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Engenharia das Fermentaes

Mestrado Integrado em Bioengenharia Especializao em Engenharia Biolgica


Mestrado Integrado em Engenharia Qumica Especializao em Biotecnologia

Manuel Jos Vieira Simes


Ano letivo 2013/2014
1

Objectivos
Pretende-se que os estudantes adquiram a capacidade de planear,
dimensionar e analisar a operao de reactores com clulas (em particular,
microbianas) em suspenso e em agregados celulares (incluindo biomasssa
fixa). Esta unidade curricular tambm visa dotar os estudantes de
conhecimentos de anlise e dimensionamento de unidades complementares
de processos fermentativos.

Mtodos
Exposio formal dos fundamentos tericos e metodologias de abordagem,
usando videoprojector e material online acessvel atravs na Internet, e
resoluo de problemas, acompanhados de alguns exemplos de aplicao.
Sero propostos para estudo individual a resoluo de problemas mais
complexos que podem exigir, em alguns casos, suporte informtico
(Microsoft Excel ou plataforma similar; SuperPro Designer; Berkeley
Madonna). Propem-se exemplos de dimensionamento de bio-reactores,
onde se aplicam regras fundamentais de modelao e projecto.

Programa
1. Integrao do biorreatores em processos industrial; Esquema geral de um
processo fermentativo; Caractersticas gerais de microrganismos e meios de
cultura utilizados industrialmente.
2. Fundamentos de balanos de material (balanos de massa a um ou mais
componentes; balanos em mltiplas unidades; balanos em unidades com
reciclagem bypass e purga). Biorreatores de clulas microbianas: classificao;
reactores com biomassa suspensa e com biomassa fixa. Modos de operao de
biorreatores (batch, fed-batch, contnuo). Caractersticas fsicas do equipamento.
3. Modelao e simulao de processos em biorreatores microbianos: exemplos
ilustrativos; utilizao de software especfico.
4. Agitao e arejamento (Conceito de transferncia de massa; Coeficiente de
correlao de transferncia de massa; Quantificao da rea interfacial;
Determinao da taxa de absoro/transferncia de oxignio; Correlaes para
KLa; Conceito de hold-up).
5. Esterilizao (Mtodos de esterilizao; Cinticas de morte trmica; Esterilizao em
descontnuo e em contnuo; Esterilizao de ar).
6. Conceitos gerais de variao de escala em biorreatores.
3

Avaliao
Modo de avaliao dos conhecimentos: avaliao distribuda com exame final.
A classificao final ser calculada de acordo com os seguintes componentes de
avaliao:

Exame final com um factor de ponderao de 60% na classificao final;

Componente prtica - 30%;


Desempenho nas aulas 10%;
Exame de recurso.
Para obteno de classificao positiva, o estudante dever obter uma classificao global mnima
de 9.5 valores. No entanto, o exame final dever ter uma classificao superior a 8 valores.

Bibliografia recomendada
Bailey J.E., Ollis D.F. (1987). Biochemical Engineering Fundamentals.
McGraw-Hill.
Lee J.M. (2001). Biochemical Engineering. Prentice-Hall Inc.
Lopes A.M., Fonseca A. (1996). Biologia microbiana. Universidade aberta.
Ferreira W.F.C., de Sousa J.C.F. (1998). Microbiologia. Volume 1. Lidel
edies Tcnicas, Lda.

Fonseca M.M., Teixeira J.A. (2007). Lidel edies tcnicas, Lda.


5

Classificao de Bioprodutos
Os bio-produtos podem ser classificados grosseiramente nas seguintes categorias: pequenas
molculas, consistindo em compostos qumicos simples e antibiticos, hormonas,
aminocidos e vitaminas; macromolculas: protenas, polissacridos e cidos nucleicos;
outros produtos: clulas, esporos, lipossomas, organelos celulares.
Sumrio da previso (2000-2010) de rendimento da industria biotecnolgica nos Estados Unidos da
Amrica por sectores chave (adaptado de Harrison et al. 2003)

100

Grau de pureza (%)

75

50

25

Grau de pureza necessrios para diferentes


produtos e aplicaes.

0
E nzim as aplicao
industrial

Diagnstico

Teraputica

Harrison et al. (2003). Bioseparations Science and Engineering.


Oxford University Press.

Fluxograma da produo de fermento de padeiro (Lee, 2001).


7

Instrumentao de controlo associada operao de um bio-reactor perfeitamente agitado (Lee, 2001).


8

Nutrientes

Arrefecimento

Fluxograma do processo de produo de penicilina (Vogel & Todaro, 1997).

Fluxograma de um processo fermentativo (fermentador e todas a unidades de controlo necessrias) (Lee,


2001).
10

Produtos industrias obtidos por processos biolgicos (Lee, 2001)

11

Os custos de produo dependem fundamentalmente do bom ou mau funcionamento do


reactor.

12

Produo da Insulina Humana


A insulina humana um polipptido com 51 aminocidos associados em duas
cadeias: A com 21 aminocidos, e B contendo 30 aminocidos. Esta molcula
pode ser produzida por quatro mtodos diferentes:

Extraco do pncreas humano;


Sntese qumica a partir de aminocidos individuais;
Sntese parcial converso enzimtica de insulina obtida de outras espcies;
Fermentao com microrganismos geneticamente modificados (tecnologia de
DNA recombinante).

13

Mtodos utilizados na ruptura celular.

14

Estgios de recuperao de um produto extracelular solvel a partir de meio de fermentao.

15

Qualidade do Processo e do Produto


A quantificao da qualidade do produto aps processamento dada essencialmente pela
pureza do produto final, a pureza em cada estgio do processo, a actividade especfica e e
rendimento do processo.

Pureza = quantidade de produto final/quantidade de produto final +


quantidade de impurezas
A pureza em cada estgio calculada pela pureza no estgio em estudo e a pureza no incio
do processo.

Actividade especfica = Unidades de actividade biolgica/Massa


Rendimento = Quantidade de produto final/Quantidade de produto alimentado

Critrios para o desenvolvimento de um processo


Grau de pureza do produto final;
Custos de produo/rentabilidade;
Escalabilidade;
Reprodutibilidade e facilidade de implementao;
Robustez no que respeita a um possvel fluxo de variveis de processo.

16

Princpios Bsicos de Anlise em Engenharia


O objectivo da anlise de processos em engenharia para determinar a quantidade de
produto final produzida e a sua rapidez de produo. Esta informao pode ser obtida pela
resoluo de equaes envolvendo a quantidade de produto inicial, taxa de processamento
e, possivelmente, a pureza do produto final.
A obteno dos valores de tais variveis requer um conjunto de equaes base derivadas de
trs conceitos essncias de anlise de processo em engenharia: equilbrio; balano

de material e fluxo ou fenmenos de transporte.


Balano de Material
Acumulao = entrada sada + produo consumo

Equilbrio
Uma reaco qumica no equilbrio dada pela expresso:
A+B
C
E pode ser caracterizada pela constante de equilbrio (Keq):
Keq = [C]/[A]+[B], com a concentrao em molar ou molaridade.
17

Fenmenos de Transporte
O fluxo de um determinado fluido pode ser descrito pela expresso:
Fluxo = coeficiente fora motriz
Em que o coeficiente representa a permeabilidade ou o inverso da resistncia, dependendo
das propriedades do meio. O fluxo e a fora motriz tm unidades iguais.
Da expresso acima descrita obtm-se a Lei de Ohm:
Je = C E
Em que Je a densidade de corrente, C a condutividade elctrica (propriedade do meio) e
E o gradiente de potencial elctrico.
A Lei de Fick aplica-se a fluxo devido ao gradiente de concentraes (dc/dx) numa
dimenso:
Je = Ddc
dx
Em que D o coeficiente de difuso, uma propriedade do meio, em alguns casos calculado
pela expresso de Stokes-Einstein para esferas:
D = kT
6a
Em que k constante de Boltzmann, T a temperatura absoluta, a viscosidade e a o raio da
partcula.
A Lei de Darcy de grande interesse para sistemas porosos:
Jw = Lp p
Em que Jw o fluxo de fluido, Lp o coeficiente de permeabilidade de Darcy e p a queda
de presso atravs do meio poroso (por exemplo filtro ou resina absorvente, sistemas
18
frequentemente utilizados em bioprocessos).

Cultura de Clulas Microbianas


Os microrganismos so usados desde os tempos pr-histricos na biotransformao de
alimentos, bebidas alcolicas, produtos lcteas, txteis, etc.
Actualmente so tambm utilizados na produo de produtos qumicos e farmacuticos,
enzimas, em tecnologias recombinantes de DNA, no tratamento de guas e efluentes,
bioremediao, etc.

Efeito das Condies Ambientais no Crescimento de Microrganismos


De grande influncia no crescimento dos microrganismos - todos os processo de crescimento
so dependentes de reaces qumicas, as quais so afectadas pela temperatura. De acordo
com as condies temperatura ptima de crescimento podemos ter microrganismos:

Psicrfilos;
Mesfilos;
Termfilos.
19

Relativamente atmosfera gasosa, podem ser:

Aerbios;
Facultativos;
Anaerbios.
Relativamente ao pH do meio extracelular, podem ser:

Acidfilos;
Neutrfilos;
Basfilos.
Em termos de presso osmtica e concentrao de gua no interior da clula (relacionado
com as concentrao de sais no meio), as clulas podem ser:

Osmfilas;
Halfilas;
Xerfilas.

20

Classificao baseada em processos bioenergticos e fontes de


carbono
Classificao em termos de energia
Organismos

Quimiotrofos

Litotrofos

Fototrofos

Organotrofos
Classificao em termos de fonte de carbono
Organismos

Autotrofos

Heterotrofos
21

Classificao Nutricional dos Microrganismos

22

Os componentes mais comuns na composio de um meio de crescimento


fazem parte as sequintes categorias:

1.

Fonte de nutrientes, essencialmente azoto (peptonas, infuses, extratos);

2.

Fonte de energia (glicose e outros aucares);

3.

Factores de promoo de crescimento (sangue, soro, vitaminas, NADH);

4.

Tampo para manuteno de pH em meios de fermentao (sais de fosfato, acetato e


citrato solveis);

5.

Sais minerais e metais, para melhorar o crescimento (PO4-2, SO4-2, Ca+2, Mg+2, Fe+2,
Mn+2 e metais);

6.

Agentes selectivos de crescimento (antibiticos);

7.

Corantes indicadores (indicao de mudanas de pH no meio, durante e depois do


crescimento de microrganismos - fenol vermelho, vermelho neutro, bromocresol prpura);

8.

Agentes de solidificao (agar, gelatina, alginato).

23

Modelos de crescimento
microbiano

24

Estudo da Cintica do Crescimento Microbiano


O crescimento de uma populao microbiana estudado por anlise da respectiva curva de
crescimento. Quando os microrganismos so cultivados num meio lquido em sistema
fechado as concentraes de nutrientes decrescem enquanto aumentam as concentraes
de produto do metabolismo. Relativamente ao crescimento microbiano, este assume
diferentes estados ao longo do tempo. O crescimento dos microrganismos pode ser
representado graficamente como o logaritmo decimal do nmero de clulas em funo do
tempo de incubao. A curva resultante caracteriza-se essencialmente pelas seguintes
fases: fase de arranque ou latncia (lag), fase exponencial de crescimento (log), fase
estacionria e fase de lise celular.

Curva de crescimento bacteriano num sistema fechado.

25

Modelos no-estruturados das cinticas de crescimento e consumo de


substrato
Em geral, os modelos no-estruturados podem ser considerados boas aproximaes quando
a composio celular dependente do tempo ou quando a composio das clulas
irrelevante escala industrial. Contudo, extrapolaes destes modelos devem ser efectuadas
com as devidas consideraes.
, qS
1

2
3
4
5
6

S
Diagrama dos modelos matemticos que descrevem a relao entre a taxa especfica de crescimento ou a
taxa especfica de utilizao de substrato e a concentrao limitante de substrato. 1-Cintica de Monod; 2Cintica de Monod com inibio pelo substrato; 3- Cintica de Monod com inibio pelo substrato a
concentraes elevadas de biomassa; 4 Semelhante a 3 e com inibio pelo produto; 5 Semelhante
26a 4
e com metabolismo endgeno; 6 Semelhante a 4 e com metabolismo sequencial de dois substratos; 7
Fase de transio (por exemplo fase de latncia).

Parmetros do Crescimento Microbiano


Quando se arranca com uma fermentao, devem ser satisfeitas as seguintes condies
para o crescimento da biomassa: Inculo vivel; Existncia de fonte nutrientes e
energia; Ausncia de inibidores; Condies processuais/fsico-qumicas adequadas.
Numa cultura axnica (sem problemas de transferncia), para o crescimento diferencial de
tempo (dt), o acrscimo da concentrao de biomassa (dX) ser proporcional
concentrao de biomassa (X) existente:

dX
= . X
dt
taxa especfica de crescimento.
O valor de obtido pela relao de Monod:

m ax.S
S + KS

max taxa especfica mxima de crescimento; KS constante de saturao

27
(normalmente assume valores entre 10-5 a 10-6 mol/L, variando significativamente com a estirpe utilizada).

Quando constante, da integrao da expresso anterior obtm-se:

ln X = ln X 0 + .(t t 0)
X0 concentrao de biomassa para t0.

Para t >> t0, obtm-se:

X = X 0. exp( .t )
A partir desta expresso possvel determinar o tempo de duplicao de uma cultura
microbiana (td). A lei exponencial de crescimento s aplicvel quando as condies de
crescimento permanece constantes.

Quando X = 2.X0 obtm-se:

td =

ln 2

28

Os efeitos de diferentes nutrientes na taxa de crescimento celular pode ser comparado com
base na concentrao que suporta metade da taxa mxima de crescimento. Este valor ser a
constante de saturao (KS), assumindo um valor entre 10-5 a 10-6 M, correspondendo a
uma concentrao de glucose entre 20 e 200 mg/L. Geralmente, o valor de KS para
enzimas respiratrias, associadas com o metabolismo de aucares, inferior ao valor de KS
para enzimas hidrolticas, associadas com o consumo de substratos primrios.
A constante de saturao para a levedura Saccharomyces cerevisiae em glicose de 25
mg/L, para as bactrias Escherichia coli em lactose e Pseudomonas fluorescens em metanol
de 20 mg/L e 0.7 mg/L, respectivamente. A taxa especfica mxima de crescimento (max)
atingida quando S >>> KS, mantendo-se as concentraes de todos os nutrientes essenciais
constantes.
O efeito da concentrao elevada de nutrientes ou produtos pode ser expressa de uma
forma emprica:

max .KI
KI + I

KI Constante de inibio (g/L)


I Concentrao de inibidor (g/L)
29

difcil determinar com rigor o valor exacto de KS. Estes valores encontram-se abaixo dos
limites de deteco dos mtodos analticos disponveis. Tambm difcil definir as condies
ambientais de modo a ter resultados comparveis. Tal como referido anteriormente, o valor
de KS varia com a estirpe utilizada.

As tcnicas disponveis incluem:

Medida instantnea da concentrao do substrato limitante num quimiostato;

Medida das velocidades de crescimento iniciais com diferentes concentraes iniciais de


substrato em culturas descontnuas;

Medida das taxas de diluio crticas em quimiostatos com diferentes concentraes de


substrato entrada;

Mtodo de estado estacionrio de Button (a abordar na seco sobre culturas contnuas).


30

Modelos alternativos ao de Monod:

Teisser (1936)

= max(1 e

S / KS

Moser(1958)

Contois (1959) e
Fujimoto (1963)

Powell (1967)

S
= max
n
KS + S
S
= max
KS . X + S
S
= max
( KS + KD ) + S
31

Para um crescimento limitado por um nico substrato

Equao de Monod

= max

Linearizao de Lineweaver-Burke
(ajuste cintica enzimtica)

S + KS
=
max S
1

S
S + KS

max

KS

max

1
S

y = mx + b

32

O substrato limitante o nutriente que controla o crescimento e pode ser a fonte de


carbono, de azoto ou mesmo o oxignio.

Apresentam-se de seguida valores de velocidades mximas de crescimento e constantes


de Monod para vrios organismos:

Blanch H, Clark D, Biochemical Engineering, Dekker, 1996

33

Em situaes particulares o crescimento pode estar limitado simultaneamente por 2


substratos, por exemplo a fonte de carbono (S1) e o Oxignio (S2)

Assim sendo a equao escreve-se da seguinte forma:

= max

S1
S2

K S1 + S1 K S 2 + S2

Blanch H, Clark D, Biochemical Engineering, Dekker, 1996

34

Rendimento
O rendimento Yi/j definido como a relao entre a velocidade de consumo de substrato (-rj)
e a velocidade de produo (rj):

ri
Yi / j =
rj

Rendimento em Biomassa
O rendimento em biomassa (YX/S) representa o acrscimo de biomassa (dX) devido ao
consumo de uma determinada quantidade de substrato (dS) e dado pela expresso:

dX
YX / S =
dS
Se as condies da cultura forem constantes ao longo do perodo de operao:

X X 0 = YX / S.(S S 0)
O rendimento em produto ser:

rP
YP / S =
rS

35

Um rendimento extremamente importante o de produo de biomassa:

CH2O +..

CH1.8O0.5N0.16S0.0045P0.0055

YX/S =1mol/mol = 0.81Kg/Kg


No entanto, foi determinado experimentalmente que:
YX/S = 0.67 mol/mol = 0.55 Kg/Kg

Os valores variam em funo do substrato consumido e da estirpe utilizada.

Considere-se a oxidao, por via microbiolgica, do etileno em epxido:

2C2H4 + O2

2C2H4O

YP/S = 1 mol/mol = 1.57 Kg/Kg

Se for seguida a via metablica, verifica-se que necessria a regenerao de um


cofactor proveniente da oxidao parcial do epxido formado. O etileno consumido para
produzir epxido mais do que o que aparece na equao anterior.
Consequentemente:
YP/S = 0.75 mol/mol = 1.18 Kg/Kg (Rendimento tcnico mximo)

36

37
(Bailey e Ollis, 1987)

Quocientes Metablicos
A velocidade de consumo de substrato numa cultura microbiana :

dS
= qS . X
dt

qS =

YX / S

qS quociente metablico.

qS max .S
qS =
KS + S

Taxa especfica de consumo

O quociente metablico de uma cultura vem sempre afectado por um ndice correspondente ao substrato
(qG quociente de consumo de glucose; qL quociente de consumo de lactose; qC quociente de
consumo de carbono).

Produo, Crescimento Microbiano e Manuteno


Um organismo consome substrato para diferentes objectivos:

rS =

rx
YX / S

rp
YP / S

+ mS.Mx

(mol subst./s)
Crescimento celular

Formao de produto

Biomassa (mol)
Coeficiente de manuteno 38
(mol subst./(mol biom.s))

Rendimento Global dos Microrganismos


O rendimento global (YG) permite quantificar a eficincia com que o substrato convertido
em produto.

Para a formao aerbia de produtos:

rp
rp
Y P/S= =
rX
rp
rS
+
+ mS.MX
YX / S YP / S
G

Em que rX=.MX

rP=qP.MX

(qP quociente metablico associado produo)

Reescreve-se:

G
P/S

Yp / S

1+

.YP / S

qP.YX / S

mS.YP / S
+
qP

39

Quando no h formao de produto (produo aerbia de biomassa):

rX
rS =
+ mS.MX
YX / S
O rendimento global dado por:

rX
YX / S
Y X /S = =
rS 1+ mS.YX / S
G

40

Formao anaerbia de produto:

rP
Y P/S =
rS
rX
a
rS = a + m S .MX
Y X /S
rX
a
rp = a
+ m P .MX
Y X /P
rX = .MX
Ga

Combinando as equaes anteriores:

Y
Y P/S =
Ga

Quando no h crescimento (=0), todo o


substrato completamente transformado
em produto:

m P
Y P/S = a
m S
Ga

+m

+m

X /P

X /S

41

Produo anaerbia de biomassa:


Neste caso, no se pode considerar a ausncia de produto como no caso aerbio, pois ele
necessrio para a produo de biomassa.

rS =

rX
a

Y X /S
rX = .MX

+ m S .MX
a

Atravs das equaes de produo


aerbia/anaerbia de biomassa, pode
concluir-se que o rendimento maior
para sistemas aerbios.

Considerando o exemplo da produo de etanol a partir de glicose:


C1H201

0.67C1H3O0.5+0.33C1O2

Na literatura existem as seguintes relaes (em base molar):


Baixa manuteno: -rS = 7.25rX+0.15MX (mol/s)
rP= 4.1rX+0.1MX (mol/s)
Alta manuteno: -rS = 7.25rX+0.9MX (mol/s)
rP=4.1rX+0.6MX (mol/s)
Pode extrair-se:
Baixa manuteno: YaX/S = 0.138; maS = 0.15; YaX/P = 0.24; maP = 0.1
Alta manuetno: YaX/S = 0.138; maS = 0.9; YaX/P = 0.24; maP = 0.6

42

YP/S
(mol/mol)

Baixa manuteno
Alta manuteno

(h-1)
YX/S
(mol/mol)

Baixa manuteno
Alta manuteno

(h-1)

A igual valor de , tem-se mais


YX/S a baixa manuteno, pois
necessita de menos energia.

