
muestra patrones, la cromatografia de gases constituye el mtodo rpido y excelente para
confirmar la presencia concreta en una muestra. Adicionando un patrn al problema, no
deben aparecer nuevos picos en el cromatograma y deber observar el rea que constituye
la muestra patrn.
La evaluacin cuantitativa se basa en que, en determinadas condiciones, el rea del pico
(detector diferencial) y la altura del escaln (detector integral) son proporciones a la
concentraciones de especies.
APLICACIONES
La cromatografia de gases constituye el mejor mtodo analtico ideado para la separacin
de gases, lquido o slidos que pueden pasar fcilmente al estado de vapor o
transformndolos previamente en otros estados voltiles Ej. metilacin de cidos grasos en
el analisis de aceite y a resuelto problemas de muy difcil solucin para la quimica analtica
empleada hace una dcada. Por eso su utilizacin es indispensable en analisis industriales,
forenses bromatologicos, toxicologicos, clnicos y de contaminacin ambiental.
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCIN
En las cromatografas clsicas, en las que la fase mvil es un lquido que fluye a traves de
un slido por el efecto de la gravedad para alcanzar alta resolucin seria necesario emplear
columnas excesivamente largas, lo que se traducira en un desarrollo muy lento de los
cromatogramas.
Estos inconvenientes se han resuelto con la cromatografia de alta resolucin, en la que se
trabaja con pequeas columnas, muy empaquetadas y forzando el paso de la fase mvil
mediante elevadas presiones, con lo que se consiguen separaciones muy efectivas en un
plazo muy corto de tiempo.
Dependiendo de la fase estacionaria, el mecanismo de separacin puede ser reparto,
adsorcin, tamao molecular (geles) e incluso cambio ionico, aunque los mtodos mas
utilizados estn basados en reparto y adsorcin.

El esquema fundamental de un cromatografo de alta resolucin esta constituido por un

deposito y un dispositivo de bombeo de la fase mvil que opera a elevada presin (hasta
500 atm.), un sistema de inyeccin de la muestra, columnas resistentes, generalmente e
acero inoxidable, rellenas de fase estacionaria, un detector y un sistema de registro grfico.
La columna y los detectores van introducidos en termostatos.
Los detectores ms utilizados en esta tcnica estn basados en absorciometria UV y en
medida de ndices de refraccin, siendo los cromatogramas obtenidos semejantes a los de
cromatografia gaseosa con detector diferencial.
APLICACIONES
1 Concentracin de trazas
2 Separacin de iones interferentes en analisis clsico
3 Separaciones de iones de caractersticas similares
4 Desmineralizacin del agua
5 Preparacin de disoluciones patrn
6 Disolucin de sustancias insolubles.
CLASIFICACION DE LAS CROMATOGRAFIAS
TABLA;1 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA ABIERTA
Nombre de la
Tcnica

Fase
estacionaria

Fase mvil

Desplazamiento Mecanismo de
fase mvil
separacin

C. slido-lquido Sol. absorbente Lquido

Gravedad

Adsorcin

C. lquido-slido Liq. Absorbido Lquido

en soporte sol.

Gravedad

Reparto,
Adsorcin

C. sobre geles

Sol. Gel poroso Lquido

Gravedad

Tamao

Electroferesis

Sol. polmero

Emigracin
inica

Emigracin
inica

Gravedad

Afinidad
quimica

Liq. Ionico

C. intercambio Sol. Cambiador Lquido

ionico
ionico

TABLA; 2 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA CERRADA

C. de gases

Sol. Absorbente Gas

Presin

Adsorcin

Liq. Absorbido
en soporte sol.
C. liquida de Sol. Diversos y Liq.
alta resolucin
liq. Absorbidos
en soporte sol.

Presin

Adsorcin,
reparto,
afinidad
quimica,
tamao

TABLA; 3 CROMATOGRAFIA EN PAPEL

C. adsorcin en Slido (papel)
papel

Lquido polar

C. de reparto en Liq.
Polar Lquido
papel
absorbido
en polar
papel slido

Capilaridad
(gravedad)
no Capilaridad
(gravedad)

Adsorcin
Reparto
(adsorcin,
Quimica)

af.

