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UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO

CENTRO UNIVERSITRIO NORTE DO ESPRITO SANTO

Relatrio n7: Reaes de Caracterizao de Carboidratos

Bianca M. Carletto
Ctia P. Barcellos
Ryan Thairyk S.de Jesus
Prof Carolina Fortes Rigos

So Mateus, 15 de Maio de 2015

1. RESUMO
O seguinte procedimento tem como assunto as reaes de caracterizao de
carboidratos. Com o objetivo de observar qualitativamente a presena de
carboidratos em solues, atravs de reaes qumicas especificas destas
macromolculas, e reconhecer as diferenas moleculares entre mono, di, tri e
polissacardeos. Todos os monossacardeos e alguns dissacardeos e
polissacardeos possuem carbonos anomricos livres, dando a eles um carter
redutor, estes so chamados de acares redutores e so capazes de reduzir
ons metlicos. Identificados atravs dos testes de Benedict, de Fehling, e do
espelho de prata. Realiza-se tambm a hidrlise cida do amido com
observao da reduo do iodo, at se transformar na unidade mais simples, a
glicose; e da sacarose, que ocorre no processo da inverso da rotao ptica
da soluo inicial, por isso o processo de hidrlise da sacarose conhecido
como inverso da sacarose. O produto final conhecido como acar invertido.

2. INTRODUO
Os carboidratos perfazem a mais abundante classe de biomolculas da face da
Terra, sendo a sua oxidao o principal meio de abastecimento energtico da
maioria das clulas no fotossintticas. Eles atuam tambm como elementos
estruturais da parede celular e como sinalizadores no organismo 1.
Os carboidratos so poliidroxialdeidos ou poliidroxicetonas ou substncias que
libera estes compostos por hidrolise. Muitos carboidratos no so todos, tem
formulas empricas (CH2O)n; alguns tambm contm nitrognio fosforo e
enxofre2.
Os carboidratos so divididos em trs classes principais, de acordo com seu
tamanho:

monossacardeos,

oligossacardeos

polissacardeos.

Os

monossacardeos, ou aucares simples, consistem de uma nica unidade de


poliidroxialdedo ou cetona. O monossacardeo mais abundante na natureza
o acar com seis atamos de carbono na molcula, a D-glicose, tambm
chamada de dextrose. Os monossacardeos com mais de quatro carbonos
tende a ter estruturas acclicas.
Os oligossacardeos so compostos por cadeias curtas de unidades
monossacardeos, ou resduos, unidos entre sim por ligaes caractersticas,
chamadas ligaes glicosdicas. Os mais abundantes so os dissacardeos,
formados por duas unidades de monossacardeos. A sacarose, o
representante tpico desta classe. Ela composta de dois monossacardeos, Dglicose e D-Frutose.

Figura 1: ligao glicosdica. Fonte: texto os carboidratos-bioqumica dos alimentos.

Os polissacardeos so polmeros que contm mais de 20 unidades de


monossacardeos e podem ter cadeias contendo centenas ou milhares de
unidades monossacardicas. Alguns, como a celulose, tm cadeiras lineares,
enquanto outro, como glicognio, tem cadeias ramificadas. Glicognio e
celulose consistem de unidades repetitivas de D-glicose, mas eles diferem
entre si no tipo de ligao glicosdica e consequentemente tm propriedades e
funes biolgicas diferentes.
Os monossacardeos podem ser oxidados por agentes oxidantes relativamente
suaves, tais como os ons frrico (Fe+3) ou cprico (Cu+2). O carbono do grupo
carbonila oxidado a carboxila. A glicose e outros acares capazes de reduzir
os ons frrico ou cprico so chamados de acares redutores. Esta
propriedade base da reao de Fehling, um teste qualitativo para a
presena

de

acares

redutores.

Um

exemplo

para

seu

uso

detectar glicose na urina, verificando-se assim uma possvel diabetes.


tambm utilizado para determinar acares (Carboidratos) redutores; ao se
reagir

com monossacardeos torna-se

esverdeada,

reagindo-se

com dissacardeos torna-se avermelhada.


Outro teste laboratorial para identificao de acares redutores o Teste de
Tollens, que utiliza o complexo inico prata amnia, Ag(NH 3)2+, como agente
oxidante. Um espelho de prata depositado na parede do tubo de ensaio se o
acar redutor estiver presente, como resultado do on Ag

no complexo inico

sendo reduzido a metal prata livre.