43

Influncia da Concentrao de Biomassa na Taxa Especfica de Crescimento


Usualmente, assumido que o crescimento microbiano assume uma cintica de primeira
ordem no que respeita concentrao de biomassa. Na fase exponencial de crescimento, em
sistema descontnuo ou operando em contnuo, aproxima-se de max. Contudo, existem
outras hipteses relativamente funo = (S,X).
Verhulst (1845) assumiu uma reduo linear de acordo com a expresso:

= max KX . X
( S , X ) = max

()
+S ( )

S0

Teisser (1973)

KS

X
Y

X
Y

A equao de Verhult-Pearl relaciona a dependncia da massa celular em funo do tempo:

N=

N 0.

max

max

.e

o max .t

+ mx.N 0.(e

o max .t

1)
44


Monod

Tessier

Verhulst-Pearl

X
Representao grfica da dependncia da taxa especfica de crescimento na concentrao de biomassa,
de acordo com as aproximaes referidas anteriormente.

45

Extenso da Cintica de Monod Fase de Arranque


A funo de Monod da cintica de crescimento microbiano vlida nas fases exponencial e
pr-estacionria de crescimento. Contudo, a introduo de extenses validam o modelo para
as fases de latncia, estacionria e de lise.
A durao da fase de latncia pode ser obtida pela expresso desenvolvida por Hinshelwood
e Lodge (1943, 1946):

2.3
X
log
tL = t
X0
max
De acordo com Pirt (1975), a representao de log X em funo do tempo dada por:

X = X0e

( t tL )

Uma extenso simples da funo de Monod, usando o tL como parmetro do modelo, foi
descrita por Bergter e Knorre (1972):

S
t / tL
( S , t ) = max
(1 e )
KS + S

46

Determinao Perodo de Latncia

Quando se inicia uma fermentao, frequente o aparecimento de um perodo de latncia.

Este tempo pode ser determinado pelo mtodo de Lodge e Hinshelwood:


lnX

lnX0

tL

lnX = . (t-tL)+lnX0
47

Extenso da Cintica de Monod Fase Estacionria


A expresso rX = max.X pode ser modificada por forma a incorporara fase estacionria. Esta
expresso conhecida pela lei logstica (Kendall, 1949):

rX = . X

( )
1

Em que e so constantes empricas.

Extenso da Cintica de Monod Fase de Lise (Velocidades Negativas)


A fase de morte celular deve ser considerada em processos biotecnolgicos com longos
tempos de residncia (por exemplo, tratamento biolgico de gua residuais). Existem vrias
hipteses para modelar a morte celular, desde formas exponenciais at formas abruptas.
Na equao de Monod inclui-se o parmetro Kd (h-1), que representa a taxa especfica de
morte celular:

1 dX
Kd = .
X dt

48

De acordo com um modelo de primeira ordem S

X:

rX = ( Kd ). X

rS =

1
YX / S

.rX

A expresso acima foi utilizada com sucesso na modelao de um sistema de lamas


activadas (Chiu et al., 1972).

Com valores conhecidos de Kd, , aparentemente, possvel determinar os valores de max e


KS por representao grfica da seguinte expresso:

1
KS 1
1
=
. +
+ Kd max S max
49

Contudo, algumas consideraes a nvel fisiolgico levam a concluir que, dois factores
independentes so responsveis pelo decrscimo da concentrao de biomassa. As clulas
viveis perdem massa devido ao metabolismo endgeno e so tambm convertidas em
clulas mortas.
Sinclair e Topiwala (1970) desenvolveram um modelo que considera a taxa de morte de
clulas viveis (K0d) e o metabolismo endgeno (Ke):

Kd = K0d+Ke
X

Clulas totais

Clulas viveis

Clulas mortas

Representao grfica da cintica em estado estacionrio num reactor do tipo perfeitamente agitado,
assumindo taxas individuais de morte celular e metabolismo endgeno, demonstrando as diferenas
50 na
concentrao de biomassa em funo da taxa de diluio (D).

1/
Kd=0.05
Kd=0.02

Kd=0.01
Kd=0.005

Kd=0

1/max

1/S
-1/KS

Representao da influncia do metabolismo endgeno, considerando a taxa de morte celular, quando se


tentam obter os parmetros de um modelo de crescimento celular utilizando a cintica de Monod.
51

Modelao Cintica do Metabolismo Endgeno


Clulas viveis que estejam termodinamicamente activas devem transformar o substrato
(fonte de energia) em calor. Esta energia necessria para uma grande variedade de
processos celulares, destacando-se a manuteno da presso osmtica, e para a reparao
da sntese de DNA, RNA e outras macromolculas.
Consequentemente, uma fonte de energia deve ser consumida, no s para reaces
macroscpicas como o crescimento, mas tambm para a manuteno da estrutura celular.
A equao de consumo de substrato deve incluir um termo (mS) relativo manuteno, tal
como visto anteriormente.

rS =

YX / S
rX = . X
mS =

qS

. . X + mS. X

( )

qS =

YX / S

+ mS

1
No considerando a
formao de produto no
associado ao crescimento

YX

1 dX
.
X dt

/S

ms
Kd

Diagrama exemplificativo da determinao do rendimento, coeficiente de manuteno celular e taxa de52


morte celular da cintica, associados ao metabolismo endgeno.

1/Y

Kd
.mS
YX / S
1/YX/S
1/D
Mtodo alternativo ao anteriormente apresentado para a determinao do coeficiente de manuteno,
atravs da utilizao de reactores em contnuo a funcionar a diferentes taxas de diluio.

53

Modelo cintico de morte celular por falta de substrato:

d =

S
d max 1
Kd . S

d
dmax

Kd

Humphrey (1978) e Gutke (1980) propuseram um modelo cintico no qual os parmetros d e

( )
( )

mS dependem da concentrao de substrato:

d =

S
d max 1+
Kd + S

mS = m

S
s max
Ke + S

54

Equaes para a Modelao da Inibio pelo Substrato


Em muitos dos casos de inibio, o modelo cintico, tal como o modelo de Monod, deriva de
teorias de inibio de determinadas enzimas. Na literatura existe um substancial nmero de
de equaes que, contudo, so meramente hipteses e podem ser substitudas por outro
modelo mais adequado.
Andrews (1968, 1969, 1971) e Noack (1968) analisaram a inibio por substrato num
quimiostato atravs da expresso:

S
1
= max .
.
KS + S 1 + S / KI , S
KI,S a constante de inibio pelo substrato.

O modelo para a inibio alostrica, segundo (Webb, 1963):

S (1 + S / K `S )
= max .
2
S + KS + S / K S
Mltipla inactivao de complexos enzima-substrato (Aiba et al., 1968):

= max .

1
i

KS / S + ( S / Ki , S ) j
j

55

A funo emprica de Aiba et al. (1968):

S
= max
.e S / KI , S
KS + S
A funo semi-emprica de Teissier:

S
S

max exp
exp
KI , S
KS

A equao derivada de Webb (1963), assumindo a teoria de Debye-Hckel de influncia da


fora inica () na taxa de crescimento:

S
1.17
.e
= max
S + KS (1 + / KI , S )
Tseng e Waymann (1976) propuseram, para concentraes de substrato superiores a uma
limite de inibio (SC) a seguinte expresso:

S
= max
KI , S(S SC)
KS + S

56

Outros mtodos incluem reformulaes ao modelo de Andrews e Noack:

1
=
+
.S
max max .KI , S
1/

Monod

1/2

1/max
1/KI

1/S

Cintica de inibio por substrato e mtodo para a determinao dos parmetros associados ao modelo
57
mtodo aproximado.

No entanto, o crescimento microbiano com inibio pelo substrato convencionalmente


descrito pela equao:

max
S
KS

1 +
1 +
S KI

KI constante de inibio.

Quando KI>>KS e equao reduz-se a:

= max

S1 K I
SK I + K S K I + S 2
58

Que conhecido como o modelo de Haldane de inibio pelo substrato

max
1

2
3

max

1 + 2 KS / K I

1/2

max
KS

Monod

.S
2

K S . KI
KS

KI

Cintica de inibio por substrato e mtodo para a determinao precisa dos parmetros cinticos
mtodo preciso.
59

Equaes para a Modelao da Inibio pelo Produto


O modelo de Dagley e Hishelwood (1938) indica a inibio da cintica de crescimento atravs
de uma constante cintica (Kp):

S
= max
(1 Kp )
KS + S
Este modelo foi melhor ajustada inibio pelo produto por Holzberg et al. (1967):

= max K 1( P K 2)
E por Ghose e Tyagi (1979):

S
KI , P
= max
.
KS + S KI , P + P
Em que KI,P a constante de inibio pelo produto. Este modelo um dos mais utilizados,
predominantemente para sistemas em descontnuo.

Jerusalimsky e Neronova (1965) representaram a dependncia da taxa especfica de


crescimento e da concentrao de produto por curvas hiperblicas e sigmoidais atravs do
modelo:

S
Kp
= max
.e
KS + S

60

Bazua e Wilke (1977) descreveram a inibio do crescimento de leveduras pelo etanol


atravs de um modelo com trs parmetros:

= 0 K 1.Pm( K 2 P)
Em que Pm a concentrao mdia de produto na cultura e K1 e K2 so constante empricas.

Esses autores tambm desenvolveram o seguinte modelo:

pm
0 1+
p max

1/ 2

Em que Pmax a concentrao de produto para a qual as clulas esto viveis.

Levenspiel (1980) desenvolveu uma expresso assumindo o modelo de Monod, na qual


substituiu max por Kobs:

Kobs = K

( )
pm
1
pcrit

Em que K = max; Pcrit = concentrao crtica de produto para a qual a fermentao termina; n = factor de
toxicidade.
61

Modelos Cinticos para a Represso Catablica

A represso catablica tem um papel essencial em muitas fermentaes industriais,


destacando-se a utilizao de leveduras (crescimento diauxico), e produo de metabolitos
secundrios.
Apesar de, na maior parte das vezes, se desconhecer o mecanismo bioqumico envolvido na
regulao desses eventos celulares, a seguinte equao cintica pode ser usada como uma
aproximao adequada:

S
1
1
ri = ri , max
.
X
KS + S (1 + S / KR ) X
Esta equao uma forma anloga ao caso da inibio por substrato e tem sido utilizada
para a modelao do crescimento diauxico de leveduras e de produo de antibiticos.

Outros modelos cinticos foram desenvolvidos com o objectivo de prever o efeito de


condies variveis de pH, crescimento pseudo-homogneo micelial, biosorpo.
62

Modelos Cinticos para a Formao de Produto (Metabolitos e Produtos


Finais)
Segundo Gaden (1955, 1959), podem distinguir-se quatro tipos fundamentais de acumulao
de produto:
Tipo 0 A produo de produtos do Tipo 0 ocorre mesmo em clulas em estado muito
baixo de metabolismo, utilizando uma pequena quantidade de substrato para o seu prprio
metabolismo. As clulas so, essencialmente, reactores enzimticos.
Exemplos: transformao de esterides e sntese de vitamina E por Saccharomyces
cerevisiae.
Tipo I Processos em que a acumulao de produtos est directamente associada com
ao crescimento. Este o caso dos metabolitos primrios, em que a formao de produto
est ligada ao metabolismo energtico. Exemplos: etanol e cido glucnico.
Tipo II Processos que tm uma associao parcial ao crescimento e, como
consequncia, uma ligao indirecta ao metabolismo energtico. Exemplos: cido ctrico e
aminocidos.
Tipo III Fermentaes em que no h ligao directa entre crescimento e formao de
produto (metabolitos secundrios) e tambm nenhuma ligao com o metabolismo primrio.
Exemplos: penicilina, estreptomicina.
63

Tipo I
[S]

Tipo III

Tipo II
[S]

[X]

[P]

[S]

[X]

[P]

[X]

[P]

Curvas de concentrao (substrato, biomassa e produto) em funo do tempo para os trs tipos usuais de
formao de produtos em processos fermentativos. I formao de produto associado ao crescimento; II
associado parcialmente ao crescimento; III no associado ao crescimento.

64

A produo de produtos em bio-reaces do Tipo I pode ser descrita por:

rP = YP / X .rX
ou

qP = YP / X .
e ainda:

S
rP = qP , max .
.X
KS + S
O caso da formao de produto no ligado ao crescimento mais difcil de quantificar.
Normalmente usa-se a relao:

rP = KP. X
A formao de produto, neste caso, tambm pode ser quantificada pela relao de
dependncia do substrato.

rP = YP / S.rS

65

Quando a formao do produto parcialmente ligada ao crescimento e parcialmente


independente, utiliza-se uma combinao dos modelos anteriores, proposta por
Luedeking e Piret:

qP = YP / X . + Kp
qP
II

I
III
IV
V

Relaes cinticas lineares entre as taxas especficas de produo e crescimento, exibindo formas
diferentes: I associadas ao crescimento; II associadas parcialmente ao crescimento; III no
associadas ao crescimento; IV com uma correlao negativa; V sem correlao.
66

Formao de produtos

Produto primrio associado ao crescimento celular


Produto secundrio formado em reaces que no so necessrias para o crescimento
Correlao emprica apresentada por Luedeking e Piret (1959):

rP = .rX + .X
De acordo com este modelo:
Produto primrio = 0
Produto secundrio = 0
Produto intermdio quando e so ambos positivos
67

Caso particular processos aerbios


No possv el apresentar esta imagem de momento.

Em processos aerbios, alm do substrato, tambm a concentrao de oxignio pode ser


limitante.

A modelizao cintica pode ser efectuada atravs de uma funo de limitao dupla por
substrato:

S
O
.
( S , O ) = max .
K S + S KO + O

Esta equao pode ser incorporada no balano mssico ao oxignio, onde se considera
tambm a transferncia de massa:

rO = K L .a.(O L OL )
*

1
YX / O

. ( S , O ). X
68

Cintica de substratos mltiplos


Em situaes reais, ocorrem casos complexos que no podem ser tratados com as equaes
anteriormente descritas.
No caso do crescimento num meio complexo, os componentes facilmente utilizveis
so consumidos rapidamente. Para a utilizao dos restantes componentes, os enzimas
responsveis pela sua degradao tm que ser, primeiro, sintetizadas.

As clulas passa por diversas transies. Daqui resulta uma srie de fases de crescimento,
cada uma com uma taxa de crescimento sucessivamente decrescente.

Podem distinguir-se essencialmente trs situaes:


Utilizao sequencial de substrato; a utilizao estritamente sequencial de substrato
pode encontrar-se, por exemplo, durante o fabrico de cerveja, onde a glicose, a maltose e a
maltotriose so utilizadas uma aps a outra.
Utilizao simultnea de substrato;
Sobreposio das duas situaes.
69

2
[S]

[S]

[S]
[S1+2]

[X]
1

[S1+2]

[S1+2]
[S1]
[S1]

[S1]

[S2]

[S2]

[S2]

Cintica multi-substrato para uma reaco com dois substratos (1 e 2): a diagrama concentrao em
funo do tempo para utilizao estritamente sequencial dos substratos (crescimento diauxico); b
utilizao de substrato parcialmente sequencial e parcialmente simultnea; c utilizao simultnea de
substrato.

70

Mtodos para Quantificar o Crescimento Celular

Quantificao directa:
Contagem em placas;
Filtrao e plaqueamento;
Mtodo do nmero mais provvel;
Contagem directa ao microscpio.

Quantificao indirecta:
Turbidimetria;
Actividade metablica;
Peso seco.

71

Imobilizao Celular
A imobilizao um termo que descreve o fenmeno de encapsulamento e/ou
aprisionamento de clulas.
Existem quatro princpios bsicos para a imobilizao de clulas: ligao a superfcies,,
aprisionamento em matrizes porosas, conteno por membranas e autoagregao.
A imobilizao por meio de aprisionamento em matrizes porosas envolve, normalmente, a
sntese in situ da matriz porosa em torno das clulas a serem imobilizadas. Este mtodo tem
sido extensivamente estudado para a imobilizao de clulas viveis, devido possibilidade
de uso de polmeros hidroflicos biocompatveis como suportes de imobilizao. Alm disso,
as clulas imobilizadas em uma matriz hidroflica podem ser protegidas de condies no
adequadas de pH, temperatura, solventes orgnicos e/ou compostos inibidores presentes no
meio de fermentao.
Como a matriz de aprisionamento geralmente resulta em limitaes de transferncia de
massa, a imobilizao na forma de esferas geralmente preferida devido elevada rea
superficial.
Como principais desvantagens, temos o pequeno volume disponvel para a conteno das
clulas imobilizadas, a perda de clulas para o meio de fermentao, que limitam a
quantidade de clulas imobilizadas nas esferas, e a instabilidade dos suportes normalmente
utilizados, que limita a utilizao dos agregados por longos perodos.
As principais caractersticas de um suporte para a imobilizao de clulas vivas so as
seguintes: no txico para a clula; elevada capacidade de reteno; elevada
72
difusividade de substratos e produtos; biodegradabilidade.

Microcpsulas de quitosano contendo a bactria Bacillus subtilis imobilizada.

Suportes polimricos utilizados na imobilizao celular..


73

Biofilmes
A definio mais usual de biofilme o de uma matriz polimrica de aspecto gelatinoso,
aderida a uma superfcie slida, quase sempre imersa em meio lquido, constituda
essencialmente por microrganismos, pelas substncias polimricas extracelulares que estes
excretam e por gua.
Os biofilmes so tipicamente constitudos por gua, microrganismos (essencialmente
bactrias, mas tambm fungos, leveduras, microalgas, vrus e protozorios), substncias
polimricas extracelulares (EPS), partculas retidas e substncias dissolvidas e adsorvidas. A
gua a fraco mais significativa da massa total do biofilme, podendo variar entre 70 a 99
% da massa total do biofilme.
Os microrganismos representam somente uma pequena parte da massa e do volume do
biofilme, geralmente menos de 10 %, embora estes excretem as substncias polimricas que
representam a fraco dominante da matria orgnica seca do biofilme. As substncias
polimricas representam cerca de 70 a 95% da matria orgnica da massa seca do biofilme.
74

Caractersticas chave dos biofilmes:


Complexos e heterogneos.

Estruturas dinmicas.

As caractersticas dos microrganismos nos biofilmes (microrganismos ssseis) so


diferentes dos microrganismos no estado planctnico (livres em suspenso).

Os microrganismos nos biofilmes coordenam o seu comportamento via comunicao


intracelular (quorum-sensing).

Os biofilmes so menos sensveis aco de agentes antimicrobianos.

75

O modo de desenvolvimento em biofilme proporciona, aos microrganismos que o


constituem, importantes benefcios, tais como:
Aumento da concentrao de nutrientes nas interfaces lquido-biofilme uma vez que a
matriz polimrica favorece a adsoro de molculas de nutrientes;
Proteco contra factores ambientais agressivos, como flutuaes de pH,
concentraes de sais, desidratao, foras de tenso de corte, substncias qumicas
agressivas, bactericidas, antibiticos, predadores, bactrias lticas e metais pesados;
Possibilidade de troca de material gentico devido aos longos tempos de reteno dos
microrganismos;
Facilidade de desenvolvimento de microconsrcios que permitem o estabelecimento de
relaes de simbiose bem como a utilizao de substratos de difcil degradao;
Capacidade de estabelecer e colonizar nichos ecolgicos.
76

Os principais processos envolvidos na formao de um biofilme sobre uma superfcie


slida em contacto com um meio lquido so:
(1) Adsoro de substncias orgnicas dissolvidas a uma superfcie slida em contacto com
um meio aquoso, formando-se um filme condicionador;
(2) Transporte de microrganismos e outras partculas do meio aquoso para a superfcie slida
condicionada;
(3) Adeso firme dos microrganismos superfcie;
(4) Destacamento de clulas reversvelmente aderidas;
(5) Produo de molculas sinalizadoras de fenmenos de densidade populacional (quorumsensing);
(6) Transporte de nutrientes da fase lquida para a interface lquido-biofilme, bem como no
interior do filme microbiano;
(7) Produo de biofilme devido ao consumo dos nutrientes, consequente crescimento e
reproduo dos microrganismos aderidos e sntese de polmeros extracelulares;
(8) Transporte de subprodutos do biofilme para o exterior;
(9) Desprendimento de pores de biofilme devido a fenmenos de eroso superficial ou
descolamento sbito (sloughing off).

77

Etapas da formao de um biofilme (Bryers e Ratner, 2004 ASM News, 70).

78

A adeso de microrganismos a superfcies um fenmeno que ocorre naturalmente


em meios aquosos e que depende:

das propriedades superficiais dos suportes de adeso;


das propriedades superficiais dos microrganismos;
das propriedades microbiolgicas dos microrganismos;
das propriedades do meio aquoso;
da morfologia das superfcies: composio, rugosidade e porosidade.

