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fromthe
verybeginning
CARLZEISS . Oberkochen/Wuern.
F. K. Moellring
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TEC**oIOUO,.#O*^*,
Microscopy
from the
very beginning
).
Dr. FriedrichK. Mijllring
Dipl.-Biol.
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1 . T h i si s a m i c r o s c o p e
2. And now a bit of practice: we focus a specirnen
3 . A g l a n c eb e h i n di h e s c e n e s ,
5 . C a r e a n d c l e a n i n go f i h e m i c r o s c o p e
2nd Step:
Microscopy foriho serious worker
6. Nurnericalapertqre, usefuTmagnificatior
and limit of resolution
7. Oilimmers'on
8. The question of cover glasses
9. Microscope illumifaiion for more exacting
requirements(KohTermethod)
1 0 . L e n g t hm e a s u r e m e n tusn d e r t h em i c r o s c o p e
1 1 . T h e c a r n e r ao n t h e m i c r o s c o p e
12. N4icroprojection
Addiiional'nformation
Z E I S S - a n dt h e a r t o f m i c r o s c o p y
5
6
t5
2A
35
37
41
43
51
53
51
59
60
60
62
Preface
W h e r e a si n s t r ! c t i o nm a n ! a s d e a l w i i hi h e o p e r a t i o n
r i c r o s c o p em o d e l ,
o f o n e p a r t i c u l am
t h i s b r o c h u r ei s l n t e n d e dt o f u r n i s hg e n e r a li n f o r m a t i o n
on rnicroscopy,ihat is, facts which apply equallyto a types
and even rnakes of rnicroscope.
T h e b o o k l e ts e r v e si h r e e p u r p o s e s :
1 ) l t l s i n t e n d e dt o b e a g u i d ef o r t h e b e g i n n e r ,
w i t h t h e a i d o f w h i c h m i c r o s c o p ew o r k
s h o u l db e a p l e a s ! r ef . o m t h e o u t s e t .
2) li will briefly recapliulatethe most essentiaifacts
about m croscopy for the benefit of those
w h o d o n o i u s e t h e m i c r o s c o p er e g u l a r l y .
3 ) l t i s a s o f o r t h e L r s eo f t h e e x p e r e n c e dm c r o s c o p i s t
who wanis to !ntroduce oihers io ihe field of microscopy.
H e m a yf i n d o n e o r t h e o t h e ro f i h e h i n t s
c o n l a i n e di n t h e b o o k l e th e l p f u lf o r i e a c l r i n g I t s h o u l db e r e m e m b e r e dt h a t w e i a k e m a n y t h i n g s
, n d a l l t o o q u i c k l yf o r g e tt h e d i f f i c ut ! e s
f o r g r a n t e da
w e o n c e h a d w h e n w e m a d eo u r f i r s t a c q u a l n t a n c e
W e w i s h y o u a s u c c e s sa n d a r e s u f e y o u w i l l e n j o yw o r k l n g
w i t h y o u r Z E I S Sm i c r o s c o p e .
6
7
8
-1o
1.This is a microscope
l ) E y e p i e c es, i p p e d i n t o u p p e r e n d o f t u b e .
T h e e n g r a v e dv a l u e ,e . 9 . , 1 2 . 5 x , l n d i c a i e st h e m a g n i f i c a t i o n
o f t h e e y e p j e c e ;m u l t i p l i e db y t h e m a g n i f i c a t i o n
of the objective, this gives the tota magnification
2 ) I u b e ( h e r e a n l n c l i n e dt u b e f o r m o n o c ua r o b s e r v a t i o n ) .
W h e n t h e s c r e w c o l l a ri s l o o s e n e d
a n d t h e t u b e p r e s s e da g a i n s ta s p r l n gi n i t ,
it can be lifted oui.
j ) N o s e p i e c et o . q - i c l e \ c h a - 9 e o - o b e c i ! e s
4) Objecuve designation 40/0.65
1 6 0 / 0 . 1 r7n e a n s :
o b j e c u v em a g n l f i c a t i o4n0 x , n u m e r i c aal p e l 1 u r e0 . 6 5
( s e ee x p l a n a t i o o
n n p a g e3 7 ) ,
c o m p u t e df o r m e c h a n i c at lu b e l e n g t ho f 1 6 0m n
a n d 0 . 1 7m m c o v e r g l a s st h i c k n e s s .
5) Specimen siage wiih spring clips.
6 ) C o n d e n s e r( c o r r e c tp o s i t i o ni s a w a y s j u s t b e l o w
STANDAFDKF M croscope
C o n d e n s e frr o n t l e n s s w i n g i n go u t
f o r i l l ! m i n a t i o no f l a r g e fo b j e c if i e l d s .
7 l l r i s l e v e r ( c o n d e n s eor r a p e r i u r ed i a p h r a g m ) .
8) Swjng-out filier holder for filters of 32 rnrn diameter.
9) Fine adjutrnentknob. On STANDARD KF Mlcroscopes
t h i s a T l o w su n l i m l t e dr o t a t i o n l
on other rnicroscopesits rotation is limiled by iwo stops
(lndex beside ihe knob, see Fig. 2).
Coarse adjustrnentknob. With all Zeiss mlcroscopes,
rotation in the direction of the arrow brings objectve
and pecirnencloser together
( t h e s a m ea p p l i e st o t h e f i n e a d j u s t m e n t ) .
10) Attachable simple substage illuminaior for direct
connecuonto the mains (which can be exchangedfor mirror)
with rotary switch and ground glass.
1 1 ) B a s ew i i h i h r e e - p o i n si u p p o r t .O n t h e ! n d e r s i d e ,
iapped holes for screwing down in cabinei as we l
as two holes for mounting ihe connecilng brackeis
o f s e p a r a t ei l l u m i n a t o r s .
S t a r t b y s c r e w i n gt h e o b j e c t i v e si n t o i h e n o s e p i e c ew, o r k i n g
f r o m o w m a g n i f i c a t i o nusp w a r d s P
. l e a s ea v o i dt o u c hn g g l a s s
surfaces, parlicularly the froni lenses of the objectives. lf
you touch them inadvertenily, remove the fingerprint imrne
djately wiih ihe aid of a soft linen rag (see also page 35).
W e n e e d p e c i m e n s
T h e m i c r o s c o p es t a n d so n a i a b l e s o t h a i y o u c a n t o o k i n r o
m e e y e p r e c er r o m a c o n v e n i e n p
t o s t u r e .M i c r o s c o p e sw i t h
o-i a b-ilt-:n
oest sei _o - f,onr oI a aTp
w t f . l d r g e J f o r n y e n i ! . 9 s u . { " c e . ( W o - < w - n s p e cd l
rnicroscope
i l u m i n a t o r si s d i s c u s s e do n p a g e 4 5 ) .
ileight of condenser,
T h e c o n d e n s e ri s i n p l a c e a n d t u r n e d o r p L r s h e du p a t h e
w a y . T h e c o n d e n s e frr o n r l e n s i s s w u n gi n . T h e e y e p i e c ew
b e i n s e d e d l a t e r . A t i h e b e g i n n i n go f a n e x a r n i n a i i o nw, e
a r w a y s u s e a o w - p o w e r o b l e c t v e o f a b o u r6 . 3 o . 1 0 x ,
b e c a u s ei t p e r r n i t sc o v e r a g eo f a w i d e r f i e l d a n d i s t h u s b e s t
s u l t e df o r s c a n n i n g .I n a d d i t i o n ,i s d e p t h o f f j e t d i s g r e a t e r
ihan thai offered by objedives of higher power, and ii is
i h ! s e a s e r t o f i n d t h e p l a n eo f b e s i d e f i n i r i o n _
Whaiis themagnificarion?
C a u io n i n s p i t eo f b u [ - i n s l d e p r o t e c u o n l
T h e o b j e c t i v ei s ' l u m i n a t e d
B e f o r e n s e i r i n gt h e e y e p i e c eo f l o w e s t p o w e . j n t o t h e i u b e ,
w e o p e n t h e j r s d i a p h r a g mo f t h e c o n d e n s e ra n d t u r n t h e
i l l u r n i n a t i nm
g i r r o r u n t i l t h e b a c k l e n s o f t h e o b j e c i i v e ,w h i c h
i s v i s i b l ea i t h e l o w e r e n d o f t h e t u b e , i s e v e n l y i u m i n a r e d .
W h e n i h e a t i a c h a b l es i r n pe s u b s t a g ej l u r n i n a t ofro r d i r e c t
c o n n e c t i o ft o t h e m a n s s h o w ni n F t g . 1i s u s e d , t h i so p e r a i i o n
i s n o t r e q u i r e d .A f t e r t h e e y e p i e c eh a s b e e n i n s e r t e d ,w e
c o s e t h e c o n d e n s e rl r s a b o u t h a l f w a y ,l o o k i n t o r h e e y e p i e c e a n d i n c r e a s et h e d s t a n c e b e t w e e nt h e o b j e c t i v ea n d
t h e s p e c j m e nb y t h e c o a r s e a d j u s t m n tu n t I d e t a ts o f t h e
s p e cm e n c a n b e r e c o g nz e d ,e v e n i f t h e y a r e s t l l b l l r e d .
E x a c t f o c l s i n g i s n o w a c h i e v e dw t h t h e a i d o f t h e f i n e
adjustment. n ihe case of spec mens of very low conrrasi,
f i n d i n g t h e f o c a p a n e r n a y o c c a s i o n ay b e s o m e w h a r
d l f f l c L r l ti;t i s f a c l t a t e d i f d u r i n g o p e r a t i o no f r h e c o a r s e
a d j u s i m e n i h e s p e c i n r e ni s s l o w l y d i s p l a c e do n t h e s t a g e ,
b e c a u s em o v j n gs i r ! c t u r e s c a n b e r e c o g n i z e dm o r e r e a d i l y .
C l o s i n gt h e c o n d e n s e irr i s f u r i h e rm a y a s o b e h e l p f ! . W h e n
t h e a r e a i o b e e x a m l n e di s i n i h e c e r i e r o f t h e f i e d o f v i e w ,
i h e o b j e c t i v eo f r e x t h i g h e rr r r a g n i f i c a i i omna y b e m o v e dt n t o
p o s i t i o nf,o r w h i c ho n y t h e f i n e c o n t r o li s n e e d e df o r f o c ! s i n g
(parfocal objectives see page 29).
D o . o t s i o p d o w nt o o f a r
T h e a d j u s t m e no
t f t h e c o n d e n s e ri s a p a r t i c u l a r t yf r e q u e n t
s o u r c e o f e r o r . T h e c o n d e n s e ri s c o r r e c t l ya d j u s r e dw h e n
i i s i n l t s h i g h e s ip o s l t i o no f d i . e c t l y b e l o w t h i s a n d w h e n
i t s l r s l r a s b e e . c o s e d o i l y f a r e n o u g hr o o b i a i n j u s t
s u f f c l e n t c o n i r a s tT h e b e g n n e r u s ! a y s l o p s t h e c o n d e n s e r
d o w nf a r i o o m u c h N
. e v e ru s e t h e c o n d e n s e r s t o d m t h e
i m a g e lO i h e r m e a n s , e . g . g r a y f l t e r s , m u s t b e L r s e df o r i h i s
p u r p o s e . L o w e r n g i h e c o n d e n s e r" i o j n c r e a s ec o n t r a s t '
w h l c h s p o p ua r w j t h m a n ym c r o s c o p i s t so n l y h a s t h e s a m e
e f f e c t a s f u r i h e r c l o s i n gt h e c o n d e n s e ri r j s a n d s t h e r e f o r e
l f w t h o b j e c i i v e so f v e r y l o w p o w e r i h e u r n i n a t e df e l d
s h o u l db e t o o s m a , s w n g o l t t h e f . o n t e n s o f i h e c o n d e n s e r
a n d o p e n i s d j a p h r a g mi u l l y .
ALwayskeep a hand
on ihe fineadjustment
T h e d e p t ho f f i e l d l n t h e s p e c i m e nc o r r e s p o n dn g t o a c e r t an
s e t t i n go f t h e f i n e a d j u s t m e njts e x t r a o r dn a r y s h a l l o w( m o r e
p r o n o u n c e dw j t h h i g h - p o w e r o b j e c t v e s t h a n w i t h l o w e r
p o w e r s ,m o r e w j t h h i g h - q u a l i i yo p t c s t h a n w h e n t h e s e a r e
l e s s g o o d ) .T h i s i s i h e r e a s o nw h y n m c r o s c o p i cw o r k i h e
f i n e a d j u s i m e nits c o n t i n u o u s l yr n o v e du p a n d d o w n n o r d e r
t o c o v e ri h e e n t j r ed e p t h o f t h e s p e c i r n e n .
