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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

Hongos presentes
en muestras de la
UNI
Trabajo realizado para el curso de
Microbiologa Ambiental
Delfin Vargas Ricardo Javier
Tasaico Salas Daniel Fernando

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Contenido
INTRODUCCIN.............................................................................................. 1
MARCO TERICO............................................................................................ 1
OBJETIVOS...................................................................................................... 3
MATERIALES Y MTODOS............................................................................... 4
RESULTADOS.................................................................................................. 5
DISCUSINES................................................................................................. 6
CONCLUSIONES.............................................................................................. 7
RECOMENDACIONES....................................................................................... 7
FUENTES DE INFORMACIN............................................................................8
ANEXOS.......................................................................................................... 8

INTRODUCCIN
La presencia de microorganismos en cada rincn del planeta es indiscutible,
y la Universidad Nacional de Ingeniera no es la excepcin. En esta
oportunidad, los alumnos del curso de Microbiologa Ambiental como parte
de su aprendizaje se propusieron determinar qu microorganismos estan
presentes en muestras de alimento y agua escogidas al azar. Con el fin de
aprender las distintas tcnicas de cultivo de microorganismos, as como su
reconocimiento por microscopa. Este trabajo se enfocar en la presencia de
Hongos en las muestras ya mencionadas.

MARCO TERICO
Los hongos constituyen un gran grupo de organismos, en este grupo estan
incluidos los mohos, las setas y las levaduras. Se han descrito
aproximadamente 100 000 especies de hongos y se estima que podran
existir hasta 1.5 millones de especies (Madigan et al, 2009).
Los hongos son quimiorgantrofos, normalmente tienen necesidades
nutricionales sencillas y la mayora son aerobios. Muchos hongos pueden

crecer en condiciones extremas de pH bajo o alta temperatura (hasta 62


gradios centgrados), lo que combinado con la facilidad de dispersin de las
esporas fngicas, hace que estos organismos sean contaminantes
habituales de alimentos, medios de cultivo y todo tipo de superficie.
La mayora de los hongos son multicelulares y forman un entramado de
filamentos conocidos como hifas (Fig.1). Las hifas estan formadas por
paredes celulare tubulares que rodean la membrana citoplasmtica.

Fig. 1. Hifas
del juntas
hongo sobre
Penicillium.
Fuente: y forman ovillos
Las hifas habitualmente
crecen
una superficie
wikipedia.org
compactos denominados colectivamente micelio o moho, que son visibles
fcilmente sin necesidad de microscopio (Fig. 2). La presencia de esporas
confiere al micelio un aspecto polvoriento.

Fig. 2. Colonias de
Aspergillus Fuente:
wikipedia.org

Algunos

hongos

forman

estructuras

reproductivas

macroscpicas

denominadas cuerpos fructificantes, en las que se producen esporas y


desde las cuales pueden dispersarse. Ej. Las setas (Fig. 3). Algunos hongos
crecen como organismos unicelulares estos se denominan levaduras.

Fig. 3. Cuerpo fructfero de Boletus edulis


Fuente: wikipedia.org
Agar Saubouraud Dextrosa
Medio de crecimiento no selectivo, utilizado para el cultivo de hongos,
particularmente aquellos asociados con infecciones cutneas (piel y pelo).
Tambin es til para el cultivo de levaduras. Los nutrientes fundamentales
de este medio son las peptonas, la casena y la dextrosa. Se puede lograr
selectividad agregandole clorafenicol y un pH cido que inhibe el
crecimiento y desarrollo bacteriano. Agente solidificante: Agar.

OBJETIVOS

Determinar qu tipo de microorganismos estan presentes en cinco

muestras de alimento y agua.


Preparar medios de crecimiento adecuado para el cultivo de distintos

organismos.
Realizar cultivos in vitro de distintos microorganismos.
Observar en microscopio las colonias de microorganismos cultivados,
utilizando la tcnica de tincin de Grahm.

MATERIALES Y MTODOS
Preparacin del medio
En un matraz erlenmeyer se mezcl 6.5 gramos de polvo de Agar
Sabouraud Dextrosa en 100 mL de agua destilada. Se agit la mezcla hasta
disolver el medio parcialmente y despus se procedi a calentar, agitando
frecuentemente durante 2 minutos para poder disolver completamente el
polvo. Luego el matraz fue taponeado con algodn y asegurado para evitar
su contaminacin post esterilizacin. Se coloc en el autoclave a

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por 15 minutos. Despus se dejo solidificar y se almacen en el refrigerador


por una semana. Las muestras que se probaron fueron: cebo de res, agua
del camote servido en el comedor universitario de la UNI, agua del grifo del
laboratorio, agua del grifo de la casa de un compaero y el aire circulante
en el laboratorio.
Cultivo
Se calent el matraz erlenmeyer para poder verter la solucin a las placas
petri, todo se realiz bajo los cuidados de desinfeccin del area de trabajo y
con un mechero al lado para esterilizar tanto la boca del matraz como el asa
de Khole. Se obtuvieron 5 placas petri con las muestras anteriormente
mencionadas y en cada una de ellas se procedi a la siembra por
agotamiento en las 5 placas petri. Con un Estilgrafo 0.1 se escribi en la
tapa de la placa petri el nmero de la muestra y se procedi a colocar las
placas en la incubadora por 24 horas a

37 . Pasado este tiempo se

sacaron las placas y se dejaron al aire libre por una semana.