Os polissacardeos de armazenamento mais importantes so o amido para
clulas vegetais e o glicognio nas clulas animais. So altamente hidratada
porque elas tem muitos grupos hidroxila expostos e capazes de forma ponte de
hidrognio com a gua.
O amido contem dois tipos de polmeros da glicose, a amilase e a amilopectina.
A amilose consiste de cadeias longas, no ramificadas, de resduos de Dglisose conectados por ligaes ( 1 4), j a amilopectina altamente
ramificada, pois a cada 24 ou 30 resduos com ligao ( 1 4) ocorre
ligaes ( 1 6).

A hidrlise do amido tem por base o fato de que a ligao glicdica estvel
em condies alcalinas mas hidrolisada em condies cidas. Se o amido for
tratado por cidos minerais ou enzimas especficas, o resultado um
fracionamento do polmero com liberao de molculas menores. Esse
processo chamado hidrlise e se for completa, dar origem apenas a glicose.
3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
3.A Reaes caractersticas dos carboidratos oxidao/reduo:
Utilizou-se as seguintes solues de carboidratos para a realizao dos testes:
frutose, glicose, sacarose e amido, todas a 1%.
A1. Teste de Benedict para acares redutores
Numerou-se 4 tubos de ensaio. A cada tubo adicionou-se 2,5 mL do reagente
de Benedict e 1 mL da soluo do carboidrato, agitou-se. Colocaram-se os
tubos de ensaio, ao mesmo tempo, em banho-maria (aproximadamente
100C). Observou-se o que ocorreu passados 5-6 minutos.
Numerou-se outros 2 tubos de ensaio, ao primeiro adicionou-se 5 mL de
sacarose e ao segundo 5 mL de amido, nos dois tubos adicionou-se 4-5 gotas
de HCl 3 mol/L. Aqueceu-se as solues em banho-maria, sendo a primeira por
5 minutos e a segunda por 30 minutos. Realizou-se o teste de Benedict
utilizando-se 1-2 mL das solues acidificadas (sacarose e amido) e comparouse os resultados obtidos com as solues sem a adio de cido.
A2. Teste de Tollens (espelho de prata)
Numerou-se 4 tubos de ensaio. Colocou-se 1 mL da soluo de Tollens em
cada tubo de ensaio e adicionou-se 0,5 mL do carboidrato e agitou-se.
Colocou-se os tubos em banho-maria (aproximadamente 70C) durante 5
minutos. Observou-se e anotou-se formao de um espelho de prata nos
tubos.
A3. Teste de Fehling para acares redutores
Numerou-se 4 tubos de ensaio. Em cada um misturou-se 1 mL da soluo de
Fehling A com 1 mL da soluo de Fehling B. Adicionou-se 0,5 mL da soluo
de carboidrato e agitou-se. Em banho-maria aqueceu-se as solues at a

fervura, durante 5 minutos. Observou-se os tubos de ensaio em que


apareceram precipitados avermelhados.
3B. Reao de hidrlise do amido
Colocou-se em um erlenmeyer de 100 mL, cerca de 20 mL da soluo de
amido a 1%. Na capela adicionou-se 1,0 mL de cido clordrico concentrado,
agitou-se e transferiu-se 1,0 mL dessa mistura para um tubo de ensaio, nesta
adicionou-se 1 gota de lugol e observou-se a cor. Colocou-se o erlenmeyer
sobre a chapa metlica, e dentro dele adicionou-se pedras de ebulio,
mantendo-se a ebulio branda. Ao incio da ebulio retirou-se cerca de 1 mL
da amostra, a cada 4 minutos, utilizou-se cerca de 6 tubos de ensaio. Em cada
tubo adicionou-se 1 gota de lugol. Ao ltimo tubo, adicionou-se base at o meio
ficar bsico e realizou-se o teste de Benedict.

3C. Reao de hidrlise da sacarose (Inverso da sacarose)


Em um polarmetro mediu-se a rotao tica da soluo de sacarose a 10 %
(50 mL). Calculou-se a sua rotao especfica. Transferiu-se a soluo para um
erlenmeyer e adicionou-se 20 gotas de cido clordrico concentrado, tampou-se
a soluo e a aqueceu por cerca de 10 a 15 minutos. Esfriou-se e mediu-se a
rotao tica novamente.

