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RESUMEN: Este trabajo entrega un panorama acerca de los aspectos tecnolgicos y de mercado de la produccin de bioplsticos microbianos. Un tipo de bioplstico producido por bacterias es el polihidroxibutirato (PHB), el cual es un biopolister biodegradable con
diferentes propiedades de gran potencial biotecnolgico. En pases
desarrollados existen impuestos al uso de materiales no degradables
derivados del petrleo y sumado a que las reservas de petrleo son
QLWDVDFWXDOPHQWHH[LVWHODQHFHVLGDGGHJHQHUDUQXHYRVPDWHULDOHV
plsticos biodegradables como los bioplsticos. La demanda global
por este tipo de material ha crecido en los ltimos aos, sin embargo,
su produccin a mayor escala requiere desarrollar un proceso ms
HFLHQWH HV GHFLU XQD PD\RU FRQFHQWUDFLyQ \ SURGXFWLYLGDG DO PiV
bajo costo posible. Para esto, la ingeniera bioqumica tiene un rol importante. La implementacin de estrategias de produccin microbiana
PiV HFRQyPLFDV \ HO GHVDUUROOR GH QXHYDV FHSDV PRGLFDGDV PiV
HFLHQWHHQODSURGXFFLyQGH3+%VRQQHFHVDULRVSDUDSURGXFLUSOiVticos microbianos.
Palabras clave: PHB, bioproceso, bioplsticos.
ABSTRACT: This paper gives a current overview about technological and market aspects of microbial bioplastics production.
One type of bioplastic produced by bacteria is the polyhydroxybutyrate
(PHB), which is a biodegradable biopolyester with different properties
with high biotechnological potential. In developed countries taxes are
charged for the use of non-degradable petroleum derivatives, in addition to that the petroleum reserves are limited, and then there is current
need to generate new biodegradable plastics such as the bioplastics.
7KHJOREDOGHPDQGIRUWKLVW\SHRIPDWHULDOKDVVLJQLFDQWO\JURZQLQ
the past few years; however, its production at higher scale requires the
GHYHORSPHQWRIDPRUHHIFLHQWSURFHVVLHDKLJKHUFRQFHQWUDWLRQ
and productivity at the lowest possible cost. For this, the biochemical
engineering has an important role. The implementation of less
expensive microbial production and the development of new
PRGLHGVWUDLQVPRUHHIFLHQW3+%SURGXFHUVDUHQHFHVVDU\LQ
order to produce plastics from bacteria.
Key Words: PHB, bioprocess, bioplastics.
30 / INGENERARE 27 - 2013
1. INTRODUCCIN
Los bioplsticos son un tipo de material que en las ltimas dcadas se han utilizado como reemplazo de plsticos derivados
del petrleo. La asociacin Europea de Bioplsticos considera
que los bioplsticos pueden ser clasificados como: 1) plsticos
sintetizados a partir de fuentes renovables y 2) polmeros biodegradables que cumplen con todos los criterios de las normas
cientficas reconocidas de biodegradabilidad y compostaje de
plsticos segn el estndar Europeo EN 13432 [1].
La demanda total de bioplsticos estimada en el 2011 fue de
475.900 toneladas mtricas, llegando a un total de 574.100
toneladas mtricas en el 2012, observndose as un potencial
de mercado en este campo. Con un 34,1% de demanda por
bioplsticos en el 2011, Europa es la regin de mayor demanda
seguida de la regin Asia-Pacfico con un 24,7% en el mismo
ao. En trminos de crecimiento, las regiones de Asia-Pacfico
junto con Amrica del Sur emergen como regiones de mayor
perspectiva para el mercado de los bioplsticos [1].
En este contexto la capacidad instalada de produccin de
bioplsticos ha aumentado en los ltimos aos. Europa en el
ao 2011 posea un 28% de capacidad de produccin global
para bioplsticos, mientras que Norteamrica y Sudamrica
seguan con un 24% y 22% respectivamente. En la tabla 1 se
resume la capacidad de produccin de bioplsticos instalada
en el mundo. Se puede observar que el bio-polietileno es el
bioplstico de mayor produccin con ms de 250 mil toneladas
mtricas en el 2011.
Tabla 1. Capacidad de produccin global de bioplsticos por tipo
de producto en el ao 2011[1].