W h e nt h e f n e a d j u s t m e n tf a i l s
poinis:
Two rnportant
W h e n ! s n g o p t c a l i n s t r u r n e n t ss,u c h a s a m i c r o s c o p eo r a
l e l e s c o p e t w o t h i n g sa r e o l g r e a t i m p o r t a n c ea n d s h o ! d b e
'
) r h e e / e ' L o u l d b e e " ' e d w h e n l o o k i n gi n l o t 5 ' e / e o e
2 ) t h e e y e s h o u l d b e k e p t a i a c e r t a i n d i s i a n c ef r o m t h e
r e a x e da c c o m m o d a t i o n
B e g l n n e r so f t e nn a k e i h e m i s t a k eo f f o c u s i n gt h e m i c r o s c o p e
as if the magnified mageihey want to view were ocated
v e r y c l o s et o t h e e y e ,a s c o s e a s a p o s l a g es t a m pw h l c hw e
w a n t 1 0 s t u d y i n d e i a f o r i n s t a n c eT. h s n e a r s e t u n go t t h e
e y e ( = a c c o r h m o d aoin ) i s h o w e v e r e x t r e m ey t i r i n gl l r n a i n
t a i n e d f o r a l o n g e ri i m e . W e t h e r e f o r er e c o m m e n dw o r k i n g
w i i h p e r f e c t L yr e a x e d e y e s . A t t h e b e g i n n i n g t h l s i s d o n e
m o r e e a s i l yl f w e i m a gn e t h a t w e a r e v i e w i n gt h e m a g e a s
"into
ihe m croscope
i f i t w e r e a t i n f n i t y .T h u s d o n o t l o o k
but thro!gh the microscope".
l f y o u a r e n o t q u i l e c e r i a j n a s i o w h e t h e ry o u a r e r e a l l y
w o r k i n gw i t h r e a x e d e y e s ,m a k ei h e f o o w i n gt e s l :
F i r s tf o c u s t h e s p e c m e n .I h e n h o l d a r n i r r o r! n f r o n t o f y o u r
s e c o n de y e ,w h i c hi s n o t l o o k i n gi n t o i h e r n i c r o s c o p es,o t h a i
y o ! c a n l o o k o l t o f t h e w i n d o w o r a i a n o b j e c ta l t h e o t h e r
e r o o l L h er o o n W - e _ y o u L " - I o r q o dt i s e . e " - _ e f a l
o b j e c t ,t h e o t h e r e y e m l s t a t t h e s a m e u m e s e e i h e m i c r o s c o pc l m a g ew l i h r n a x i m u md e f n i i i o n .l f t h i s i s t h e c a s e ,y o u
are slre that you can work n an absolutely relaxed'siate.
A l w a y sr e m e m b e lrh a t t h e m i c r o s c o p ec a n b e r e f o c ! s e dw i t h
t h e a d o f t h e f i n e a d j u s i m e nat n d c a n t l r u s r e L e v ey o u r e y e
c f the experlenced
o f a c c o m m o d a t i o nl t i s c h a r a c t e r i s t i o
r nc r o s c o p j s t h a t h e k e e p s p l a y L n gw t h t h e f i n e a d j u s t m e n t .
l n i h i 6 w a y h l s e y e s l v l n e v e rg e t t r e d , o r a c i l a y h ! t 1
a n d g o o d c o n i a c t "o f t h e p u p s
T h e s e c o n di m p o r t a n p
t o n t i s t h e c o r r e c td l s l a n c eo f t h e e y e
f r o r nt h e e y e p l e c eS
. h o ud i h e e y e b e b r o u g h ia s c l o s et o t h e
a s w t h a r n a g n i f i e rG
? e n e r ay n o t ,
e y e p i e c ea s p o s s l be
b e c a u s et h e c o r r e c t e y e p o i n t a s t h i s d s i a n c e i s c a e d ,
v a r i e s a c c o r d i n gt o t h e e y e pe c e u s e d .T h e b e s t p r o c e d u r e
s t o m o v e i n f r o m a f e w i n c h e s d i s t a n c eu n t i Lt h e f i e l d o f
view is widest and sharply defined. In thi cae, all the lighi
rays emerging from the microscope find their way into the
eye. As is evident from Fig. 3, this is possible orly if the eye
pupil is brought very exactly to the point of constringenceof
the m'croscope s light rays, whic$ has therefore been named
the exii pupil of the microscope . When you have acquired
a cei.ain amount of pract ce in the use of a miiroscope, you
will automatically find and keep the right distance from the
Eyepuprrredu.esrhe fierd.
L e t ! s i o w p a ! s e t o c o n s i d e rw h e r e y o u m a y s l i l l e n c o ! n t e r
d i s . u l l . i n . o . r r i - 5 - dq . a i , r c n ( rer .
er '.o opi s L a t e r a l lrye v e r s e d
Y o u h a v e ,o f c o l r r s e ,n o i i c e dt h a t t h e m i c r o s c o p i cm a g e s
u p s d e d o w n . f y o ! d i s p l a c et h e s p e c r n e n1 c 'o n e s i d e , t h e
l m a q e m o v e s i n t h e o p p o s i t ed r e c u o n .Y o u w g e 1 a c c u s t o n r e dt o t h i s s o q u c k l y i h a t y o ! w s o o n f o r g e t t h e f a c t
Y o u c n n o to b t a i na s h a - pi m a g e
L t m a y h a p p e ni h a t y o u c a n n o t g e t a s h a r p i n r a g e o f t h e
s p e c i m e ni n s p i l e o f e v e r y i hn g y o ! d o . n t h s c a s e ,t h e t n e
" d . J " _ n e_ L c e r L e r e d e d " s t o o r ' e r e d . - e p r g e 9 l
o t r - o b e r . e r o c F e , r h e , o e u i n " n b e ' o _ e" s ' " o - r a g e
s o b t a i n e dT
. h e n t h e c o v e r g a s s i s e i l h e r f a r l o o t h i c k ,o r
y o ! h a v e l n a d v e r t e n l l yp l a c e dt h e s p e c r n e nw r o n g s j d e u p
o n i h e s l a g e .W h a t e v e rt h e c a u s em a y b e , l h e s p r n g m o u n t
o f y o u r Z E S S o b j e c tv e p r e v e n t sd a m a g et o l h e s p e cm e n .
O v a l f l e l do f v e w ?
I t s n o i o n l y t h e b e g l i n e r w h o s u d d e ny f i n d s t h a t t h e f e l d
o f v e w i s n o t r o l n d . I n t h i s c a s e ,e t h e r t h e o b t e c u v eh a s n o t
f u y e n g a g e di t s c l c k s i o p p o s t o n o r t h e f i t e r h o d e . b e l o w
t h e c o n d e n s e ro r n f r o n l o f t h e I l n r i n a t o ri s n o t s w u n g i n
' M o u c h e s! o a . t e s '
A n o t h e r p h e n o m e n o nm a y a t f i r s t b e n e x p i c a b e t o t h e
b e g i n n e r S p e c m e n s w i t h a w i d e c l e a r b a c k g r o u n dm a y
s h o w s t r a n g e ,i r r e g u l a rp a t c h e s ,s h a p e d r a t h e r l k e w o r r n s ,
w h i c hr e m a i ns t a t i o n a r yw h e nt h e e y e l s f x e d , b u t w h i c hs t a r t
r n o v i n gw h e n t h e v e w l n gd f e c t i o n s c h a n g e dT. h e s ea r e i h e
s h a d o w so f i n h o m o g e n eei ts i n t h e a q u e o u sh u r n o ro f i h e e y e ,
w h c h b e c o m ev i s i b l e w h e n e v e rt h e e x t p u p i l o f l h e m c f o
s c o p e b e c o m e sv e ' . / s m e l l : j f t h e c o n d e n s e ri r i s i s c l o s e d
d o w n t o o f a r o r f a h g h - p o w e re y e p e c e s ! s e d . ( l n c d e n
t a y t h e s a m es h a d o w sc a n b e s e e n I y o u l o o k a t a u n t o r m
s k y . H o w e v e r i,h e s k y m u s i b e b r i g h t b e c a u s eo n y t h e n d o
t h e e y e p ! p i l s c l o s ef a r e n o u g h . )
O b l q u e ! u r n i n aot n
A s t r a n g ee f f e c l m a y o c c u r w h e n t h e i m a g e i n t h e m l c r o s c o p e a d o p t s a c e r i a i n r e i e f a p p e a r i n ga L m o s t o h a v e a
'shlft
ihe image.
t h l r d d i r n e n so n , a n d f o c u s n g s e e m s t o
q
u
e I u m n a to n " . A
T h s a w a y s h a p p e n si f y o u h a v e o b
g l e n . e i n t o t h e t u b e w t h t h e e y e pe c e r e m o v e dw i i ! s h o w
12
y o u t h a t t h e b a c k l e n s o f t h e o b j e c t v e i s n o t u n i f o r my
i l l u mn a t e d .T h s c a n b e c o f f e c t e db y r e a d j u s r i n g
rhe minor
K e e pb o t h e y e s o p e n
I y o u a r e n o t u c k ye n o l g h t o h a v ea b n o c u l a rt u b e f r o m t h e
v e r y s t a r t ( s o t h a t y o u c a n l o o k i n t o t h e m c r o s c o p ew i i h
b o t h e y e s l , o b s e r v a t i o nw i i h o n y o n e e y e w i i l a t f i r s t b e
s o m e w h a td f f c ! l t . W e t h e r e f o r e a d v s e v e r y b o d yw h o
i h r o w s r n o r et h a n l u s t a n o c . a s l o n a lg a n c e n t o t h e m c r o
s c o o et o k e e p h i s s c o n de y e o p e n f r o n rt h e v e r y s t a r t .T h e
i m a g e s e e n b y t h e s e c o n de y e , w h j c h i s n a t u r a l l ys u p e r i m p o s e d o n t h e m i c . o s c o pc m a g e w i l l b e f o u n d d l s i u r bi g
o n y i n t l r e b e g n n n g a n d w I l a t e r b e s u b c o n s co u s y s ! p p r e s s e d .l n o r d e r n o t t o h a f m t h e u n l s e d e y e b y l h i s f o r n r
o f d i s c o r n e c t i o n, t h e e y e s s h o ud b e L s e d a l t e r n a t e l y .
A . a c c e s s or : t h e e r e s ( r e e n
A n y Z E S S m j c r o s c o p ec a n e a s i l yb e c o n v e r i e df o f b n o c u l a r
o b s e r v a t i o ns n c e i h s o n l y m e a n sc h a n g i n gt h e l u b e
H e r e a s o t h e q l e s t o n a r i s e sh o w e y e g l a s sw e a r e r ss h o ! d
/ o r k T t s Fb " .
L of e - p e g t o r . - o
a n d t o l s e s p e c l a e y e pe c e s f o r e y e g l a s sw e a r e r s .B l b b e r
g u a r d sa v o l d s c r a t c h l n go f t h e e y e g l a s s e s .
L ft h i s i s n c t p o s s b e , y o u s h o ! d f i r s r o f a f n d o l t w h e r h e r
y o u r e y e ga s s e s h a v e s p h e r i c a o r t o r i c e n s e s .T h i s c a n b e
d e t e m n e d v e r y e a s l y . H o d y o u . g l a s s e si n f r o n t o f y o !
a t a r m ' s e n g i h : t h e e n s e sw e r h e f r e d u c eo r m a g n t f ya n
o b j e c to n i h e i a b l e .T h e n r o t a i et h e g l a s s e sa b o u rt h e c e n t e r
o f t h e e n s t h r o l g h w h c h y o u a f e o o k n s . l f t h e s h a p eo f i h e
ob 6.
dob
oi cha od d
r'-
g as<a. o 6
otdteo
. e
13
h a s o n y s p l r e r i c apl o w e r t h o w e v e r ,i f l e n g t ha n d w i d t h o f t h e
o b j e c t c h a n g ed u r n g r o t a i i o n ,t h e g a s s e s h a v e r o r i c e n s e s
( F i g . 5 ) . l n t h e l a t t e rc a s e y o ! w i l l h a v e i o k e e p t h e g a s s e s
o n o r h a v e a u x l i a r y l e n s e s m a d e f r o m y o u r e y e g l a s sp r e s c r i p t i o nw
, h i c ha r e t h e n s l i p p e do n r o t h e e y e p i e c e s( e n s u r e
correct orentaton!) lf your glasseshave only sphertca
enses/o. on p o.e Lher .o ^orl n rl Lhe . o. ope
a n d n o o s s o f s h a r p n e s sw i l l b e o b s e r v e d .I n r h s c a s e i h e
v j s u a l d e f e c t i s c o m p e n s a t e db y t h e a d j u s t m e n io f r h e
H o w l s a f i r n a g ef o r m e d ?
b r i g h t n e s sa n d h a r p n e s s
W e m u s tf i r s t o f a l l ! n d e r s r a n dt h f o r m a u o no f a n i m a g e ,f o r
w h i c h w e s h a l c h o o s ea v e r y p r i mt i v e e x a m p l e . f y o u a r e
s t a n d i n gi n a d a r k c o r r d o r a n d t h e k e y h o l eo f a d o o r t s o f
a p p r o p ra t e s i z e y o u c a n c l e a r l ys e e a p j c i u r eo f t h e w i n d o w
i n t h a t r o o m p r o l e c i e do n t h e o p p o s i i ew a l l o f r h e c o r i d o r
t p i n h o l e c a n r e r a ) .Y o u i m m e d i a t e l yr e c o g n i z e w h a t s
h a p p e n l n ge: v e r y p o i n t o f i h e w l n d o w e m i l s l i g h r r a y s n a l i
d r e c t i o n s .W h i l e m o s t o f t h e m e n d o n i h e w a s o r a i t h e
door, a few of them pass through the keyhole (Fig.6).
C o n s e q u e n i l ya, b r g h t p a r t o f t h e w t n d o wp r o d u c e sa b r i g h t
p a t c h o n t h e w a i l , a r d a d a r k p a r t p r o d u c e sa d a r k p a r c h
A n d b e c a u s ea l l i g h t p a t h s c a n j u s t a s w e l l b e f o l l o w e di n
i h e o p p o s i t ed i r e c to n , w e m a y a l s o s a y t h a i e v e r y p o f t o n
t h e w a l i o ft h e c o t r i d o r ( = u n i t oaf r e a l s e e s a m o r e o r r e s s
b r i g h ts p o t o f t h e w i n d o wt h r o u g hi h e k e y h o l e( F i g .7 ) .