4. RESULTADOS E DISCUES
4A. Reaes caractersticas dos carboidratos-oxidao/reduo
A1 Teste de Benedict para acares redutores
Ao adicionar o reagente de Benedict nas solues de cada carboidrato,
observou-se tonalidades azul em cada um deles, aps a aquecimento em
banho-maria, O aparecimento de um precipitado de colorao vermelho-tijolo
nos seguintes carboidratos: frutose e glicose (tubo 1 e 2), indicando que os
ons Cu2+ do reagente de Benedict foram reduzidos a Cu +, indicando presena
de acar redutor. Reagem com o reagente de Benedict formando o xido de
Cobre (Cu2O).
CuSO4 Cu2+ + SO422 Cu2+ + Acar redutor Cu+

Cu+ Cu2O (precipitado vermelho)

J que, os monossacardeos podem ser oxidados por agente oxidantes suaves


como ons frricos (Fe+3) e cpricos (Cu+2). O grupo carbonila oxidado a cido
carboxlico. Estes acares so chamados de acares redutores. Essa
propriedade til na anlise de monossacardeos e dissacardeos 1.
Sendo que, alguns carboidratos possuem um grupamento - OH (hidroxila) livre
no carbono 1 de suas molculas, enquanto outros no. Observa-se que os
acares que apresentam a hidroxila livre no C-1 so bons agentes redutores.
Por esse motivo a extremidade que contm o OH - passa a ser chamada
extremidade redutora e o acar, de acar redutor. A capacidade que esses
compostos apresentam de reduzir ons metlicos em solues alcalinas um
bom mtodo de identificao desses compostos1.
Tambm foi possvel observar, que aps o aquecimento os tubos 3 e 4 que
eram a sacarose e o amido, eles no mudaram de colorao. A sacarose por
ser um dissacardeo no possui o poder redutor da glicose. No contem
tomos de carbono anomricos livres; os tomos de carbono anomricos de
ambos os monossacardeos esto envolvidos na ligao glicosdica. A
sacarose, portanto, um acar no redutor, estes chamados de glicosdeos.

Figura 2: estrutura da sacarose, com ligao glicosdica entre D-glicose e D-sacarose.


(Fonte: texto os carboidratos-Qumica de alimentos) 8

J o amido sendo um acar deveria apresentar uma colorao avermelhada.


No entanto no h alterao da cor ao adicionar o reagente de Benedict porque
o amido um homopolisacardeo no redutor, e enquanto no houver hidrlise
no haver reao por isso a cor permanecer azul original a do reagente.

Figura 3: estrutura do amido. Fonte: texto os carboidratos-Qumica de alimentos

Aps a adio de HCL 3M na soluo de 5 ml de sacarose e 5 ml de amido 1%,


deixando-o ambos respectivamente em banho maria por 5 minutos e por 30
minutos. Aps o aquecimento realizou-se o teste de Benedict utilizando-se 2
mL das solues acidificadas. Para a soluo de sacarose houve a formao
do precipitado vermelho-tijolo e para a de amido no houve. Isso ocorre, pois, a
concentrao do cido adicionado no suficiente para a quebra da estrutura
do amido em molculas de glicose, mas suficiente para a quebra da estrutura
da sacarose, em que forma a glicose e a frutose. A sacarose se hidrolisa
facilmente em meio cido diludo com HCl, que age como catalisador. A
facilidade de hidrolise se deve a estrutura plana do anel da furonose 3.

Figura 1: Formao de precipitado vermelho de Cu2O

A2. Teste de Tollens (espelho de prata)


Aps a adicionar o reagente de tollens, que consiste em uma soluo
amoniacal de nitrato de prata aos 4 tubos com carboidratos, e aquecer em
banho de agua por 5 minutos, observou-se que as solues do tubo 1 e 2, que
contem frutose e glicose respectivamente, houve formao de espelho de

prata, e as solues 3 e 4 contendo sacarose e amido no houve nenhuma


formao.
O teste de tollens distingue a maioria dos aldedos e cetonas, os Aldedos so
facilmente oxidados pelo on prata Ag +, em soluo bsica, fornecendo o sal do
cido carboxlico e o metal prata precipitado. Por esse motivo, esse tambm
conhecido como o teste do espelho de prata, pois se as paredes do tubo de
ensaio estiverem devidamente limpas, a prata metlica aderir ao vidro
formando um fino espelho de prata. As cetonas, porm, usualmente no
reagem, logo no se observa a formao de nenhum precipitado de prata nas
paredes do tubo de ensaio4.
O

R C H + 2Ag(NH3)2OH 2Ag(s) + RCO2NH4 + 3NH3 + H2O


Aldedo
reagente
precipitado sal de amnio
de Tollens
de prata
do cido carboxlico

R C R + 2Ag(NH3)2OH no h reao
cetona

reagentes de Tollens

Nota-se que a glicose possui o grupo aldedo e a frutose possui grupo cetona, sendo assim o
reagente de Tollens serve para diferenciar esses dois carboidratos, ocorrendo a formao do
espelho de prata apenas com a glicose. Mas, no foi observada essa diferena no
procedimento realizado, pois formou-se o espelho em ambas solues, Mas como

mencionado na teoria, os acares que so cetonas, tambm podem ser acares


redutores porque se isomerizam a aldoses. Devido a isso pode-se ter ocorrido a reao,
na frutose que uma Cetose.