No processo de adeso, as interaces entre os microrganismos e as superfcies so


efectuadas por um conjunto de fenmenos fsico-qumicos, termodinmicos e
microbiolgicos.
79

Factores que influenciam a formao do biofilme:

pH
Temperatura
Fora Inica do Meio
Velocidade de Escoamento/Regime de Escoamento
Concentrao de Nutrientes
Tipo de Material da Superfcie e o Seu Estado de Conservao
Comunidade Microbiana
Concentrao de Agentes Antimicrobianos
80

Processo laboratorial utilizado para a formao de biofilmes de Acidothiobacillus ferroxidans.


81

Os biofilmes desempenham um papel importante na natureza e em processos tecnolgicos.


Do ponto de vista do interesse do Homem podem ser benficos ou prejudiciais, donde
resulta a necessidade do seu estudo para poder desenvolver estratgias no sentido de
melhorar as suas caractersticas, caso ele seja benfico, ou para o eliminar ou inibir a sua
formao, quando a sua aco prejudicial.
Como exemplo de biofilmes benficos temos aqueles que se acumulam em ambientes
naturais nos depsitos dos rios, lagos ou ambientes marinhos, e que se desenvolvem
em associao com as razes de algumas plantas fornecendo-lhes alguns nutrientes.
So tambm biofilmes benficos aqueles que so utilizados em biotecnologia ambiental
com grande sucesso no tratamento de efluentes, removendo poluentes orgnicos e
inorgnicos de guas contaminadas. Na indstria alimentar os biofilmes apresentam
inmeras vantagens, podendo ser utilizados na produo de alimentos fermentados, como
por exemplo, a produo de vinagre.

82

Na maioria das situaes, a adeso de microrganismos a superfcies slidas


indesejvel pois, de uma maneira geral, est associada deteriorao das superfcies e/ou
ambiente circundante. Nas cincias mdicas, os biofilmes apresentam-se geralmente com
um carcter nocivo uma vez que esto associados a um grande nmero de problemas de
sade, tais como infeces em tecidos, infeces do trato urinrio, infeces e
consequente rejeio de prteses e implantes e infeces da placa dentria, entre
outras.
Na indstria, para alm de originar problemas de higiene, a acumulao de biofilmes
pode provocar perdas de eficincia em permutadores de calor, perda de carga nas
tubagens e acelerao da deteriorao dos materiais.
Nos sistemas de distribuio de gua potvel, a formao de biofilme, e principalmente o
seu desprendimento, constitui um factor de diminuio da qualidade da gua.

83

Biofilmes no corpo humano


Feridas

Dentes

Intestino

Alvolos
pulmonares

Biofilmes em dispositivos mdicos


Cateteres e implantes

Tracto urinrios

Lentes de contacto
84

Biofilmes na indstria
Indstria do papel

Indstria alimentar
Permutadores de calor

85

Biofilmes nos sistemas de distribuio de gua

Biofilmes em casa
Superfcies sanitrias

Paredes e tectos

86

Dispositivos laboratoriais para a formao de biofilmes:


Clula de fluxo

87

Clulas de fluxo em paralelo

Escala piloto

Escala laboratorial

88

Clulas de fluxo em paralelo

89

Bio-reactor rotativo

90

Reactor PropellaTM

91

Microtiter plates

24 poos

96 poos

92

Imagens, obtidas por microscopia de epifluorescncia com recurso ao corante alaranjado de acridina e por
microscopia electrnica de varrimento, de biofilmes formados por Bacillus cereus (esq.) e Pseudomonas
93
fluorescens (dir.).

Balano de massas ou balano de


material

94

Um dos princpios fundamentais da engenharia o balano de massas ou


balano material.
Os balanos materiais so usados para fundamentar quantitativamente,
eficincias,

rendimentos,

dimensionamento

de

instalaes

de

equipamentos, etc...
O balano de massas ou balano material baseia-se no princpio de
conservao de massa.

Se em um dado processo 120 g de enxofre esto contidos no carvo queimado


diariamente numa caldeira, esta mesma quantidade de enxofre deixar a cmara de
combusto. A anlise qumica das cinzas ou da fuligem revelar a quantidade de
enxofre em cada uma dessas substncias.

A soma das duas quantidades dever ser igual a 120 g de enxofre.


95

O modo de operao se um sistema pode ser em descontnuo,


contnuo ou semi-contnuo. Esta classificao baseia-se no procedimento
de entrada e sada dos materiais.

Processos descontnuos a alimentao introduzida no sistema de


uma s vez, no incio do processo e todos os produtos so retirados algum
tempo depois. Nenhuma massa atravessa a fronteira do sistema no intervalo
de tempo decorrido entre a alimentao e a remoo dos produtos.

Processos

contnuos

alimentao

os

produtos

flem

continuamente enquanto dura o processo. H a contnua passagem de


matria atravs das fronteiras do sistema.

Processos semi-contnuos a entrada de material praticamente


instantnea e a sada contnua atravs de uma nica fronteira (entrada ou
sada) do processo.
96

Os processos tambm so classificados em relao ao tempo, como


estado estacionrio ou no-estacionrio
Processos em estado estacionrio se os valores de todas as
variveis do processo (pH, temperatura, caudais, concentraes, etc) no se
alteram com o tempo.

Processos em estado no-estacionrio so os processos onde


ocorrem alteraes dos valores das variveis de processo ao longo do
tempo.
Os processos em descontnuo e semi-contnuos, pela sua natureza,
operam em estado no-estacionrio.
Os processos em contnuo podem operar tanto em estado estacionrio
como em estado no-estacionrio.
97

7 PASSOS PARA EXECUTAR BALANOS DE MASSA


1 Listar todos os componentes e atribuir-lhe um smbolo/nomenclatura;
2 Executar um esquema sequencial de todas as etapas que constituem
um procedimento de produo;
3 Definir sistemas e subsistemas, executando balanos globais e parciais,
a cada uma das etapas e ao conjunto de etapas;
4 Seleccionar uma base de clculo apropriada;
5 Escrever o conjunto de equaes que relaciona todas as entradas e
todas as sadas para cada um dos componentes;
6 Verificar se o sistema de equaes tem soluo;
7 Resolver o sistema determinando os valores numricos das incgnitas,
e validar as solues encontradas para as incgnitas.

98

F=P
F = F1 + F2 + F3
P = P1 + P2
F1 = 0.2F
F2 = 0.35F
F3 = 0.45F
P1 = 0.1F1 + 0.25F2 + 0.65F3
base de clculo F = 100 kg

99

Suponhamos que, um processo contnuo onde entra e sai metano a um


caudal Qe e Qs, respectivamente:
Os caudais foram medidos e constatou-se que Qe diferente de Qs. H 5
explicaes para este facto:
Existe um caudal adicional de sada do equipamento (por exemplo:
perdas);
O metano consumido como reagente;
O metano gerado como produto;
O metano acumulado na unidade, sendo, possivelmente, absorvido nas
paredes da unidade de operao;
As medidas esto erradas.
Unidade
Qe (Kg/h)

Qs (Kg/h)

de
processo
100

Um balano de massa de um sistema (um nica unidade, vrias unidades ou


o sistema como um todo) pode ser escrito da seguinte forma:

SAI = ENTRA + GERADO CONSUMIDO ACUMULADO


Esta a equao geral de balano que pode ser escrito para qualquer
material que entra ou sai do sistema. Pode ser aplicado massa total de
componentes do sistema ou a qualquer espcie molecular ou atmica
envolvida no processos.
Podemos escrever 2 tipos de balanos:
Balanos diferenciais indicam o que acontece num dado sistema, num dado instante.
Cada termo da equao de balano expresso em termos de uma velocidade/taxa e
tem unidade da quantidade a dividir pela unidade de tempo (g/h; L/h, etc). Este tipo de
balanos usualmente aplicado a processos em contnuo.
Balanos integrais descrevem o que acontece entre dois instantes de tempo (t).
Cada termo da equao uma quantidade com a sua respectiva unidade (g; L, etc).
Este tipo de balanos usualmente aplicado a processos em descontnuo.

101

Balanos em processos com unidades mltiplas


Quando se tem mais do que unidade compondo um determinado processo,
fundamental definir-se as fronteiras dentro das quais se realiza o balano. O
espao delimitado por essas fronteiras usualmente denominado por
volume de controlo. Um volume de controlo pode ser um processo como um
todo ou uma parte apenas. Pode combinar unidade interligadas ou localizarse sobre uma mesma unidade ou mesma diviso de correntes do processo.
O fluxograma abaixo indica um processo contendo 2 unidades e 5 volumes
de controlo.

Sistema com mltiplas unidades.

102

Sistema com mltiplas unidades.

A compreende o processo como um todo, compreendendo todas as


correntes de alimentao e produto (volume de controlo global);
B compreende um posto de mistura de duas correntes de alimentao;
C compreende a primeira unidade de processo;
D compreende um ponto de separao (diviso de correntes);
E compreende a segunda unidade de processo;
F compreende um sub-sistema formado pela unidade de processo 1 (UP1) e
pelo volume de controlo D.
103

Reciclagem, Bypass e Purga


Considere a reaco A

B. muito raro que a reaco se complete num reactor a

operar em contnuo. A quantidade de A presente no incio da reaco ou o tempo que


ele deixado no reactor podero no evitar que exista A na corrente de sada. A
sempre encontrado na corrente de produtos (nem todo A reagiu).
vantajoso, caso o custo associado ao processo compense o custo da matria-prima
A, reciclar o reagente A (separado do produto R) para a entrada do reactor.

Reactor
110 Kg A/h

Separador

200 Kg A/h

100 Kg A/h

10 Kg A/h

30 Kg R/h

130 Kg R/h

100 Kg R/h

90 Kg A/h
30 Kg R/h

Fluxograma tpico envolvendo uma operao de reciclagem.


104

Uma operao vulgarmente utilizada nos processos industriais consiste no desvio de


uma parte de alimentao de uma unidade e a combinao dessa corrente, chamada
de bypass, com a corrente de sada daquela unidade.

Unidade de processo

Fluxograma de uma unidade de processo com bypass.

Outro procedimento adoptado consiste na purga, em que parte de uma corrente, que
no interessa, separada da parte de corrente de interesse.
Alimentao

Produto

Processo
Alimentao
combinada

Reciclagem

Fluxograma de um processo com reciclagem e purga.

Purga

105

Bio-reactores de clulas
microbianas

106

Bio-reactores de Clulas Microbianas


O projecto de unidades de bioprocesso (incluindo o clculo da bioconverso substratoproduto/biomassa e do modo de operao de um bio-reactor que maximize a produtividade)
representa um estgio no qual se integram os dados cinticos e as caractersticas do
bio-reactor.
Na prtica, os problemas dominantes esto associados manuteno da esterilidade,
melhoramento do microrganismo e isolamento do produto.

Diferentes fases de implementao de um processo fermentativo.

107

Esquema-bsico de um processo fermentativo


Preparao do inculo
Laboratrio

Matrias-primas

Meio de cultura
seleccionado
Esterilizao

Indstria
Clulas
Separao
das clulas

Indstria

Meio fermentado

Ar esterilizado

Produto

Efluentes

108

Classificao de Bio-reactores
Os bio-reactores podem classificar-se em:

Quanto situao de reteno da biomassa:


- Biomassa em suspenso
- Biomassa fixa
(alguns so hbridos, isto , contm biomassa fixa
e suspensa simultaneamente)

Quanto ao modo de alimentao:


- descontnuo (batch)
- contnuo
- descontnuo com alimentao escalonada (fed-batch)
- descontnuo sequencial (SBR - Sequencing batch reactor)
109

Quanto configurao fsica:


- Tanque agitado
- Coluna de borbulhamento
- Air-lift com biomassa suspensa
- Reactor de membrana
- Leito fixo submergido
- Filtro percolador
- Biodiscos
- Leito fluidizado
- Air-lift com biomassa fixa (Leito circulante)

Quanto ao processo biolgico:


- Aerbio
- Anaerbio

110

Modo de operao de bio-reactores/modo de alimentao

Descontinuo
(Batch)

Continuo

Semi-continuo
(Fed-batch)

111

Operao em Semi-contnuo (fed-batch)


No modo de operao em fed-batch, a alimentao continuamente adicionada at se atingir
o mximo volume desejado. De seguida o bio-reactor descarregado ou poder prosseguir a
bio-reaco.
Este modo de operao correntemente utilizado dado que, os rendimentos so geralmente
superiores quando os nutrientes se encontram no substrato a baixas concentraes.
Num bio-reactor a operar em contnuo as concentraes de nutriente podem manter-se
baixas, mas pressupem que as condies de up-stream e de down-stream estejam tambm
em contnuo. No entanto, existem produtos que so produzidos em diferentes estados
fisiolgicos.
Nos bio-reactores fed-batch, a alimentao fresca, mas o efluente (e a biomassa) no so
continuamente removidos. Este modo de operao permite a obteno de produtos, sob
baixas concentraes de nutrientes (reaco biolgica lenta) ou a elevadas concentraes de
substrato (inibio por substrato), evitando-se o wash-out.
O conceito do modo de operao fed-batch foi descrito pela primeira vez por Yoshido et al. (1973). Este
modo de operao pode-se assumir como um reactor perfeitamente agitado com volume varivel. 112

Operao em Semi-contnuo (fed-batch)


A operao em semi-contnuo funciona, em algumas situaes, como uma operao
transiente na qual a produtividade do sistema pode ser maximizada.
Bio-reactores em fed-batch podem operar das seguintes formas:
Alimentao contnua de meio a uma cultura batch, a biomassa resultante reduzida por
bombagem em intervalos pr-definidos (alimentao por ciclos) e o processo repetitivo;
Alimentao da fonte limitante de carbono (semi-batch);
Utilizao de sensores para medir os parmetros especficos de crescimento e regulao da
adio da fonte limitante de carbono.

Concentrao de biomassa,
substrato e produto

Biomassa, X
Substrato, S
Produto, P

Alimentao por ciclos

comum a
utlizao destes
reactores na
produo de
antibiticos e de
fermento de
padeiro (levedura)

113
Tempo

Operao em Semi-contnuo (fed-batch)

114

Balano material

d (V . )
= Qentrada.entrada Qsada.sada
dt

No possv el apresentar esta imagem de momento.

Considerando constante e como em fed-batch: dV/dt = Qentrada = F(t):

d (V .Csada )
= Qentrada.Centrada ri.V
dt
Para caudais muito baixos, o modo de operao em fed-batch assemelha-se a um
quimiostato, atingindo-se um estado estacionrio dinmico para caudais suficientemente
baixos:

Qentrada
=
V

Neste caso, o sistema opera em estado quase-estacionrio (~D=Qentrada/V).


115

Em estado quase-estacionrio:

dX
V.
= Q.YX / S.Sentrada V . X = Xentrada + Q.YX / S.Sentrada.t
dt
Massa de clulas recolhida

Neste modo de operao pode-se determinar a taxa de diluio:

Q
D=
V 0 + Q.t

116

Modelos extracelulares de bio-reaco em fed-batch

dX
Q
Q
Biomassa
= Kd X + X 0
dt
V
V
Substrato

Produto

Biomassa
removida
Biomassa
adicionada

dS Q
= (S0 S )
+ m X
dt V
YX / S

dP
Q
=
+ X + P 0
P

dt

dV
=Q
dt

YX / P

Kd - taxa de lise celular


m - coeficiente de manuteno
p taxa especfica de produo no associada ao
crescimento

117

Consideraes associadas operao em fed-batch:

Reactor perfeitamente agitado;

Limitao do crescimento por um nico substrato e condies de cultura estreis;

Crescimento dinmico;

Coeficiente de rendimento constante;

Cintica de Monod.

118

Comparao entre os modos de operao em fed-batch e em contnuo:


Em ambos os modos de operao podem sem controladas a taxa especfica de crescimento
e a concentrao do substrato.
A maior diferena entre os dois modos de operao relativa inexistncia de
fenmenos de wash-out em fed-batch.

Outras vantagens dos fermentadores fed-batch:


Como a biomassa no removida os produtos podem ser obtidos sob taxas de
crescimento baixas ou at taxas de crescimento nulas.
A alimentao no fed-batch pode s conter alguns dos nutrientes necessrios ao
crescimento. O meio de crescimento pode ter composio varivel ao longo do processo.
(Em contnuo, o meio fresco dever ter uma composio completa).
A alimentao fed-batch pode ser manipulada para maximizar a formao do produto (ajustes
de composio e de taxas de alimentao para os diferentes estgios fisiolgicos da
biomassa). Modo de operao mais robusto em caso de contaminao.
119

Aplicaes do modo de operao em fed-batch:

Remoo de efeitos repressivos ou limitantes de componentes do meio rapidamente


utilizadas e manuteno de condies na cultura dentro da capacidade de arejamento
do bio-reactor;

Obteno e mximizao da formao de produtos secundrios;

Realizao de estudo cinticos.

120

Bio-reactores a operar em fed-batch so especialmente adequados para:


Baixas concentraes de substrato, ou de nutriente limitante;
Condies de inibio pelo substrato;
Condies adversas de transferncia de massa - Exemplos:
- produo de vinagre;
- produo de cido ctrico;
- produo de amilase;

Quando se exigem elevados rendimentos em produto ou biomassa:


- sistemas com clulas animais;
- produo de fermento de padeiro;
- produo de antibiticos;
- produo de probiticos;
- casos particulares de composio do meio (ex.: razes de carbono/nitrognio ou
razes de carbono/oxignio)
121

Produo de vinagre

O cido actico produzido por oxidao do etanol.

O etanol a 96%(v/v) adicionado ao meio de fermentao; medida que se produz


cido actico, as clulas deixam de crescer e a produo do cido actico deixa de ser
associada ao crescimento; assim o vinagre no pode ser produzido em contnuo
porque poderiam surgir condies de wash-out.

O etanol mais txico para as clulas do que o cido actico ou que o pH;
As aceto-bactrias so capazes de metabolizar o etanol a pH < 3;
As aceto-bactrias podem produzir at 180 g/L de cido actico.

122

Produo de cido ctrico


O cido ctrico pode ser produzido a partir de acares ou polissacridos;
Estirpes de Aspergillus niger devem ser crescidas sob concentraes limitantes de
mangans e ferro;
O processo inicia-se num reactor batch e finalmente num processo em fed-batch.
A fonte de carbono adicionada sequencialmente, porque elevadas concentraes
tornam o meio com elevada presso osmtica causando desidratao do biocatalisador.
Amnio (47% p/p) adicionado ao meio de cultura para regular a inibio pelo
substrato.
A acumulao do cido ctrico promove inibio da gliclise em fed-batch.
Concentraes elevadas de amnio promovem formao de biomassa e no de cido
ctrico;
Concentraes elevadas da fonte de carbono (na forma de alcanos) promovem
problemas de transferncia de oxignio.
123

Cultura de clulas animais

As clulas de animais, sob concentraes elevadas de fonte de carbono (glicose), tm


tendncia para fermentar em vez de respirar.
So utilizados meios de cultura especficos, Eagle's Modified Media contendo at 4 g/L
de glicose.
Em sistemas batch com este meio induz a produo de cido lctico e baixos
rendimentos em biomassa.
Elevadas concentraes de lactato exigem que seja adicionado ao meio CO2, para
controlar o pH.
Com sistemas fed-batch, o meio adicionado em baixas concentraes de glicose e as
clulas respiram em vez de fermentar, aumentando o rendimento em biomassa.
124

Produo de antibiticos

A maior parte dos antibiticos so derivados de processos microbiolgicos. Estes


processos desenvolvem-se em dois estgios:

No primeiro as clulas so multiplicadas num sistema batch;

Depois de se atingir um mximo de concentrao de biomassa, o sistema passa a


funcionar no modo fed-batch (alimentao escalonada).

125

Produo de penicilina

Inculo
microbiano

Esporos de Penicillium
chrysogenum

Fase de crescimento
40 horas; tduplicao = 6 h

Produo de
penicilina

Inoculao com substrato


fase de produo
120-160 horas

126

Produo de antibiticos, na qual o bio-reactor deve operar sucessivamente, em batch e


fed-batch.

Biomassa

Antibitico

Tempo
127

Bio-reactor escala piloto a operar em modo fed-batch.


128

Operao de Bio-reactores em Sistemas Aberto e Fechado


(contnuo/descontnuo):

Num sistema aberto/contnuo, todos os materiais que compem o sistema podem entrar
ou sair dele;
Se uma parte componente do sistema no puder entrar nem sair, o sistema diz-se
fechado em relao a essa parte.

Num sistema fechado, a velocidade de crescimento deve tender para zero. Logo, neste
caso, haver uma sucesso de estados transientes.