T h e d r a w b a c ko f s u c h a n m a g e i s a b o v e a l i t s l o w b r i g h i
n e s w h i c hw o u l d i n r m e d i a t e lbye i n c r e a s e di f t h e h o l e w e r e
l a r g e r .S o l e t s m a k e i t a r g e r
T h r o u g hi h e b i g g e r h o e , a u n i l o f w a l l a r e a n o w s e e s " n o i
only ihe dark flower pot, blt aso ihe brightwindow pane
b e s i d e t ( F i g .8 1 .A s a r e s l l i , i h i s ! n t i s n o w n e i t h e rd a r k
n o r b r l g h t ,b L r tg r a y - t h e d i v i d i n gl i n e b e t w e e nt h e p o t a n d
t h e p a n e i s n o w b l u r e d i n i h e i m a g eo n t h e w a l . I n o t h e r
w o r d s , t h e t w o p o i n t s a t a d s i a n c ed a r e n o o n g e r r e s o l v e d '
l . e . , i h e y c a n n o l o n g e rb e r e c o g n j z e ds e p a r a t e l yN. a l u r a l l y ,
i h e b g g e r t h e h o l ei h e m o r e b l u r r e d s t h e l m a g e .T h i s i s d u e
to the fact that in a p n-hole camera ihe rectilinear propag a t i o no f l i g h t d o e s n o t m a k e a p o i n t c o r r e s p o n dt o a n o t h e r
t5
l
l
v/t
16
T h e r e s o n l yo n e p l a n e
A s a n e x a m p l e ,l e t u s c o n s i d e ra c a m e r at a k i n ga p i c t u r eo f
a p l a n t .T h e l g h i t r a v e l sf r o r n a n y p o i n i o n t h e p l a n t j n a l
d i r e c to n s ( F i g .1 l ) . A p a r t o f t h e l l g h t r a y s i s l n t e r c e p t e db y
t h e o b j e c t i v el e n s ,r e f r a c t e da n d r e c o m b i n e di n t h e f i l m p l a n e
l f b e h i n dt h e p l a n t t h e r e i s , f o r e x a m pe , a w i n d o w ,t h e n t h e
ray6 emanatingfrom there do not recombine exactly in the
film planebut in front ol it, aid on the filrna circleof diam e t e r I i s i n a g e d i n s t e a do t t h e p o i n t :t h e w i n d o w i s o u t o t
"Focuslng
c a n b e a c h i e v e do n l y b y a r e l a i i v e
f o c u s( F i g . 1 2 ) .
b
d i s p l a c e m e n i e t w e e n e n s a n d f i l m p l a n e .T h i s s h o w s t h a t
! n a n i m a g ef o r m l n gs y s t e m a g i v e n o b j e c t p a n e i s a w a v s
. o ' r e d t e or o " d . r ' l e p l a n eo ' " F a p I n a g e l
H o w b i g w i l l t h e i m a g eb e ?
(Fis.13).Therorrnula
*""a ,r'r" -"d, 4-i
distance)
S l n c ei h e i m a g ed i s t a n c eb i n t h e c a m e r ai s s m a l l e r ,u s u a l l y
m u c hs m a l l e rt h a n t h e o b j e c t d i s t a n c ea , t h i s o p t i c a l j n e t r u m e n i o f c o u r s ef ! r n i s h e s r e d u c e dp i c t u r e s .
W e b u i l da m o d e lm i c r o s c o P e
18
W e n o w k n o w e n o u g hi o t r y a n d b u i l d a r n o d e m c r o s c o p e
frorn the cornponenis we have Learnt to understand - a
c o n c r e t em o d e li f p o s s i b l eo, r o t h e M l s e a n i r n a g i n a r yo, 'n e
T h e m i c r o s c o p ei s i o m a g n i f y ;t h e r e f o r et h e c a m e r ag l v j n g
r e d u c e d m a g e s i s n o t s u i t a be a s a b a s i s f o r o u r m o d e l
microscope. We are ooki.g fo. an opiica inslrurnentwhich
p r o v i d e se n l a r g e di m a g e s ,i . e . , n w h i c h t h e i m a g e i s m l c h
further away from lhe lens than the object SLrchan instrum e n t i s f o l n d i n t h e f a m i i a r s l i d e p r o j e c t o r( F l g 1 4 r A =
object,ihe slidei B = screen imagei L = proiection ensl
S l n c e i n t h i s c a s e t h e o b j e c t t h e s l i d e ,d o e s n o t e r n i t L i g h t
i t s e l f , i t m l s t b e i l u m i n a t e df r o m b e h i n d L e t u s i h e r e f o r e
p l a c e a L a m pb e h i n dl t ( F l S .1 5 ) .H o w e v e r ,t h e s i d e j s m u c h
l a r g e rt h a n t h e l a m p f a r n e n ia n d i h e l e r s d i a m e t e r s, o i h a t
o n l y t h e i g h i r a y s p a s s i n gt h r o l g h i h e c e n i e r o f t h e s l i d e
r e a c ht h e l e n s . B e s u l t :t h e f e d s n o i f l t l y u m j n a i e d i,h e
m a r g i n a zl o n e s r e m a i nd a r k - T h t s c a n b e r e m e d i e db y a
ight source which is at leasi as arge as ihe stde. An
i l i u m i n a t e dg r o u n d - g l a s s c r e e ni s s u i r a be f o r t h i s p u r p o s e .
T h e l g h t s t r i k i n g i h s s c r e e n i s d e f l e c r e di n a d i r e c i t o n s
( F l g .1 6 ) -S u c ha s c r e e na l s o a o w s i h e j g h t r a y s t r a n s m i i t e d
b y t h e p e r i p h e r a pl a r t s o f r h e s l i d e t o e n l e r r h e t e n s .H o w
e v e r , t h i 6 i s r a t h e ru n e c o n o mc a l b e c a u s et h e m a j o r p a r r o f
i h e i g h t r a y s s d e f e c i e d i n d i r e c r i o n si n w h c h w e d o n o i
need any light. A better solution is a tens (here called
c o n d e n s e rw
) h c h d i r e c t sa l l i n c t d e n tr a y s e x c t u s i v ey t o t h e
p o i n tw h e r et h e y a r e r e q u t r e d t: o i h e p r o j e c t i o ne n s ( F i g . j 7 ) .
W e t h l s h a v et h e f a c i i h a t i n t h e f i r s i p l a c e t h e l i g h t s o u r c e
s i r n a g e db y t h e c o n d e n s e ri n t h e p r o j e c r i o nl e n s ,w h i t e i n
t h e s e c o n d p a c e a n r n a g eo f i h e s t i d e i s f o r m e d b y r h e
p r o j e c i i o nl e n s o n t h e s c r e e n :a s o c a t l e d n r e r t o c kn g l g h r
p a t h s u c h a s w e f i n d i n t h e m i c r o s c o p ew t h t h e s o , c a e d
K d h l e rm e t h o do f i l l ! m n a t i o n( s e ep a g e4 5 1 .
T h es e c o n d m a q e J o m n g s y s t e m
(Fig. 19) viewed once with the naked eye from a reading
distance" of 10 ins. and then through a magnifier is seen
under considerably higher magnificationdue to the refraction
of rays. But ihe magnifier also magnifies rhe texture of the
g r o u n dg l a s ss o t h a t i t b e c o m e sd i s t u r b ' n g( F i g s . 2 0a n d 2 0 a ) ,
and we therefore investigate whai happens if we simpty
remove rheground glass. The image witt stitt exist in rhe same
plane in the form of a so-called aertal image. Through our
magnifier this aerial irnage will, however, be visibte onty in
the direction of the illuminated projection lens and around ir
there will be darkness, because ihe rays miss the magntfier.
This is illustrated in Fig.21. ln rhis case, rhe remedy consists
once more in the use of a lens in exactly the pjane in which
the image 's formed. Just as a magnifier placed directty on
writing does noi magnify the letiers, a lens located exacity or
almost exactly in the image plane has no effeci on image
22
s h a r p n e s sb, u i c o n . r ' o L r e st o b n g h t e n i n gt h e
,rd,g,ra,zones
o r r n e n a t d b a c u s er h e r a y s p a s s i n gt f e s e z u , r e 6
are rrans
-nill-ed
I n i o t h e y e ( T , 9 . 2 2 ) .f h e s e t r e r dt e n s e s , a s
r!ey are
,
r
h
e
.
e
r
o
.
e
ca eo. are
becer tha- Srourd Srass"s ana ,n
@ o r f l o n , i r e y d o n o t . i n l r o d u c ev o - b t e s o m e g . a i n
irlo tte
rtrg trn otherwords we have here a case
which:s very
s r n l a r l o r h e o n e n e n r , o n e da b o v e , w n e - e
we had a tens
p r a c e da s a c o n d e n s e rb e t w e e n, a n p
a n d s , i o e_ t i k e w i s e
as a ground-gJasssubsiitute).
Tle- effrciency ol our noder
p.oveo by rhe
." fte ro ow:rs pse. rhese are 1ol
l i -r*.:rlo- :s c o p ; ci T a 9 e s
senurne
m
b . t i n a g e s a c . L J Jpyr o d u c e db y a 2 r 2
p r o j - c t o ra n d t w o s o e c t a c t et e r s e s .O n e
s p F c t a c , er e n sw a s
u s a o a s a t i e t d i e r s , l h e o r h e r a s a r e y e t e n s .r l e
eye was
represented by a reftex camera wjth its jens
focused at
inf'nity.
i h s s w h a i r h ei t e r m e d r a tm
e a q eo o k r k .
a.c ob3eiy:d sr.!qE a m.sn fer tF n 20)
o p i n a r e s !t s , r e p r o d r c e d
o i y w h e n! 3 n s
24
: r o m t h e n r o d e l t ot h e
V e r y f e w c h a n g e sa r e r e q L r t r efdo r t h e s t e pf r o r nt h j sp r o j e c i o r
w t h m a g n i i e . v e w n g t o t h e r n c r o s c o p e .T h u s r h e i m a g e
d s t a n c eo l s e v e r a J e e t s i o o a w k w a r d .W e s h o l l d a t s o i k e
t o h a v e b o t h o p t c a l s y s i e m s .v : . . i h e o n e c a L sn g r h e f i r s r
m a g n t c a t o n ( t h e o b j e c t v e )a n d i h e o n e m a q n f y n g t h i s
r m a g ea s e c o n dt m e c o m b n e d n o n e n s ! r ! n e n i . T h e e n t r e
s e i u p c a n b e k e p t m l c h s m a e r b y a p p r o p r a r es e e . i i o n o f
b ,l . ! . w 6 -e . e - d o , o .
- o t. .-o
o.op"
aroLrnd
t h s i g h t p a t ha n d k e e p i n m n d t h a i t h e p a t h o i r a y s
s u s ! a l y f c d e d ' f o r g r e a t e cr o n v e n i e i c e a i d w e h a v e
a r e a m i c f o s c o p{eF s . 2 3 )
o
@
T h e p r i n c i p l ei n a n u t s h e
T h e p r i n c i p l eo f i h e m i c r o s c o p en r a yi h u s b e s u m r n azr e d a s
T h e m i c r o s c o p eo b j e c tv e f i r s t f o r r n s n t h e t l b e a m a g nf l e d
a e r a l i m a g e( n l e r r n e d i a tiem a g e )o f t h e s p e c i m e ni u m i n a t e d
f r o m b e l o w b y t h e l a m p a n d t h e c o n d e n s e r .H o w e v e r ,t h i s
i m a g e i s n o t i n t e r c e p t e d ,b u r v i e w e d u n d e r m a g n i f i c a t i o n
t h r o u g ha m a g i i f i e r( c l l e de y e p i e c e )
T h e d e s i g no f i h e l i g h i p a t h
n t h e f o r e g on g p a r a g r a p h sw e h a v e t r t e d t o e x p a n i h e
b a s i cf a c t so f t h e m l c r o s c o p ea s c e a r y a s p o s s i b l e ;i n d o i n g
s o , h o w e v e r ,w e w o u l d g i v e n o e x a c i d e s c r i p t o n .t n i h e f o t l o w i n g ,i h e r e a d e rw h o s m o r e f a m i l a r w i t h o p t i c a ls u b j e c t s
w i l l f i n d i n s t r u c t i o n sf o r t h e d e s i g n o f a r n i c r o s c o p et i g h t
p a t h .I n p r j n c i p l et,h s i s r e a y q u t t ee a s y .
F i r s t m a g e j o r m i n gs y s t e m
. . . a n ds e c o n dm a g nf c a t o n
n a n o t h e rc a s e [ F j s . 2 5 ) w e a r a n s e a l e n s O k n s u c h a
m a n n e ri n r e l a i i o r t o a n o b j e c t B ' A ' t h a i t h e l a l r e ri s s h i f t e d
s l i g h i l yo f f t h e f o c a Lp o i n t n t h e d i r e c t i o no f t h e l e n s . T h e
d e s i g no f t h e p a t ho f r a y s i s a n a l o g o u sA: f t e r b e i n gr e f r a c t e d ,
t h e p a r a l e l r a y p a s s e si h r o u g ht h e f o c a l p o i n l ,w h l e t h e r a y
i h r o u g ht h e e n s c e n i e r t s n o t d e f l e c t e d S
. ill, the two rays
do nor intersectr only their extensions ro ihe rear have a
po nt of intersecuon
a i B " o r A " . T h e m a g eB " A " i s l i k e w i s e
e n l a r g e db
, u t e r e c t a n d v i r t u a l ,i . e . , t c a n n o tb e i n t e r c e p t e d
b e c a u s et h e l i g h i r a y s d o n o i r e a l l yi n t e r s e c a
t t t h e p o i n t sB "
a n d A " . - T h i s i s t h e l i g h t p a t h o f a m a g n i f i e ra n d t h u s a s o
ofamcroscopeeyepiece
L fw e c o n n e c it h e s et w o l i g h tp a t h si n s u c ha m a n n e rt h a i t h e
mage formed by Ob s at the same iime the objeci for Oc,
t h e n w e h a v e t h e t w o - s t a g el m a g ef o r m a io n o f a c o m p o u n d
m i c r o s c o p e( F i g 2 6 ) .