Figura 2: Texto Fazendo um espelho de prata. Fonte: Site do educador Brasil Escola) 4

Figura 3: Formao de "espelho de prata" nas amostras de glicose e frutose

A3. Teste de Fehling para acares redutores


Misturou-se 1 ml da soluo de Fehling A e 1,0 mL da soluo de Fehling B em
4 tubos. A cada tubo adicionou-se 0,5 mL de cada soluo de carboidratos no
seu respectivo tubo de ensaio e agitou-se. Aqueceu-se fervura em banho de
gua durante 5 minutos e observou-se o aparecimento de precipitado
avermelhado no fundo do tubo, nos tubos 1 e 2, da glicose e frutose
respectivamente), como teste positivo para presena de acares redutores,
que no caso da prtica a frutose, glicose.
A reao de Fehling um teste qualitativo para a presena de aucares
redutores. O reagente de Fehling fortemente alcalino contendo ons cpricos
que formam um complexo on cprico-trtaro de sdio e potssio. Nestas
condies, o grupo carbonila da glicose e oxidado a grupo carboxlico, o cobre
reduzido por ao de acares redutores, formando-se o xido cuproso
(precipitado avermelhado). A frutose e a glicose em soluo possuem carter
redutor e em meio alcalino este carter se torna mais marcante, fazendo com
que esses grupos redutores reduzam os ons cobre (II) ons cobre (I), com a
formao de hidrxido cuproso, que por aquecimento, se converte em xido
cuproso. Um composto insolvel de cor vermelha que se precipita 5.

Figura 4: Formao de precipitado de cobre em aucar redutor

4B. Reao de hidrlise do amido


Ao realizar-se os experimentos, observou-se os seguintes resultados
apresentados no quadro
Hidrlise do amido
Tempo de
aquecimento
4 minutos
8 minutos
12 minutos
16 minutos
20 minutos

Colorao com o lugol


Azul escuro
Roxo escuro
Marrom avermelhado escuro
Marron avermelhado claro
Marron avermelhado mais claro que o anterior

Observou-se que a medida que a soluo ficava mais tempo no aquecimento,


as solues ficavam mais claras aps adio do lugol, porm as trs ltimas
solues ficaram praticamente com a mesma colorao.
O amido um homopolissacardeo no redutor constitudo essencialmente por
resduos de glicose unidos por ligaes alfa 1-4 (amilase) e alfa 1-6
(amilopectina). A amilase forma um complexo azul com iodo, enquanto a
amilopectina forma um complexo vermelho. O complexo apresenta colorao
azul intensa, desenvolvida pela ocluso do iodo nas cadeias lineares da
amilase. O cido clordrico e um catalisador inespecfico, que quebra qualquer
tipo de ligao glicosdica6.
Desta forma as ligaes de amido tratadas com cido quente ocorrem
sucessivas hidrolises ate que suas molculas sejam convertidas totalmente a
glicose. medida que a hidrlise progride, a reao com o iodo vai
desaparecendo e o poder redutor do hidrolisado vai aumentando, ento a

