SESIN: 7 8 ENZIMAS, BIOCATLISIS.

INHIBICIN ENZIMTICA

Q.F. Juan Salazar Snchez

BIOCATALISIS
-La biocatlisis.-Tambin conocida como catlisis enzimtica o
biotransformacin, es el uso de enzimas para catalizar reacciones qumicas,
como disciplina involucra el uso de biocatalizadores en la transformacin
qumica de la materia.
El compuesto que sufre la transformacin en estas condiciones se llama
sustrato.
Es importante sealar que los sustratos empleados en una reaccin
biocataltica no son necesariamente aquellos que son transformados por la
enzima en las reacciones que forman parte del metabolismo del organismo
del cual proviene la misma.
-Biocatalizadores.- Son molculas de origen biolgico con actividad
cataltica, aplicadas a alguna reaccin sobre algn compuesto en particular.

Reacciones Qumicas
Catabolismo
Anabolismo

Anfibolismo

Anfibolismo

ENZIMAS
-Las enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los seres vivos.
-Las enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reaccin,
aumentan notablemente su velocidad.
-No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que solamente aceleran las que
espontneamente podran producirse.
-Ello hace posible que en condiciones fisiolgicas tengan lugar reacciones que sin
catalizador requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o pH.
-En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos,
las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos.
-Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas
significativas.
A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas.

ESTRUCTURAS DE LAS ENZIMAS

ESTRUCTURAS DE LAS ENZIMAS

ESTRUCTURAS DE LAS ENZIMAS

COMPOSICIN QUMICA DE LAS ENZIMAS

-En la composicin qumica de las enzimas se consigui cristalizar la ureasa, enzima que
transforma la urea en anhdrido carbnico y amoniaco, y demostrar que era una
sustancia proteica.
-Posteriormente fueron aisladas otras enzimas en forma pura, cristalina, demostrndose
siempre la presencia de una protena, simple o conjugada.
-Cuando los anlisis qumicos demuestran que la enzima es una protena conjugada,
pueden distinguirse en los dos partes bien diferenciados:
.El grupo prostetico (Coenzima)
.La protena (Apoenzima)

NOMENCLATURA
DE
LAS
ENZIMAS
-Una trivial.- Es la reaccin que catalizan (peptidasas hidrolizan enlaces
peptdicos, lipasas hidrolizan lpidos, oxidasas oxidan diversos compuestos,
etc.).

-La clasificacin sistemtica.- Consta de una serie de cuatro nmeros

asignados por la Comisin de Enzimas (EC, acrnimo de Enzyme Commission)
que siempre van antepuestos por la sigla EC y separados por puntos. El primer
nmero indica el tipo de reaccin que la enzima cataliza y las divide en seis
clases. El segundo nmero (subclase) y el tercer nmero (sub-subclase)
caracterizan la reaccin con mayor precisin y el cuarto nmero es un nmero
de serie particular para la enzima. Por ejemplo, las lipasas de triglicridos son
EC 3.1.1.3. Esto significa que pertenecen a la clase 3 (hidrolasas), subclase 1
(acta sobre uniones ster), sub-subclase 1 (hidrlisis de steres derivados de
cidos carboxlicos) y nmero de serie 3. Para la clasificacin completa de un
biocatalizador, adems de las nomenclaturas descriptas deber indicarse la
fuente de la enzima y el soporte si se encuentra inmovilizada.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS

-Nomenclatura actual.-La nomenclatura enzimtica est basada en 3

parmetros:
a.- Todas las enzimas deben de llevar el nombre del sustrato. Sustrato: parte
del sistema enzimtico, sustancia o compuesto qumico sobre la cual va actuar la
enzima es la sustancia o compuesto qumico que sufre la reaccin qumica.
b.- Las enzimas deben de llevar el nombre de la reaccin qumica catalizada
Oxidacin --------------------------oxidasa
Reduccin--------------------------reductasa
Hidrlisis----------------------------hidrolasa
Isomerizacin---------------------isomeraza
Transferencia----------------------transferasa
Sntesis -----------------------------ligasa
Catlisis----------------------------liasa

c.- Terminacin asa

Ejemplo: Glucosa oxidasa.
Las enzimas se identifican por 4 dgitos:
El primer digito se refiere a la clasificacin general, va
del uno
El segundo dgito se refiere a la clase de enzima.
El tercer dgito es la subclase, se refiere a la reaccin
qumica especfica que cataliza la enzima
El cuatro dgito se refiere al nmero progresivo de orden
de acuerdo a su identificacin.

Clasificacin de las enzimas

Clasificacin sistemtica de las enzimas segn la IUBMB.

