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UNIVERSIDADE DE FRANCA

FERNANDA DINIZ DE SOUSA

RELATRIOS AULAS PRTICAS

Trabalho apresentado a Universidade de Franca,


para a matria de Bacteriologia Geral,
de todas as aulas prticas feitas
Prof. Dr. Carlos Henrique G. Martins

FRANCA
2015

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Coloraes:
Colorao de Gram
Introduo

A colorao de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o


mdico dinamarqus Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, Gram observou que as
bactrias adquiriram cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes.
Isso permitiu classific-las em dois grupos distintos: as que ficavam roxas, que
foram chamadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, chamadas de
Gram-negativas. Aps descrio do mtodo, inmeras propostas de modificao
foram feitas.
O mtodo tintorial predominante utilizado em bacteriologia o mtodo de Gram. A
bacterioscopia, aps colorao pelo mtodo de Gram com diagnstico presuntivo,
de triagem, ou at mesmo confirmatrio em alguns casos, constituindo-se uma
pea importante e fundamental. Essa tcnica simples, rpida e tem capacidade de
resoluo, permitindo o correto diagnstico em cerca de 80% dos pacientes em
carter de pronto atendimento em nvel local.

Objetivo

Saber identificar se a bactria Gram positiva ou Gram negativa, qual o seu


arranjo e a sua forma, a partir do microscpio ptico.

Materiais e Reagentes

Lmina
Placa de Petri com a bactria
Bico de Bunsen
Ala de Platina
gua corrente
Cristal Violeta
Lugol
lcool-Acetona
Fucsina

Procedimento Experimental

Fazer um esfregao fino, uma bactria por lmina


Fixar o esfregao, passando a lmina trs vezes sob o bico de Bunsen.
Cobrir a lmina com Cristal Violeta (corante bsico) 1 minuto.
Escorrer o excesso e cobrir a lmina com Lugol (mordente) 1 minuto.
Lavar a lmina delicadamente em gua corrente.
Escorrer at desprender o corante com uma soluo lcool-acetona (1.1)
descorante
Lavar a lmina delicadamente em gua corrente
Cobrir a lmina com Fucsina (corante bsico) 30 segundos.
Escorrer e lavar a lmina delicadamente em gua corrente
Deixar secar e observar a lmina em objetiva de imerso.

Resultado.
Resultado

Forma

Arranjo

Gram

Diagnstico

Presuntivo

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L. casei
S. aureus

Bacilo
Cocos

E. coli
Yersinia sp.
B.
Megaterium

Bacilo
Bacilo
Bacilo

Cacho de
uva

Estreptobacil
o

Positiva
Positiva
Negativa
Negativa
Positiva

Gonococo
Meningococo

Neisseria sp.
Streprococus
mutans

Cocos
cocos

Diplococo
Cadeia

Nisseria
gonorrhoeae
Nisseria
meningitidis

Negativa
Positiva

Concluso

A realizao de identificao de bactrias, atrves da colorao de Gram, permitiuse distinguir se era positivo ou negativo, com ajuda pela cor, Gram-negativa,
vermelha e Gram-positiva, roxa. Conseguiu-se identificar a sua forma e arranjo.

Colorao de Ziehl-Neelsen
Introduo

A colorao de Ziehl-Neelsen baseasse na capacidade de algumas bactrias


(microbactria e actinomicetes) resistirem aos mtodos comuns de colorao
devido composio altamente lipdica da parede celular. Aps um processo de
colorao especial a quente uma vez coradas no sofrem ao de descorantes
fortes como soluo de lcool cido. Desta forma, a fucsina de Ziehl cora todas as
bactrias de vermelhos, e aps de descolorao com lcool-cido somente os
bacilos lcool-cido resistentes (BAAR) conservaro est cor. para facilitar a
visualizao cora-se o fundo com azul metileno, estabelecendose contraste ntido
entre elementos celulares e outras bactrias (azuis) e os BAAR (vermelhos).

Objetivo

Conseguir identificar as microbactrias, que so conhecidas como bacilos lcoolcido resistente (BAAR).

Materiais e Reagentes

Placa de Petri com a bactria


Lmina
Ala de Platina
Bico de Busen
Fucsina de Ziehl concentrada
lcool-cido Clordrico a 1%
gua corrente
Algodo
Fogo
Soluo diluda de azul de metileno
Microscpio

Procedimentos
Fazer um esfregao com Mycobacterium sp.
Fixar no calor
Corar com fucsina de Ziehl concentrada, aquecendo cuidadosamente a
lmina at a emisso de vapor, durante 5 minutos.

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Escorrer o corante e diferenciar com lcool-cido clordrico a 1%.


Lavar com gua corrente, delicadamente.
Corar com uma soluo diluda de azul de metileno 30 segundos
Lavar com gua corrente e secar.
Observa em objetiva de imerso.

Resultado
MICRORGANISMO
M. smugmatis

FORMA
Bacilo

ZIEHL-NEELSEN
BAAR

Concluso

A colorao de Ziehl Neelsen foi realizada com sucesso, j que conseguimos


identificar a micobactria, que forma de bacilos e aparece sempre em rosa.

Colorao de Parede (Mtodo de Robinow)


Introduo

O mtodo de Robinow & Murray reputado por seus autores como especfico para
demonstrar a parede celular de bactrias, fornece contraste ntido a essa estrutura
quando aplicado a bactrias Gram positivas. Todavia, em se tratando de bactrias
Gram negativas, no se consegue resultados satisfatrios porque todo o corpo
bacteriano se torna corado. Knaysi empregando um mordente preparado com cido
tnico e alumen de potssio, seguido de colorao com fucsina, conseguiu
evidenciar bem a parede celular. O processo, contudo, envolve uma delicadeza de
tcnica que acaba por torn-lo pouco prtico.
Procurando encontrar um mtodo que pudesse revelar a citada estrutura e que
reunisse praticabilidade a condio de eficincia para bactrias Gram positivas e
Gram negativas, fomos levados a ensaiar o emprego de um mordente cido, capaz
de transformar os componentes do citoplasma de corveis em no corveis, e, ao
mesmo tempo, impregnar a camada superficial de forma a torn-la suficientemente
ntida sob ao de um corante. Scanga reconhece no cido tnico a propriedade de
promover aquela modificao no citoplasma e verificamos que a adio de
pequenas propores de cloreto frrico favorece a alterao desejada.
Conseguimos nosso objetivo com um mordente composto de cido tnico e cloreto
frrico, em solues a 5% e 2% respectivamente. Bactrias submetidas a tal
mordente e depois coradas com Azul Vitria ou Verde Malaquita, exibiram, em bom
contraste, a camada superficial.

Objetivo

conseguir corar a parede celular, que tem melhor resultado em uma bactria
Gram-Positiva, j que sua parede celular mais fina que a Gram-Negativa.

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