medida que vai ocorrendo essa hidrlise a reao com o iodo deixa de ocorrer
e a colorao vai deixando de ser azul escura, pois todo o composto no
redutor (amido, que reage com o iodo) esta sendo convertido em seu
constituinte essencial, que um acar redutor (glicose, que no reage com o
iodo)6. Para comprovaes da hidrolise acida do amido utiliza-se como prova a
mudana de colorao da soluo durante o processo. Sendo utilizado como
reagente a soluo de lugol, como identificador da atividade extracelular de
amilases.
Foi possvel observar tambm o teste de Benedict com a soluo do ultimo
tubo, que se apresentou positiva para o teste de Benedict, pois ocorreu
aparecimento de um precipitado vermelho, assim constatou-se que houve
hidrlise suficiente para o surgimento de um acar redutor, no caso a maltose
e ou a glicose.
4C. Reao de hidrlise da sacarose (inverso da sacarose)
Inicialmente mediu-se no polarmetro a soluo de sacarose, e obteve o valor
de +10, mas aps o aquecimento em meio cido, ocorreu a hidrlise da
sacarose, assim obteve-se o valor de -6. O acar denomina-se agora de
invertido.
A sacarose um acar dextrorrotatrio, ou seja, capaz de desviar a luz
polarizada para a direita. Quando submetida ao de cidos diludos ou da
enzima invertase, a sacarose sofre hidrlise e libera a molcula de glicose e a
de frutose que fazem parte da sua estrutura 7. A glicose dextrorrotatria, e a
frutose formada est na sua forma piranosdica (mais estvel) que altamente
levorrotatria, com isso, a estrutura da frutose favorece a rotao para a
esquerda, diz-se ento que o acar inverteu o ngulo.
O termo "invertido" decorre de uma caracterstica fsica da sacarose ela inverte
o plano da luz polarizada quando submetida anlise no aparelho polarmetro
(aparelho ptico que permite identificar se uma substncia possui poder
rotatrio e se dextrgira ou levgira)7.
C12H22O11 (sacarose) + H2O (gua) = C6H12O6 (glicose) + C6H12O6 (frutose)

5. CONCLUSO
Na reao de Benedict os ons cpricos so reduzidos pela carbonila dos
carboidratos a ons cuprosos, formando xido cuproso que tem cor vermelho
tijolo. Deste modo, na anlise feita durante este procedimento observou a
reduo do cobre apenas nas amostras de frutose e glicose, indicando o

carter de acar redutor destes carboidratos, sendo comprovado esse carter


novamente, atravs do teste de Fehling. A formao de um espelho metlico na
parede dos tubos de ensaio durante o teste com reagente de Tollens, vai de
encontro com o descrito na literatura, onde carboidratos do grupo dos
poliidroxialdeidos, reagem com a prata oriunda do reagente de Tollens, sendo
oxidados e a prata reduzida, formando um espelho de prata nas paredes dos
tubos de ensaio onde contm carboidratos poliidroxialdeidos. Apesar do
experimento prtico ter apresentado falhas em sua execuo, tendo em vista o
erro na colorao com o reagente Lugol, foi possvel demonstrar que o amido
pode ser hidrolisado e obtido como produto final da hidrlise a glicose. A
medida que o amido hidrolisado, proporcionalmente a glicose produzida,
fato este comprovado pela mudana na tonalidade observada, sendo que ao
final da hidrolise observou-se apenas a cor do iodo na soluo. Por fim, o
estudo da hidrolise da sacarose catalisada pela enzima invertase, proporcionou
bons resultados ao ser observado no polarmetro a inverso do ngulo de
polarizao da luz, devido a formao de frutose a partir da hidrlise da
sacarose.

6. REFERENCIAS
1. Nelson, David L.; Cox, Michel M.; Prncipios de bioqumica de Lehninger. 5
edio, Porto Alegre: Artmed, 2011
2. REIS, Gleyson Tacido Gomes.Reagente Benedict.disponvel em:
http://www.ebah.com.br/content/ABAAABWUsAL/trabalho-benedict
3.SARAN,Luciana Maria.Aula:Indentificao de aldedos e cetonas. Disponvel em:
http://www.fcav.unesp.br/Home/departamentos/tecnologia/LUCIANAMARIASARAN/
aula-02-de-laboratorio.pdf
4. FOGAA, JENNIFER. Fazendo um espelho de prata.
http://educador.brasilescola.com/estrategias-ensino/fazendo-um-espelho-prata.htm
5. NORONHA,Victor. Analise Qualitativa de carboidratos. Disponivel em:
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfe9MAF/relatorio-bioquimica-analisequalitativa-carboidratos
6.Remio,Jos Oscar.Bioquimica guia de aulas praticas disponvel em:
https://books.google.com.br/books?
id=9DTwnE1dOQC&pg=PA109&lpg=PA109&dq=hidrolise+acida+do+amido&source
=bl&ots=TQHu6Yyaw&sig=aiNHoMD3rxEuMLJoj8SrboRFNS8&hl=en&sa=X&ei=
WecfUeflJo2W8gSl4YGgAw#v=onepage&q=hidrolise%20acida%20do
%20amido&f=false
7. ALVES,Liria.Aucar Invertido.disponivel em:
http://www.brasilescola.com/quimica/acucar-invertido.htm