Tipo de bioplstico
Capacidad de produccin
global (%)
Bio-polietileno
25
Mezclas de almidn
15
Polilactato (PLA)
13
13
Tipo
de PHA
Escala de
produccin
(ton/ao)
Biomer, Alemania
PHB
---
BASF, Alemania
PHB, PHBV
Piloto
PHAs
---
PHAs
50.000
PHAs
10.000
Kaneka, Japn
PHAs
---
Biocycle, Brasil
PHB, PHBV
50
Bio-On, Italia
---
10.000
PHBV
2.000
Yikeman, China
---
3.000
PHB
Piloto
PHAs
---
Polihidroxialcanoatos (PHA)
11
Cloruro de bio-polivinilo
PHB4B
10.000
PHAs
Piloto
Polisteres biodegradables
Bio-polietileno tereftalato
INGENERARE 27 - 2013 / 31
Abreviacin
CH3
poli(3-hidroxibutirato)
PHB
CH2CH3
poli(3-hidroxivalerato)
PHV
CH2CH2CH3
poli(3-hidroxihexanoato)
PHHx
Acetil-CoA
Acetil-CoA
3-cetotiolasa (phA)
Acetoacetil-CoA
El poli(3-hidroxibutirato) o PHB es uno de los PHA ms estudiados y es sintetizado por diferentes bacterias. Posee caractersticas muy similares al polipropileno (PP), uno de los plsticos
convencionales (de la industria petroqumica) de mayor uso. En
la tabla 3 se muestran una comparacin de ambos polmeros.
NADPH
NADP+
(R)-3-hidroxibutiril-CoA
Polimerizacin
PHB
PHB
PP
177
176
-10
Cristalinidad (%)
60
50-70
43
38
400
Con respecto a la biodegradabilidad de los PHA, muchos microorganismos en la naturaleza los degradan ya que contienen
PHB hidrolasas y PHA depolimerasas [5]. Tpicamente, una
estructura de PHB tiene una velocidad de degradacin de unos
pocos meses (en condiciones anaerobias) o pocos aos (en
En el primer paso, la enzima 3-cetotiolasa condensa dos molculas de acetil-CoA para formar acetoacetil-CoA. Luego, una
segunda enzima, acetoacetil-CoA reductasa permite la reduccin
de acetoacetil-CoA a 3-hidroxibutiril-CoA, utilizando NADPH.
Finalmente la enzima PHB sintasa polimeriza 3-hidroxibutiril-CoA
a PHB, liberando la coenzima-A.
La acumulacin de PHB es una manera natural para las bacterias
de almacenar carbono y energa. Este polister es insoluble
en agua y es por esto que los polmeros son acumulados en
grnulos intracelulares. Para la bacteria es ventajoso almacenar
32 / INGENERARE 27 - 2013
nutrientes en exceso, especialmente para que su estado fisiolgico no se vea afectado [6].
Durante el crecimiento bacteriano, la enzima 3-cetotiolasa es
inhibida por la coenzima-A libre y el flujo de acetil-CoA se favorece hacia el ciclo de Krebs. Cuando hay limitacin de algn
nutriente, diferente al carbono, el acetil-CoA es canalizado hacia
la biosntesis de PHB [9].
5. BIOPROCESO DE PRODUCCIN DE PHB
El PHB debido a sus caractersticas ha sido de mucho inters
con miras de producirlo a escala industrial y lograr el reemplazo
del plstico convencional. Sin embargo su costo de produccin
sigue siendo mayor a los plsticos derivados del petrleo. Segn
lo reportado, su valor de produccin puede ser hasta 16 veces
mayor que la produccin de polipropileno [10].
El bioproceso de produccin microbiana de PHB consiste en
una primera etapa de fermentacin para el crecimiento de la
biomasa y acumulacin intracelular del biopolmero, seguido de
una etapa de cosecha de la biomasa y extraccin/recuperacin
del polmero.
Se estima que para producir PHB alrededor de un 40% del
costo total de produccin se debe a las materias primas [11].
Por esta razn, existen diferentes investigaciones orientadas
a usar fuentes de carbono baratas para reducir el costo de su
produccin [12; 13; 14].
Sin embargo, hasta ahora el desafo sigue siendo desarrollar
un bioproceso con alta eficiencia de conversin en PHB al ms
bajo costo posible. En este sentido, en nuestro pas existen diferentes procesos industriales de los cuales se pueden obtener
subproductos que podran ser usados como fuente de carbono
y nutrientes para la produccin microbiana de PHB. Un ejemplo
de esta opcin fue recientemente evaluada en nuestro grupo de
investigacin. En un estudio de evaluacin tcnica y econmica
para producir PHB microbiano se evalu la factibilidad de usar
suero de leche de la industria de leche y quesos como fuente
de carbono para producir PHB [15]. Demostrndose que si es
una opcin factible en nuestro pas.