26
2T
4. Practical hints
After a brief exc!rsion nio the theory of the rnicroscope
t h e r e s t l r e m a i na f e w f a c t s t h e u n d e r s t a n d j n o
gfwhich s
l ork.
o t l m p o r t a n c ef o r p r a c t i c aw
Objective
Engraving
a n d o t h e rc h a r a c t e r i scis
T h e o b j e c i i v e i s e n g r a v e d w t h a v a l u e ( F i g .2 7 ) w h i c h
n d i c a t e sf a r m o f e t h a n i n i t i a m a g n l f i c a 1 ! oant o n e . L e r u s
r e p e a ti h e e x a m pe o n p a g e 5
40/0.65
I60/0.17
m e a n s , n i l i a l m a g n f c a t i o n 4 0 x ( r n u l ip e d b y e y e p i e c e
m a g n l f i c a i i o n= t o t a l n r a g n f c a t i o no f m i c r o s c o p e ) n; u m e r
c a a p e r t u r e0 . 6 s ( f o r e x p l a n a o
t n, see page 37Jr for use
w t h m c r o s c o p e sw i t h a m e c h a nc a l i u b e e n g t h o f 1 6 0 m r n
(d*d-.e oe.^ae' ob,.'r - rl".qe cnd e.eo.ce s". 9
f a c e )a n d w t h a c o v e r g a s s o f 0 . 1 7 1 0 0 1 m m t h c k n e s s .
n s t e a do f 1 0 . 1 7t h e e n g r a vn g m a y a l s o r e a d / = i n s e n s l t i v e t o a r g e r d e v i a l l o n so f t h e c o v e . g a s s i h i c k n e s s / 0 =
c o r r e c t e d f o r " z e r oc o v e r - qa s s t h i c k n e s s . e . f o r u n c o v e r e d
O b j e c i i v e sw i t h o ! t a n y f u r t h e . e n g r a vn g a r e i h e w l d e l y
! s e d a c h r o r n a t s .O t h e r e n g r a v e da b b r e v i a i i o n sf r e q u e n t l y
P l a n = P a n a c h r o r n ait. e f l a t - f i ed a c h r o m a t
Neofuar = high'aperiureobjective (see pase 37) wiih
m p r o v e dc o l o r r e n d i t i o nh, l g h c o n t r a s i ,b ! t w t h o u i f a t f i e l d .
P l a n a p o= P a n a p o c h r o r n a tor b j e c t j v e o f o p t m ! m c o o r
c o r r e c to n , m a x i m l m p e r t l r e a n d f a t f i e d .
L J l t . a f u a r= s p e c i a o b j e c t i v e f o r L rt r a v o l e t r l 1c r o s c o p y
c o t r e c t e df o r w a v e e n g t h sb e t w e e n2 3 0 a n d 7 0 0 n r n .
E p p a n = f a t - f e l d o b j e c t i v ef o . v e r t i c a b r g h t ' f e d i u E p p l a n H D - f l a t ' f i ed o b j e c t i v ef o r v e r t c a b r g h t f L ed a n d
d a r k - fe l d i l i u m i n aot n ( i n c o n j ! n c to . w i t h c o n c e n t rc
r e f e c t i n go r . e f . a c t i n gc o n d e n s e r ) .
P O L = s t r a i nf r e e o b j e c t i v ef o r p o l a rz e d g h t m c r o s c o p y .
P h 2 = p h a s ec o n t r a s i o b j e c i i v e f o r d i a p h r a g m2 o f t h e
p n a s ec o n r r a s rc o n o e n s e r s .
m . l . = o b j e c t i v ew t h i r i s d i a p h f a g m a s o s u t e d f o r t r a n s
r n t t e d d a r k J i ed I u r n i n a t i o n .
Oel
.9
Glyz
E
E
.t
glycerin
5 1 5 )b l a c kr i n g
333)whiie r ng
455) orange rins
7401yel ow rlnq
K o n . - h i s h a p e r t u r e o b l e c t v e w i t h c o r r e c t i o nc o a r i o
a l l o wf o r d i f f e r e n ic o v e F ga s s t h i c k n e s s e s( s e e p a s e 4 3 ) .
n a d d i t i o n ,c o l o r e d r . g s n e a r t h e k n u r l e d r n g f a c i l i i a t e
r e c o g n i i i o no f i h e d i f f e r e n t m a g n i f i c a t j o n sbi l a c k- 1 x ,
brown 2.5,<rctl-4t,
orange-6.3r,ye ow-10).,
light green
1 6 x , d a r k g r e e n - 2 5 ) < ,l i g h t b l u e - 4 0 x ,
dark blue
6 3 x , w h i t e - 1 0 0 ) < .( T h ec o l o r r i n g s r e f e r r i n g
t o t h e m m e r so n r n e du m ,h o w e v e r , a r ec l o s et o t h e o b j e c t i v e
front ens;see tab e above.)
F o r m e r l y ,c h a n g l n g o b j e c t i v e s w a s r a t h e r i n c o n v e n i e n i ,
b e c a u s et h e t u b e h a d t o b e l f t e d b e f o r e i u r n i n g i h e n o s e
p e c e , a n d e v e r y o b j e c t i v eh a d i o b e f o c u s e d s e p a r a t e l y .
Today, tl.e objectives are parfocal . Th s means thai they
a r e o p t j c a l y a n d m e c h a n ca l y d e s g n e d s o t h a t i h e d l s i a n c e
b e t w e e n t h d s p e cr n e n a n d t h e a e r i a l m a g e i s a l w a y s
c o n s t a n t .S l i g h t r e f o c u s i n gw i t h t h e a i d o f i h e f i n e a d j u s t
nrent is therefore s!fficient to resiore critical sharpness of
t h e i m a g e a f t e i c h a n g i n gf r o m o n e o b j e c t i v et o a n o t h e r ,
w h i l e t h e c o a r s e a d j u s t m e n tn e e d n o l o n g e r b e o p e r a t e d .
T h i s f e a t u r e i s p a r t i c u l a r yv a l u a b l ew h e n w o r k i n g w i t h o i i
i m m e r s i o ni,n w h i c h c a s e t h e d e p t h o f f o c u s i s s o s m a l lt h a t
focusing wlthout padoca ized objeciives usually presents
c o n s i d e r a b l ed i f f l c u i t y .( O n l y t h e e s p e c i a i l yo n g P l a n a c h r o
mat 1 objecuve ls not parfoca ).
a n di h e l rp r e r e q u i e l i e s
I t s h o u l d ,h o w e v e r ,b e n o t e d t h a t a f e w c o n du o n s m u s i b e
s a t s f i e d t o m a i n t a i nt h e p a r f o c a s e t t i n g o f t h e o b j e c t i v e s :
j n t h e f i r s t p l a c e , o n y e y e p i e c e se n g r a v e d" C A R L Z E I S S '
must be used (oiher eyep eces are des gned for a different
l o c a i i o no f t h e a e r l a l j m a g e ) ;s e c o n d l y ,t h e o b s e r v e rm ! s t
h a v e n o r m a lv s i o n ( o r t h e v i s u a d e f e c t m u s i b e c o t r e c t e d
b y e y e ga s s e s o r a f o c u s l n ge y e l e n s ) ia n d f i n a l l y ,c o r e c i
t u b e e n g r hi s e s s e n t i a( w i t h b r n o c u l a r i u b e s , i d e n t i cvaa t u e s
m l s t b e s e t a t t h e e y e p i e c et u b e s a n d t h e w h e e b e t w e e n
t h e e y e p i e c e sS
. ee page32.).
N o r m a l m e d i u mt o h g h - p o w e ro b j e c t i v e sh a v e a r e t a t i v e l y
s h o r t w o r k i n gd s t a n c ea n d m a y k n o c ka g a i n s t h e s p e c i r n e n
u n l e s ss p e ca l c a r e i s t a k e n . n o r d e r t o p r e v e n id a m a g er o
the specinren or the front lens of the objective, these
objectives therefore have a built'in spring so thar the
objective as a whole wi y eld io pressure. Sorne objectives,
p a r i c ! l a r y t h o s e f o r o i l i r n m e r s i o nc, a n b e l o c k e d i n t h e
r e t r a c t e dp o s i t o n b y c o c k w i s e r o l a i o n . T h s i s i o a v o i d
s o i l i n go f t h e s p e c r n e nw t h o l w h e n i h e n o s e pe c e i s t u r n e d .
A very important h ni regarding h gh dry objecrives wt I be
f o ! n d o n p a g e3 9 ( c o r r e c t i o nc o l l a r ) .
A s i n g l et y p e f o r a l l o b j e c tv e s
E y e p l e c e fso r s p e c t a c l ew e a r e r s
30
T h e m o s l w i d e y u s e d e y e p i e c em a g n f c a t o n s a r e 8 x a n d
1 2 . 5 r . F g . 2 8 s h o y T sa l s i o f a l l r e s u l i a n tm a g n l f i c a u o n e
w h i c h c a n b e o b l a i n e dw l t h o u r m j c r o s c o p eo b j e c t v e s a n d
P a r t i c ua r m e n i i o ns h o u l db e m a d e o f t h e e y e p i e c e s p e c i a l l y
d e s i g n e df o r s p e c t a c l ew e a r e r s .A s w a s m e n t i o i e d a r e a d y
o n p a g e 1 0 , i h e e x i t p u p o f t h e m i c r o s c o p ea n d t h e e y e
p u p i lm u s tc o j n c i d ei f i h e e n t i r ef i e d o f v e w i s i o b e c o v e f e d .
W i i h n o r m a l e y e p i e c e s l,h e d i s t a n c eb e t w e e ni h e e d g e o f
i h e e y e p i e c ea n d t h e e x i t p u p i l ( e y e p o i n t ) i s s o s h o r t t h a t
e y e g l a s s e sc a n n o tb e k e p t o n i f t h e t w o p u p i l sa r e t o c o i n c i d e .
T h e h g h e y e p o l n t o f t h e s p e c i e l e y e p i e c e sf o r e y e ga s s
w e a r e r sr n a k e st h i s p o s s i b l ee v e n w h e n t h e e y e g l a s s e sa r e
n o t r e m o v e d .T h e r u b b e r g u a r d s s u p p l i e dw i t h t h e s e e y e p i e c e sp r e v e n ts c r a t c h i n go f t h e s p e c t a c l el e n s e s -. f t h e s e
(1600)
125
0
1000
600
630
500
100
320
250
200
160
125
t00
60
OJ
50
10
32
25
20
125
t0
0
63
5
s p e ca l t y p e s o t e y e p i e c ea r e u s e d b y o b s e r u e f sn o r w e a r i g
g a s s e s ,c a r e m L r 6bt e t a k e n1 o k e e pt h e e y e sa t a n a d e q u a i e
d i s t a n c ef r o m t h e e y e p i e c e sl.f n e c e s s a r yf l, n d f 9 s r e c o r r e c r
d l s t a n c ec a n b e f a c i l i t a t e db y s t i p p i n g e y e c u p s o n t o r h e
F i e l d - o f -e
vw nurnber
K p l w d e - a r g l ee y e pe c e
5 x
6.3r
8 X
8 ) <
10 )<
l0 r
12.5.1
12.5' (
12.5)..
16 I
2 5 X
20
18
16
18
16
t6
18
10
6.3
E x a n r p l eai 1 0 ) . o b j e c t i v ei n c o m b n a t i o nw t h a l 2 . S x e y e p e c e p e r r n i t sa f j e l d o f 1 . 2 5m m d i a m e t e rt o
l l r e s p e cm e n p l a n e .
T h e m c r o s c o p ec a n e a s i i yb e e q u i p p e df o r b i n o c u l a ro b s e r
v a i i o n b y e x c h a n gn g i h e o r d i n a r yi u b e f o r a b i n o c u l a rt u b e .
