ADN- recombinante

Se obtiene al intercalar un
segmento de ADN extrao a un
ADN receptor.
La tecnologa del ADN recombinante:
recombinante es el conjunto
de tcnicas que permiten aislar, manipular y expresar
fragmentos de ADN de un organismo introducidos en
otros.

Conceptos y mecanismos bsicos

ENZIMAS DE RESTRICCIN:
RESTRICCIN Corte especfico del ADN en fragmentos
pequeos y manejables
DESNATURALIZACIN: Capacidad
de las molculas de DNA de separar
sus cadenas. Es un proceso reversible.
Temperaturas elevadas (90 92 C)
pH alcalinos

HIBRIDACIN: Capacidad de
las molculas de unirse por
complementariedad con otros
cidos nucleicos (DNA- DNA o
DNA-RNA)

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) aumenta el

nmero de copias de un fragmento determinado
SECUENCIACIN: permite saber el orden o secuencia de los nucletidos
que forman parte de un gen.
INGENIERA GENTICA:
GENTICA La manipulacin deliberada de la informacin
gentica, con miras al anlisis gentico o al mejoramiento de una
especie.

Enzimas de restriccin

(1928- 1999)

En 1975 Daniel Nathans y Hamilton O. Smith

descubrieron un tipo de protenas que actan como tijeras
moleculares, cortando la doble cadena de ADN a travs
del esqueleto de fosfatos sin daar las bases:
las enzimas endonucleasas o enzimas de restriccinPremio Nobel en 1978 y dio origen a la Ingeniera Gentica.

Las enzimas de restriccin

son producidas por
bacterias como mtodo de
defensa contra virus y
degradan el ADN extrao.

(1931)

A su vez, el propio genoma bacteriano est protegido

contra sus enzimas de restriccin mediante
metilaciones (es decir, el agregado de un grupo
metilo [-CH3)]) en un tomo especfico de ciertos
nucletidos.

Se nombran a partir de las bacterias de las que son extradas, utilizando el gnero y
la especie de la bacteria de donde se aisl por primera vez esta enzima. La primera
letra representa el gnero de la bacteria, las prximas dos indican la especie, una
cuarta letra indica la cepa, y un nmero al final indica la cantidad de enzimas que se
han aislado de esa cepa. Ej: Eco RI E = gnero Escherichia
co = especie coli
R = cepa RV 13
I = primera endonucleasa aislada de esta cepa

5-A A G C T T--3'
3-T T C G A A--5'
HindIII

Hemophilus influenzae

5-GT T A A C3
3-CA A T T G5
HpaI
EcoRI

Hemophilus parainfluenzae

Escherichia coli

Aplicaciones de las enzimas de restriccin:

Hacer mapa de restriccin de un plsmido o bacterifago.
Fragmentar DNA genmico para separacin de electroforesis y Southern Blot.
Generacin de fragmentos para ser usados como sondas marcadas en
Southerny Northern blotting.
Generacin de fragmentos para ser subclonados en los vectores apropiados,
creacin de DNA recombinante.

Agentes desnaturalizantes:

Temperatura
pH

Hibridacin
DNA - DNA
DNA - DNA*
DNA - RNA

Electroforesis:utiliza
una corriente elctrica controlada con la finalidad de
Electroforesis
separar biomoleculas segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz.
Cuando una mezcla de molculas
ionizadas y con carga neta son
colocadas en un campo elctrico,
experimentan una fuerza de atraccin
hacia el polo que posee carga opuesta,
las molculas cargadas positivamente
se desplazaran hacia el ctodo (el polo
negativo) y aquellas cargadas
positivamente se desplazaran hacia el
nodo (el polo positivo).

Poro medio
Geles de agarosa Simple y Doble cadena
Rango de tamao 300 a 10.000
nucletidos
Poro pequeo
Geles de poliacrilamida Simple y Doble cadena
Rango de tamao de 10
a 50 nucletidos

Corte con enzimas de restriccin

Generacin de fragmentos

Separacin por electroforesis

Polimorfismo
de los longitud de
fragmentos de
Restriccin (RFLP)

RFLP

Northern Blotting:
Transferencia de RNA

RFLP y posterior Southern blot

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR):

aumenta el nmero de copias de un fragmento determinado de ADN

Desnaturalizacin

Anneling: unin del

oligonucletido
Polimerizacin

Eficiencia=n X 2c
n = nmero de molculas
c= nmero de ciclos

Fundamento de la secuenciacin enzimtica

Secuenciacin

Repeticiones en Tandem
de Nmero Variable

sonda multilocus

Minisatlites
y
Microsatlites

Sistemas que detectan

mayor variabilidad

sonda unilocus

Repeticiones en tandem de nmero variable (VNTR)

Huella Gentica

Clonacin

Librera o Biblioteca genmica

Biotecnologa:
El trmino biotecnologa fue creado en 1917 por el
ingeniero hngaro Karl Ereky para describir
procesos en los que se formaban productos a partir
de materiales crudos, con la ayuda de la actividad
metablica de organismos vivos.