Nos sistemas abertos, possvel atingir-se um equilbrio dinmico, conduzindo a uma


infinidade de estados estacionrios.
129

Existem dois tipos fundamentais de culturas em sistema aberto:

A cultura em bio-reactor do tipo pisto e a cultura em quimiostato;

Ao contrrio do sistema pisto, num quimiostato h uma suspenso homognea de


biomassa, na qual o meio introduzido e a cultura retirada mesma taxa (o volume de
cultura mantm-se constante);

A importncia do quimiostato s se revelou fundamental quando foram

desenvolvidos trabalhos demonstrando que era possvel fixar a taxa de


crescimento de uma cultura. At ento, julgava-se que a nica velocidade de
crescimento estvel seria a velocidade mxima correspondente ao tempo de duplicao
numa cultura descontnua.

Exemplos da utilizao de bio-reactores a operar em contnuo so a produo de single


cell proteins (SCP), a partir de metanol; tratamento de efluentes, produo de aminocidos e
proteinas.

130

Cultura em Reactor do Tipo Pisto


Um bio-reactor contnuo do tipo pisto ou CPFR (continuous plug flow reactor) possibilita
a simulao de uma cultura descontnua num sistema aberto. Idealmente, o inculo e o meio
so misturados entrada do sistema, fluindo a cultura a uma velocidade constante, sem se
misturar (fluxo pisto e sem retrodisperso). Necessita de uma fonte contnua de inculo.
Todos os elementos da cultura tm o mesmo tempo de residncia;
As condies so constantes ao longo do tempo no mesmo ponto do reactor.
Nestes sistema, define-se um tempo de residncia tr =V/Q, em que V o volume do meio de
cultura e Q o caudal.
Fazendo tr = tf em que tf o tempo total da cultura descontnua do mesmo microrganismo,
ento:
Concentrao

S0
Xf
X0

Bio-reactor

Xf

X0
Sf
tf

131

Esta anlise corresponde a uma situao ideal. No entanto, existe sempre retrodisperso e
disperso transversal.
Podem considerar-se dois casos gerais:

1 Sem recirculao de biomassa:


No possv el apresentar esta imagem de momento.

S=Sa

S=SW

X=Xa

X=XW
dV

Quando Sa>>Ks (assumindo cintica de Monod), o crescimento em qualquer elemento de


volume dV do reactor pode ser representado pela equao de crescimento em modo
descontnuo, at se consumir o nutriente limitante:

X = Xa.e ( max .t )

v
Q
v
t=
V .D

Como:

Vem:

t=

Portanto:

(Obtida de dX/dt = .X)

Onde v o volume de cultura deslocado por unidade de tempo.

Onde V o volume do reactor e D (Q/V) a taxa de diluio.

X = Xa.e

max
.

V
.
D

Para o substrato (concentraes variam ao longo do reactor):

QdS = rS dV

132

2 Com recirculao de biomassa


S=Sa

S=SW

X=Xa

X=XW

S=SW
X=Xe

Q
QS

a.Qs

No possv el apresentar esta imagem de momento.

Separador

S=SW

X=g.XW
Factor de concentrao da biomassa

QS = Q + a.QS
Xa = a.g.XW
Um dado volume (v) sai do reactor ao fim do tempo:

1 a
t = v.
Q
A produo mxima de biomassa dada pela expresso: Xmax = YX/S.Sa+Xa

133

Quando v = Ve (volume ao fim do qual se d a exausto do substrato):

Ve.(1 a)
t=
Q
Xw = Xa.e

Ve (1 a )
max .

1
Q

Ve =
. ln
(1 a). max a.g

Quando Ve=V:

1 1
1
Ve
=
= tr =
. ln
Q
(1 a). max a.g Dc
Taxa de diluio crtica

Para D > Dc, Xw

Na prtica, impossvel realizar uma cultura pisto num s vaso, pois h sempre mistura,
incluindo entre diferentes fases (gs, lquido, slido). Uma boa aproximao atravs da
134
utilizao de uma srie de quimiostatos.

Vantagens da utilizao de sistemas de fluxo pisto

Obteno simultnea de elevada produtividade e taxa de converso.

A mistura em sistemas tubulares mais uniforme, eliminando zonas mortas e permitindo


uma maior facilidade de processo de mudana de escala.

O bioprocesso ocorre com gradientes de concentrao e/ou temperatura vantajosos


quando requerida uma elevada rea de transferncia de calor;

Vantajoso em situaes de inibio pelo produto na ausncia de mistura as clulas


estaro em contacto com concentraes baixas de produto (apropriado para o tratamento de
efluentes e resduos txicos);

Possibilidade de operao horizontal ou verticalmente.


135

Bio-reactor industrial do tipo pisto.


136

Cultura em Quimiostato
Numa situao ideal, podemos assemelhar um quimiostato a um reactor contnuo
perfeitamente agitado/com mistura perfeita ou CSTR (continuous stirred tank reactor) assume
uma densidade constante; condies isotrmicas; reaco irreversvel e de 1 ordem (tal
como assumido pelo modelo de Monod); estado estacionrio.

Considerando a situao em que efectuado um crescimento em descontnuo, sem adio


de meio fresco; a partir de um dado instante (t1) inicia-se o modo de operao em contnuo.
Nesta situao a cultura poder ser exposta aos seguintes fenmenos:
1 A taxa de sada de biomassa superior taxa especfica mxima de crescimento
(wash-out);
2 A taxa de sada de biomassa igual taxa especfica mxima de crescimento
(situao de instabilidade);
3 A taxa de sada de biomassa menor que a taxa especfica mxima de crescimento
(estado estacionrio).

137

Formao de
biomassa

2
X0

1
t1

Consumo de
substrato

S0

t1

Representao grfica dos fenmenos anteriormente descritos.

138

Um quimiostato a operar de forma ideal um sistema autoregulado, em que uma


diminuio na concentrao de biomassa aumento a concentrao de substrato;
consequentemente, a taxa de crescimento celular aumenta, reconstituindo assim a biomassa
no interior do sistema.
No possv el apresentar esta imagem de momento.

O aumento da concentrao de biomassa origina o inverso.

Balano biomassa:

V .dX = V . . X .dt Q. X .dt

(Aumento da biomassa = Crescimento Sada)

Fazendo D = Q/V (taxa de diluio), vem:

dX
= ( Kd D ) X
dt
Considerando >>kd, e como em estado estacionrio dX/dt = 0:

=D
139

Este resultado (~D) tem implicaes muito importantes no funcionamento de um


CSTR:
No possv el apresentar esta imagem de momento.

O valor da taxa especfica de crescimento imposto pela taxa de diluio;

A taxa de diluio mxima a que se pode operar dever ser inferior ao max-kd. Caso seja
superior, o sistema perder toda a biomassa, situao que conhecida como wash-out. Isto
acontece porque max um parmetro biolgico intrnseco.

Aps inoculao de um bio-reactor, este dever operar durante algum tempo em descontnuo, antes de ser
iniciada a alimentao. A experincia indica que o tempo necessrio para atingir a situao de estado
estacionrio aps arranque do bio-reactor ou aps alterao da taxa de diluio corresponde a 3-5 tempos
de residncia da fase lquida.
140

Dc a taxa de diluio crtica, caso em que a concentrao estacionria de biomassa


nula.

= Dc =

max .Sr
Sr + Ks

Concentrao de
substrato no reactor

Quando Sr>>Ks, ento Dc = max;

Assim, desprezando o valor de kd, pode-se substituir o valor de por max na equao:

dX
= ( D) . X
dt

No possv el apresentar esta imagem de momento.

Obtendo-se:

ln X = ln X 0 + ( max D ).t
141

Partindo de um estado estacionrio, se se fizer D>Dc, a biomassa decresce ao longo do


tempo e o declive do grfico semi-log permite obter o valor de max-D (Mtodo de Pirt).

A produtividade (D.X) atinge o seu valor mximo quando dP/dD=0 e D = Dm:

Ks
Dm = max .1
Ks + Sr

No possv el apresentar esta imagem de momento.

Quando Sr>>Ks, ento Dm = max.

Atravs do mtodo de Button tambm possvel determinar os parmetros de crescimento


de uma cultura. Com este mtodo so determinados os valores de biomassa para duas
taxas de diluio e para vrias concentraes de biomassa. Com os resultados obtidos
so traadas as curvas X = f(S).
142

Com este mtodo escrito o seguinte sistema de equaes:

Ks.D1
S1 =
max D1
Ks.D 2
S2 =
max D 2
Determinando-se os valores de Ks e max.

D1

D2

No possv el apresentar esta imagem de momento.

S1

S2

No possv el apresentar esta imagem de momento.

A linearizao (1/S=f(1/D)) da seguinte equao tambm permite obter os parmetros


cinticos Ks e max.

1 max
1
=

S Ks.D Ks

143

Balano ao substrato:

dS
V .dS = Q.So.dt Q.S .dt rS.V .dt
= D( S 0 S ) rS
dt

No possv el apresentar esta imagem de momento.

(Taxa de acumulao) = (entradas) + (formao) (sadas) - (consumo)


Em estado estacionrio: dS/dt=0; X e S assumem valores mdios.

dS


= D(S0 S)
+ m X
dt
YX/S

S0 a concentrao do substrato limitante;


O modelo de um sistema batch o modelo de um sistema contnuo considerando a taxa de diluio igual
a zero;
A alimentao Q tem de ser estril;
A composio do meio no reactor idntica composio do efluente;
O produto considerado um produto associado ao crescimento;
A cintica de crescimento considerada a de Monod.

Balano ao produto:

dP D

=
+ P X
dt YX / P

Em estado estacionrio: dX/dt = 0;


dS/dt = 0; dp/dt
Kd - taxa de lise celular
m - coeficiente de manuteno
p taxa especfica de produo no
associada ao crescimento
144
V = constante

Concentrao de substrato e de clulas

Concentrao celular, X

S0
Taxa de arrastamento (sada)
de clulas do reactor =
= Produtividade celular= D.X

Concentrao de substrato, S

Taxa de Diluio, D (h-1)

A produtividade celular mxima obtm-se para taxas de diluio elevadas, mas isto corresponde a uma
zona de grande instabilidade, uma vez que aqui que a taxa de arrastamento de clulas para o exterior
(wash-out) maior. Logo, qualquer pequena variao no caudal, concentrao de substrato, etc. pode
causar o arrastamento total da biomassa para o exterior.
145

Vantagens dos bio-reactores contnuos:


As clulas mantm-se num determinado estgio fisiolgico;
A produtividade pode ser optimizada pelo caudal de alimentao (Produtividade = D.X);
O sistema no necessita de parar com a frequncia de um sistema batch. Teoricamente
um bio-reactor contnuo pode operar indefinidamente;
Depois de se atingirem as condies de estado estacionrio, no ocorre a situao estado
de latncia do sistema batch.
A productividade global superior visto que se podem programar de forma simultnea as
operaes de down-stream.
Como os bio-reactores contnuos possibilitam maior produtividade, permitem a utilizao
de equipamentos de porte inferior.
146

Desvantagens dos bio-reactores contnuos:


Maior risco de contaminao;
Impossibilidade de uso para produo de frmacos em alguns pases, em que se exige que
todas as etapas de produo sejam em descontnuo (ex.: nos EUA a FDA probe a produo
de frmacos em contnuo);
Em alguns produtos alimentares (ex.: cerveja) importa que a fermentao avance at lise
celular;
Alguns dos produtos de fermentao com valor comercial so secundrios (produzem-se
aps a suspenso da fase de crescimento exponencial).

Desvios teoria do quimiostato:


Diminuio do rendimento ao longo do tempo;
Existncia de inibidores ou estimulantes;
Problemas de transferncia (mistura imperfeita);
Reteno de biomassa (adeso s paredes ou floculao).

147

Bio-reactor contnuo agitado com reciclagem de clulas


O bio-reactor est associado a um sistema de separao da biomassa (decantador,
centrfuga, membranas de filtrao, etc.) que depois reciclada de volta ao reactor,
permitindo manter uma mais elevada densidade celular.
Vantagens: inoculao contnua, estabilidade, aumento da produtividade.

Qe

Xe

Se

Pe

Qo

Xo

So

Po

Qs

Xs

Ss

Ps

SEPARADOR
Purga de biomassa

QR

XR

SR

PR

Reciclagem

REACTOR

Qw

Xw

Sw

Pw

A purga de clulas permite controlar


a concentrao de biomassa no reactor
148

Balanos de massa em estado estacionrio (reactor com recirculao)

Balano biomassa

dX
= D. Xo + R.D. Xr D. X (1 + R ) + . X
dt
em que: R = QR/Qe (razo de recirculao) e D = Q/V
Supondo que Qe . Xe << QR. XR e como em estado estacionrio dX/dt = 0, vem que:

D=

1 R R 1
X

Balano ao substrato

dS
. X rP. X
= D.So + R.D.SR D.S .(1 + R )

dt
YX / S YP / S
149

Balano ao Produto

dP
= D.Pe DP + rP. X
dt

No possv el apresentar esta imagem de momento.

em estado estacionrio:

D.( Pe P) + rP . X = 0
Neste sistema possvel funcionar a concentraes celulares mais elevadas:

Xs = X .(1 + R R. )
em que =XR/X
X

X
D.X
XR

D
Representao grfica da evoluo da concentrao de biomassa no bio-reactor (X), na corrente de
recirculao/reciclagem (XR) e da produtividade em biomassa (D.X) para um sistema perfeitamente
150
agitado com um andar.

Processos contnuos em andares com uma ou vrias alimentaes

Classificao:
Mltiplos andares com uma s corrente;
Mltiplos andares com vrias correntes;
Mltiplos andares com recirculao.

Os sistemas com uma s corrente so uma cascata com uma nica entrada de meio que
constante em todos os outros andares. As suas caractersticas so:
Os ltimos andares no afectam os primeiros;
O primeiro andar comporta-se como um sistema perfeitamente agitado;
A taxa de diuio no pode ser modificada num andar sem mudar os outros;
A taxa nos vrios andares depende s do volume do bio-reactor:
Q=D1.V1=D2.V2=D3.V3
151

Nos sistemas com vrias alimentaes, os primeiros andares so independentes dos


ltimos, e o primeiro perfeitamente agitado.

As diferentes alimentaes podem ser variadas independentemente e as taxas de


diluio individuais so variveis independentes do processo.

Potencialidades dos sistemas em andares:


Converso mxima por utilizao completa do substrato nos ltimos andares e
produtividade mxima no primeiro (ex.: transformao de esterides; tratamento de guas);
Clulas em diversos estados fisiolgicos (ex.: produo de metabolitos secundrios);
Manuteno de tempos de residncia elevados (ex.: bioprocessos na fase estacionria de
crescimento com cinticas e/ou meios complexos);
Manuteno das condies ambientais de operao ptimas.
152

Balanos extracelulares biomassa, substrato e produto em bio-reactores


em cascata
No possv el apresentar esta imagem de momento.

Biomassa

dXN
= D. XN 1 D. XN + N . XN
dt

Substrato

dSN
1
= D.SN 1 DSN
.N . XN
dt
YX / S

Produto

dPN
1
= D.PN 1 DPN +
.N
dt
YX / P

153

O nmero de andares de um processo contnuo pode ser determinado pelo mtodo


grfico de Deindorfer, Humphrey ou de Luedeking e Piret.
Neste mtodo, representam-se dados de crescimento batch com rx em funo de X.

dXN Q

= .( XN XN 1)
dt V

Aproximao para sistema batch.

No possv el apresentar esta imagem de momento.

Cintica do processo
descontnuo

Declive = D1

rX

Balano
mssico ao
reactor contnuo

Declive = D2

XN=1
X0
Contnuo

X0
descontnuo

XN=2

X
154

Quimiostato vs descontnuo
Considere-se que a taxa especfica de crescimento permanece no mximo. Ento, a durao
de uma cultura descontnua dada por:

Xm
+ t p
tc =
.ln
max X 0
1

tc tempo de um ciclo de operao;


tp tempo de paragem para esvaziamento e
recarga.

O aumento da biomassa ser YX/S.Sr. Ento, a produtividade de uma cultura batch pode ser
calculada pela expresso:

Pbatch

Y.Sr
=
=
tc

max .Y.Sr
Xm
+ max .t p
ln
Xo
156

Quimiostato vs descontnuo
Em quimiostato, a produtividade dada pela expresso:

Pquimiostato = max .Y.Sr


Portanto:

Pquimiostato
Pbatch

Xm
X m 0.693.t p
+ max .t p = ln
+
= ln
td
X0
X0

Em geral, Xm >> 10X0, pelo que ln (Xm/X0) 2.3. por outro lado, normalmente, tp > td.

Portanto, pode concluir-se que na generalidade, a produtividade de um quimiostato

mais de 3 vezes superior de uma cultura em descontnuo.


157

Sistemas de Alta Densidade Celular


A afinidade de certos microrganismos para crescerem em superfcies um fenmeno bem
conhecido.
Comparao dos bioprocessos de alta densidade celular com os convencionais:

Sistemas convencionais
Recuperao cara do produto;
Custo de capital elevado para aquisio do equipamento;
Bom para processos multi-enzimticos;
Menor concentrao de biomassa;
Elevados custos para controlo.

158

Sistemas de alta densidade celular

Maior concentrao de biomassa;


Maior estabilidade a longo termo;
Possibilidade de reutilizao;
Maior robustez s contaminaes;
Custos de capital mdio para aquisio do equipamento;
Necessidade de um tamanho ptimo das partculas;
Recuperao barata do produto;
Produtividade volumtrica mais elevada.

159

Classificao dos sistemas de alta densidade celular


Esta classificao pode ser feita de acordo com o sistema utilizado para reter as clulas no
interior do bio-reactor:

1.

Sistemas em que existe um contacto directo entre as clulas e um suporte inerte


(gis de poliacrilamida; alginato); ligao a um suporte inerte (adsoro);
estabelecimento de ligaes covalentes.

2.

Sistemas em que no h contacto directo com um suporte (sistema de


membranas);

3.

Sistemas abertos sem barreiras exteriores (flocos; pellets);

4.

Sistemas com reciclagem forada.

160

Tipo 1:
Polimerizao de uma soluo aquosa na qual as clulas so suspensas (ex.:
polimerizao da acrilamida originando cadeias de poliacrilamida reticuladas em N,N`metilenobio (acrilamida)). Esta tcnica tem o problema da toxicidade dos monmeros.

Incluso em polissacridos (alginato, carragenato, agar) e protenas (colagneo,


gelatina, albumina). No entanto, o alginato tem o problema de no poder ser utilizado em
situaes em que o pH seja baixo ou em que haja altas concentraes de ies monovalentes.
Gelatina ou agar no podem ser utilizados com clulas sensveis ao calor.

Outros factores a considerar:


Resistncia mecnica;
Limitaes difusionais;
Libertao de clulas.

Ligao de clulas a um suporte inerte (ex.: adsoro a resinas de permuta inica,


aparas de madeira, partculas cermicas e polimricas porosas, quitina e vidro tratado).
Importante a considerar: Fora inica; Potencial zeta; Hidrofobicidade das superfcies
161
celulares e de adeso.

Ligao de clulas mediada por macromolculas (ex.: utilizao de lectinas para


ligao clula-suporte).

Ligao covalente ou coordenada de clulas a suportes (ex.: imobilizao de clulas


em suportes de metais de transio activados, activao dos grupos carboxilato de bolas de
agarose com carboximida seguido de imobilizao). Esta tcnica tem problema de reduzir a
viabilidade celular, no entanto, no permite a libertao de clulas.

Tipo 2
Caracterizados pela existncia de uma membrana cuja porosidade no permite a
sada de clulas. Estas membranas devem ter elevadas resistncias mecnicas, trmicas e
qumicas. Como problemas associados a esta tcnica so: custo elevado, elevados gastos
energticos e possibilidade de aplicao de elevadas foras de corte nas clulas ( excepo
dos sistemas de fibras ocas hollow fibers).
162

Tipo 3
As clulas so agregadas em flocos ou pellets. A floculao pode ser natural ou
induzida por floculantes (polielectrlitos catinicos e/ou aninicos, hidrocolides minerais e
poliacrilato). Tambm pode ser utilizada a tcnica de reticulao entre clulas, recorrendo a
um agente reticulante (ex.: glutaraldedo), apesar deste mtodo reduzir a viabilidade celular.
Como desvantagens associadas a esta tcnica so: fracas propriedades mecnicas dos
agregados. As vantagens so: simplicidade e economia do processo.

Tipo 4
As clulas que saem do bio-reactor so centrifugadas e recicladas. Esta tcnica tem o
inconveniente dos elevados custos fixos de operao.