T h e e y e p l e c es l e e v e so f i h l s i ! b e c a n b e d i s p a c e d i n r e l a r i o n
i o e a c h o t h e r o n a s l d e t o a l l o w f o r a d a p t a r i o nt o r h e
i n d v d l a l i n t e r p u p a r y d i s t a n c eo f t h e o b s e r v e r .l f y o u k n o w
y o u r i n t e r p u p ial r y d s i a n c e ,y o L rm a y s e l i h i s v a l u e o n t h e
w h e e j n t h e c e n i e r b y d r a w i n gt h e t u b e s a p a r t . f y o u d o n o t
kfow this value,look into the eyepiecesand vary ihe
d i s t a n c eb e i w e e nt h e t u b e s u n i i l t h e f i e l d s o f v i e w s e e n b y
b o t h e y e s c o n c i d ee x a c ty . T h e v a l u et n d i c a t e do n t h e c e n i r a l
32
l f y o u s h o u l dh a v e t h e i m p r e s s i o ni h a t y o u r v i s u a l a c u t y i s
different in the two eyepieces, adjusi the eyepiece s eeve
o n i h e p o o r s i d e u n t i l b o t he y e s s e e t h e s a m e ,s h a r p l yd e f i n e d
I u r n i n a t i n lga r g ef i e l d s
O b l i q u ei l l u mn a t i o n
T h e r e q u i r e r n e n tm
s a d e o f a c o n d e n s e ra r e p a r t l y c o n t r a
dictory, because it is Jrot only ihe large object fields of the
low-power objectives which have to be illumjnaied, but also
the pupils of high-power syiems of high aperiure. Some
condensers are therefore equipped with a swing out froni
lens: as soon as a owpower objeciive reproduces more
t h a n t h e c o n d e n s e ri l l u m i n a t e st h
, e c o n d e n s e lrr i s i s o p e n e d
fu y and the front ens swung out. Condensers without a
s w i n g - o u l e n s u s u al y a l l o wt h e f r o n t e n s t o b e u n s c r e w e d l
i f e v e nt h i s i s i r n p o s s i be , t h e n l t i s n e c e s s a r yt o c h a n g et h e
F o r p h a s e - c o n t r a sj ltl ! m i n a t i o na s p e c i a lc o n d e n s e ri s u s e d ,
the design and operation of which are described in the per
t i n e n t i n s t r u c u o nm a n u a l .T h e s ep h a s e c o n d e n s e r sa r e a l s o
s u t e d ' o s o - c a e d o b l i q u ei u - r i n a lo n . a n d
f o r d a r k - f e l d i l l u m i n a t o n . A f t e r t h e m i c r o s c o p eh a s b e e n
a d j u s t e du n d e r b r l g h t - f e l di l l u m i n a t i o nt ,u r n t h e t u r r e i p l a t e
"l" (iris,
f r o r n i t s c l i c k - s t o pp o s i t i o n
i . e . , b r i g h tf i e l d )t o t h e
e f t o r r i g h t , a n d y o u w l l l i m m e d i a i e l yn o t i c e t h e t h r e e
d i m e n s i o n ael f f e c i w h i c h i s t y p i c a l o f o b l i q u e j l u m i n a t i o n .
Shortly before ihe field of view is completely obscured as
y o u k e e p t u r n i n gt h e p a t e , o n e - s i d e dd a r k j i e l d i l l u m i n a t i o n
Enemy
No.1: dust
D u s t i s p r a c tc a l l y e v e r y w h e r ea n d m a y b e c o r n ea s o l r c e o f
t r o l b e w h e r e v e r - a s n t h e n r i c r o s c o p e- . f e c h a n i c a l
p a r t s a r e m o v n g i n p r e c i s i o ng u i d e s .W h e n t h e t r a c k s a r e
c lr t y t h e y n e e d w a s h i n g a n d r e g r e a s i n g
whlch shoutd
p f e f e . a b l yb e d o n e b y t h e m a n u f a c r u r e r .
D u s t o n o p ! c a l e l e r n e n t sw i l l d e g r a d et h e i m a g e q u a lt y t o
a greater or esser exteni. lt is true rhai a surfaces exposed
t o d l s t a r e a l s o e a s i y a c c e s sb e f o r c e a n n g , b u t n o g a s s
s u r J a c ei s i r n p r o v e db y ' c l e a n i n g ' ,s o t h a t i h e b e s t a d v i c e
i s a l w a y s i o a v o i d e x p o s L r eo f t h e m c r o s c o p et o d u s t b y
c o v e r i n gi t u p w i t h a h o o d w h e f n o t n l s e o r b y k e e p i n gi t
i n a c a b l n e rS
. p e c r a lc a r e s h o u l db e r a k e nr o e n s u r et h a t t h e
tlbes of the m croscopeare always cosed ether by an
e y e pe c e o r a d u s t p u g .
D r t y o b j e c tv e f r o . i e . s
W h i l e d l s t p a r t l ce s o n t h e e y e p l e c ew o n l y g v e r s e t o
p a i c h e s i n i h e i m a g e - w h i c h n o i e v e r y o b s e r v e rf i n d 6
d s t u . b n g - a d i r t y o b j e c t j v ef r o n i l e n s m a y h o p e l e s s l y
r e d u c et h e s h a r p n e s so f t h e r n a g e ,o r a t l e a s t i t s c o n t r a s t .
D L r et o t h e f a c i t h a t j t l s c l o s e t o t h e s p e c m e n a n d p o s s i b l y
t o i h e l m m e r s j o no i l o f i h e c o v e r g l a s sb, u t p a r t c u l a r y t o t h e
h a n d o p e r a tn g t h e n o s e p i e c et,h e f r o n t l e n s o f t h e o b j e c t i v e
-le
is - .p.ri"l d.9e- o" gerr.9 soled. t.Snresf i n g e r p r i n tm a y h a v e g r a v e c o n s e q u e n c e s( F i g s . 2 9 , 3 0 J .
B e f o r es i a r i i n gi m p o r t a n tw o r k t s a d v s a b e
p a r t i c ua r l y
i f t h e m i c r o s c o p el s n o t u s e d b y o n e o b s e r v e ra o n e - t o
lnscrew every oblectve and check t carefuy wiih the ad
of a magnifierD
. r t i s e a s y r e . o g n z e d f t h e o b j e c i i v ei s
h e l d s o t h a t t h e i m a g eo f a l g h t s o l r c e i s r e f l e c t e df r o m i t s
p l a n es u r f a c e .l n t h e c a s e o f o b j e c t v e s w h i c h h a v a
e concave
f r o n l e n s , a d l f f e r e n ta p p r o a c hs i n d i c a t e dv, i z . ,i o e x a m j n e
i h e s u r f a c eo f t h e f r o n t l e n s f r o m t h e s c r e w t h r e a ds i d e .T h e
r e m a i n i n gl e n s e e r n e n t sc a n a s o b e e x a r n i n e de a s l y a n d
a n y f a u l s ( c r a c k s ," s t a r t n g o f t h e c e n r e n Od e t e c t e dw i t h -
35
H i n t so n r r o u be - s h o o tn g
S h o u l ds t r ! c t u r e sb e f o u f d i n t h e i m a g e w h i c ha r e s u s p e c t e d
o f b e l n ge x t r a n e o u st o t h e s p e c l m e nt,h e f a ! l t n a y b e t r a c e d
l f t h e t r o u be c a n b e e l l m i n a t e db y s i g h t a d j u s t m e not f t h e
c o n d e n s e rt,h e c a u s em u s tb e s o u g h ii n i h e b u l bo f t h e a m p ,
i h e l a m p c o n d e n s e ro r t h e f l t e r i n f r o n t o f t . F l o w e v e r i,t
a d j u s t r n e not f t h e c o n d e n s e rd o e s n o t p r o d u c e a . y r e s u l t ,
t h e n e x i s t e p s t o t u r n t h e f o c u s i n ga d j l r s t m e nwt ,hi c h s h o u l d
e i i r n i n a t ea I t a u l t sd u e i o s o i l i n go f t h e c o n d e n s e fr r o n t e n s
o r t h e s p e c i m e nl.f t h l s d o e s n o t l e a d a n y w h e r es, l i g h tv t u r n
f r s t t h e o b j e c i i v ea n d t h e n i h e e y e pe c e , a n d y o L rw i l l l m r n e diately notice in which case ihe foreign body lollows ihe
D u s t p a r t c e s a r e m o s ! c l e a ry s e e n w h e n t h e a p e r t l r e s t o p
h a s b e e n f u L L yc l o s e d , b e c a u s ei n i h i s c a s e l h e d e p t h o f
focus is al its greatest,
C l e a n i n gb, u t h o w ?
l n a l r n o s ta l l c a s e s t w i l l b e s u f f i c i e nt o c l e a nt h e o u l e r l e n s
faces wlth the a d of a srease'free brush (jf necessarv,wash
n e t h e . f i r s t ) o r w l t h a f r e q l e n t v w a s h e d 'a b s o l u t e l vd u s t f f e e i n e n r a g a n d d i s t e d w a t e r ,p r o d u c de a s i l yb v b r e a t h i n g u p o nt h e s u r f a c et o b e c e a n e d
l f a n o r g a nc s o l v e n ic a n n o tb e d l s p e n s e d w i t ht, i s a d v l s a be
r o u s e v e r y l i t t l ee t h e ro r b e n z i n ej n s t e a do f w a t e r ,b u t n e v e r
alcoho which mght desiroy the cernent between ens
E t h e ri s u s u a y p r e f e r r e db e c a u s ei t e v a p o r a t e sr n o s t q u l c k L v
a n d a n y h a r r n f u le f f e c t j s t h u s l e s s i k e l y F i n a l y , r e s i d L r e s
are aLwaysremoved with water as descrlbed above.
a i r b e a v a a b l e f o r c l e a n i n g ,b e s u r e t o
S h o u l dc o r n p r e s s e d
use a f lter of cotton wool.
lf the alr in the work roorn conlin!ousy has a relative
h u r n i d i t yo f m o r e t h a n 6 0 0 / 0c e r t an p r e c a u t i o n ss h o u l d b e
. o not
t a k e nt o a v o l df u n g u sg r o w i h o n t h e o p t i c a le e r n e n t sD
k e e p m i c f o s c o p e su n d e rp l a s tc c o v e r s ,d o n o t s i o r e t h e m ! n
c a b i n e i s ,b u t e n s u r e g o o d v e n t i l a l i o n ,i n e c e s s a r yw i t h t h e
a i d o f a f a n . I n a p a r t j c u l a i yh u m i dc l r n a t e i t s a d v i s a b l et o
k e e p o p n c a l p a r i s n p e f e c t l y a r p r o o f c o n t a i n e r sp r o v i d e d
w i t h a d e s sc a n t o r l n w h j c h f o r i f s t a n c e ,a a m p a n d a f a n
c rcllate a r of 40 +0 o C (100-1 20 o F) - Our agents have
s p e ca l i n s t r u . io n s a n d w l l b e p a s e dt o a s s i s ty o u .
6 . N u m e r i c a la p e r t u r e ,
useful magnification and limit
of resolution
ihegalrinthesde
t o a d i f f r a c u o ng r a i n
T o u n d e r s l a n dt h i s q u e s t i o nb e t t e r , l e i u s n o w t h i n k a g a n
oi the prolector and the projecied sl!de described n
s e c t j o n3 . A t f i r s t w e o b s e r u ei h e l a n d s c a p eo n i h e s c r e e n
f r o m f a r b e h n d t h e p r o j e c t o r . l n t h i s c a s e , m a g n i f i c a t i o jns
s t i l l l o w , b e c a u s et h e a n g l e o f v e w i s q u t e s m a l l . A s w e
m o v e c l o s e r t o t h e s c r e e n ,r n a g f i f i c a t i o ni n c r e a s e sa n d w e
b e g l n t o r e c o g n j z ed e i a j s w h l c h h a d o r i g i n a l l ye s c a p e do u r
a i l e n t i o n .B u t f i n a y a p o i n t s r e a c h e dw h e r e h i g h e rm a g n l fication (= movns closer) does noi gve better resuts.
l n s t e a do l s i n g e e a v e s o n t h e t r e e s w e t h e n o n l y s e e t h e
s k u c t u r eo f i h e c o l o r f i l m , a n a c c ! m ! l a l j o n o f d y e p a r t i c l e s ,
t h e s o - c a l l e dg r a i n .B y f u r t h e rr e d u cn g i h e v i e w i n gd i s t a n c e
w e c o u l d ,o f c o u r s e ,f u r t h e f n c r e a s em a g n i f i c a r i o nb u t t h t s
w o u d b e s o c a e d e m p t ym a g n i f i c aot n " , i . e . , r n a g ff i c a t i o n
w h i c hd o e s n o i r e v e a a n y n e w d e i a l .
I n t h e m c f o s c o p e ,t h e s t u a i i o n s i h e s a m e . A s w e h a v e
s e e n ,t h e p f o l e c t e di r n a g ec o r e s p o n d s t o i h e a e r i a l i m a g e
f o r m e d b y t h e m c r o s c o p eo b j e c t v e i n t h e t u b e .i u s t a s w l t h
i h e o r o _ e c r d( l d a h a F r - " l o " i T i ! o - . L e p r o _ e . l e o
"usef!l
aerial niage where
r n a g n i f i c a t i o ne n d s a n d " e m p t y
m a g n i f i c aot n " b g n s . t i s t r l e t h a t t h e m i c r o s c o p i ci m a g e
w l n o t e x h i b i i a n y a c t u a lg r a i n s t r u c i u r e ,b l t h e r e a L s ow e
m a y s p e a k o f g r a i n , b e c a u s et h e r e s n o o p i i c a i m a g e i n
w h i c h a i o b j e c t p o i n t l s r e a l l y r e p r o d u c e da s a p o i n i ( i . e
w i t h n o r n e a s l r a b l ed a m e t e r ) . D u e t o i h e p h e n o m e n ao f
d i f f r a c to n , a n o b j e c i p o i n i l s a w a y s i r a n s f o r m e dj n t o a s m a
disk n the mage. i is these so ca ed Airy disks which
'nrage gra
f o r r nt h e
n". Thjstype of gra n can be found in
a n y o p t c a i m a g e f t h e m a g n f c a t i o n i s h i g h e n o u g h .l t l s
o b v i o l s t h a t i m a g ed e t a s w i l l n o o n g e r b e c e a r y r e c o g
n z e d a s s o o n a s t h e y r e a c ht h e s i z e o f l h e A i r y d l s k - l u s t
a s w e w e f e u n a b l et o r e c o g n l z et h e e a v e si n t h e s i d e w h e n
t h e y w e r e a s s m a l la s t h e d y e g r a n .