PRINCIPALES 6 CLASES DE ENZIMAS

.Se clasifican de acuerdo al tipo de reaccin que
catalizan:

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Oxidoreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas

PRINCIPALES 6 CLASES DE ENZIMAS

xido reductasas

Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y las

reducciones biolgicas que intervienen de modo fundamental en los
procesos de respiracin y fermentacin.
Son importantes a nivel de algunas cadenas metablicas, como
la escisin enzimtica de la glucosa, fabricando tambin el ATP,
verdadero almacn de energa. Extrayendo dos tomos de
hidrgeno, catalizan las oxidaciones de muchas molculas
orgnicas presentes en el protoplasma; los tomos de hidrgeno
tomados del sustrato son cedidos a algn captor.

PRINCIPALES 6 CLASES DE ENZIMAS

Transferasas
Estas enzimas catalizan la transferencia de una parte de la molcula
(donadora) a otra (aceptora). Su clasificacin se basa en la
naturaleza qumica del sustrato atacado y en la del aceptor.
Este grupo de enzimas actan sobre los sustratos mas diversos,
transfiriendo grupos metilo, aldehdo, glucosilo, amina, sulfat, sulfrico,
carboxilo, carbonilo, fosforilo y cido (RC = o).
Los nombres comunes triviales suelen incluir el prefijo trans. Como
ejemplo podemos nombrar
las transcarboxilasas, transmetilasas y transaminasas.
Ejemplo: Enzima Hexoquinasa
Glucosa + ATP

Glucosa Fosfato + ADP

PRINCIPALES 6 CLASES DE ENZIMAS

Hidrolasas
Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las grandes
molculas del protoplasma, como son la de glicgeno, las grasas y las
protenas.
La accin cataltica se expresa en la escisin de los enlaces entre
tomos de carbono y nitrgeno (C-N) o carbono oxigeno (C-O);
Simultneamente se obtiene la hidrlisis (reaccin de un compuesto con el
agua) de una molcula de agua. El hidrgeno y el oxidrilo resultantes de la
hidrlisis se unen respectivamente a las dos molculas obtenidas por la
ruptura de los mencionados enlaces.
A este grupo pertenecen protenas muy conocidas: la pepsina, presente
en el jugo gstrico, y la tripsina y la quimiotripsina, segregada por el
pncreas. Desempean un papel esencial en los procesos digestivos,
puesto que hidrolizan enlaces ppticos, estricos y glucosdicos.

PRINCIPALES 6 CLASES DE ENZIMAS

Liasas
Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces entre
tomos de carbono, o bien entre carbono y oxgeno, carbono y
nitrgeno, y carbono y azufre dejando enlaces dobles, pero tambin
agregan grupos a los enlaces dobles. Las liasas catalizan reacciones en
las que se elimina grupos (por ejemplo H2O, CO2 y NH3) para formar un
doble enlace o se aaden a un doble enlace. Los ejemplos
son liasas, descarbolasas,hidratasas, deshidratasas, desaminasas y sint
asas.
Algunas liasas actan sobre compuestos orgnicos fosforados muy
txicos, escindindolos; otros separan el carbono de numerosos
sustratos

Isomerasas
Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es decir, de
idntica formula emprica pero con distinto desarrollo.
Son las enzimas que catalizan diversos tipos de isomerizacin,
sea ptica, geomtrica, funcional, de posicin, etc.
Ejemplo:
Enzima Piruvato descarboxilasa

Se dividen en varias subclases.

Las racemasas y las epimerasas:
Actan en la racemizacin de los aminocidos y en la
epimerizacin de los azcares. Las primeras son en realidad
pares de enzimas especficas para los dos ismeros y que
producen un solo producto comn.

Las isomerasas cis trans:

Modifican la configuracin geomtrica a nivel de un doble

ligadura. Las xido reductasas intramoleculares catalizan la
interconversin de aldosas y cetosas, oxidando un grupo CHO y
reduciendo al mismo tiempo al C = O vecino, como en el caso
de la triosa fosfato isomerasa, presente en el proceso de
la gluclisis; en otros casos cambian de lugar dobles ligaduras,
isopentenil fosfato isomerasa, indispensable en el cambio
biosintico del escualeno y el colesterol. Por fin las transferasas
intramoleculares (o mutasas) pueden facilitar el traspaso de
grupos acilo, o fosforilo de una parte a otra de la molcula, como
la lisolecitina acil mutasa que transforma la
2 lisolecitina en
3 lisolecitina, etc.

 Algunas isomerasas actan realizando inversiones muy complejas,

como transformar compuestos aldehdos en compuestos cetona, o
viceversa.
Estas ltimas desarrollan una oxidorreduccin dentro de la propia
molcula (oxido reductasa intramoleculares) sobre la que actan,
quitando hidrgeno, a algunos grupos y reduciendo otros; actan
ampliamente sobre los aminocidos, los hidroxicidos, hidratos de
carbono y sus derivados.