C.
cambio Slido
inica en papel

Lquido

Capilaridad
(gravedad)

Afinidad
quimica

Electroferesis
en papel

Lquido inico

Emigracin
inica

Emigracin
inica

Slido (papel)

MATERIALES
CROMATOGRAFIA
DE
PAPEL
Vasos de precipitados de 100
mL
Tapn de hule
Papel filtro
Marcadores

CROMATOGRAFIA DE
PLACA
Vasos de precipitados de
100 mL
Placas cromatograficas
Vidrio de reloj
Varilla de vidreo

CROMATOGRAFIA
COLUMNA
Soporte universal
Pinzas de 3 dedos con nuez
Bureta
Probeta
Matraces Erlenmeyer
algodon

POR

SUSTANCIAS

CROMATOGRAFIA
PAPEL
Agua destilada
Alcohol
Benceno
ter
Acetona
Metanol
Cloroformo

DE

CROMATOGRAFIA DE
PLACA
Agua destilada
Alcohol
Benceno
ter
Acetona
Metanol
Cloroformo

CROMATOGRAFIA
COLUMNA
Arena
Silica gel
Agua destilada
Alcohol
Benceno
ter
Acetona
Metanol
Cloroformo

Desarrollo de la prctica

Cromatografa en
papel

POR

Trazar una lnea base en una tira de papel filtro y

deposite al menos 2 puntos de tinta de

En dos vasos de
precipitado depositar 2
ml de muestra, en uno
ter y en el otro

Colocar los papeles con las

muestras de en los Disolvente y
esperar para ver que color tiene
mayor desplazamiento
Medir la distancia recorrida para
calcular el

Rf

Cromatografa en
placa

Trazar una line base en una

placa de vidrio, y se le colocan
dos muestras de tinta diferente
para analizar.

Colocar 2ml de ter y en

el otro se le colocan 2 ml
de benceno.

Introducir las placas de vidrio en

los vasos de precipitado que
posteriormente ya contienen la
fase mvil (eluyente).

El eluyente ascender a lo largo de la capa

por capilaridad eluyendo a los componentes
de la mezcla a distintas velocidades lo que
provoca su separacin.

Cromatografa en
columna
Se sujeta la columna a
un soporte universal,
se rellena con:.
Colocar un poco algodn

Colocar una capa de arena

Colocarle una cantidad de slica gel preparada anterior

mente con 5g de slice gel y 50 ml de benceno.

preparar una solucin de 1ml que contiene naranja de metilo

y violeta de cristal, el cual es la mezcla que queremos
separar y se agrega a la columna.
Despus de lo anterior, se le coloca continuamente nuestro eluyente
o fase mvil que provocar que nuestra mezcla o fase estacionaria a
separar atraviese el sistema. Aplicando una presin para que se
empiecen a separar los compuestos. Los compuestos van saliendo
por separado de la columna y se recogen en fracciones.

RESULTADOS
Calculo el Rf de las muestras analizadas en papel
FASE MVIL
Agua Destilada