163

Balanos extracelulares a um bio-reactor de alta densidade celular


Considere-se um caso geral de um sistema de alta densidade celular, num reactor contnuo,
fluidizado, com sada de uma corrente diluda e purga de uma corrente concentrada de
biomassa. Admita-se tambm que a reaco ocorre em todo o o bio-reactor e que o sistema
perfeitamente agitado.
Sada de ar
Q caudal de alimentao;
S0 concentrao de substrato
na alimentao;

Corrente de sada

(1-c)Q, S, hX

V, X

X concentrao de biomassa
no sistema;
hX concentrao de
biomassa na corrente diluda;
cQ fraco de corrente de
sada com biomassa
concentrada.
Alimentao

Q, S0

Purga
Entrada de ar

cQ, X, S

164

Um balano biomassa, por unidade de volume, permite escrever:

dX
= . X c.D. X (1 c).D.h. X
dt
Em estado estacionrio:

= D.[c.(1 h) + h]

Se h = 0 na corrente diluda de sada no h clulas (ex.: sistemas de membranas);


Se h = 1 a corrente de sada tem uma concentrao de biomassa igual do interior do
sistema (ex.: quimiostato).
Nos outros casos: 0 < h < 1.
Quando no h purga de clulas (c = 0). Em estado estacionrio: = h.D
Como, geralmente, h < 1, pode-se trabalhar com altas taxas de diluio (D > )165
que
conduzem a um aumento da concentrao celular e da produtividade (D.X).

Bio-reactores de Biomassa Imobilizada


Aspectos a considerar no dimensionamento de um bio-reactor

Volume no reactivo () = Volume ocupado pelo imobilizador/Volume total do bioreactor

Exemplo: Considere um reactor com um volume til VR (m3), contendo clulas de levedura
imobilizadas em bolas de alginato de clcio com uma porosidade p e que, no reactor,
ocupam uma fraco de volume igual a S. As clulas contidas nas bolas de alginato tm
uma fraco de clulas viveis y e so responsveis pela produo em contnuo de etanol a
partir de glicose.

A expresso que permite calcular o volume onde se do as reaces bioqumicas de


converso de glicose em etanol (Vr, m3) ser:

Vr = S VR p y

166

Principais Tipos de Bio-reactores


As configuraes mais comummente utilizadas so as de tanque agitado, leito
fixo, leito fluidizado e coluna de bolhas e circulao por arejamento (airlift).

167
Aspecto de diversos bio-reactores utilizados para produo em larga escala.

Tanque agitado
,

essencialmente,

um

vaso

cilndrico com uma altura a duas


vezes o dimetro.
Est equipado com um agitador na
parte

inferior,

colocado

uma

distncia do fundo igual ao dimetro


do agitador. Por vezes, torna-se
necessrio

colocar

agitadores

tambm na parte superior.


O distribuidor de ar est colocado
por baixo do agitador e possui
anteparos para evitar a formao de
vrtices.
A turbina o tipo de agitador mais
utilizado.
168

Vantagens do tanque agitado:


o tipo de reactor mais usado em processos industriais por isso existe muita
informao disponvel sobre o seu dimensionamento e operao;
Permitem um fcil controlo do nvel de disperso do gs e da agitao atravs do
controle da velocidade do agitador;
Pode ser usado com misturas reaccionais muito viscosas;
O arejamento quase no contribui para a mistura (esta essencialmente dependente
do agitador parmetro fundamental no projecto) por isso pode operar-se com
caudais de arejamento muito baixos se tal for necessrio;
Considera-se um grau de mistura perfeito neste tipo de reactores embora na prtica
isso no se verifique exactamente;
muito verstil possibilitando a utilizao de vrios acessrios para transferncia
de calor, recirculao, separao celular, etc.
169
Um bio-reactor com geometria de tanque agitado pode operar em modo descontnuo, semi-contnuo ou contnuo.

Desvantagens:
Baixa eficincia na transferncia de oxignio;
Necessita de uma grande potncia de agitao;
Necessita de muita remoo de calor (devido grande potncia de agitao);
Com o aumento de escala a rea disponvel para transferncia de calor por unidade
de volume diminui muito;
A agitao pode provocar tenses de corte elevadas tornando-o pouco indicado em
algumas aplicaes (clulas ou agregados celulares sensveis);
Custos elevados de construo e operao devido grande potncia de agitao
necessria s selagens mecnicas que contm.
170

Coluna de bolhas

171

Vantagens
Reactor muito simples, com grande resistncia mecnica;
Construo muito barata com custos de manuteno baixos j que no possui
partes mveis;
Valores razoveis de transferncia de massa gs-lquido;
Possvel suspender partculas com clulas ou catalisadores imobilizados devido
pequena diferena de densidades entre a fase slida e a lquida;
O tipo de agitao (por circulao de ar) no induz tenses de corte que podem ser
prejudiciais no crescimento de clulas ou agregados celulares sensveis a este tipo de
foras.

Desvantagens
Deficiente grau de mistura o que implica baixa eficincia nas transferncias de
massa slido-lquido e lquido-lquido;
Devido a estas limitaes na transferncia de massa no pode ser usado em muito
grande escala pois os gradientes de concentrao na fase lquida seriam demasiado
172
significativos.

Coluna de bolhas e circulao por arejamento Airlift


Consiste numa coluna de bolhas dividida em duas seces distintas, sendo numa delas injectado gs (tubo
ascendente ou riser) que se liberta na parte superior, ficando a outra parte (tubo descendente ou
downcomer), na maior parte dos casos, desgaseificada em larga extenso. Consegue-se assim um
decrscimo na densidade do fluido do tubo ascendente em relao ao do tubo descendente, provocando a
sua circulao, que assume um fluxo prximo de pisto quando a velocidades de circulao elevada.
Quando baixa, os padres de fluxo assemelham-se aos de uma coluna de bolhas.

Airlift de circulao
interna e tubos
concntricos

Airlift de circulao
externa

Reactor com circulao induzida pelo ar.

173
P. Doran, Bioprocess Engineering Principles, Academic Press, 1995

No riser a densidade mais baixa porque o fludo uma mistura de gs e lquido o que faz
com que o fluido seja empurrado para cima;
No downcomer a densidade do fluido maior, aproximadamente igual densidade do
lquido. Isto faz com que o lquido seja empurrado para baixo;
Esta movimentao nos tubos ascendentes e descendentes responsvel pelo elevado
grau de mistura, que no topo do reactor (zona de desgaseificao) equivalente a de um
reactor perfeitamente agitado.
A transferncia de massa gs-lquido to eficiente como numa coluna de bolhas;
Devido ao tipo de agitao, as tenses de corte induzidas so tambm bastante
baixas adequados para bioprocessos envolvendo microrganismos imobilizados;
Devido s caractersticas do fluxo a capacidade para transferncia de massa e calor
muito aumentada ao mesmo tempo que se diminui a energia consumida para
agitao;
As tenses de corte no interior do bio-reactor so relativamente constantes quando
174
comparadas com um bio-reactor do tipo coluna de bolhas ou tanque agitado.

Leito fixo

Gas

o reactor mais usado com clulas imobilizadas;


Gradiente de concentrao favorvel a altas velocidades de
reaco;
Baixa velocidade de circulao do fludo implica resistncias
elevadas s transferncias de massa e calor;
Funcionamento simples;
No so adequados para sistemas com clulas vivas devido
deficiente transferncia de massa gs-lquido;
O leito tem que ter uma resistncia mecnica considervel
devido presso exercida (problema de compactao);
Ocluso de metabolitos gasosos que no so facilmente
removidos em sistemas arejados.

175

Leito fluidizado
Boa mistura e baixa resistncia s transferncias de massa e
calor;
Gas

Pode obter-se a fluidizao do leito com lquido, gs ou uma


mistura de ambos;
Baixa queda de presso;
A diferena de densidades entre a fase slida e fluida deve
ser maximizada de modo a permitir elevadas velocidades de
circulao;
No caso de o leito ser constitudo por partculas de densidade
prxima da do fluido (agregados microbianos) a velocidade
de fluidizao dever ser baixa o que prejudica a
transferncia de massa e de calor;
A rea de partcula disponvel para transferncia de massa
176
maximizada.

Critrios gerais de seleco para geometrias comuns


Os critrios para seleccionar o bio-reactor mais adequado baseiam-se em
estudos de mistura, transferncia de massa e custo.

Para processos em que a viscosidade do fludo pode atingir 100 cP (a


viscosidade da gua de 1 cP), um reactor mecanicamente agitado
provavelmente a melhor opo uma vez que as colunas de bolhas e os airlift no
funcionam com viscosidades to altas;

Se a viscosidade do fluido for elevada, o volume de reactor mecanicamente


agitado no dever exceder os 500 m3 devido inrcia a que o veio do agitador
estar sujeito;
177
Lima and Mota, Biotecnologia, Lidel

Quando exigida uma elevada flexibilidade operatria (como por exemplo em


instalaes piloto) os reactores mecanicamente agitados so normalmente os
mais indicados;
Para operaes em grande escala (50 - 500m3) em que o fludo de processo
tem baixa viscosidade deve verificar-se a possibilidade de usar colunas de
bolhas devido ao baixo custo do equipamento;
Para operaes em muito grande escala (200 - 10000 m3), reactores do tipo
airlift podem ser os mais indicados.
Ateno: Estes so critrios gerais de seleco, a soluo adequada deve ser
equacionada caso a caso.
178
Lima and Mota, Biotecnologia, Lidel

Variao de escala

179

Variao de Escala
Os estudos de variao de escala tm o objectivo de fornecer dados acerca do
comportamento de um bio-reactor de escala diferente mantendo rendimentos e
qualidade de produto quando se muda de escala (scale-up ou scale-down).

O que acontecer escala industrial?

Problemas
heterogeneidade
(mistura,
transferncia
massa e calor)
180

de

de

Variao de Escala

181

Variao de Escala

Factores a considerar:
Transferncia de massa (oxignio);
Transferncia de calor;
Esterilizao;
Caractersticas fsicas do equipamento (impulsor; reactor);
Limpeza e desinfeco;
Formao de espuma.

182

O processo de mudana de escala passa normalmente pelas seguintes etapas:


Cultura em pequena escala realizada em bales com menos de 1 L de capacidade.
O sistema opera em condies ptimas de crescimento para o microrganismo;
Cultura em escala laboratorial realizada em bio-reactores de 1 a 5 L, geralmente
equipados com sistemas de monitorizao e controlo;
Cultura em escala piloto realizada em bio-reactores de 50 a 1000 L. Estes bioreactores tm geometria semelhante que deu melhores resultados laboratoriais. Os
parmetros do sistema (transferncia de massa e calor, tempo de residncia, nmero de
potncia, etc) devem ser conhecidos, possibilitando estudos econmicos com vista futura
aplicabilidade;
Cultura escala industrial realizada em bio-reactores cujo volume varia com o tipo
de produto a sintetizar, podendo ultrapassar os 1000 m3. Estes bio-reactores requerem
equipamentos adicionais, previamente dimensionados, de acordo com as caractersticas do
sistema, nomeadamente compressores de ar, geradores de vapor e equipamentos de
esterilizao, bem como redes de monitorizao e controlo.

183

Variao de Escala Scale-up


O scale-up pode ser definido como um conjunto de procedimentos necessrios no
dimensionamento dum sistema numa escala superior a partir de resultados experimentais
obtidos numa escala inferior.
Este processo uma das tarefas mais complicada em engenharia bioqumica, no existindo
uma teoria geral. Quanto maior a escala, maior o afastamento do comportamento do
bio-reactor em relao ao ideal, essencialmente devido a problemas de gradientes de
velocidade, causadores de gradientes de concentraes de nutrientes e de produtos.
O desempenho de um bio-reactor depende de parmetros intrnsecos ao processo que
so independentes da escala:

Coeficientes estequiomtricos, constantes cinticas e termodinmicas;


No entanto, o desempenho do bio-reactor tambm influenciado por parmetros que
dependem da escala:
Parmetros de transporte, relacionados com a hidrodinmica e com as propriedades
de transferncia de calor e de massa.

184

Critrios para aumento de escala:


Um conceito utilizado para aumento de escala o princpio da similaridade. Trs tipos
de similaridades so consideradas: geomtrica, cinemtica e dinmica. Utilizando a
similaridade a nvel geomtrico obriga a que todas ou algumas das dimenses lineares
dos bio-reactores de pequena e grande escala sejam iguais para que sejam considerados
geometricamente semelhantes.

Por exemplo:
HT/Dt = constante
ou
Dt/Di = constante

(para mltiplos
impulsores)

Sendo HT a altura de lquido no arejado e Dt e Di os dimetros do reactor e do


agitador/impulsor, respectivamente.
Em reactores mecanicamente agitados, a razo HT/Dt varia entre 1 e 3; a razo de dimetros
entre 2.5 e 4 (3 assumido como valor padro).

185

Este critrio tem por base dimenses padro publicadas pela


Organisation e British Standards Institution.

International Standards

Esses padres levam em conta critrios de

eficincia e estruturais.

Da - dimetro total do impulsor


W, L - altura e largura das ps do
impulsor
Ht - altura do bio-reactor
Hl - altura mxima do lquido
E - distncia mdia entre o
impulsor e a sada de gs
Db - largura do anteparo
Dt - dimetro do bio-reactor

186

Por exemplo, para um bio-reactor equipado com anteparos e sem arejamento:

Razo

Valores tpicos

Altura do lquido no reactor e altura do reactor

Ht/Hl

~ 0.70 0.80

Altura do reactor e dimetro do tanque

Ht/Dt

~ 1.0 2.0

Dimetro do impulsor e dimetro do tanque

Da/Dt

1/3 1/2

Dimetro dos anteparos e dimetro do tanque

Db/Dt

~ 0.08 0.10

Altura da p do impulsor e dimetro do impulsor

W/Da

0.20

Largura da p do impulsor e dimetro do impulsor

L/Da

0.25

Distncia mdia entre o impulsor e a sada de gs e altura da


p

E/W

1.0

Exemplo: Um bio-reactor tem volume total de 100.000 L. A sua geometria definida pelas seguintes
razes:
Dt:Ht = 0.50
Da:Dt = 0.33
Db:Dt = 0.10
Calcule as dimenses:
O volume de trabalho do reactor aproximadamente 0.7 0.8 do volume total.

187

Tradicionalmente, usam-se com critrios de scale-up a integrao de vrios


parmetros fsicos operacionais, baseados nas semelhanas geomtricas e de
potncia por unidade de volume, nomeadamente:

N de Reynolds ou factores de momento semelhantes (.N.Di2/);


Consumo de potncia para agitao por unidade de volume constante (P/V) ou
velocidade de bombagem do impulsor/taxa de circulao de liquido no reactor
constante (F/V);
Velocidade de agitao do impulsor constante (N.Di);
Tempo de mistura por agitao constante (tm);
Arejamento - coeficiente volumtrico de transferncia de massa constante (KLa).

188

O modo de proceder ao aumento de escala consiste em seleccionar um


parmetro que influencie fortemente o processo biolgico e em manter o
valor absoluto deste parmetro entre as diferentes escalas.
Relacionando os critrios anteriores com o dimetro do impulsor de agitao (Di) e com a
velocidade de agitao (N):
P N3.Di5; V Di3; F N.Di3
Critrios de projecto:
Potncia por unidade de volume constante: P/V N3.Di2;

P Potncia do impulsor (W);

Capacidade de bombagem do impulsor: F/V N;

N Velocidade do impulsor (r.p.m.);

Velocidade de agitao constante: N.Di;

Di dimetro do impulsor (m),


normalmente 30 a 40 % do dimetro
do tanque (Dt);

N de Reynolds constante: Re N.Di2


Como Di Dt, a relao anterior vlida para Dt.

V volume de trabalho/bio-reactor.

Qualquer um destes critrios pode conduzir alterao dos outros parmetros. Por exemplo,
o oxignio dissolvido pode tornar-se inferior ao seu valor crtico.
Esta abordagem no adequada por si s para se conseguir a transio de escala
189
aspectos importantes da maioria dos processos biolgicos so ignorados.

Potncia por unidade de volume constante:


Com o aumento de escala verifica-se que:
Volume a proporcional Di3, sendo Di o dimetro do agitador;
Potncia proporcional a N3 Di5, sendo N a velocidade de
agitao.

Para manter uma geometria standard, devido relao mostrada


acima, na escala de produo iriam obter-se consumos energticos
muito elevados. Para obter valores de dimetro de agitador razoveis
os reactores escala industrial so altos e relativamente estreitos.
Torna-se ento necessrio colocar vrios agitadores no mesmo veio
de modo a manter um grau de mistura adequado.
Valores da taxa especfica de dissipao de energia entre 0.5 e 1.5
kW/m3 tm sido utilizados como critrio de aumento de escala em
bio-reactores para cultura de microrganismos,

190

Velocidade da extremidade das ps constante:


Nos bio-reactores, as clulas esto sujeitas a tenses de corte mecnicas, podendo diminuir
a viabilidade celular.
Num bio-reactor mecanicamente agitado, a tenso de corte mxima verifica-se junto
extremidade das ps.
Em bio-reactores arejados verificam-se tenses de corte elevadas superfcie da fase lquida
devido ao rebentamento das bolhas de gs.

As respostas das suspenses celulares s tenses de corte pode variar com escala,
utilizando-se como critrio de scale-up a manuteno da velocidade da extremidade dos
agitadores entre as escalas laboratorial (Dlab) e industrial (Dind):

Nind = Nlab. (Dlab/Dind), sendo N a velocidade de rotao do veio do agitador.

Velocidades tpicas da extremidade das ps situam-se entre 2.5 e 7 m/s.


191

Tempo de mistura constante:


O tempo de mistura (tm) um parmetro crtico para a determinao da eficincia de um
sistema agitado.
Em bio-reactores mecanicamente agitados a operar em regime turbulento, o tm igual a
aproximadamente cinco vezes o tempo de circulao tc (tempo necessrio para um ciclo de
agitao completo, calculado pela razo entre o volume do sistema e o caudal de circulao).

tm proporcional a 1/N.
Este critrio equivale a manter constante o nmero de rotaes do veio (N).
Por exemplo, para um sistema agitado por turbinas de Rushton com 6 lminas e em regime
turbulento, o n de rotaes do agitador por ciclo de homogeneizao dado por:

N.tc = V/(2.6Da3)

192

Coeficiente de transferncia de oxignio constante:


Manter o coeficiente de transferncia de oxignio (KLa) constante um dos critrios de
aumento de escala mais utilizados em culturas aerbias, uma vez que, em reaces
microbianas escala industrial, o oxignio muitas vezes o nutriente limitante.
O valor do coeficiente de transferncia de oxignio, KLa pode ser obtido por correlaes do
tipo:

KLa = a.(PotG/V)b.uGc
Sendo PotG, a potncia dissipada com arejamento; V, o volume do bio-reactor; uG, a
velocidade linear do gs.
Num bio-reactor de grande capacidade, atravs de um ajuste frequente da velocidade
de agitao e do arejamento, conseguem obter-se taxas de consumo semelhantes s
do sistema em pequena escala.
Em bio-reaces onde a viscosidade do meio aumenta, possvel observar gradientes de
concentrao de oxignio dissolvido. Esses gradientes devem-se a tempos de mistura
relativamente elevados, quando comparados com os tempos caractersticos das taxas de
transferncia e consumo de oxignio.
Nesses casos, ser mais correcto usar a taxa de consumo de oxignio como
parmetro de aumento de escala.

193

Taxa de arejamento constante:


Geralmente utilizam-se taxas de arejamento enter 0.5 e 1.5 v.v.m. (volume de ar por unidade
de volume de lquido no bio-reactor e minuto).
Neste caso, a velocidade superficial do gs (uG) aumentar com a escala:

uG = Qv.v.m. (HG/60)
Sendo HG a altura do lquido arejado no bio-reactor.

Taxa de arejamento constante:


Em reaces fortemente exotrmicas, ou naquelas em que a viscosidade do meio atinja
valores elevados, em particular se o rendimento da reaco e/ou a produtividade do processo
forem muito sensveis temperatura do meio, a manuteno da temperatura ptima um
factor crtico.
A possibilidade de esterilizao do sistema, em larga escala, deve ser tido em conta no
aumento de escala.
194

Vrios parmetros de scale-up (escala piloto bio-reactor de 10000 litros) utilizados em semelhanas
geomtricas (Lima e Mota, 2000)
Propriedade

Escala Piloto
(80 L)

P/V
constante

N
constante

N/D
constante

ND2/
constante

Potncia fornecida (P)

1.0

125

3125

25

0.2

Potncia fornecida/volume
do reactor (P/V)

1.0

1.0

25

0.2

0.016

Velocidade de rotao do
impulsor/agitador (N)

1.0

0.34

1.0

0.2

0.04

Dimetro do impulsor (D)

1.0

5.0

5.0

5.0

5.0

Capacidade de bombagem
do impulsor (F)

1.0

42.5

125

25

5.0

Capacidade de bombagem
do impulsor/volume do
reactor (F/V)

1.0

0.24

1.0

0.2

0.04

Velocidade mxima do
agitador (N/D)

1.0

1.7

5.0

1.0

0.2

N de Reynolds (ND2/)

1.0

8.5

25

5.0

1.0

Seleco de um critrio, estimando-se os parmetros considerados como crticos nas


diferentes escalas e avaliando-se as consequncias das escolhas nos outros
parmetros importantes no sistema.