Nomenclatura

Cofactor enzimtico
Un cofactor enzimtico.- Es un componente no proteico,
termoestable y de baja masa molecular, necesario para la accin
de una enzima. El cofactor se une a una estructura proteica
denominada apoenzima, y a este complejo se le denomina
holoenzima, es el complejo apoenzima-cofactor.
Entre los cofactores mencionables se encuentran: iones metlicos
(Fe2+, Cu2+, K+, Mn2+, Mg2+, entre otros) y molculas
orgnicas, denominadas coenzimas.

Las coenzimas
Las coenzimas.- por lo general son vitaminas

(vitaminas B, vitamina C, por ejemplo), la deficiencia

de las vitaminas dentro de un organismo, provoca la
deficiencia en enzimas y por ende hay falta de
reacciones indispensables. Aquellos cofactores que
estn covalentemente unidos a la apoenzima son
denominados grupos prostticos, ya sean orgnicos
(coenzimas) o inorgnicos.

El ion metlico
El ion metlico.- Puede actuar como:
Centro cataltico primario.
Grupo puente para reunir el sustrato y la enzima,

formando un complejo de coordinacin.

Agente estabilizante de la conformacin de la

protena enzimtica en su forma catalticamente

activa.
Las enzimas que precisan de iones metlicos se
llaman a veces metaloenzimas.

CINTICA ENZIMTICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y de la
especificidad puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos
casos no es necesario purificar o aislar el enzima.
La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc., y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad
mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin
de los productos o la desaparicin de los reactivos.

CINTICA ENZIMTICA
En funcin del tiempo se obtiene la llamada curva
de avance de la reaccin, o simplemente, la
cintica de la reaccin. A medida que la reaccin
transcurre, la velocidad de acumulacin del
producto va disminuyendo porque se va
consumiendo el sustrato de la reaccin. Para evitar
esta complicacin se procede a medir la velocidad
inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la
reaccin es igual a la pendiente de la curva de
avance a tiempo cero. De esta forma, la medida de
v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del
total del sustrato, de forma que pueda considerarse
la [S] como esencialmente constante. Adems, en
estas condiciones no es necesario considerar la
reaccin inversa, ya que la cantidad de producto
formada es tan pequea que la reaccin inversa
apenas ocurre.

CINTICA ENZIMTICA
Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin
inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo
la cantidad de enzima constante.
Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a
la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden. A
altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya
no depende de [S]0. En este punto, la reaccin es de orden cero y la
velocidad es mxima (Vmax).

CINTICA ENZIMTICA
.En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es
independiente de la concentracin de sustrato.
v=k
.En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos es
directamente proporcional a la concentracin del sustrato.
v = k [A].
As, en la reaccin:
sacarosa + agua
glucosa + fructosa
La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la
concentracin de sacarosa. Dicho matemticamente, donde [A] es la concentracin de
sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad.

.Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del

producto depende:
1. de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de condensacin)
v = k [A1] [A2]
2.del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (reaccin de dimerizacin)
v = k [A]2

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente
ocurren en dos etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en
la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando
el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y
tambin reciben el nombre de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto,
podemos afirmar que:
.v1 = k1 [E] [S]
.v2 = k2 [ES]
.v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que
la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
-Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado
estacionario, segn la cual la concentracin del complejo
enzima-sustrato es pequea y constante a lo largo de la
reaccin.
-Por tanto, la velocidad de formacin del complejo
enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociacin
(v2+ v3):v1 = v2 +v3
Adems, como [ES] es constante, la velocidad de
formacin de los productos es constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.
Como v1=v2+v3, podemos decir que:
k1 [S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]
Despejando [ES], queda que: siendo, en donde la
expresin (k2+k3)/k1 se ha sustituido por KM, o constante
de Michaelis-Menten.

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
-Hay enzimas que no obedecen la
ecuacin de Michaelis-Menten.
-Se dice que su cintica no es Michaeliana.
-Esto ocurre con los enzimas alostricos,
cuya grfica se observa donde [S] no es
una hiprbola, sino una sigmoide.
-En la cintica sigmoidea, pequeas
variaciones en la [S] en una zona crtica
(cercana a la KM) se traduce en grandes
variaciones en la velocidad de reaccin.

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
.La representacin grfica de la

ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente

a [S]0) es una hiprbola.
.La Vmaxcorresponde al valor mximo al
que tiende la curva experimental, y la
KM corresponde a la concentracin de
sustrato a la cual la velocidad de la
reaccin es la mitad de la Vmax.

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Una molcula de enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma
velocidad. Su actividad puede estar modulada por:

cambios en el pH

cambios en la temperatura

presencia de cofactores

las concentraciones del sustrato y de los productos finales

presencia de inhibidores

modulacin alostrica

modificacin covalente

activacin por proteolisis

isoenzimas

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

-Las enzimas poseen grupos qumicos ionizables

(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos.
-Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga
elctrica positiva, negativa o neutra.
-Como la conformacin de las protenas depende, en
parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la
conformacin ser la ms adecuada para la actividad
cataltica.

