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Enzimtica
Actividad Enzimtica
1. Resumen
Las enzimas son el medio por el cual los organismos canalizan el flujo de energa y
materia. En la actualidad, como resultado de la acumulacin de datos procedentes de la
dinmica de las protenas (estudios de movimiento conformacional) y del anlisis del
hacinamiento macro molecular, la investigacin de enzimas est experimentando
cambios revolucionarios. (URL)
Evaluar la cintica enzimtica de la invertasa durante el desarrollo de la reaccin
qumica y su relacin con el tiempo, permite comprender el efecto de los factores que la
pueden modificar la velocidad de reaccin. Principalmente para esta prctica, se
evaluara el efecto de concentracin, a temperatura constante 37C, tras la aplicacin del
GOD PAP, si se extraen volumen de muestras dentro de un determinado tiempo y se
llevan a refrigeracin, la actividad disminuye debido a que el enzima, como cualquier
otra protena, sufre procesos de desnaturalizacin y, por lo tanto, de inactivacin.
Pasado el periodo de incubacin se toman 1 ml en celdas de cuarzo determinndose la
absorbancia a 510nm de la mezcla problema utilizando como blanco la mezcla de
ensayo del blanco de sustrato. A partir de los valores de absorbancia y tiempo de
incubacin se pueden determinar los valores de actividad enzimtica.
2. Introduccin
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que actan como catalizadores en
todas las reacciones del metabolismo. Las enzimas dems de ser consideradas como
catalizadores, son capaces de reconocer sobre que sustancia van a actuar y tambin son
capaces de provocar una transformacin (Sapag, M., et al)
La invertasa es una enzima que convierte la sacarosa en glucosa y fructosa, esta enzima
es procedente de cepas especiales de levadura. La invertasa es una Bfructofuranosidasa: el pH ptimo de inversin es de 4,5 y presenta una mxima
actividad a una temperatura entre 50-60C. El azcar invertido, por el alto contenido de
fructosa libre, es ms soluble en agua, presenta un poder edulcorante ms elevado (es
ms dulce) que una disolucin de sacarosa de igual concentracin y una viscosidad
mayor.
Los mtodos de ensayo enzimtico son mtodos que miden las actividades enzimticas,
mediante el cual se puede medir indirectamente la cantidad de enzima activa presente.
Especficamente la actividad enzimtica expresa la cantidad de sustrato convertido o la
cantidad de productos producidos, por unidad de tiempo, teniendo en cuenta el volumen
de reaccin (Herrera, C., et al., 2003)
En los ensayos espectrofotomtricos puede seguirse el curso de una reaccin
observando cmo cambia la luz absorbida por la solucin en la que se est dando la
reaccin. Para poder utilizar un ensayo de este tipo debe haber entre los sustratos o los
productos alguno que absorba luz a una longitud de onda determinada, y que sea la
nica molcula de la mezcla de reaccin que lo hace a la misma; de esta forma, se puede
observar el aumento o la disminucin de la absorbancia a dicha longitud de onda.
Inmovilizacin
Enzimtica
Agitadores de vidrio.
Agua destilada.
Balanza analtica.
Bao de termostato.
Beakers.
Celdas para espectrofotmetro.
Cinta para rotular.
Erlenmeyers.
Esferas de la Enzima invertasa inmovilizada en alginato de calcio.
Esferas de la Levadura inmovilizada en alginato de calcio.
Esptula.
Espectrofotmetro.
Kit GOD PAP (Reactivo para la determinacin fotomtrica de glucosa)
Micropipeta.
Pipetas.
Plancha de calentamiento
Reloj.
Sacarosa
Toallas absorbentes.
Tubos de ensayo.
Vidrio de Reloj.
Inmovilizacin
Enzimtica
Tomar
4. Resultados
Inmovilizacin
Enzimtica
Imagen N. 01. Hidrolisis de la sacarosa.
Absorbancia
0
0,034
0,308
0,547
0,601
0,701
0,867
Actividad Levadura
Transcurridas las 2 horas de reaccin se observa la aparicin de unas pocas y pequeas
burbujas.
La composicin del reactivo enzimtico es la siguiente:
Buffer fosfato pH 7.0
Glucosa oxidasa (Aspergillus Nger)
Peroxidasa
4-Aminoantipirina
Acido p-Hidroxibenzoico
Azida sdica
Estabilizantes y preservantes no reactivos
75mM
15000U/I
2000 U/I
0.5 mM
10mM
0.1 g/dL
c.s.
Inmovilizacin
Enzimtica
0,322, teniendo en cuenta esta relacin se haya la concentracin de glucosa para cada
punto.
Absorbancia
0.034
0.308
0.547
0.601
0.701
0.867
Concentracin glucosa
(mg/mL)
0,010
0,095
0,169
0,186
0,217
0,269
Inmovilizacin
Enzimtica
Inmovilizacin
Enzimtica