195

Reduo de escala scale-down


Trata-se de realizar experincias em pequena escala reproduzindo as condies da
uma escala maior.
Os principais objectivos so:
Investigao escala laboratorial determinados aspectos relativos ao desempenho
de um bio-reactor que j opera escala piloto ou industrial. Geralmente so mantidas
semelhanas nos valores dos tempos de residncia;
Realizao de estudos preliminares referentes ao desenvolvimento de novos
processos ou optimizao de um processo j existente;
Conseguir os objectivos apresentados anteriormente de uma forma mais rpida e
econmica.
Neste caso, a variao de escala efectuada pela realizao de uma anlise dimensional
tendo por base a manuteno da semelhana geomtrica ou as regras empricas
utilizadas para scale-up.

196

Scale-up e scale-down (anlise de regime)


Um instrumento disponvel para verificar qual ou quais os mecanismos que limitam a
velocidade global de um processo a anlise de regime. Esta anlise consiste na
estimativa e comparao dos tempos caractersticos dos vrios sub-processos e fenmenos
que contribuem para o processo como um todo:
1. Determinao dos tempos crticos correspondentes a cada parmetro operacional
para a escala inicial de trabalho;
2. Por comparao dos tempos crticos, determina-se o tempo caracterstico
(corresponde ao maior valor dos tempos crticos encontrados);
3. O tempo caracterstico ( o maior dos tempos crticos para cada parmetro
operacional) do sistema corresponder ao parmetro que se manter constante na
variao de escala.
Estes critrios alteram-se de acordo com o que se pretende redimensionar.

Um tempo caracterstico pequeno significa um mecanismo


rpido, enquanto que um tempo caracterstico elevado
197
significa um mecanismo lento.

Alguns exemplos de como se podem exprimir vrios parmetros em funo dos


tempos crticos:

Parmetro

Tempo crtico (s)

Crescimento

1/

Consumo de substrato

1/qs

Consumo de oxignio

1/qO2

Mistura

tm

Transferncia de oxignio

1/KLa

Taxa de produo de calor


(W/m3)

Produo de calor:
Tempo caracterstico = T.Cp./HPR
Coeficiente
trmico do caldo
fermentativo
(J/Kg.K)

Massa especfica do caldo


fermentativo (Kg/m3)

198

Tempos crticos dos mecanismos relevantes na produo de cido glucnico por Gluconobacter oxydans
(Fonseca e Teixeira, 2006)
Hidrodinmica/Fenmenos de transferncia

Tempo crtico (s)

Transferncia de oxignio

8.4

Circulao da fase lquida

12.3

Tempo de residncia da fase gasosa

20.6

Transferncia de oxignio a partir de uma bolha


gasosa

442

Transferncia de calor

490

Converso

Consumo de oxignio

0.7 16

Consumo de substrato

5.5 104

Crescimento

1.2 104

Produo de calor

350

199

Interpretao:
O consumo de substrato um processo muito mais lento do que a circulao da
fase lquida o substrato ser disponibilizado de forma rpida e homognea por toda a
cultura;
Valores dos tempos crticos da transferncia de oxignio para a fase lquida e do seu
consumo semelhantes possibilidade de limitao de oxignio;
Tempo de circulao da fase lquida da ordem de grandeza do tempo crtico da
transferncia de oxignio para a fase lquida possibilidade de existncia de gradientes
de concentrao de oxignio;
Transferncia de oxignio da fase gasosa para a lquida mais lenta do que o tempo
de residncia da fase gasosa no se verificar esgotamento do oxignio na fase gasosa;
Tempo de circulao da fase lquida mais rpido que o calor gerado no existiro
gradientes de temperatura no interior do bio-reactor;
Esta anlise revelou que o mecanismo chave a ser estudado o fornecimento de
oxignio transposio de escala tomando como base a manuteno de tempos
crticos para a circulao do lquido e para o consumo de oxignio.

200

Scale-up atravs de scale-down:

201

Problemas associados a um processo de


variao de escala:

Dificuldades em manter uma mistura


perfeita induzem a:
Formao de gradientes de velocidades;
Formao de gradientes de
concentrao;
Deficiente transferncia de calor;
Formao de micro-ambientes dentro do
reactor;
Diminuio de rendimentos e
produtividade;
Formao de produtos secundrios.

Variao da concentrao de oxignio no bio-reactor.

Disperso de ar e mistura para diferentes


202
condies experimentais.

Modelao e simulao de
processos em bio-reactores

203

Modelao e simulao de processos em bio-reactores

Armazenagem de matria-prima

Sub-produtos

Reciclagem de material

Resduos

Separao dos
produtos

Preparao da
alimentao

Reaco

Purificao dos
produtos

Armazenagem dos
produtos

Venda
Estrutura de um processo bioqumico.
204

SuperPro Designer
O SuperPro Designer (Batch-Pro, BioPro, EnviroPro, SuperPro) um software de projecto
em engenharia que efectua balanos mssicos, econmicos e atravs do qual
possvel avaliar com mais facilidade a viabilidade de um determinado processo
produtivo. Este programa uma valiosa ferramenta para engenheiros e cientistas em
desenvolvimento de processos em indstrias como farmacutica, qumica ou alimentar.

O programa funciona inserindo equipamentos representativos no ambiente de trabalho,


adicionando operaes unitrias e correntes com os componentes intervenientes no
processo, pelo que cada operao unitria est intimamente relacionada com a
composio da corrente anterior.

205

SuperPro Designer
Sumrio do procedimento utilizado no desenvolvimento de um projecto:

206

Produo de -galactosidase

207

Berkeley Madonna
Este software foi desenvolvido na Universidade de Berkeley, Califrnia, permitindo a
modelizao e anlise de sistemas dinmicos. Possui interfaces grficas para a anlise e
modificao de parmetros, e elaborao de diagramas de fluxo.
considerado o sistema mais rpido e flexvel para a resoluo de sistemas de equaes
diferenciais.
Uma verso de demonstrao pode ser obtida pelo endereo electrnico:
http://www.berkeleymadonna.com/

Ansys, Aspen Plus e Matlab so exemplos de outras ferramentas que podem ser utilizadas
na simulao computacional de processos e equipamentos.
208

Componentes bsicos associados a um bio-reactor:


Sistema de agitao;
Sistema de distribuio de O2/ar (arejamento);
Sistema de controlo de espuma;
Sistema de controlo de temperatura;
Sistema de controlo de pH;
Portas de amostragem;
Sistema de limpeza e esterilizao;
Linhas para esvaziamento do bio-reactor.
209

Arejamento

210

Arejamento
Interface lquido-slido

Filme lquido

Local de reaco do
oxignio

Massa de
lquido

Clula individual

Bolha de
gs
Agregado celular

Local de reaco do
oxignio
Filme lquido

Clula individual
Interface gs-lquido

Filme lquido

i) transferncia do interior da bolha para a interface gs-lquido;


ii) movimento atravs da interface gs-lquido;
iii) difuso atravs do filme de lquido estagnado na superfcie da bolha;
iv) transporte atravs da massa de lquido;
v) difuso atravs do filme de lquido estagnado na superfcie da clula;
vi) movimento atravs da interface lquido-clula;
vii) se as clulas estiverem em flocos ou em partculas slidas, difuso atravs do slido at
clula individual;
211
Doran, 1995
viii) transporte atravs do citoplasma ao local de reaco.

Arejamento Transferncia de Oxignio


A transferncia de oxignio um dos parmetros mais importantes no projecto de bioreactores em processos aerbios.

Fluxo de oxignio = mole de O2/(cm2.s)

Como as concentraes interfaciais no so fceis de determinar, consideramos um


coeficiente global de transferncia de massa KL e a concentrao total (C* - CL), onde C* a
concentrao do gs em equilbrio com a fase lquida.
Fluxo = KL (C* - CL)

Taxa de transferncia de oxignio por unidade de volume dada por:

QO2 =

fluxo rea interfacial


A
= K L (C * C L ) = K L .a(C * CL )
volume de lquido no reactor
V
212

Hold-up
O hold-up do gs em um dos parmetros mais importantes na definio das
caractersticas hidrodinmicas de um sistema.
A disperso de pequenas bolhas de gs resulta numa maior rea interfacial por unidade de
volume. Pequenas bolhas tm uma baixa velocidade de ascenso. Consequentemente, estas
esto mais tempo em contacto com o lquido, permitindo uma maior dissoluo do oxignio.
A fraco de fluido ocupado pelo gs designado por hold-up do gs volume de gs
no volume total gs-lquido. Bolhas de gs pequenas originam maiores valores de
hold-up.

VG
H=
VG + VL
H - hold-up; VG - volume de gs no bio-reactor; VL volume de lquido no bio-reactor.

213

A rea superficial de uma bolha (a) pode ser calculada atravs da expresso:

6H
a=
d
d ou d32 dimetro da bolha (dimetro mdio de Sauter) determinado pelo tamanho mdio
de gotas, directamente por fotografia de disperses.

O hold-up depende essencialmente da velocidade superficial do gs e da


potncia de agitao, sendo muito sensvel s alteraes das propriedades
fsicas do meio.
Num sistema de duas fases, sem agitao mecnica, o hold-up depende da velocidade
superficial do gs (VS) e da velocidade de ascenso da bolha (Vt):

VS
H=
VS + Vt
Foram desenvolvidas diversas expresses que permitem o clculo do hold-up para
214
diferentes modos de operao (com ou sem agitao, tipo de agitador utilizado, etc).

Arejamento
Em bio-reaces aerbias, a quantidade de oxignio a fornecer aos microrganismos
um factor extremamente importante na sua viabilidade e na produo de biomassa e
de produtos.
Os factores mais importantes na determinao da quantidade de oxignio necessria a
uma bio-reaco so:
Caractersticas

exigncias

dos

microrganismos/clulas

(espcie,

fase

de

crescimento, fonte de carbono);


Natureza do processo;
Grau de dissoluo do oxignio no meio lquido;
Transferncia do oxignio pela camada lquida at s clulas;
O segundo factor depende da diferena de concentraes na saturao e no meio de
cultura. O ltimo factor ser tanto mais favorecido quanto menor o tamanho das
bolhas de gs. Neste caso, ser menor a camada lquida retida superfcie das bolhas
e maior ser a velocidade com que so projectadas.

215

As diferenas referidas anteriormente podem ser reunidas na seguinte equao:

dCL

= KL.a.(C * CL )
.X
dt
YO2
dCL/dt taxa global de transferncia de oxignio (mg/L.h)
KL coeficiente de transferncia de oxignio no meio lquido (m/h);
a rea interfacial efectiva das bolhas/volume das bolhas de gs no meio
(m2/m3);
C* - concentrao de saturao de gs no meio (mg/L);
CL concentrao de gs no meio (mg/L);
taxa especfica de crescimento dos microrganismos (h-1);
X quantidade de biomassa formada (g/L);
YO2 rendimento da cultura em biomassa, relativamente ao oxignio consumido
(gbiomassa/goxignio);
.X/YO2 taxa de consumo de oxignio pelos microrganismos;
KL.a.(C*-CL) taxa de transferncia de oxignio apenas no meio de cultura.

216

Variveis que afectam o KL.a:


Velocidade do ar;
Tipos e sistemas de agitao;
Propriedades fsicas do meio de cultura;
Velocidade de agitao;
Temperatura;
Quantidade de slidos;
Taxa de arejamento;
Volume de meio;
Presena/ausncia de anteparos
Potncia de arejamento (depende a velocidade superficial do gs)
217

De facto, so vrios os factores que afectam o KL.a dos quais se destacam o grau de
agitao, a taxa de arejamento, as propriedades reolgicas do meio de fermentao e a
presena de antiespumantes. De facto, a transferncia de massa depende:
da solubilidade do gs no lquido;
mistura (uma maior mistura implica maior investimento e gastos energticos, provocando
tambm danos celulares);
rea interfacial entre as 2 fases (uma maior rea interfacial est relacionada com uma
maior transferncia de massa). Para aumentar a rea interfacial deve ser adicionado mais
material ao bio-reactor e/ou diminuir o tamanho da bolha;
viscosidade do lquido (quanto maior a viscosidade do lquido, menor ser a transferncia
de massa).

218

Mtodos para determinao do KL.a


1 - Reaces qumicas
Neste mtodo o gs reage com o composto adicionado a fase lquida e este consumo
monitorizado e relacionado com coeficiente desejado. A reagente deve ser suficiente para
que todo o oxignio seja consumido.

Cu2+/CO2+

Na2SO3 + O2
dCL
= K L a(C * CL )
dt

Na2SO4

No final da reaco CL

0, ento:

Limitaes do mtodo:
A reaco tem que ser rpida o suficiente para reduzir a concentrao no lquido at zero,
mas no to rpida que no seja possvel medi-la;
A reaco funo do pH, temperatura;
Influncia da qualidade da gua;
219

2 - Mtodo dinmico

C*

Consumo de oxignio devido ao


metabolismo (no h arejamento)

Declive =X./YO2
C*-CL
C*-C0

CL

C0

Inicialmente o bio-reactor arejado em estado estacionrio. Em dado instante corta-se a


entrada de ar do sistema e monitoriza-se o decrscimo da concentrao de oxignio no meio
de cultura. Aps o perodo de monitorizao do decrscimo da concentrao, abre-se
novamente a entrada de ar do sistema.
Durante este perodo de tempo considera-se que no h formao de biomassa no bioreactor, desta forma a variao da concentrao de oxignio descrita pela expresso:

dCL

*
= k L .a. C CL
.X
dt
YO2

220

Representao grfica dos valores de CL = f(dCL/dt+.X/YO2) para duas condies distintas de arejamento.

Alternativamente, representando os valores C = f(t), quando o arejamento reiniciado e


considerando estado estacionrio:

C * C L

ln
C * C0

K L .a =
t t0
C*, CL e C0 so diferentes valores de concentrao de oxignio dissolvido mostrados na
Figura C = f(t).

Declive =X./YO2
Declive =X./YO2

222

3 - Determinao do KL.a atravs de correlaes matemticas:


Existem diversas correlaes matemticas para a determinao dos valores de KL.a de
diversos sistemas. A maioria das correlaes pode ser escrita da forma:

Pg
K L .a = k u s
V

k, , - constantes; us - velocidade superficial do gs [m/s]; Pg - potncia em sistemas


arejados; V - volume do lquido
Alm das variveis anteriores, a viscosidade do lquido tambm influencia significativamente
a transferncia de massa.
Schgerl:

k L a = ku s

0, 4

A influncia desse parmetro foi agrupada na correlao de

Pg

0,6

0,7

Pg um factor importante na transferncia gs/lquido.

um dos principais custos em

processos aerbios e um factor importante no projecto do sistema de agitao.

Est

relacionado ao dimetro do agitador, ds [m], velocidade de agitao, N [s-1] e nmero


potncia, Np (n adimensional - funo do nmero de Reynolds e do tipo de impulsor
utilizado):

Pg = Np N d s
3

223

Para um microrganismo que produza um produto na fase gasosa, a partir de


um substrato orgnico
Balano mssico ao produto no gs e no lquido:

Balano mssico fase lquida:

224

Agitao
A agitao uma operao fsica que uniformiza o fluido pela eliminao de gradientes
de concentrao, temperatura ou outras propriedades. Consiste num movimento tipocircular ou de vai-vem exercido sobre o material contido num recipiente.
no-mecnica

natural (trabalho exercido por gs da fermentao)


forada (introduo de gs pela base do reactor)

Agitao
mecnica

arejado
no-arejado

Com a agitao pretende-se atingir os seguintes objectivos:


Homogeneizar dois lquidos miscveis;
Formar emulses de lquidos imiscveis;
Dissolver slidos em lquidos;
Dispersar um gs num lquido;
Manter em suspenso partculas de um slido num lquido;
Melhorar a transferncia de calor;
Acelerar as reaces.

Baixa velocidade
de agitao

Elevada velocidade
de agitao

225

A agitao mecnica usualmente efectuada em tanques cilndricos (tanques com arestas,


permitindo a existncia de zonas com biomassa morta) com recurso a agitadores que so
compostos por um eixo, um impulsor e um motor que faz rodar o eixo.
O movimento rotativo do impulsor cria um fluxo no tanque: o fluido afasta-se do
impulsor, circula pelo tanque e volta periodicamente ao impulsor.

ncora

Hlice

Turbina

Ps

ncora

Parafuso

Tipos de impulsores.

226
P. Doran, Bioprocess Engineering Principles, Academic Press, 1995

O tipo de impulsor a utilizar depende de vrios factores, incluindo a viscosidade do fluido e a


resistncia do meio. Os mais utilizados so os de hlice, turbina, ps e parafuso.

Tipo de impulsor a utilizar em funo da viscosidade


do meio.
227

Principais caractersticas dos impulsores

Tipo de fluxo

Dimenso
Velocidade de
rotao

Hlice

Parafuso

Axial

Axial

Pequena
Da > 0.45 m
Alta
400-1800 rpm
Lminas fazem

Formato

ngulo diferente
de 90 com o
eixo

Grande

Baixa

Parafuso-semfim, com lminas


largas

Ps
Radial e
tangencial

Turbina
Radial

Grande

Pequena

Da 90 % Dt

Da = (30-50%) Dt

Baixa
20-150 rpm

Ps planas
Ps em ncora

Alta

Lminas planas ou
curvas; verticais ou
inclinadas

Evitar a
Lquidos poucos
Aplicaes

viscosos
Suspenses
diludas

Pastas (sabo,
alimentos, etc)
Polpa de papel

formao de

Lquidos de

depsitos nas

diversas

paredes

viscosidades

Lquidos

Turbulncia elevada

viscosos

228

O n de impulsores depende da altura de lquido


no bio-reactor.
Classificao:

Fluxo radial:

o liquido inicialmente dirigido


parede do reactor, i.e., ao longo do raio do tanque. No
to eficiente quanto o axial. Maior quantidade de
energia necessria para gerar o mesmo fluxo que o
axial;
Algumas marcas comerciais: tipo Arrowhead, de ps
curvas, de ps rectas verticais, impulsor Rushton,
impulsor Smith.
Caracterstica das lminas: so responsveis por gerar
regies de turbulncia para quebra das bolhas. Esta alta
turbulncia pode danificar materiais como cristais e
precipitados e tambm clulas, como fungos filamentosos
e clulas animais.

Fluxo axial: o lquido dirigido para a base do


reactor, i.e., paralelo ao eixo do agitador.
So
deficientes em gerar turbulncia e quebra das bolhas de
ar, o que os tornam indesejveis para culturas arejadas.
So utilizados para processos sensveis como em
reactores de cristalizao e precipitao. So tambm
utilizados vastamente em culturas de clulas animais.
Algumas marcas comerciais:
Lightnin 320, KPC
KROMA, Pitched, Lightnin

229

Anteparos
Os anteparos previnem a formao de vrtices e
a existncia de excesso de mistura axial mesmo
com impulsores de fluxo radial.

Zona de estagnao

Efeito da colocao dos anteparos junto da parede do reactor ou ligeiramente afastados, permitindo a
circulao volta do anteparo.
230

O padro de fluxo num tanque agitado depende de:


Tipo de agitador;
Posio do agitador no tanque;
Dimenses relativas agitador/tanque;
Propriedades do fluido;
Velocidade do fluido;
Geometria do tanque;
Existncia/ausncia de anteparos.
Impulsores mltiplos
Em bio-reactores em que a altura do lquido muito superior ao
dimetro do tanque, necessrio instalar agitadores com impulsores
mltiplos. Cada impulsor gera uma corrente de circulao. A distncia
entre impulsores normalmente 1 a 1.5 vezes o dimetro do
tanque. Se a distncia for superior, geram-se zonas sem agitao. Se
for inferior geram-se correntes que interferem entre si. Quando os
impulsor esto convenientemente espaados, a potncia de agitao
do agitador mltiplo proporcional ao nmero de impulsores:

(PA)n = n.(PA)

231

Potncia na agitao

O consumo de potncia para agitao (PA) de fluidos no arejados uma funo das
propriedades fsicas do fluido (massa especfica e viscosidade), condies de
operao (velocidade de agitao N), e geometria do tanque e do impulsor
(dimetro DA).

PA n1.n2.DAn3.N.n4.gn5
Nmeros adimensionais na agitao
Nmero de potncia

PA
NP =
5
3
L .N .DA
Nmero de Reynolds

D A . N . L
2

Re A =

PA Potncia fornecida ao lquido na agitao


(W);
L Massa especfica do lquido (Kg/m3);
N Velocidade de rotao do agitador (s-1);
DA Dimetro do agitador (m);
L Viscosidade do lquido (Kg/m.s).

232

Nmero de Froude na agitao

D A .N 2
FrA =
g
Este nmero representa a razo entre as foras desenvolvidas pelo agitador e a fora
de gravidade. A formao de vrtices est associada ao nmero de Froude.

