ROTEIRO DE AULA PRTICA N 04 Fermentao alcolica

1.

Objetivo(s):
Calcular a eficincia de uma fermentao de glicose por clulas de S. cerevisiae
atravs da medida da produo de etanol e de CO 2 e do consumo de glicose.
Calcular o rendimento do processo de fermentao alcolica.

2.
Descrio do Mtodo:
A fermentao um processo de liberao de energia que ocorre sem a participao do oxignio
(processo anaerbio). A fermentao compreende um conjunto de reaes enzimaticamente
controladas, atravs das quais uma molcula orgnica degradada em compostos mais simples,
liberando energia. A glicose uma das substncias mais empregadas pelos microorganismos
como ponto de partida na fermentao.

C6H12O6 + Zymase 2 C2H5OH + 2 CO2

Esta a equao de Gay-Lussac, que permite o clculo do rendimento da fermentao. O
rendimento de um processo fermentativo pode ser definido como sendo a quantidade de produto
obtido (P) em relao quantidade de matria prima introduzida na dorna, ou quela
consumida no processo (P/So).
Como parte do acar consumido resulta em produtos secundrios, no possvel atingir
o rendimento Gay-Lussac P/So de 0,511. Pasteur, no laboratrio, em condies ideais,
conseguiu atingir o mximo de 95-96% do rendimento terico, P/S = 0,485; definindo o
chamado rendimento Pasteur, valor muitas vezes tomado como referncia para os clculos de
rendimentos industriais. As operaes industriais no so realizadas com os cuidados adotados
por Pauster; portanto, o rendimento Pasteur de 100% tambm no atingido.
De qualquer forma, o clculo do rendimento largamente utilizado pelas indstrias de
fermentao alcolica, lctica, actica, acetonobutlica, ctrica, etc. No aplicvel, entretanto,
aos produtos das fermentaes biossintticas como antibiticos e vitaminas, onde no se
conhece com exatido a proporo e os substratos utilizados diretamente para a sntese. Aps a
fermentao as clulas so separadas do mosto por decantao, centrifugao, etc. e
reutilizadas em um novo processo fermentativo, por um dado nmero de vezes.
3. Procedimentos experimentais
3.1. Produo de etanol, produo de CO2 e consumo de glicose.
a) Montar o fermentador utilizando um kitassato de 500mL, rolha, mangueira e uma proveta de 1L
ou 500 mL com gua numa bacia (como na figura abaixo). Pese conjunto kitassato + rolha. Anote
o valor.

b) Dissolver 5,0g de extrato de levedura (fermento) em 110mL de gua num bquer de 250mL.
c) Adicionar 50,0g de glicose, 0,5g de ureia, 1,0g de KH 2PO4 e 0,5g de MgSO4 em outro bquer
de 250mL. Acrescentar 140mL de gua e agitar at a dissoluo.
d) Misturar os lquidos dos dois bqueres no kitassato do fermentador.
e) Ajustar rapidamente o pH entre 4 e 5 com soluo de H 2SO4 5% sob agitao utilizando o
pHmetro.
f) Fechar com a rolha, pesando o conjunto logo em seguida em balana semi-analtica. Anote o
valor.
e) Conectar a mangueira ao kitassato e adaptar o sistema de coleta de gases. Fermentar por 2h
entre 25 e 30C.
f) Pinar a mangueira e desconectar do kitassato.
g) Pesar novamente o conjunto kitassato + rolha + mosto fermentado. Anote o valor.
h) Calcule o teor alcolico em % utilizando os dados da equao de fermentao e a massa de
CO2 liberada.
i) Verifique se o teor alcolico compatvel com o volume liberado na proveta. (1mol CO 2 = 44g =
22,7L).
3.2. Destilao do etanol
a) Com auxlio de uma proveta, transferir 40mL de vinho (mosto fermentado) para 4 tubos de
centrfuga (10mL cada).
b) Centrifugar at a obteno um sobrenadante lmpido.
c) Medir na proveta e anotar o volume obtido.
d) Destilar a 80C durante aproximadamente 10min.
e) Medir o volume do destilado e calcular o rendimento da fermentao.
4. Mtodo de avaliao
Anlise do desempenho e dos relatrios tcnicos.

1234567-

5. Questes para o relatrio

Qual o objetivo da utilizao das substncias uria, KH 2PO4 , H2SO4 e MgSO4?
Qual a influncia da temperatura neste processo?
A reao de fermentao se completou? EXPLIQUE.
Qual a influncia do pH neste processo?
O processo utilizou oxignio? JUSTIFIQUE.
A lei da conservao das massas pode ser observada na reao de fermentao?
Aps a centrifugao, qual a provvel composio do precipitado?