A n o t h e r e x a m p l e : L e t u s e x a m i n ea m o s a i c f r o r n a l o n g
d i s t a n c e( i . e . , w i t h l o w r n a g n i f i c a t i o nA) .s w e m o v e c l o s e r
w e r e c o g n i z em o r e d e t a i l s .A s s o o n a s w e b e g i n i o r e c o g n i z e i n d i v i d u a le l e m e n i so f i h e m o s a i c ,h o w e v e r ,w e p a s s
"ueful
t h e l i m j to f
m a g n i f i c a i i o n. l n t h i s c a s e ,t h e e l e m e n t s
o f i h e m o s a i c c o r r e s p o n dt o t h e A i r y d l s k s m a k l n g u p t h e
a e r i a l! m a g e .
Bewareof pseudostructuresl
W h a t i s t h e h j g h e s ip o w e r
l i f o l l o w sf r o m t h e a b o v e r e m a r k st h a t w e s h o u l d k n o w t h e
pefo,na e in.of .henco""ooeob.e .e.^euse.i.'
ihe point at whch thelr usefulmagnlfcaion ends. This ls
j n d i c a t e db y a v a l u e e n g r a v e do n e v e r y o b j e c t i v ea n d c a l ! e d
' n u m e r c a l a p e d u r e ' . T h e t r e m e n d o l s i m p o r t a n c eo f t h l s
characteristicwl rnmediatelybe recognized lt we say that
i h e n u m e r l c aal p e r t u f ei s l h e d e c i d i n gf a c t o r\ r y h e nd e i e r . n i n i n g t h e s l z e o f i h e A r y d i s k s l n i h e m c r o s c o p i ci m a g e ,i e ,
" s c r e e n . T h e r e i s a d e f j nt e r e l a t i o n s hp
the size of ihe
beiween the nume.ical aperture and ihe s ze of the A ry disk
f o ' t h e n o ' r e n t .y o ' e " o o n l y- r o ^ h e ' o l o $ - S :
T h e t o l a m a g n i f i c a i i o no f t h e m i c r o s c o p e( i . e . , l h e m a g n l fication of the objective multip ied by ihat of the eyepiece
m!ltiplied by any tr.rbe or OPTOVAF factor) should noi
e x c e e do n e t h o u s a n di r n e st h e n u m e r i c aal p e r t u r e .
Nlicroscop
sts who have partc!lafly good vsual acuty
s h o ud e v e n u s e f j v e h u n d r e dl i m e s i h e n u m e r i c a al p e r t u r e
a s a l i m t . E x c e p to n s t o t h i s r ! ] l e m a y b e a l l o w e . li n o r d e r i o
f a c i l i t a t em e a s u r i n ga n d c o u n t i n gw o r k
38
ta
39
W h a t j s t h e r e s o l v i n gl i r n i t ?
W i i h i h e a i d o f i h e n u m e r i c aal p e r i u r ew e c a n a l s o c o m p u t e
ihe limjt of resolution or maximlm resolving power. By ihis
w e u _ d e ' s . a - d l h a s m d l l e 5 t" e p a - d t i o n- d e s g - a . a d o
w h i c h t w o s k u c t ! r a l e l e r n e n t s e, . 9 . , t w o a d j a c e n tf l a g e l l a ,
may have in o.der to be irnaged as two separate elemenis
n. a. obt + n. a. oond
E x a m p l e : U s i n g a g r e e n f i l t e r , t h e w a v ee n g t h i s 0 - 5 5 p ;
a s s u m i n gt h e o b j e c t i v eu s e di o h a v ea n a p e r t u r eo f 1 . 2 5 ,a n d
t h e c o n d e n s e ro n e o f 0 - S rt h e n d = 0 . 2 5r r , i . e . , t h e f o u r t h
part of a thousandth of a millimeter. - However, slructural
elements which are just reso ved are not reproduced wjth
f!llfidelity.
4A
7. Oil immersion
c o r r e c ta p p l i c a t i o n
o f t h e r i g h to i l
lmmersionobjectives mostLy
h a v ea s h o r l w o r k i n gd i s t a n c e
O i l i m m e r s l o no b j e c u v e sa r e o b j e c t i v e sw h i c h a r e l s e d w t h
immersion oil (instead of alr) between objeciive froni ens
a n d c o v e r g l a s s .A s w a s e x p l a i n e di n t h e p r e v i o u ss e c t i o n ,
t h i s m e t h o d e a d s t o a g a i n i n n u m e r i c a a p e r t u r e .F o r t h e
s a m e i m a g e s c a l e , a n o i l i m m e r s i o no b j e c t i v e i s a L w a y s
s u p e r i o r t oa c o m p a r a be d r y o b j e c t v e a s r e g a r d s c o r r e c t i o n .
T h e r ea r e , o ; c o u r s e ,c a s e sw h i c h d o n o t p e r m i li h e a p p l i c a i o n o f t h e o j l i m m e r s i o nt e c h . q ! e . 1 0 0 x o b j e c t i v e sa f e
a ways oil jmrnerslonobjectives.
T h e u s e r s h o u l d ,i f p o s sb e , e r n p l o yo n y t h e t y p e o f i m r n e r
s i o n o i l s ! p p l i e d b y t h e o b j e c t i v em a n l f a c t ! r e r ,b e c a u s en o t
o n l y t h e r e f r a c t i v ei n d e x m u s t h a v e a c e r t a i nv a l u e ,b u i a l s o
t h e d i s p e r s i o no f t h e o i l .T h e i m r n e r s l o o
n j Ls l r p p l i e db y Z E l S S
s s y n t h e t i c ,n o n - f l u o r e s c i n ga n d n o n - r e s j n i n go i l w i t h a
r e l r a c t i v ei n d e x o f 1 . 5 1 5a n d a d i s p e r s i o no f 4 3 . 9 6 T
. he oiler
sLrpplied
b y l r s w i t h e v e r y j m r n e r s r o no b j e c t i v ei s d e s i g n e d
i o f a c i l i t a t ea p p l i c a t i o no f t h e o i l t o t h e c o v e r g l a s s w i t h o u i
air bubbes: turn oiler upsde down, wait until the air has
r i s e n a n d a p p l y a i t t e o i l . T h e o b j e c t i v er n a yb e r n o v e di n t o
p o s i t i o na s u s L r a- I n t h l s c a s e , e x c e s s i v eo i l a n d , p o s s l by ,
b u b be s a r e p u s h e da s i d ed u e t o t h e s h o r tw o r k i n gd s t a n c e .
l n a d d i t i o no
, b j e c t i v e sw t h a p l a n ef r o n t e n s c a n b e p u s h e d
upward in their spring rnount, locked by clockwise rotation
a n d l o w e r e dv e l t c a l l y i n t o t h e o i o n l y a f t e r t h e n o s e p i e c e
h a s b e e nt u r n e da n d e n g a g e d t h en o t c h .P e r s o n ael x p e r i e n c e
w l l F a c l -y o u $ L r ^ h o l F a s e L \ r o n e r h o d s i . o r e _ o n
! f f o c u s i n gt h e s p e c l m e nw l t h o j i r n m e r s i o ns h o u d p r o v e
i m p o s s i b i e r e m e m b e rt h e p r e v l o u s l yr n e n t i o n e dp o s s i bl l i y
ihat ihe cover gla6 may be too thick for the shori working
d i s t a n c ea v a i l a b l eo r t h a t t h e s p a c e b e t w e e ni h e s p e c i m e n
a n d t h e c o v e r g l a s s ,w h i c h i s f i l l e d w i t h r n o u n t i n gm e d i u m ,
m a y b e l o o w i d e ,w h l c hc o m e si o t h e s a m et h i n g .
alsorequire
immersion
42
K n o w i n gt h e h i g h p r e cs o n r e q ur e d f o r t h e p r o d u c io n o i
m l c r o s c o p eo b j e c t i v e sw h i c h a r e t o g j v e f i r s t - r a t e m a g e s
w e s h o ud n o t b e s u r p r l s e di h a t t h e c o v e r g l a s s ,w h i c h s
l o c a t e db e t w e e nt h e s p e c i m e na n d t h e o b j e c i i v ef r o n t l e n s
n a y n o t b e j l s t a n y c o v e r g l a s s .W e s h o u l d n o i f o r g e t t h a t
s r n p l eg a s s p a t e s ,t h a t j s p l a n ep a t e s ,a L s oh a v ea n o p t i c a l
power and ihat the op!cal power of ihe cover glass was
t a k e n l n t o a c c o u n tl n t h e c o m p u t a t o n a n d d e s i g n o f i h e
o b j e c t v e . W i h n o r m a l r n i c r o s c o p eo b j e c t v e s , t l r e c o v e r
g l a s s i s p a r i o f t h e l m a g ef o r m i n g s y s t e m l t s a l e n s
element (tho!gh wth infnite rad of c!Nature), which is
l o c a t e do u t s i d et h e o b j e c t l v em o u n t b u t s t f o r n i s a p a r t
o f t h e o p t i c a ls y s t e r n - T h e o p u m l m t h l c k n e s so f a c o v e f
T h e h i g h e r l h ea p e r t u r e
t h e . n o r ea c c u r a l e! h e c o v e rg a s sL
S t r i c t l y s p e a k i n g ,i h s a p p l i e s o n l y t o o b j e c t i v e sw h o s e
n u m e r l c aal p e r t u r ee x c e e d sa c e r t a i nv a l u e .W t h o b j e c t i v e s
h a v i n g a n a p e d u r e n o t e x c e e d l n g0 . 3 s p e c i m e n sm a y b e
e x a mn e d b o i h u n c o v e r e do r w t h c o v e rg l a s s e sa s t h i c k a s a
m i l l r n e t e r ,a n d t h e s p h e r i c a la b e r r a t i o nw l n o t b e n o t i c e
a b l e . W t h a p e r i l r e s b e t w e e n0 3 a n d 0 7 , i h e c o v e r - ga s s
t h c k n e s ss h o u l dn o t d e v i a i ef r o m t h e n o m j n avl a u e b v m o r e
i h a n 0 . 0 3 m m . W i t h h i g h e r a p e r t u r e s ,e v e n a d e v a t i o n o f
0 . 0 1m r nw i l l c o n sd e r a by i m p a i rt h e q u a i t y o t t h e r n a g e
O b j e c t i v e sw t h a c o t r e c i i o nc o l a r
a r e f o r c a r e f u lu s e r so n y
l n o r d e r n o t 1 o b e r e s i r l c t e dt o s p e cf e d c o v e F g l a s st h l c k _
n e s s e sw h e n u s l n g d r y o b j e c t i v e so f p a d i c ua r y h l g h a p e r t u r e , o b j c t i v e sw e r e d e s i g n e di n w h l c hl h e o p t m u m c o v e r g l a s s t h c k n e s sl s n o t a f i x e d 0 . 1 7 m r n , b u t c a n b e v a r i e d
w l t h i n a r a n g eo f 0 . 1 2t o 0 . 2 2m r n ( o b j e c t i v e sw i t h c o r r e c t i o n
c o l l a r ) .l f t h e c o v e r - ga s s i h i c k n e s so f t h e s p e c j m e nt o b e
e x a m i n e d i s u n k n o w n ,f i r s t s e t t h e c o r r e c u o n c o a r a t
0 . 1 7m m a n d f n d a h j g h - c o n t r a sat r e a l n t h e s p e cm e n .T h e n
t r y w h e l h e rt h c o n l r a s ti s m p r o v e dl f t h e c o r e c i i o n c o a r
s s e t f o r g r e a t e ro r e s s e r c o v e r _ g l a stsh l c k n e s sT h i s a s o
r e q u i r e sr e f o c u sn g . L t i s o b v o u s t h a t l n i h e h a n d s o f i n e x
p e f e n c e d u s e r s w h o u s u a y l e a v et h e c o r r e . t o n . o l l a r a t
one end of lts range of a djustmeni, ihese objeci ves rnay give
v e r y d i s a p p o i n t i n .ge s u l t s( F g 3 2 J .
43
Oi immersion
is lesscriiical
H o w t o o b t a i ng o o d c o v e rg l a s s e s ?
K d h l e ri l l u m i n a t i o n
For microscopic research work, phoiomlcrography, mjcroprojection, eic., preclse control of ihe lighi paih should
a ready start before the light reaches ihe specirnen,i. e., at
the llght source. Prof. August Kdhler fjrst used this exaci
c o n t r o lo f t h e l i g h t p a t h i n t h e i l l u mn a i i n gb e a mo f i h e m l c r o s c o p e ,a n d t h e m e t h o di s i o d a y c a l l e c l K d h l e r l l l m i n a t i o n "
( l o u r n a lo f t h e R o y a lM l c r . S o c . ) .
T h e p r o c e d u r ef o r a p p l y i n gt h i s m e t h o do f i l l ! m l n a t i o ni s a s
f o l o w s ( F i g .3 4 ) :
46
l . A i g n r n i c r o s c o p ei l l L r mn a t o r w i t h p a n e m t r o r o f t h e
rnicroscope
a n d a d j u s t t s o t h a t a s m a l l ,b r i g h ts p o r o f i g h t
i s p r o j e c t e do n t o t h e m r r o r o r a n i m a g e o f t h e f l a o r e n t
f o r m e d ( t h i s a d j l s t r n e n ti s f a c l i t a i e d f a s h e e t o f p a p e r s
h e d o v e rt h e s l r f a c e o f t h e m r r o ,
' o"ch
- _ o po - o r . l F
-o rL"
o u t o f t h e t u b e . K e e p a d j u s tn g i h e m j r r o r u n t t h e b a c k l e n s
o f l h e o b j e c vt e s f e d w i i h g h t . D m r n i n gt h e l g h i b y a
. e u t r a l d e n s i t yf t e r w o u d b e a d v l s a be . n s e r tt h e e y e p i e c e
a n d f o c L r st h e s p e cm e n w l t h a l 0 ; l o r l 6 : o b j e c u v e .