Rf
A un tiempo de 21min

Rf =
Metanol

2.43 cm
=0.24333
10 cm

A
un
tiempo
60.08min

de

Rf =
Alcohol
Benceno
ter
Acetona de etilo

4.925 cm
=0.4925
10 cm

Rf=2cm/3cm=0.66cm
Rf=2.3cm/4.7cm=0.48
Rf=5.6/10=0.5

Cloroformo

Trietilamina

Rf=2.5/10=0.25

Calculo el Rf de las muestras analizadas placa

FASE MVIL
Metanol

MUESTRA
Naranja de metilo
Violeta

mezcla

Rf

Rf =

2.8 cm
=0.2947
9.5 cm

Rf =

2.2cm
=0.2315
9.5

Rf =

1.2 cm
=0.1263
9.5 cm

Benceno

Rf=0.7cm/4.5cm=0.5

ter

Rf=2.7cm/4.3cm=0.62

Acetona

Rf=4.4cm/10cm=0.44

Trietilamina

Rf=0.7cm/10cm=0.07

Cromatografa de papel
Descricion

obserbacion

Muestra de las placas con los colores

Disolvente o facel movil para poder observar la polaridad de los

compuestos o tinta

Desplazamiento de los colores por lo tanto prosederemos acalcular el

Rf para cada cromatografia

Cromatografa de placa
Descricion

obserbacion
Muestra de las placas con los colores para la cromatografia
de placas

Disolvente o facel movil para poder observar la polaridad de

los compuestos o tinta

Desplazamiento de los colores por lo tanto prosederemos

acalcular el Rf para cada cromatografia

Cromatografa de placa

Descricion

obserbacion
Montaje del equipo para la cromatografia de placa

Cromatografia de columna preparada con base una capa de

algodn 1 cm de arena silica gel

Se observa los cambios en la separacion de los colores

pero no se obtubieron resultados favorables para esta
practica

Anlisis De Resultados

Como se puede apreciar en las cromatografas de placa y papel se observa que las
distancias recorridas para cada placa apartir de estos datos se puede observar la distancia
y con ello podremos calcular el Fr de cada uno de los colores compuestos que se
aplicaron

CUESTIONARIO
Elusin:
Es la fase mvil de una cromatografa, pero no cualquier elusin; es decir, este es aplicado
conforme a la polaridad de la fase mvil para que envase ms rpido.

Anlisis Frontal
Es el tipo de medicin de los centmetros (cm) que avanza la fase mvil para separar los
colores, son analizadas con el Rf de cada color o componente que aparece en el papel.

Tcnica de Desplazamiento
Estas pueden ser la inclinacin y el tipo de fase mvil, si su concentracin vara y la
polaridad de la fase mvil es menor, entonces ser mucho ms fcil de separar los
colorantes utilizados.

Cul de los colorantes es el ms polar?

El colorante ms polar es el Anaranjado de Metilo

Cul es el disolvente ms adecuado para esta separacin?

El disolvente ms adecuado para la separacin es el alcohol metlico (metanol)

Sera adecuado utilizar metanol en esta separacin?

Si es adecuado, ya que lleva a cabo una separacin de colorantes muy eficaz.

Por qu los derivados halogenados suben ms que los alcoholes en una

cromatografa en capa fina?
Porque el alcohol empieza a evaporar en el ambiente y pierde su fuerza para subir y
separar as los compuestos

Al cambiar de eluyente menos polar por otro ms polar Cmo se afecta la velocidad
de elucin en un alcohol? Yen una Cetona?
Cuando la fase es estacionaria es polar, quiere decir que es ms densa, y ser la que
saldr primero, por lo tanto; la densidad tanto de un alcohol como de una cetona implica
que la polaridad sea similar y sea ms fcil de separar los colorantes.

El vapor de Rf Depende del absorbente utilizado? Y el Eluyente?

La fase estacionaria depende de la polaridad pero influye la concentracin de la fase mvil,
si esta es constante, como lo es la concentracin.

Conclusiones
Pudimos observar que cada una de las cromatografas su pudo observar que cada uno de
los colores utilizados funcionan como la fase mvil y al fase estacionaria es el solvente a
utilizar para que esta se vierta y se obtenga la polaridad de cado color

Referencias
PERRY, ROBERT H. Manual del Ingeniero Qumico 1992. Sexta Edicin. Tercera Edicin
en Espaol. Editorial McGraw Hill. Mxico
Skoog A. Douglas. Principios de anlisis instrumental, 5 ed., Saunders Collage Publishing,
Espana, 2001, pgs.: 785- 791 y 831- 836.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
Willard Hobart, Mtodos instrumentales de anlisis. 7. Ed., Compaa de publicaciones
Wadsworth, California, 1988, Pginas 644-650. http://www.javeriana.edu.co/Facult