Reconocimiento
Pasado los 7 das se realiz una observacin macroscpica y microscpica
de cada una de las placas. Para la observacin microscpica se utiliz un
microscopio ptico de espejo y se realiz tincin de Grahm en las muestras
1, 2 y 4. En la muestra 5 solo se realiz coloracin violeta.

RESULTADOS

Observaciones
macroscpicos
1)

Cebo de res

Formacin de abundantes colonias de

3 tipos .
Algunas con elevacin convexa, otra
en

2)

Agua de
camote

forma

elevada

irregular

de

diferentes tonalidades de color.


Todas fueron de textura cremosa con

un olor peculiar.
Formacin de solo 2 tipos de colonias.
Son de textura cremosa y de elevacin

convexa.
Aqu creci

el

mayor

nmero

de

colonias de hongos con respecto a las


-

3)

Agua de
manos

ninguna

Se encontr colonias en forma de

puntos.
Estas colonias son de textura cremosa
con un olor peculiar.

5) Aire de
laboratorio

creci

colonia.

Agua de la
caera de
laboratorio

4)

dems muestras.
A simple vista no

Presencia de 5 tipos de colonias: 3 de


textura algodonosa y dos de textura

cremosa.
Las 3 colonias algodonosas fueron de
diferentes colores: negro, marrn y

meln.
En la colonia

de

color

meln

se

observ un punto caracterstico de


color naranja.

Observaciones
microscpicas
Se observ puntos de color morado.

1)
Cebo
Res

de
No se logr observar algo.

2)
Camote
de
comedor
UNI
3)
Agua
de
la caera de
laboratorio

No se observ nada porque no crecieron


hongos en esta muestra

Se observ puntos de color morado.

4)

Agua de
manos
No se logr observacin alguna

5)
Aire de
laboratorio

DISCUSINES
De acuerdo con los resultados obtenidos y contrastando con la teora vale
decir lo siguiente:

Los hongos tipo levaduras tienen un aspecto cremoso de color


amarrillo lechoso y con un olor peculiar; este tipo de hongos
reaccionan positivamente a la coloracin gram, o sea en el
microscopio se vern de color morado. Con este breve resumen de
teora, se puede decir con toda seguridad que en la muestras 1, 2,

3 y 4 encontramos solo hongos tipo levadura.


Los hongos tipo miceliales presentan un aspecto algodonoso
(filamentoso), para ver este hongo en microscopio no se hace la
tincin gram, pero para poder observar la presencia de estos se
utiliza solo el cristal violeta vindose filamentos coloreados; de
acuerdo con lo propuesto, este tipo de hongo se encontr solo en
la muestra 5.

De acuerdo con el punto de vista convergente de los experimentadores


estos resultados obtenidos no son del todo exactos, ya que existen muchos
factores que alteran a las muestras, como por ejemplo al momento de hacer
el muestreo, pueda ser que se expusieron indebidamente las muestras
contrayendo microrganismos que estn fuera de los parmetros estipulados.
Tambin se supuso que al no ver microrganismos en el microscopio de la
muestra 5 el microscopio del laboratorio no tiene la capacidad para poder
observar las hifas de estos hongos.

CONCLUSIONES
De este experimento se puede concluir que los hongos se encuentran en
todas partes, pero no son muy patgenos con respecto a los humanos.
Segn la tabla de resultados en la parte microscpica solo se vieron puntos
de color morado en las 3 primeras muestras; en la cuarta muestra no se

logr ver ni macroscpicamente ni microscpicamente, fue un resultado que


se esperaba ya que el agua de laboratorio debe ser estar libre de
microrganismos que pudieran daar los experimentos hechos en dicha
estancia.
En el resultado microscpico de la muestra 5 no se llen la tabla, debido a
que no se pudo observar ningn microrganismos en el microscopio.

RECOMENDACIONES

Se recomienda tener cuidado al momento de realizar la coloracin


gram, ya que al realizar incorrectamente la coloracin pueda ser

que no se observe muy bien en el microscopio.


Trabajar en condiciones aspticas en el laboratorio para evitar la

contaminacin de la muestra.
Utilizar microscopio en buenas condiciones con buena iluminacin
para poder observar distinguidamente los microrganismos a

estudiar.
Al momento de la toma de muestra, llevar al laboratorio en un

continente hermtico para evitar salirse de los parmetros.


Tener mucho cuidado al trabajar con microrganismos, ya que son
gradualmente patgenos.

FUENTES DE INFORMACIN
1. MADIGAN M. T., MARTINKO JOHN M., DUNLAP P. V., CLARK D. P. (2009)
Brock Biologa de los microorganismos. Duodcima edicin. Editorial
Pearson.
2. BBL Sabouraud Dextrose Agar. Consultado: 01/05/2014. Disponible en
: www.bd.com/resource.aspx?IDX=22894

ANEXOS

Calentamiento del medio congelado

Muestra 2: Camote. Hay presencia de levaduras


Muestra 5: Aire. Hay presencia de hongos
miceliales.

Muestra 1: Cebo de cerdo. Hay presencia de levaduras


Muestra 3: agua de laboratorio. No se observ
crecimiento de microorganismos

Muestra 4: Agua de cao. Hay baja presencia de levaduras.


La placa petri sin nmero es una muestra de agua de cao
contaminada durante la siembra. Se puede observar la
presencia de distintos hongos y en mayor cantidad.

Observacin microscpica de la muestra 1 (izquierda) y


muestra 4 (derecha)