3. Close ihe iris daphragm of the iilumnator(fied stop)
a m o s t c o m pe l e l y e n d m o v e i t s ( ! n s h a f p ) m a g e o i t h e
s p e c m e n n t o t h e c e n t e ro f t h e f i e c i o f v l e w b y r o t a tn g a n d
4 . F o c u st h e e d g e o f t h i s d i a p h r a g mi m a g eb y s g h t l y o w e .
i n g i h e c o n d e n s e rB
. o t h t h e s p e c i m e na n d t h e f e d s t o p a r e
n o w s h a r py d e f n e d .T h e no p e nt h e f e l d s i o p l n t I i h e e n l i r e
r i e d o f v e w s j u s tc e a r
5 . S l g h t l y . e a d j l s i i h e l a m p s o c k e to r t h e l a m p c o n d e n s e r
L r n it t h e f e d o f v i e w l s e v e n l y u m l n a i e d .
6 . A t f i r s t o p e nt h e c o n d e n s e ri . i s ( a p e r t u r es t o p )c o m p L e tye
( i m a g ev e r y b r i g h t l a n d c l o s e i t o n y f a r e n o u g ht o e l m i n a t e
g l a r e j n t h e r n o s t l m p o r t a n ti m a g e e e r n e n t sa n d t o r n a k e
t h e m a p p e a rw t h s a t s f a c t o r yc o n i r a s t .W i t h s t a n e d s p e c i mens lhis is the case elen al a reatvely wde aperture,
w h e f r e s h s p e c m e n s r e q u i r es i g h t y m o r e s i o p p n g d o w n
S l o p p n g d o w n f ! r t h e r t h a n s a b s o l u t e l yn e c e s s a r y( f o r
exanpe, to redlce ihe brghiness of the mage)is one of
t h e b i g g e s tm i s t a k e sa m i c r o s c o ps t c a n m a k e ,s j n c ei t e n t a i l s
a o s s o f r e s o l vn g p o w e r .- l f t r e i n t e n s i t yo f t h e g h i s
too hlgh red!ce the lamp voltageor insert gr.y or green
flte16 ito the filterholder.
7 . l f w j t h l o w p o w e r o b j e c t l v e so n l y p a r t o f t h e f e l d i s
l l ! m n a t e d s w i n g o u t t h e c o n d e n s e fr r o n t l e n s a n d o p e n t h e
c o n d e n s e rr s f u l y C o n t r a s t s t h e n c o n t r o l l e dw i h t h e a i d
o f i h e a m pd a p h r a g m .
l n t h e c a s e o l m c r o s c o p e sw i i h a b u l t - i n i l l l m n a t o r s t e p l
a n d p a r t y a s o s t e p 2 a r o m i i t e d .U n d e r 3 , c e n t e r l n g s n o i
a c he v e d w t h t h a i d o f a m l t r o r ,b u t b y t h e c n t e r i n gs c r e w s
o f t h e c o n d e n s e rP
. i e a s ec o n s ut t h e o p e r a i i n gi n s i r u c io i s
s u p pi e d w t h i h e m l c r o s c o p e
L e t u s n o w e x a mn e t h e p a t h o f r a y s w t h K d h l e ri u r n i n a ot n .
t c o n s l s t so f t w o s u p - . r m p o s e db e a n s - F o r g r e a t e rc l a r i t y
w e s h a l l s h o w b o t h b e a m ss e p a r a t ey a n d o n y o n o n e s d e
( i n t h e c a s e o f i h e p u p b e a m ,f o r i n s i a n c e ,o n y t h e r a y s
o r i g i n a tn g a t o n e e n d o f t h e f i a m e n t ) .
F g . 3 5 s h o l v st h e p a i r o f t h e r a y s o r i g i n a t n ga n d m e e u n g
n t h e p a n e s w h c h a r e i n s h a r p f o c l s i o g e t h e rw i t h i h e
s p e cm e n , i . e t h e s o - c a l l e dw n d o w s .T h e r a y s e m a n a u n g
f r o m t h e f i e l d d i a p h r a g mo f t h e a r n p a r e c o r n b i n e dl n t h e
s p e c i m e nb y t h e c o n d e n s e r( i n o t h e rw o r d s , a n i m a g eo f t h e
f i e l d d i a p h r a g mi s f o . m d o n t h e s p e c i r n e n )F. f o m t h e r e ,t h e
t w o i m a g e sa r e p r o j e c t e do n t o t h e f e l d o f v i e w d i a p h r a g m
o f i h e e y e p i e c e( a e r j a i m a g e ) .W h e n t h e a d j u s t r n e n si c o F
rect, the magesof the field and field of vew djaphragms
a p p e a r s h a r p b o t h a r e c e n t e r e d ,i . e t h e y a r e c o n c e n t rc
a n d i h e y a r e o f i d e n t i c as z e
f o r t h e a p e d u f es t o p s
o f K d h l e ri l u m i n a to n
roq-d
Lhe'edsooof
66160a^e.
T h e s p e c l m e ni s t h u s n o t s u b j e c t e dt o u f n e c e s s a r yi r r a d i a t o n ( e x a m i n a u oonf l i v i n g o r g a n i s n r s la) n d c o n i r a s tr e d u c i n g
s t r a y i g h i f r o m s p e c i n r e na r e a s o u t s d e t h e f i e l d o f v i e w i s
3 . T h e a p e d u r ea n d t h u s c o n t r a s ta s w e l l a s d e p t h o f f o c u s
a r e c o n t r o e d b y t h e c o n d e n s e irr i s .
WithKdhle. illuniiatron
lowennsthe condenserwould lead
io on exessive ros ofapsbre(refD.
50
l n m i c r o s c o p e sw i t h b u i l t - i nl l l u m i n a i o rt h e f i e l d d j a p h r a g m
s sometimes located very close to the condenser' When
i m a g j n gt h i s d i a p h r a g mo n t h e s p e c i m e ni n a c c o r d a n c ew j l h
Kcihlerls nrles, ihe condenser has to be lowered to such an
js
extenl that a considerable Lossof aperiure ensues This
tols
suppLied
which
lens
avoided by a so-called auxlliarv
qether with the microscope and is ocated dlrectlv below the
;ondenser. lts function is illustraied ln Fig 36 lf a separate
h i q h p e r f o r m a n c e i l l u m i n a t o ri s u s e d t h e a u x i ! i a r y l e n s
letter siill, replaced with ihe longeF
sn-ouidbe swunq out or,
" a u x i l i a r yl e n s l ! ' .
focus
1 0 .L e n g t hm e a s u r e m e n t s u n d e r t h e
microscope
M e a s ! r e r n e not f r nc r o s c o p r co b j e c r sj s r e a i v e y 5 m p r e ,o u 1
d 6 o 4o
6 . . . t " b t .
o a
o t r 6
o o r
m e a s u r i n ge y e p l e c e
, y e pe c e m c r o r n e t e ra n u s r a l j e m c r o
m e t e r( F i g . 3 7 ) .
A rolnd gass dsk wih a scae -ihe mcro,,ereo
r sK
c a n b e i n s e r i e dt n t h e m e a s u rn g e y e pe c e . a n d i h e f o c ! i n g
e y e e n s e n s u r e st h a t e v e n o b s e r v e r sw i i h d e f e c ,v e e y e sg n r
c a n s e e a s h a r p m a g eo f r h e s c a e _ T h e s t a g en r i c r o m e r e r
i s a s c a e g r a d u a r e di n u i i r s o f 1 1 1 0 0n r m o n a c o i v e n i i o n a l
.q
3.
, l
o'
ll
lll
llti
il
lil
l
/,1r11
ll,t
,1,
,lllrl{
(\
jlnIlrlllirl
Ill'rlrl
l
\t
tat
(o
51
T h e p r o c e d u r ei s a s f o o w s :
1 P o st o n t h e f o ! n d e y e pe c e m c r o m e t e r n t h e m e a s u r i n g
e y e p e c e . F o r t h i s p l r p o s e u n s c r e wt h e L o w e rp a r i o f t h e
e y e p e c e r e r n o v et h e r i n g a b o v e t h e e y e p i e c ed a p h r a g m
a n d - e p l a c ei t a f t e r h a v n g i n s e r t e d t h e m c r o n r e t e rd j s k
{ s c a l e l p w a r d s ) . T h e n s c r e w t h e e y e Pe c e t o g e t h e ra s a i n
2 . F o c u st h e e y e e n s i n s u c ha m a n n e rt h a t t h e s c a e a p p e a f s
w t h n r a x i m ! ms h a r p n e s s ti h e n l n s e r t t h e e y e p l e c e n t o t f r e
3 . P l a c e t h e s t a g e n - r c r o m e t eor n t h e s t a g e a n d f o c u s i h e
microscopeon the sca1e.Both scaes will then appear
shafpy dfined. By t!rning the eyeplece tlrev are iaid
p a f al e i o e a c ho t h e r .
4 . F l n d o l t h o w r n a n yd l v i so n s o f t h e e y e p l e c em c r o n - r e t e r
c o r r e s p o n dt o a c e r t a i n d i s t a n c o n t h e s i a g e m i c r o m e t e r
a n d c a l . u a i e t h e l e n g i h w h c h c o t r e s p o n d st o o n e d v s l o n
o f t h e e y e pe c e m c r o m e t e r .
E x a m p l e ( F i g . 3 8 )8 0 d i v s i o n s c o n e s p o n dt o I 3 s n r m
0.069_.' o,
o n oc . i . o so
S.. e.oitias: n.
om*"f
0
1
5 T h e i r c r o m e t e rv a u e t h l s d e t e f r n l n e da p p i e s o n y r o r
t h e o b l e c tv e w i l h w h c h t h e c a i b r a to n w a s r n a c r e
S u b s e q u e n i l yi t, s o n l y n e c e s s a r vt o m ! u p v t h e n l m b e r o f
d v s j o n s c o v e r e d b y a n i n t e r e s tn g d e t a l n i h e s p e c f ' e f
b v t h e m l c r o m e l e vr a t e i n o r d e r t o d e t e r mn e i h e l e n g t ho i
t n l " a " t n l ' n t t - , "o f j " " t p l a n e ( F o r s e n a l m a s u r e m e n i st h e
r n i c r o m e i evr a L u en e e d o i l y b e s e t o n c e o n t h e s l i d e r ! e
\ l h e r e u p o nt h e d l f f e r e n tl e n g t h sc a n s i r n pv b e r e a d o f f )
S l n c et h e i r c r o m e t e rv a u e a l s o d e p e n d so n t h e r . e c h a n l c a
i u b e e i q t h . i i s a d v s a b l et o k e e p a n e v e o n t h e s e t t n g o f
i h e e y e pe c e s l e v e so f t h e b i n o c u l a rt u b e w h c h ' n u s t n o t
L ft h e n r e a s l r e . n e n t es x t e n do v e r a o n g e r p e r o d o f t r n e o r
f t h e s p e cm e n st h e m s ev e s e x h b l t a f i n e l n e a ri e x t u r e w e
- e c o m m e r dl h a t ? c o n i r a s t , l n e _ c o n t r a sotr n e t m i c r o m e i e r
d s k b e ! s e d n s t e a d o f t h e n o f . n a e v e p i e c em l c r o m e t e r
{ Fs . 3 9 a l .
A m a s ! r i g e y e p i e c ec a n . o f c o u r s e b e u s e d L nt T r es a m e
m a i n e r a s a n y o r d i n a r ye y e pe c e f t h e m c r o m e t e rd i s k i s
l a k e n o l t L nt h i s c a s e a n o b s e r u e rw h o h a s n o r m a lv i s o n
s h o l l d s e t t h e z e r o f . a r k o n t h e e v e l e n ss c a l e a t t h e b l a c k
.stead of the red lne.
52
'll. The
I n e c e s s a r yi ,t c a n b e s m p l e
T h e s m p l e s i w a y o f t a k i n g p h o t o mc r o g r a p h si s t o m o u n t a
c a m e r aw i t h t s l e n s s e l a t t n f i n i i y a s c l o s e y a o o v e r n e
m c r o s c o p ee y e p i e c ea s p o s s b l e a n d t o o p e n t h e c a m e r a
stop fully. f the nricroscopewas fi.si foclsed w rh re axed
a c c o r n r n o d a t o nt ,h e n t h e p h o l o n r t c r o g r a pw
h
be sharp,
b u i l s l a l l y v g n e t t e d .T h s s d u e t o t h e f a c t r h a i i n c o n r b i
n a t o i w l t h a c a m e r al e n s o f n o r m a lf o c a l t e n g t h{ 5 0 m m f o r
2 4 x 3 6 m m , 7 5 t o 8 0 m r nf o r 6 ) . 6 c n r t 0 5 r i m f o r 6 : i 9 c m )
o n l y w d e - a n ge m i c r o s c o p ee y e p i e c e sc o v e r t h e e n r i r ef i e d
o f v i e w . - A n y d o u b t s r e g a r d n g c r i t c a t i o c L r sc a n b e
e m n a t e di f a s l n g l e - l e n sr e f l e xc a r n e r as e m p o y e d ( F j g . 4 0 ) .
F o c l s n g b e a f l s p i l l e f sa r e d e a l
W h a t i m a g es c a l el s o b t a n e d
w i t h a p h o t o m i c r o g r a p hci ca r n e r a ?
T h e i m a g es c a l e o n i h e f i l m d i f f e r s b y a c e d a i n f a c r o rf r o m
t h e r n a g . i t j c a t i o ng i v e n b y t h e m i c r o s c o p ed u r i n g v i s u a l
w o r k . T h j s f a c t o r i s f o u n d b y d i v i d i n gi h e f o c a e n g t h o f t h e
c a m e r al e n s ( i n l n i l l r n e t e r s b
) y 2 s 0 m m . ( E x a m p l eA
: Conraf l e x c a m e f aa s s h o w ni n F i g .4 0 h a s a f o c a l e n g r ho f 5 0 m r n .