-Este es el llamado pH ptimo.

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

-La mayora de las enzimas son muy sensibles a los

cambios de pH.
-Desviaciones de pocas dcimas por encima o por
debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su
actividad.
-As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la
ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10.
-Como ligeros cambios del pH pueden provocar la
desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han
desarrollado sistemas ms o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiolgicos

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE

LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
-En general, los aumentos de temperatura aceleran las
reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad
de reaccin se duplica.

-Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general.

-Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor.
-La temperatura a la cual la actividad cataltica
es mxima se llama temperatura ptima .
-Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad
de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado
por la prdida de actividad cataltica debida a la
desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica
decrece rpidamente hasta anularse.

INHIBICIN ENZIMTICA
La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada
completamente por la accin de ciertas sustancias a las cuales se las
conoce con el nombre genrico de inhibidores enzimticos.
La inhibicin enzimtica es de gran importancia fisiolgica, ya que a
veces la inhibicin de una sola enzima que forma parte de una cadena de
reacciones metablicas puede inhibir por completo a todo el proceso
metablico involucrado.

Los inhibidores pueden clasificarse en dos grandes grupos:

1) Reversibles
i) competitivos
ii) no competitivos
iii) acompetitivos
2)Irreveversibles

1.-Inhibicin reversible: Unin no covalente de un inhibidor a la enzima

i.-Competitiva.-Unin del inhibidor al centro activo del enzima, compite con el
sustrato. Ejm: La intoxicacin con etilenglicol o metanol se trata con etanol.
ii.-No competitiva.-Unin del inhibidor a un sitio distinto del centro activo, no
compite con el sustrato. Ejm: PETT 2 es un inhibidor de la Transcriptasa
inversa
iii.-Acompetitiva.-El inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo que el
sustrato, sin embargo la unin del inhibidor afecta la unin del sustrato y
viceversa. Ejm:la glucgeno fosforilasa.

2.-Inhibicin irreversible: Unin covalente del inhibidor al enzima. Casi todos

son sustancias txicas ( naturales o sintticas ).Ejm: La penicilina inhibe la
sntesis de la pared bacteriana y la aspirina inhibe la sntesis de la PG.

(i)

( ii )

( iii )

a) Efecto del pH sobre la

actividad enzimtica
La mayora de las enzimas tienen un pH caracterstico al cual su actividad es
mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye.

En muchos casos los perfiles de actividad de las enzimas en funcin

del pH son acampanados. En otros casos no.
La relacin del pH con la actividad de la enzima depende del
comportamiento cido-base de la misma, as como de otros factores difciles
de analizar de forma cuantitativa.
El pH ptimo de una enzima no es necesariamente idntico al pH de su
entorno intracelular normal, el cual puede hallarse a su vez en la pendiente
ascendente o descendente de la curva. Por eso la relacin pH-actividad de
una enzima puede constituir un factor en el control intracelular de su
actividad.

b) Efecto de la temperatura sobre

las reacciones enzimticas
Al igual que sucede con la mayora de las reacciones qumicas, las
reacciones enzimticas incrementan su velocidad con la temperatura.
La velocidad de muchas reacciones enzimticas se duplica,
aproximadamente por cada 10 1C de aumento de la temperatura.
Cuando se representa la actividad cataltica respecto a la temperatura se
debe a que las enzimas, al ser protenas, se desnaturalizan por accin del
calor y se inactivan a partir de cierto punto. Luego la aparente temperatura
"ptima" viene determinada por estos dos procesos:
1) El incremento habitual de la velocidad de la reaccin con la
temperatura.
2) El incremento en la desnaturalizacin trmica de la enzima al
sobrepasar una temperatura crtica.
A partir de los 55-60 1C la mayor parte de las enzimas se inactivan. Sin
embargo, las enzimas de bacterias termoflicas siguen siendo activas a
temperaturas altas

c) Efecto de los metales sobre las

reacciones enzimticas
-Numerosos metales monodivalentes son necesarios para la
actividad enzimtica de diversos sistemas. Destacan entre ellos los
siguientes: K+, Mn++, Mg++, Ca++, Fe+++, Cu+, Cu++, etc. A
menudo el metal, a estas condiciones, es el centro que permite la
unin conjunta del sustrato, de la coenzima y de la misma
apoenzima con la que forma quelatos al unirse con grupos cargados
elctricamente.

-Los metales como el hierro, el cobre y el molibdeno, actan a

menudo como transportadores de electrones y no se les puede
considerar activadores en el sentido estricto pues forman parte
integral del grupo prosttico.