Hoy el trmino biotecnologa engloba todo tipo de

produccin industrial de "bienes y servicios" por
medio de procesos que utilizan organismos,
sistemas o procesos biolgicos.

Cultivo de tejidos
Produccin de materiales libre de virus
Conservacin de germoplasma
Aplicaciones al mejoramiento gentico
Obtencin de monoploides

Marcadores moleculares y bioinformtica

Caracterizacin molecular de genotipos vegetales
Seleccin asistida por marcadores moleculares
Evaluacin molecular de factores asociados a
caractersticas de calidad

Laboratorio de Ingeniera Gentica

resistencia a estrs biotico (plantas capaces de
crecer en suelos salinos)
plantas que resisten a condiciones muy severas
de fro
expresin de molculas de inters (los
agricultores del futuro sern verdaderamente
molecultores)
plantas usadas como bioreactores para la
produccin de sustancias de uso mdico,
alimenticio o industrial
plantas productoras de vacunas
plantas que crezcan en suelos contaminados
permitiendo su recuperacin (fitoremediacin)

La Acuicultura o mejor dicho el

manejo de organismos marinos
para la obtencin de protenas, no
est exenta de la Biotecnologa.
En estos momentos se obtienen
ostiones y ostras triploides (3n),
es decir, con tres conjuntos de
cromosomas, estos moluscos
presentan un mayor crecimiento,
mejor talla y una carne de calidad
superior.
Los estudios de los
microorganismos en la
acuicultura aplicada a los
salmones, permite conocer la flora
bacteriana del tracto digestivo lo
que permitir disminuir la
mortalidad del alevn y mejorar la
sobrevida. El uso de las algas
marinas para fabricar alimentos
alternativos a la protena. Crear
autovacunas, frmacos, etc.

La Minera es una de las actividades

productivas ms antiguas del hombre,
en ella se utilizan tcnicas que
permiten purificar el cobre mediante
procesos qumicos.
Ahora utiliza la Biolixiviacin, que
consiste en utilizar bacterias para
oxidar compuestos, estas bacterias se
llaman quimiolitoautotrficas, esta
palabra deriva de tres trminos
qumica que significa transformacin
de la materia, lito que significa piedra y
autotrofa que adems se separa en
dos trminos, auto que significa "por
si mismo" y trofos o "comer". Por lo
tanto estas bacterias llamadas
Acidithiobacillus ferrooxidans utilizan
los compuestos presentes en las
piedras para liberar el mineral
obteniendo energa para vivir.
El proceso permite obtener cobre de
alta ley del sobrante de la produccin
de la minera

La Biotecnologa aplicada
en la Medicina es muy
compleja, se piensa en
tratar enfermedades
genticas. Produccin de
protenas en organismos
procariontes y eucariontes,
terapia gnica que
consiste en introducir
material gnico en las
clulas con fines
teraputicos para tratar
enfermedades adquiridas o
heredadas fabricacin de
vacunas, fabricacin de
animales knockout para
estudiar funciones de
protenas.

Se imaginan una papa variedad

Desiree resistente a la bacteria
Erwinia, frutales resistentes a
virus y embriones transgnicos de
Pinos, alerces y cipreces
resistentes a herbicidas y polillas.
Frutas resistentes a heladas y
perodos largos de embalaje.
Frutas con ms jugo, verduras
que pueden resistir las heladas.
Lechugas y repollos ms grandes
que pueden soportar el
transporte, etc. Es importante
mencionar tambin los estudios
en guanacos y vicuas
convirtiendo a Chile en la nica
fuente mundial para ciertas
especies de importancia para la
ganadera.

TRANSGNESIS:
Ocurre cuando se transfieren genes entre
especies no emparentadas, el riesgo est
en que se saltan los puentes evolutivos
Toda variedad recin formada tendra que ser al
principio, generalmente local. Si la nueva variedad
fuese afortunada en su lucha por la vida, lentamente se
propagara desde la regin central, compitiendo con
los individuos no modificados y vencindolos en los
bordes en un crculo cada vez mayor
CHARLES DARWIN
El Origen de las Especies
(1859)