Consequenl y, the factor is 1/5. Objecrive magnification )<
e y e pe c e m a g n j u c a t i o nx 1 / 5 t h u s g i v e s t h e i m a g es c a e o n
the 35 mrn negative.)The specia ZE SS attachmentcamera
s h o w n i n F i g . 4 1 h a s c a m e r af a c t o r s d e p e n d e n o
t n the indi
D e i e r mn a t i o no f i h e c o r r e c i x p o s u r ef o r p h o t o m i c r o g r a p h y
i s v e r y c o n v e n i e nitf s p e c i a p h o t o ee c k i c e x p o s u r ed e v c e s
a r e u s e d ( F i g . 4 1b )
A n o t h e rs i m p l ea n d a c c u r a t er n e r h o di s d i r e c t m e a s u r e r n e n t
of the finder irnage of a reflex camera, preferab y by means
o f a p h o t o e l e c tcr e x p o s u r em e t e rw h i c h h a s a s m a t ta c c e p t a n c e a n g l e a n d m e a s u r i n gs u r f a c e( e . 9 . , i h e Z E T S SI K O N
''IKOPHOT
C D ) . N o t e v e n c a l i b r a u o np h o i o s a r e r e q l i r e d ,
i f , f o r i n s t a n c et h e f o o w i n g p r o c e d u r ei s u s e o :
P o i n t c a m e r aw i t h l e n s s e t a t f / 2 . 8 ,f o r e x a r n p t ea i a b r g h t
w a l l .T a k e a m e t e r r e a d i n go f t h e w a l l , w t h , s a y , f 1 2 . 8 , 1 1 5 0
s e c .T h e ni a k e a r e a d t n gw i r h t h e n r e t e r p o i n t i nagt r h e g r o u n d
g a s s o r i h e f i f d e r i n r a g ea n d r e a d t h e f s i o p c o r r e s p o n d j n g
t o l / 5 0 s e c , e . g . , f / 1 . 4 .W h e n r a k i n gt h e p h o t o m i c r o g r a p h s ,
a f e a d i n g ss h o u l dt h e n b e t a k e n w i t h t h e m e t e rp o i n r i n ga t
t h e f i n d e ri m a g e it h e e x p o s u r et i r n ei s t h e n t h e v a l u e c o r e s ,
l f w o r k i n g c o n d i i i o n sa r e a w a y s i d e n t i c a l( o b l e c r v e , e y e p i e c e , p o s i t i o n o f c o n d e n s e ri r i s , l a m p , f i l r n s p e e d ) , t h e n
exposure measlrements are not required. A iew rest
exposures nray be made, after which the optimum exposure
time determined can always be used.
High-contrastfilm
o r e n e r g e t i cd e v e l o p e r l
56
W i t h n o r m a l d e v e l o p m e n t ,h g h - c o n i r a s t f l m s h o ! l d b e
employedb
, e c a u s ec o n t r a s ti n p h o t o m i c r o g r a p his ! s u a l l y
l o w e r t h a n i n o u t d o o rp h o t o g r a p h y-. F i l r n so f " p a r t i c ua r l y
h i g h r e s o i v i n gp o w e l ' a r e n o t n e c e s s a r yb, e c a u s ee s p e c t a l l y
i n h i g h - p o w e$r , o r kt h e r e s ou t o n o f e v e n t h e e a s t s u t a b l e
f l r n s i s s t i l l h i g h e rt h a n i h a t w h i c h s p h y s l c ay p o s s i b l ei n
t h e r r r i c r o s c o p eT.h e s m p l e s t a n d o n e o f t h e b e s t m e t h o d s
s t o u s e o r d n a r y a l - r o u n df l m a n d t o d e v e l o p t i a p a p e f
W h e n i s 3 5 n r mt o o s m a l l ?
t h a s b e e nf o l n d i n p r a c i i c a lw o r k t h a t n e g a t i v es z e s a f g e r
t h a n 2 4 x 3 6 m m a r e o f a d v a n t a g eo n l y f s m a Lsl c a l e p h o t o s ,r e d o m i
m i c r o g r a p h sa n d p a r i i c u l a r l yp h o t o r n a c r o g r a p h p
nate. n addition, arger sjres should be used if coor
photos have io be taken fof printng purposes.ZELSS
s u p p l e s s p e ca l p h o i o m l c r o g r a p h iact t a c h m e nct a m e r a sf o r
2 r " / r " ) < s r l "( 6 x 9 c r n J , 2 r l i " > . 2 r L' ( 6 t B c r i ) , 3 t l a ' t 4 t l . "
( 9 ) . 1 2c m ) a n d 4 " x s " ( P o a f o d l .
12. Micro.proiection
l l i c r o - p r o j e c t i o ni s a v a l u a b l et e c h n i q u ei f s e v e r a l p e o p l e
w a n t t o o b s e r v e a m c r o s c o p i ci n r a g es m u t a n e o l s l y . F o r
s m a l l e r g r o u p s a v i e w i n g s c r e e n i s e r n p i o y e d ,w h i c h s
s m p l y e x c h a n g e df o r t h e o b s e r v a o
i n t l b e a n d w h i c ho f f e r s
a n i m a g es c a e o f 1 0 : i h e o b j e c t i v em a g n i f i c a t i o (nF t g .4 2 ) .
A l e s s e x p e n s i v es o u t i o n i s t o p r o j e c t t h em i c r o s c o p t ci m a g e
o n i o a w h t e s l d a c e w t h t h e a j d o f a d e v l a tn g p r i s r na t t a c h e d
-o
h6 e.eo,o.a
wL F, .hp ob.pn6.
p l e c e ,t h e m a g n i f i c a t i o ins i h e s a m e a s i n t h e m i c r o s c o p e .f
t h e v i e w i n gd i s t a n c es h a l v e d ,m a g nf c a t o n s d o l b l e d e t c .
Due to the frequently arge mage diameters and ihe
relatively o.r efficiencyof pfolecuon in refected ight,
light so!rces of higher lumnance are then req!ired, with
w h i c ha b o v ea l l t h e s p e c i a le q u i p m e nfto r m c r o p r o j e c t i o ni s
p . o v i d e d .F o r f u r t h e r d e i a i l s ,r e f e r e n c e s m a d e i o t h e c o t r
r e s p o n d i n gZ E S S i t e r a t u r e .
5T
53
Annex
Bibtiography
F o r m o r e c o m p r e h e n s i v en f o r m a i i o no n t h e f i e d o f m c r o s
c o p y w e g i v e b e t o w t h e t j t e s o t a n u r n b e ro f w o r k s .
''Using
t h e t V i c r o s c o p eb
, ,y A . L . E . B a r r o n
C h a m p m a na H a l , L o n d o i , 1 9 6 5
'Microscopy
by W. c. Harfley
E n g l i s hU n i v e r s t e s p r e s s L r d . ,L o n d o n ,1 9 6 2
A n r e r i c a ne d i t i o ne d i t e db y j o h nJ .L e ea n dB e r n a . dF r i e d m a n
T h e N a t u r a tH i s r o r yp r e s s ,C a r d e nC i i y , N e w y o r k , 1 9 6 4
L e c r ! r e n o t e so n t h e u s e o f t h e r n i c r o s c o p b
ey R . B a r e r
B l a c k w e S c i e n t i f i cp u b t c a r o n s ,O x f o r d ,1 9 5 3
a n d F . A . D a v i e sC o . , p h t a d e l p ha , p a .
''An
lntroductjon
i o t h e p r i n c t pe s o f t h e M c r o s c o p e
a . d i r s A p p t c a i i o nt o t h e p r a c t i c eo f p h o i o mc r o g r a p h y . .
b y F . S c h e n ka n d c . K s i l e r
C h a p m a n& H a t t ,L o n d o n ,1 9 6 2
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Cytotogy
E d i t e db y F . C . M e o r s
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"Progress
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nve.ted lvlicroscope
l v l i c r o s c o pIe u m i n a i o r sa n d L i g h iF i i e r s
I n s i r u m e n i sf o r t h e P h o t o g r a p h i cG, r a p h i c
and Projectjve Reproduciion
ULTFAPHOT
II
ResearchMeta ograph ULTFAPHOTll lV
I n s t r u m e n tfso r P o l a r l z l n gM i c r o s c o p y
ntederence lvlicroscopyw th Transmitied L ghi
Epi-Microscope
S T A N D A R DM e t a l u r g i c a M
l icroscope
4A-120
40 130
40 143
40 160
40-215
40-254
4A-344
40-400
40-430
4A-452
40-453
40-550
40-560
40-655
40-660
40-700
ZEISSreprints
ev a i R e p r i n l so f p a r t i c ! l a r l yi n t e r e s t i n ga n l c e s a r e L i k e w i s a
able. However, ihe stock of such maierial is llm ied, and very
o f t e nt h e a r t i c l e s w e r er e p r l n t e do n l y i n t h e a n g u a g ei n w h i c l r
t h e y o r l g i n a l l ya p p e a r e d .
o i r e q u e s t ,s c h o os , i n s t l t u t e se, t c . ,m a y r e c e i v ea n l n s t r u c tionaldiagram
l n t h e f o r m o f r o e r p o s t e r ss, h o w i n g t h ec r o s s
s e c t i o n o f a m i c r o s c o p ea n d t h e c o r r e s p o n d i n gl g h t p a t h
(Cat. No. 40-020).
60
Additional information
The staff of our guesi laboratory at the Oberkochen rnain
f a c t o r y a s w e l l a s o u r s u b s l d i a r j e so r r e p r e s e n t a t i v eas l l
o v e r t h e w o n d a r e e n t i r e l ya t y o u r s e r v c e f o r c o n s u l t a i i o n
o n y o u r p a r t i c u L aprr o b l e m s .
M a y w e a l s o c a l l y o u r a t t e n u o nt o i h e f a c t t h a t a n y o n e
w h o u n d e r s t a n d sG e r m a n a n d i s i n t e r e s t e di n p h o t o m l c r o
gfaphy rnay participate in a five-day introductory course
w h i c hl s h e l d e v e r yy e a r l n M a r c h o r A p r i l a t C d i i i n g e n .F o r
a p p l i c a t i o n sp, l e a s ew r i t e t o o L r rZ E I S S a g e n t o r d j r e c t l yi o
t h e M i c r o s c o p yD e p a r t m e n tC, A R LZ E I S S ,7 0 8 2O b e r k o c h e n Wuertt. - West Gerrnany.
I h e Z E I S S w o r k s h a v e m a d e d e c s l v e c o n t r i b u t i o n st o i h e
d e v e i o p r n e not f t h e m o d e r nm i c r o s c o p eF
. r o r nt h e l o n g i s i
o f i n n o v a i i o n sj n t r o d u c e db y t h i s c o m p a n y , w e h a v es e e c t e d
t h o s e p o n i s w h j c hm a y b e o f p a r t i c Lar r j n t e r e s t1 o y o u .
1812
F o r t h e f i r s t t r n e i n t h e h i s i o r yo f t h e m c r o s c o p eo b j e c t i v e s
w e r e o f f e r e dw h i c h h a d n o t b e e n n r a d es i m p y b y " t r y l n g l t
o t ' t b l i o n t h e b a s l s o f r n a t h e m a t c aal n d o p l i c a l f e s e a r c l r .
T h e C A R L Z E I S S i s t N o . 1 9 ( 1 8 7 2 )o p e n sw t h t h e s e n t e n c e :
"The
m c r o s c o p es y s t e m s b e l o w a r e e x c u s i v ey b a s e d o n
theoretica complrtaiions carried out by Professor Abbe at
Ai the same time, the bis Abbe illuminator appeared for rhe
"combjned
first time
i n a l l i t s p a r t s e x c l u s i v e l yo n r h e b a s i s
of theorerical considerations _
1886
1893
P r o f e s s o rA . K d h l e r , w h o j o i n e d Z E I S S i n 1 9 0 0 ,p u b l i s h e d
l L e m . - h o d o " i l l u T i n a t o - a l e c a l l a od h e h i r n .
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F o r m l l i t a r yr e a s o n s ,t h e a n t i - r e f l e c t i ocno a t i n go f l e n s s u r
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Z E I S S b u l l i t h e f i r s t s t e r e o m i c r o s c o pw
e ith magnificauon
c h a n g e r{ e l i m i n ant g e x c h a n g eo f o b j e c t i v e s ,o f f e r l n s c o n
stant workjng di6tance).
1950
1950
1955
T h e f i r s t p h o t o m i c r o g r a p h idce v j c e w i i h f ! y a u t o r n a t i ce x
p o s u r ec o n i r o lw a s s o l d ( Z E I S SP h o t o r n i c r o s c o p e ) .
1959
W i l h t h e i r U l t r a f u a r s ,Z E I S S s u c c e e d e di n m a k i n g r e f r a c t i n g o b j e c u v e ss u i l a be f o r b o i h u t r a v o l e t a n d v i s i b l e l l g h t
(imporlantfor m crospectrophotomeiry and cancer researchl.
T h l s b o o k i s c o p y r g h i . l i m a y n o t b e r e p r o d u c e do r i r a n s '
l a t e d b y a n y r n e a n sl n w h o l e o r i n p a r t w i t h o u t p e r m i s so n .
A p p l i c a l i o n s w l t hr e g a r d t oc o p y r i g h ts h o r . r lbde a d d r e s s e d t o ;
CARL ZEISS, Oberkochen/West Germany