N Velocidade de rotao do agitador (s-1);


DA Dimetro do agitador (m);
g Acelerao da gravidade (m/s2);
Nmero de Weber na agitao

WeA =

DA .N . L

L Massa especfica do lquido (Kg/m3);


Tenso superficial (N/m).

Este nmero importante no caso de duas fases lquidas imiscveis.


233

Funo potncia
Nos casos em que o valor da tenso superficial no afecta a mistura:

N P = K (Re) a A .( Fr ) b A
Define-se funo de potncia () como a razo entre o nmero de potncia e o nmero
de Froude:

NP
a
=
=
K
(Re)
A
b
( Fr ) A
Nos tanques sem anteparos (onde pode ocorrer a formao de vrtices e o nmero de
Froude importante) o exponente b pode ser calculado atravs da expresso:

m log(Re) A
b=
p
O valor de m e de p encontra-se na tabela seguinte, de acordo com o tipo de impulsor:
234

Tipo de impulsor

Turbina com 6 lminas planas verticais

1.0

40.0

Passo quadrado - S1 = 4.5; S2


= 1; S6 = 1

18.0

Passo quadrado - S1 = 2.7; S2


= 1; S6 = 1

2.3

18.0

Passo 2:1 - S1 = 4.5; S2 = 1;


S6 = 1

1.7

18.0

Hlice com 3
lminas

O movimento de rotao d
ao fluido um movimento
helicoidal,
uma
rotao
completa move o fluido
longitudinalmente a uma
distncia fixa, dependendo
do ngulo das lminas do
impulsor. A razo entre esta
distncia e o dimetro do
impulsor chamada passo
do agitador.

- Passo quadrado: razo


igual a 1.

S1 = dimetro de tanque/dimetro do impulsor; S2 = distncia do impulsor ao fundo do


tanque/dimetro do impulsor; S6 = altura de lquido no tanque/dimetro do tanque

A determinao da funo de potncia efectuada graficamente, utilizando-se


diagramas da funo de potncia em funo do nmero de Reynolds. Nestes grficos
e para regime laminar aparecem duas curvas, dependendo da existncia ou no de
anteparos.

No caso de no ser importante a formao de vrtices, utilizam-se curvas do nmero


de potncia em funo do nmero de Reynolds. A relao entre estes dois nmeros
adimensionais depende do regime de fluxo no tanque e do tipo de impulsor.

235

Na Figura seguinte esto representadas vrias curvas de NP em funo de ReA.

Correlao entre o nmero


de potncia e o nmero de
Reynolds para diferentes
impulsores.

236
Perry & Green (1999)

Nmero de potncia

N m ero d e R eyn old s

Nmero de potncia versus Reynolds para diversos tipos de impulsores.

237

Atravs da Figura anterior, possvel identificar 3 zonas distintas:

- Regime laminar, correspondente a ReA < 10;


O logaritmo do n de potncia decresce linearmente com o aumento do logaritmo do n de
Reynolds da agitao o declive da curva -1. A potncia necessria independente
da massa especfica do fluido, mas directamente proporcional a sua viscosidade.

- Regime de transio (hlices: 10 < ReA < 1000; turbinas: 10 < ReA < 10000); no h
relao constante entre NP e ReA.

- Regime turbulento, correspondente a ReA > 10000;


O NP constante, independentemente do ReA o declive zero.

238

Clculo da potncia casos especiais


Em diversas zonas do grfico NP = f(ReA), possvel definir relaes entra os nmeros
adimensionais.
Regime laminar no h vrtices, pois ReA < 300 (a = -1 inclinao da curva da funo
de potncia)

KL
3
2
NP =
PA = K L N DA
Re A
Regime turbulento no h vrtices, no varia com ReA = constante (KT)

N P = K T PA = K T N DA
3

Os valores de KL e KT dependem do tipo de impulsor utilizado e pode ser encontrados


tabelados para algumas dimenses de reactores.
239

Agitao de fluidos no-Newtonianos


Tal como foi visto anteriormente, o valor do nmero de Reynolds da agitao depende da
viscosidade do meio.

dv
mdio = C 0.N
dr

C0 constante de proporcionalidade
N velocidade de rotao

Exemplo:
Para agitao de fluidos pseudo-plsticos C0: Ps planas (11-12); Ps curvas (7); Turbina
de lminas planas (11); Hlice (10); ncora (20-25).
2n
dv
D
(
N
)

n 1
A
mdio = 11.N ap = K c (11N )
Re A =
dr
K C (11) n 1
2

Calcular a potncia de agitao atravs das curvas NP em funo de ReA, ou atravs


de correlaes empricas.
240

Em sistemas no arejados tambm se usa a correlao:


x DA

N P = C1 (Re i )
Dt

ht

Dt

Larguras das
lminas

Dimetro do
tanque

Sendo:

DA N n

0.1K C 6n + 2
2

Re i =

2n

Valores empricos para diferentes intervalos de nmeros de Reynolds


Rei < 10

10 < Rei < 50

Rei > 50

C1

32

11

-0.9

-0.4

-0.05

-1.7

-1.7

-1.2

0.4

0.5

0.9
241

Agitao de sistemas arejados


O consumo de potncia de um agitador num sistema arejado diminui relativamente a
um sistema sem arejamento. Tal deve-se essencialmente diminuio da massa
especfica do lquido, devido presena de bolhas de gs, em particular em torno do
impulsor.

A diminuio do consumo de potncia no sistema arejado relativamente ao no arejado


((PA)G/PA) varia entre 0.3 e 1.0 (neste caso no afectado), dependendo do tipo de
impulsor e da taxa de arejamento.
Esta correlao pode ser terminada a partir de diagramas.
Alternativamente, a potncia consumido num sistema arejado pode ser calculada a partir
de correlaes empricas, de acordo com o nmero de Reynolds da agitao, e
dependendo do geometria do tanque (C).

PAG

PA 2 NDA3

= 0.15
0 .56
Q
G

0 .45

PAG potncia de agitao com arejamento


PA potncia de agitao sem arejamento
QG caudal volumtrico de gs
C = 0.15
N velocidade de agitao
242
DA dimetro do impulsor

Potncia de agitao de suspenses slidas


O consumo de potncia na agitao de suspenses slidas pode ser calculado atravs da
correlao:
S massa especfica da suspenso
1/ 2

D
PA = g . S .VS .ut .(1 ) 2 / 3 . t .e 4.35
DA

VS volume da suspenso
Dt dimetro do tanque
DA dimetro do impulsor
= (volume de lquido)/(volume total da
suspenso)
= (HL-HA/Dt)-0.1

No caso de o movimento das partculas (partculas

HL altura de lquido no tanque

pequenas e/ou pouco densas) na suspenso no

HA distncia do impulsor ao fundo do


tanque

agitada se dar em regime laminar:

g ( P ) DP
ut =
18

ut velocidade terminal das partculas em


suspenso

P massa especfica das partculas


DP dimetro das partculas
massa especfica do lquido
viscosidade do lquido

243

Correlao entre o n
de potncia e o n de
Reynolds

para

agitadores tipo turbina


de

Rushton,

hlice.

Doran (1995).
244

Factor (fc) de correco para sistema com similaridade no-geomtrica:

( Dt / Di ) * ( H L / Di ) *
fc =
( Dt / Di )( H L / Di )

Valores tabelados (dependem do tipo de impulsor).

245

NQg =

Qg
ND 3
246

Formao de espuma

247

Controlo da formao de espuma


A espuma formada pela absoro de protenas desnaturadas na interface gslquido.
Efeitos da formao excessiva de espuma:
Contaminao e bloqueio dos filtros de sada de ar;
Crescimento e lise celular na espuma;
Reduo da produtividade;
Aumento da presso no bio-reactor (perda de meio, danos ao reactor).
O controlo poder ser efectuado atravs da adio de agentes antiespumantes baseados
em silicone ou leos vegetais que desestabilizam a espuma pela reduo da tenso
superficial.
Sensores

Antiespumante

248

Factores que afectam a formao/remoo de espuma:


Meio de fermentao: meios ricos em protenas tendem a formar mais espuma;
Produtos excretados durante o processo. Muitas clulas produzem tensioactivos;
Elevadas taxa de arejamento e velocidade de agitao;
Volume livre no reactor: em sistemas nos quais a espuma formada facilmente, o
volume de trabalho deve ser reduzido para facilitar o controlo de espuma. Quanto maior o
volume livre, maior a probabilidade da espuma colapsar por causa do seu prprio peso;
Temperatura: em reactores de laboratrio uma temperatura mais baixa pode ajudar no
controlo da espuma. A densidade da espuma aumenta quando ela se move de uma regio
mais quente para a regio fria, causando o colapso da espuma;
Sistemas mecnicos antiespuma: impulsor de alta velocidade. A bolha puxada
para o impulsor, colapsando por aco de foras mecnicas. Em pequenos reactores de
laboratrio utilizado equipamento que emite ultrasons, gerando vibraes de alta
frequncia responsveis por colapsar as bolhas da espuma;
Antiespumantes: Estes agentes podem actuar baixando a tenso superficial, criando
presso na interface, ou por competio com o agente formador de espuma..

249

Mistura

250

Mistura
Mistura um processo que aumenta a homogeneidade de um sistema.

A mistura caracteriza-se por dois parmetros:


A escala da mistura dimenso mais pequena para a qual aceite a no homogeneidade
( sempre menor que a dimenso do sistema e maior que as partculas mais pequenas
presentes no sistema) quando se utilizam amostras ou sondas, a escala igual ao
tamanho da amostra ou da sonda ou zona de deteco da sonda;
A intensidade da mistura desvio de completamente misturado (s possvel para um
tempo infinito).

Tempo de mistura tempo necessrio para se atingir uma certa intensidade de


mistura a uma escala determinada.

251

Mecanismos de mistura
Corte a mistura ocorre por aco de camadas do fluido, deslocando-se ao longo umas
das outras (ocorre em fluxo laminar);
Troca partculas movem-se aleatoriamente (ocorre em fluxo turbulento);
Difuso difuso molecular.

Modelizao da mistura
Para a modelizao da mistura em bio-reactores necessrio conhecer diversas
caractersticas do sistema, destacando-se:
Tempo de residncia (tR) mdio dos elementos do lquido;
Concentrao do componente numa determinada posio num determinado
tempo;
Direco axial e velocidade mdia na direco axial;
Nmero de Bodenstein (razo entre o fluxo mssico por conveco e o fluxo
mssico por disperso).

252

Mistura de lquidos miscveis

Se o escoamento for turbulento a mistura bastante rpida.


Nesta situao, o sistema de agitao produz correntes de altas velocidades e o
fluido misturado melhor prximo ao impulsor, devido alta turbulncia. Como as
correntes se movem na direco das paredes, ocorre uma mistura radial, porm essa
mistura pequena na direco do fluxo. Quando o fluido completa uma volta, ele retorna
ao centro do agitador e ocorre novamente uma mistura intensa.

Clculos existentes indicam que, para que 99% da mistura ocorra,


necessrio circular o contedo do tanque 5 vezes.

253

A Figura abaixo apresenta o tempo de mistura ntT vs N`ReA.

Tempos de mistura em tanque agitado. Linhas a tracejado para tanques sem anteparos; linha slida para
tanque com anteparos (McCabe, 2001).
254

Uma correlao mais geral mostrada na Figura abaixo:

Correlao para tempos de mistura para lquidos miscveis em tanque agitado com turbina e com
anteparos (McCabe, 2001).

255

Adicionalmente s turbinas, outros tipos de impulsores so preferidos para a


mistura de certos lquidos, por exemplo:
Os impulsores tipo hlice apresentam menor tempo de mistura para a mesma
potncia quando usados para agitar um lquido viscoso, mas so mais lentos que as
turbinas para lquidos menos viscosos.
Os impulsores tipo hlice apresentam tempos de mistura maiores em comparao
com as turbinas, mas o consumo de potncia menor para a mesma velocidade de
agitao.
Quando bolhas de gases, gotas de lquidos, ou partculas slidas so dispersas num
lquido, o tempo de mistura para a fase contnua aumenta, mesmo se a comparao
feita com a mesma potncia fornecida. O efeito aumenta com a viscosidade, e para
lquidos viscosos o tempo pode ser duas vezes o normal, quando o hold-up do gs
10%.
256

Mtodos de medida da mistura


Mtodos acsticos e de laser

Mtodo condutimtrico o traador um electrlito. um mtodo largamente aplicado


em pequena escala, devido simplicidade e resposta rpida das sondas. No utilizado
em grande escala, devido necessidade de grande volumes de electrlito, alterando a
presso osmtica do meio.

Mtodo do pH um cido ou uma base so adicionados ao sistema, a resposta medida


na sonda de pH. utilizado em grande escala.

Mtodo da reaco qumica sem importncia para processos biotecnolgicos, uma vez
que a sua principal vantagem reside na possibilidade de efectuar medies escala
molecular (desnecessrias em bio-reaces).
257

Mtodo trmico - um dado volume de lquido aquecido e adicionado ao meio, sendo a


resposta medida por termopares. Aplicabilidade a larga escala limitada pelo grande volume
de traador que necessrio utilizar.

Mtodo do traador corado aplicabilidade difcil em grande escala e para situaes em


que ocorrem bio-reaces. Os traadores mais utilizados so azul de metileno, iodo/amido,
azul de timol e a fenolftalena.

Mtodo do traador radioactivo Pouca aplicabilidade, embora seja interessante em


grande escala, se as condies de segurana forem satisfeitas.

258

Esterilizao

259

Esterilizao

Para a preparao e cultura de microrganismos tem que se dispor de material


e de meios de cultura estreis, ou seja, desprovidos de microrganismos
viveis.

Esterilizao pelo calor seco utilizado quando se trabalha com materiais resistentes a
altas temperaturas (por exemplo, vidro). Para este efeito recorre-se a estufas que atinjam
temperaturas da ordem dos 160-180 C. Estas temperaturas vo promover a oxidao e a
desnaturao das protenas eliminando os seres vivos contaminantes. Contudo, apesar de
clulas vegetativas serem destrudas a menos de 100 C, os esporos podem ser muito
resistentes aos tratamentos trmicos.
A incinerao, consiste na queima directa do material pelo fogo (por exemplo, esterilizao
de ansas no bico de Bunsen, eliminao de lixos slidos dos hospitais)

260

Esterilizao por filtrao utilizada quando os produtos so danificados pelo calor


(por exemplo, antibiticos, vitaminas). Neste processo, os microrganismos so removidos por
passagem da soluo por uma membrana filtrante com poro nominal inferior s dimenses
bacterianas usuais (0.2 m).
A filtrao tambm utilizada na esterilizao do ar (por exemplo, uma cmara de fluxo
laminar possui um sistema de filtrao de ar por membrana).

Esterilizao por radiao as radiaes de curto comprimento de onda so utilizadas


na esterilizao de materiais sensveis ao calor.
Os raios gama e os raios X so radiaes com poder ionizante e de alterao de
compostos celulares. Estes raios tm elevado poder de penetrao sendo ideais para a
aplicao em objectos volumosos. No entanto, existem problemas tcnicos que dificultam a
sua aplicao corrente em microbiologia.
Os radiaes ultravioleta tm menor energia do que os raios X ou os raios gama, mas so
absorvidas por molculas, como o DNA, conduzindo a alteraes da estrutura molecular que
podero ser letais para os microrganismos.
261

O comprimento de onda com maior poder bactericida o de 265 nm. Este tipo de
esterilizao limitada a superfcies, uma vez que se tratam de radiaes pouco
penetrantes.
A radiao acstica de alta frequncia (ultra-sons) tambm , por vezes, utilizada na
esterilizao de materiais.
Os raios catdicos so feixes de electres com intensidade e velocidades elevadas,
circulando num tubo com vcuo. Estes feixes so utilizados na esterilizao de equipamento
cirrgico previamente lavado.

Esterilizao por tratamentos qumicos so vrios os agentes qumicos com potencial


antimicrobiano. A maioria destes agentes elimina as clulas vegetativas, mas no tm
qualquer efeito sobre as formas esporuladas dos microrganismos.
Alguns agentes qumicos como os tensioactivos (essencialmente aninicos e catinicos) e os
fenis, actuam por alterao da tenso superficial na interface clula/meio, por interaco
com lipopolissacridos.
Os lcoois desnaturam as proteinas e solubilizam lpidos celulares.
262

O cloro um dos agentes qumicos mais amplamente utilizado em esterilizao. O cloro


gasoso comprimido, sob a forma lquida, utilizado na desinfeco de gua de
abastecimento pblico. A destruio das clulas devida combinao do cloro com as
protenas e oxidao de compostos celulares provocada pelo oxignio libertado na
transformao do cido hipercloroso em cido clordrico.

Esterilizao pelo calor hmido o calor hmido destri rapidamente os


microrganismos por coagulao das protenas. O tempo de morte trmica, ou seja, o
intervalo de tempo necessrio para destruir clulas vegetativas ou esporos at ao nvel de
densidade pretendido (geralmente a reduo de vrias ordens de grandeza),
inversamente proporcional temperatura. A conjugao dos factores tempo-temperatura
depende das caractersticas do produto a esterilizar e da sua estabilidade trmica.
Nos autoclaves desenvolve-se uma atmosfera de vapor de gua sob presso, que permite a
subida da temperatura a valores superiores a 100 C (a autoclavagem normalmente levada
a cabo a 121 C, 1 bar de presso e durante 20 min).
263

O calor hmido evita a evaporao excessiva, quando se trata de meios lquidos e


solues, sendo o mtodo de esterilizao mais adequado a este tipo de materiais.
O tempo de tratamento trmico est relacionado no s com a temperatura, como tambm
com o volume de massa a esterilizar (tempo de penetrao do calor). Para a mesma
temperatura, os tempos de tratamento trmico so tanto maiores quanto maior for o volume.
Outros tipos de esterilizao pelo calor hmido so a tindalizao e a pasteurizao. Na
primeira os materiais so aquecidos a 100 C durante cerca de 30 min em 3 dias
sucessivos, intercalados com perodos de incubao a 35 C. Este processo permite a
germinao de esporos existentes na soluo, que resistem temperatura de 100 C,
eliminando depois as clulas vegetativas resultantes.
A pasteurizao no inactiva todos os microrganismos mas apenas as formas mais
sensveis ao calor, entre elas, algumas estirpes patognicas. Para tal, o material aquecido
a temperatura de morte trmica daqueles microrganismos durante um perodo de
tempo varivel com o produto a pasteurizar e a temperatura a utilizar (por exemplo, o
leite pasteurizado a 71.7 C durante 15 s ou a 63 C durante 30 min).
264

No considerado um processo de esterilizao


poder no haver uma eliminao total dos
contaminantes biolgicos!

Pasteurizao: processo recomendado para eliminar microrganismos patognicos e/


ou reduzir a populao de microrganismos presentes em determinados alimentos (por
exemplo, leite). Essencialmente, empregado para produtos que possuem caractersticas
organolpticas e nutricionais altamente susceptveis a altas temperaturas. Este tratamento
deve ser associado ao emprego de outros mtodos como refrigerao, adio de acar e/ou
aditivos e o uso de embalagens hermticas.
No caso do processamento de leite pode ser empregada a pasteurizao rpida (HTST high temperatures for short times) em que o produto aquecido a 72 C por 15 segundos
ou a pasteurizao lenta (LTLT - low temperature and long time) em que o leite exposto a
uma temperatura de 62 C por 30 minutos.
Entende-se por leite UHT (ultra high temperature) o leite que foi submetido, durante 2 a 4
segundos, a uma temperatura entre 130 C e 150 C, mediante um processo trmico de
fluxo contnuo, imediatamente arrefecido a uma temperatura inferior a 32 C e armazenado
sob condies asspticas em embalagens estreis e hermeticamente fechadas.

265

Esterilizao pelo calor seco

266

Esterilizao por Radiao

Efeitos da radiao dependentes de:

Comprimento de onda
Intensidade
Distncia da fonte
Durao

267

Esterilizao por Radiao


Mtodos comuns de controlo ()

268

Esterilizao por Radiao

Microondas agitao das molculas de gua Calor

Ultravioleta Quebra DNA, forma dmeros de timina

Radiaes gama ionizantes formao de radicais oxidantes livres

269

Cmara de fluxo laminar

Luz UV

270

Esterilizao por filtrao

0.2 m

Membrana de nitrocelulose

271

Esterilizao por filtrao

Suportes

272

Esterilizao por filtrao

Receptculo
com filtro estril

Colector

273

Agentes qumicos
No antibiticos

274

Modo de aco de alguns agentes qumicos

Parede celular
Membrana plasmtica
Ligao cruzada entre macromolculas

Intercalao de DNA

Interaco com grupos tiis (grupos sulfidrilo)

SH

Oxidao
275

Agentes qumicos

lcoois

Glutaraldedo

Clorhexidina

Halogneos

Metais pesados

Perxido de hidrognio

Fenis

Compostos quaternrios de amnio

Esterilizantes gasosos

276

Caractersticas de um desinfectante

Agir rpido mesmo na presena de substncias orgnicas;

Largo espectro de aco;

Penetrar no material desinfectado (a desinfectar) sem causar danos ao


mesmo;

Ser fcil de preparar e estvel;

Ser barato;

No ter odor desagradvel.