INGENERARE 27 - 2013 / 33
Origen de los
genes
E. coli
XL1-Blue
E. coli
HMS174
PHB (%
p/p)
Referencia
Alcaligenes latus
73
[23]
Ralstonia eutropha
80
[24]
87
[25]
Ralstonia eutropha
49.1
[26]
E. coli
SY-2
Ralstonia eutropha
59.5
[26]
E. coli
SY-3
Ralstonia eutropha
50.8
[26]
E. coli
4=
Ralstonia eutropha
41.3
[27]
E. coli W
Cupriavidus
necator
40.1
[28]
E. coli W
Cupriavidus
necator
36.2
[28]
E. coli
W6cscR
Cupriavidus
necator
45.8
[28]
En cultivos de esta cepa (E. coli KO11 PPAL-) se evalu el crecimiento celular y la produccin de PHB usando como fuente
de carbono glucosa o lactosa.
Materiales y mtodos
Las cepas de E. coli crecieron en un medio de la siguiente composicin (en g/L): glucosa 10; lactosa 10; NH4Cl 1;
Na2HPO46,8;KH2PO4 3;NaCl 0,5; MgSO47H2O 0,24; CaCl22H2O
0,011. Se adicion adems ampicilina 0,3 mM y como inductor
IPTG 0,01 mM.
Los cultivos se realizaron en matraces Erlenmeyer de 250 ml
con 50 ml de medio de cultivo. Se cultiv en una incubadora
rotatoria a 37C y 250 rpm.
La biomasa fue cuantificada mediante peso seco y la fuente de
carbono se midi utilizando la tcnica colorimtrica DNS, que
identifica azcares reductores.
El PHB fue recuperado mediante extraccin con cloroformo e
hipoclorito de sodio. Para su cuantificacin, el PHB extrado fue
hidrolizado con H2SO4y el producto de la hidrlisis (cido crotnico) fue cuantificado por HPLC con un sistema de deteccin UV.
Resultados
En las Figuras 4 y 5se muestran las cinticas de crecimiento y
acumulacin intracelular de PHB (%p/p) en cultivos de E. coli
KO11 PPAL- con glucosa (Fig. 4) y lactosa (Fig. 5).
34 / INGENERARE 27 - 2013
Si bien se alcanz una mayor concentracin de biomasa con glucosa (3,0 g/L) respecto de usar lactosa (2,0 g/L), el rendimiento
de PHB en biomasa (YPHB/X) fue 2,6 veces mayor con lactosa,
por lo que lactosa resulta ser una mejor fuente de carbono para
la acumulacin de PHB en clulas de E. coli recombinante.
50
3,5
3,0
30
2,0
1,5
20
PHB (%p/p)
Biomasa (g/L)
40
2,5
1,0
10
0,5
0,0
0
0
10
20
30
40
50
Tiempo (h)
8. CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS
Aunque durante la ltima dcada se han instalado nuevas compaas productoras de bioplsticos microbianos, an quedan
desafos para poder desarrollar un bioproceso ms eficiente.
Para esto, el aporte de la ingeniera bioqumica ser disminuir
los costos de produccin, generar nuevas cepas productoras y
encontrar aplicaciones con un mayor valor agregado. En diferentes pases (incluyendo el nuestro) existen normativas tendientes
a reemplazar el uso de materiales plsticos no biodegradables
y ya que a nivel global hay una mayor demanda por plsticos
biodegradables ms amigables con el medio ambiente, se vislumbra que la produccin de PHB microbiano es una importante
oportunidad para la generacin bioplsticos biodegradables.
50
3,5
AGRADECIMIENTOS
3,0
40
30
2,0
1,5
20
PHB (%p/p)
Biomasa (g/L)
2,5
1,0
10
0,5
0,0
[1]
[2]
G.Q. Chen A microbial polyhydroxy alkanoates (PHA) based bio- and materials industry Chemical Society Reviews
38:2434-2446, 2009.
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[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
0
0
10
20
30
40
50
60
Tiempo (h)
YX/S
(g/g)
YPHB/X
(g/g)
QPHB (g/
Lh)
Glucosa
0,10
0,37
0,30
0,027
Lactosa
0,07
0,36
0,79
0,027
Fuente de
carbono
INGENERARE 27 - 2013 / 35
[9]
[10]
[11]
[12]
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