277

Efeito da combinao de diferentes agentes qumicos e


diferentes diluies

278

Esterilizao de um reactor vazio


Decorre por injeco de vapor:
A entrada de vapor fechada;
Injecta-se ar esterilizado para chegar a um equilbrio;
adicionado meio de cultura esterilizado.

Em alguns casos
necessrio um
pr-tratamento qumico!

Esterilizao de um reactor com meio de cultura


Durante o processo o meio de cultura deve ser agitado:
Deve circular vapor de gua atravs de uma serpentina at temperatura de 96-97
C; vlvulas, filtros e tubagens so esterilizados por circulao de vapor. Alternativamente,
dever ser efectuada uma injeco de vapor de gua a 100 C, directamente no meio de
cultura;
O reactor dever ser esterilizado a 121 C e 1 atm;
A injeco de vapor poder ser cortada, sendo a temperatura e presso
controladas atravs da serpentina;
No final, o arrefecimento conseguido atravs da circulao de gua a 279
uma
temperatura adequada.

A linha de esterilizao de gases deve ter um filtro esterilizado ou


esterilizao por vapor;

O sistema de agitao do meio de cultura deve ser colocado na


parte superior do sistema;

As linhas de inoculao, amostragem e de sada devem ser


esterilizadas pela passagem de vapor saturado;

A manuteno do bio-reactor deve incluir limpeza frequente e


eventual substituio de todas as vlvulas.

Os equipamentos automatizados trazem incorporados a funo de esterilizao no


software de base controlado pelo operador.
280

Cintica de esterilizao utilizao de calor


A velocidade de destruio trmica de um microrganismo segue uma lei cintica de 1 ordem:

dN
= K d .N
dt

N nmero de microrganismo no instante t


Kd constante da velocidade da reaco
t tempo

Kd varia com a temperatura de acordo com a lei de Arrhenius:

K d = K d 0 .e

E / RT

E energia de activao da reaco


R constante dos gases perfeitos
T temperatura absoluta

Os valores de E variam com o tipo de reaco:


5-20 Kcal/mole para enzimas
50-100 Kcal/mole para clulas vegetativas e esporos

281

A taxa especfica uma constante para cada estirpe num determinado meio e
depende fortemente da temperatura

Resistncia relativa de microrganismos ao calor


hmido (Fonseca & Teixeira, 2007)
Resistncia relativa
Clulas vegetativas de
bactrias e leveduras
Esporos de bactrias
Esporos
de
filamentosos

fungos

Vrus

1
3 106
2-10
1-5

Inactivao trmica dos esporos de Bacillus


stearothermophilus (Fonseca & Teixeira, 2007)
Relao entre a temperatura e a velocidade de morte
trmica para esporos de Bacillus stearothermophilus
(Perry & Green, 1999).

Temperatura ( C)

Kd

100

0.02

110

0.21

120

2.1

130

17.5

282

Tempo de reduo decimal


O tempo de reduo decimal o tempo necessrio para reduzir de 1/10 o nmero inicial de
microrganismos viveis (N/N0 =1/10).

N
1
K d DT
=
=e
N 0 10

Tempo de
reduo decimal

A relao entre o tempo de reduo decimal e o tempo t em geral dada por:

N0
1
t=
ln
Kd
N

Conhecendo Kd, podemos


determinar o tempo necessrio
para reduzir a populao
de N0 a N.
283

Esterilizao pelo calor

Tempo necessrio:
Inversamente proporcional temperatura empregada
Directamente proporcional carga microbiana no material
Dependente do tipo de microrganismos presentes

284

Tempo de reduo decimal


(D)

100
50C

% de viveis

10

70C
60C

0.1
tempo
285

Esterilizao pelo calor


Esporos
Clula vegetativa

esporo

286

Esporulao

Germinao

287

Esterilizao pelo calor


Resistncia de esporos

Cl. Vegetativa = menor D

% de viveis a 121C

100
Esporo
10

1
Cl. vegetativa
0.1

Tempo (min)

10
288

Esterilizao pelo calor


Factores determinantes da resistncia ao calor pelos esporos:

Intrnsecos
Baixo teor de gua
Pequenas protenas solveis em cido
cido dipicolnico
Ca2+

289

Esterilizao pelo calor

Factores determinantes da resistncia ao calor pelos esporos:

Extrnsecos
pH neutro
Altas concentraes de gorduras, protenas, acares
gua

290

Tempo de Esterilizao - mtodo tradicional de clculo


Das definies de DT e de Kd obtm-se:

2.303 E
log10 DT = log10
+
a
RT
Representando esta equao num grfico semi-logartmico:

log10 DT

1/T
291

Factor de Esterilizao Fo
Uma vez que a gama de temperaturas durante a esterilizao relativamente pequena,
pode-se, aproximadamente, simplificar o grfico anterior e representar log DT em
funo da temperatura T (C ou F) atravs de uma recta:

DT
10
Fo
1.0

z
0.1
T2

121.1 C

T1

T (C)

A temperatura de 121.1 C (250 F) muitas vezes considerada como temperatura de


referncia para muitas esterilizaes, sendo o respectivo tempo de destruio
designado por Fo (Factor de esterilizao).

292

Da definio de Fo resulta:

No
Fo = D121.1C log10
N

Os valores de Fo encontram-se tabelados para diversos microrganismos e


processos alimentares.
Um outro parmetro definido na Figura anterior :
Z - variao de temperatura que provoca uma variao de DT igual a 10
(aumento de temperatura necessrio para reduzir em 90 % o tempo de
esterilizao)
Assim, o declive da recta DT versus T nessa figura 1/Z.
Logo:

1
log10 DTo log10 DT = (T To )
Z

em que To a temperatura de referncia usada nos clculos de


esterilizao.
No caso de se considerar To = 121.1 C, obtm-se:

121.1T

DT = D121.1.10

293

O tempo de destruio temperatura T, simbolizado por F pode escrever-se,


ento, do seguinte modo:

F = DT .10

T 121.1

No
. log10
N

Relacionando com o tempo do processo (t), tem-se:

F = t . 10

T 121 . 1

(Z em C)

A esterilizao pode considerar-se eficaz quando o valor de F calculado por


estas expresses for igual ou superior ao valor de referncia Fo estabelecido
para o caso em estudo.

294

Valores de parmetros de destruio trmica de microrganismos

Microrganismo

Fo (min) Z (C)
Produto alimentar
________________________________________________________________________
Clostridium botulinum

0.1-0.3

8-11

Alimentos pouco cidos

Clostridium sporogenes

0.8-1.5

9-11

Carnes

Bacillus stearothermophilis

4.0-5.0

9.5-11

Leite e hortalias

Clostidium thermosaccharolyticum

3.0-4.0

7-10.5

Hortalias

Bacillus subtilis

3.0-4.5

4.1-7.2

Produtos lcteos

_______________________________________________________________________

No caso de a temperatura variar ao longo do processo de


esterilizao, a equao anterior toma a forma:

F =

10
0

T 121 , 1

dt
295

296

Mtodo baseado no factor de reduo de microrganismos


viveis
Quando a concentrao de um determinado microrganismo reduzida a um valor
suficientemente baixo (N) para garantir que no ocorrer crescimento dessa espcie
microbiana, condies que prevalecero durante o tempo e comercializao, considera-se
que o produto est comercialmente esterilizado no que respeita a esse microrganismo.
Considerando N0 a concentrao inicial no produto antes do tratamento trmico, o expoente
de reduo ( ) ser dado por:

N0
= ln
N
Quando

= 8, o processo reduz a concentrao de contaminante de um factor de 108.

O factor de projecto para reduzir o n de clulas a zero igual a infinito. Isto indica que
teoricamente impossvel garantir a eliminao de todas as clulas viveis.

Se uma nica clula permanecer vivel, todo o bio-reactor poder ficar


contaminado.

297

Processo a temperatura constante:


t

N0
dN
=
= K d 0 dt ln
= K d .t
N 0 dt
N
0
N

- factor de projecto/expoente de reduo

No n inicial de microrganismos antes do tratamento


N n de microrganismos ao fim do tempo t
t tempo do tratamento

Temperatura varia durante o processo:


t

N0
= ln
= K d 0 e E / RT dt
N
0
298

No entanto:
Os meios de cultura no possuem 1 nico tipo de microrganismo a ser destrudo;

Quando aplicamos a equao da cintica de destruio trmica a casos reais, o Kd


depende do meio de cultura (viscosidade, presena de slidos em suspenso ou material insolvel,
causando fouling nas superfcies de transferncia de calor) e da temperatura;

As clulas microbianas a serem destrudas podem estar na formar de flocos, biofilmes, ou


estarem protegidas por partculas slidas em suspenso;

Definio de esterilizao implica que todos os microrganismos sejam destrudos (N


= 0) equao da cintica de destruio no aplicvel!

299

Tempo de destruio trmica


O tempo de destruio trmica (t), para reduzir a populao numa proporo 10:1,
dado por:

2.303
t=
Kd
Clculo do tempo de destruio trmica baseado na probabilidade de falha
P = (n de microrganismos no destrudos/n total de microrganismos) x 100

sendo P a probabilidade de falha:

N0
1
ln
t=
Kd
P

300

Esterilizao em descontnuo
A esterilizao de meio de cultura num bio-reactor pode ser efectuada em descontnuo.
A esterilizao de um produto conseguida atravs de um plano temperatura vs tempo
convenientemente escolhido. Normalmente o processo de esterilizao compreende as
seguintes fases:
Aquecimento do produto at temperatura de esterilizao permanente (injeco
directa de vapor perfil de temperatura hiperblico; aquecimento por resistncia elctrica
perfil de temperatura linear; aquecimento por vapor circulante perfil de temperatura
exponencial);
Operao/esterilizao a uma temperatura permanente (usualmente 121 C);
Arrefecimento (usualmente, atravs da circulao de gua numa camisa ou serpentina
perfil de temperatura exponencial).

301

Temperatura

Permanncia

Numa
Aquecimento

esterilizao

em

descontnuo, as 3 etapas
contribuem para a reduo
do n de microrganismos
contaminantes.

Arrefecimento

Tempo

Diagrama temperatura em funo do tempo num processo de esterilizao em descontnuo.

302

As temperaturas adequadas para esterilizao em descontnuo podem ser obtidas atravs a


aplicao directa de vapor de gua, utilizao de sistemas de aquecimento elctrico ou
utilizao de permutadores de calor com gua a elevada temperatura ou vapor de
gua.

Numa esterilizao em descontnuo o factor de projecto dado por:

total = aquecimento + permanncia + arrefecimento

Usualmente, o tempo para esterilizao a temperatura constante um dos valores a


determinar num projecto. Este poder ser obtido atravs da seguinte expresso:

testerilizao

total aquecimento + permanncia + arrefecimento


=
=
Kd
Kd
303

Em bio-processos, a esterilizao em descontnuo efectuada essencialmente de 3


formas distintas:
Em cmaras pressurizadas (autoclaves);
Em caixas que rodam num autoclave esttico;
Em autoclaves rotativos.

Os processos rotativos so mais vantajoso relativamente aos estticos, devido melhor


eficincia de troca de calor e melhor uniformidade de tratamento.

Exemplo da esterilizao do leite: este aquecido at 80 C e depois transferido para


garrafas limpas e pr-aquecidas. As garrafas so depois tapadas, colocadas dentro da
cmara e esterilizadas entre 110 e 120 C durante 15 a 40 minutos. A cmara ento
arrefecida e pode ser carregada com uma nova carga.
Este mtodo tem a vantagem de aps a embalagem, no necessrio o manuseamento
304
assptico do produto. No entanto, o material das embalagens deve ser resistente ao calor.

Autoclave horizontal

Autoclave vertical
305

Manmetro
Sada de vapor
Vlvula para sada
de vapor

Porta
Cmara de
vapor

Termmetro

Vlvula de
segurana
Entrada de
vapor

306

Desvantagens da esterilizao em descontnuo

A temperatura alta mantida durante algum tempo poder alterar a composio do meio de
cultura;

Os sistemas tm usualmente uma baixa eficincia de troca de calor, aumentando o consumo


de gua e vapor);

Problemas de corroso (contacto bio-reactor/meio aquecido);

O tempo durante o qual processada a esterilizao um tempo no produtivo.

307

Consideraes em esterilizao em descontnuo


O ciclo total de esterilizao poder levar entre 3 a 5 horas, dependendo do tamanho do
fermentador.
Para fermentadores com volume superior a 100 m3, o tempo de esterilizao poder levar
cerca de 8 horas.
Alguns valores tpicos para as contribuies das vrias etapas do ciclo de esterilizao so:

Aquecimento / Total = 0.2


Permanncia / Total = 0.75
Arrefecimento / Total = 0.05
308

Consideraes em esterilizao em descontnuo


Na prtica, estes valores podero ser diferentes, sendo uma funo da rea de transferncia
de calor. No entanto, a maior contribuio para o processo de esterilizao derivado pela
poro de permanncia no ciclo.

t Permanncia

Permanncia
=
Kd

O ciclo de arrefecimento contribui pouco para o processo global.


Deve ser evitada a aplicao de perodos de aquecimento longos, pois a sua
contribuio para a destruio microbiana muito inferior aos seus efeitos nefastos
na decomposio de nutrientes do meio.
No s so destrudos nutrientes, mas tambm so formados produtos com potencial inibidor
do crescimento celular.
309

Esterilizao em contnuo
O meio recentemente preparado actua, geralmente, como fluido de arrefecimento;
Posteriormente, aquecido (mistura com vapor ou atravs de um permutador de calor);
Percorre a clula holding;
Sofre um arrefecimento gradual at chegar ao bio-reactor;
O tempo de residncia , geralmente, igual ao tempo de esterilizao.

310

Esterilizao em contnuo
Este processo apresenta algumas vantagens comparativamente ao modo de esterilizao em
descontnuo, nomeadamente:
Minimizao do espao requerido;
Reprodutibilidade do sistema;
Possibilidade de operao a alta temperatura e baixo tempo (HTST e UHT);
Requer menos vapor de gua (consequentemente menos gua para aquecimento),
pois recupera vapor do meio a esterilizar;
Sistema mais fcil de automatizar, requerendo menor trabalho do operador.

311

Uma esterilizao em contnuo (HTST e UHT), identicamente a uma esterilizao em


descontnuo, processa-se em 3 seces: aquecimento, permanncia a temperatura
contnua e arrefecimento.

Os mtodos mais utilizados em processos de esterilizao HTST e UHT so:


Transferncia de calor indirecta atravs de permutadores de calor (tubulares; placas;
superfcie raspada);
Processos combinados permutador de calor e sistemas de infuso ou injeco de vapor;
Transferncia directa de calor sistemas de infuso ou injeco de vapor.

312

Um tratamento trmico correcto requer que o fluido permanea um determinado tempo


temperatura de esterilizao, o que usualmente conseguido recorrendo a uma clula
externa chamada holding.

O tempo de residncia mdio numa clula holding dado por:

t Rpermanncia

L
=
u

L comprimento da clula holding


u velocidade de circulao

O factor de projecto poder ser obtido atravs da expresso:

permanncia

N0
= ln
= K d .t R permanncia = K d 0 .e E / RT .t R permanncia
N

Numa pasteurizao, uma clula holding consiste num tubo em espiral ou zig-zag, coberto ou
no por uma cpsula metlica que previne acidentes por contacto com a superfcie quente e
diminui as perdas de calor para o exterior. O comprimento do tubo e o caudal a escoar so
calculados de modo a que o tempo de residncia no tubo, o holding time, seja igual ao tempo
de pasteurizao requerido. Uma combinao adequada de permutadores de calor e de
clulas holding permite obter processos eficientes e economicamente optimizados.

313

O equipamento de esterilizao de um dado produto deve ser esterilizado antes do incio do


processo de tratamento do produto, de modo a evitar a sua contaminao (pr-esterilizao).

A pr-esterilizao envolve:
Tratamento com gua quente mesma temperatura a que se vai efectuar a
esterilizao do produto, com uma durao mnima de 30 minutos a partir do momento
em que atingida, em todas as partes da instalao, a temperatura pretendida.

Relativamente ao fluido de aquecimento, o mais usual a gua. No caso da pasteurizao,


utiliza-se gua a uma temperatura 2 a 3 C superior temperatura requerida pelo produto.
evitada a utilizao de vapor de gua devido grande diferena de temperaturas. O vapor de
gua utilizado para reaquecer a gua quente utilizada no processo.

314

Consideraes em esterilizao em contnuo

total permanncia
Desvio ao fluxo pisto ideal na clula holding
Backmixing contacto de elementos de volume j esterilizados com outros que ainda
podero conter clulas viveis.
Estes desvios so traduzidos pela extenso da disperso axial. O nmero de Peclet (Pe) da
disperso axial uma medida da importncia relativa do transporte de massa por conveco
e por disperso:

u.L
Pe =
Dz

u velocidade linear do escoamento;


L comprimento do reactor;
Dz coeficiente de disperso axial.

Por exemplo, um valor de Pe baixo significa disperso longitudinal significativa.


Existem diagramas que do uma aproximao do efeito do desvio ao fluxo pisto na
eficincia de esterilizao na clula holding.

315

Clculo do tempo de esterilizao pelo mtodo grfico

Mtodo de clculo:
1 Especificar o valor de P
desejado;
2 Determinar N0 no sistema:
3 Ler Kd.t a partir do grfico;
4 Sabendo o valor de Kd para o
microrganismo contaminante,
obtm-se o valor de t.

Mtodo de clculo:

1-P = 1-ln(N0/N)
Kt = Kd.t

316

Pasteurizao
Processo recomendado para eliminar microrganismos patognicos e/ou reduzir a
populao de microrganismos presentes em determinados alimentos (por exemplo,
leite).

Essencialmente,

empregado

para

produtos

que

possuem

caractersticas

organolpticas e nutricionais altamente susceptveis a altas temperaturas. Este tratamento


deve ser associado ao emprego de outros mtodos como refrigerao, adio de acar e/ou
aditivos e o uso de embalagens hermticas.
No caso do processamento de leite pode ser empregada a pasteurizao rpida (HTST high temperatures for short times) em que o produto aquecido a 72 C por 15 segundos
ou a pasteurizao lenta (LTLT - low temperature and long time) em que o leite exposto a
uma temperatura de 62 C por 30 minutos.
Entende-se por leite UHT (ultra high temperature) o leite que foi submetido, durante 2 a 4
segundos, a uma temperatura entre 130 C e 150 C, mediante um processo trmico de
fluxo contnuo, imediatamente arrefecido a uma temperatura inferior a 32 C e armazenado
sob condies asspticas em embalagens estreis e hermeticamente fechadas.
317

A pasteurizao uma esterilizao mais moderada, efectuada, em geral, a


temperaturas inferiores.
__________________________________________________________________________
Alimento
Objectivo
Objectivo
Condies mnimas
principal
secundrio
de pasteurizao
__________________________________________________________________________
pH < 4.5:
Sumo de fruta Inactivar enzimas
Destruir fungos
65 C (30 min); 77 C (1 min);
88 C (15 s)

Cerveja

pH > 4.5:
Leite

Destruir leveduras
indesejveis

65-68 C (20 min, garrafa);

72-75 C (1-4 min, 9-10 atm.)

Destruir patognicos

Destruir outros
microb. & enzim. 63 C (30 min); 71.5 C (15 s)
Ovo lquido
Destruir Salmonella spp.
Destruir outros
microb.
64.4 C (2.5 min); 60 C (3 min)
_________________________________________________________________________.

318

319

Unidade de Pasteurizao de Leite

320

Permutador
de Placas

321

Permutador Tubular

322

Permutador de Carcaa-e-Tubos

Fluido que entra


nos tubos

Fluido que entra


na carcaa

Sada dos tubos


Sada da carcaa
323

Permutador de Tubos Concntricos


Entrada na
seco anular

Sada do
tubo interno

Entrada no
tubo interno

Sada da
seco anular

324

Permutador de Superfcie
Raspada

325

Produo de Iogurte Batido

326

Esterilizao do ar
A esterilizao do ar de entrada e de sada de um bio-reactor tem a finalidade de prevenir a
sua contaminao.

Mtodos:
Em bio-reactores at aproximadamente 10 m3 utiliza-se filtrao.

Para bio-reactores maiores que 10 m3 a opo pela membrana torna-se muito cara.
Actualmente, utiliza-se vapor para a esterilizao.

327

Esterilizao Desinfeco Limpeza


Aplicao de procedimentos clean-in-place;

HACCP (Hazard analysis critical control points);

Definio
dos
procedimentos
fortemente
caractersticas da unidade processual.

dependentes

das

328

Resistncia aos mtodos de controlo de crescimento.

329