III.

DATOS Y RESULTADOS:

TABLA N 2.Tabla de resultados para determinacin de Rf.

SISTEMAS

MEDIDAS TOMADAS

ACETONA PURA

Y(frente de solvente)= 5cm

X1(comp. Verde oscuro )=
5cm
Y(frente de solvente) = 5cm
X1(comp. Verde olivo) =0.8
cm
X2(comp. Verde claro)=1.2
cm
X3(comp. Amarillo) = 3 cm
X4(comp. Verde oscuro) =
1.6 cm
Y(frente de solvente) = 5.7
cm
X1(comp. Amarillo) = 1.1 cm

ACETONA- HEXANO

HEXANO PURO

DETERMINANDO RF PARA LOS DIVERSOS SISTEMAS:

Fig.N1.Proceso para colocar el cromatograma en el

1

disolvente

FIGURA N2. Cromatografa de capa fina.

Rf =

distanciarecorrida por un compuesto

distancia recorrida por el solvente

A) SISTEMA ACETONA PURA:

Rf =

distanciarecorrida por el compuesto verdeoscuro

=1
distanciarecorrida por laacetona

B) SISTEMA ACETONA HEXANO:

Rf =

distanciarecorrida por el compuesto verdeolivo

=0.16
distanciarecorrida por lamezcla acetonahexano

Rf =

distanciarecorrida por el compuesto verdeclaro

=0.24
distanciarecorrida por lamezcla acetonahexano

Rf =

distanciarecorrida por el compuestoamarillo

=0.6
distanciarecorrida por lamezcla acetonahexano

Rf =

distanciarecorrida por el compuesto verdeoscuro

=0.32
distancia recorrida por lamezclaacetonahexano

C) SISTEMA HEXANO PURO:

Rf =

distanciarecorrida por el compuesto amarillo

=0.19
distancia recorrida por el hexano
IV.DIAGRAMA DE FLUJO:

A) CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA:

silica gel.

colacar en una estufa.

lavar y secar los portaobjetos

op: disolcuion.

4 ml de H2O

agregar la papilla

a 150C por 70 min

Cond: amientantales

op: siembra del pigmento

cond: ambientales.
Forrar 3 vasos con papel filtro :

colocar las placas en los vasos.

n-hexano

n-hexano

acetona

+ 5 gotas de acetona

medir las distancias recorridas por el solvente

en la placas

B) CROMATOGRAFIA DE COLUMNAS:

poner algodon.

preparar el sistema, agregar hexano.

agragar poco a poco la alumina

pigmento

vacio

vacio

armar el sig. sistema

acetona

pigmento verde arrastrado

pigmento amarillo.

vacio

por la acetona.

arrastrado por el hexano.

V.OBSERVACIONES

Para la cromatografa de columna.

5

La almina acta como fase estacionaria durante la separacin de

los componentes del pigmento de la espinaca, adems la fase
mvil (n-hexano) que se adiciona de forma continua al sistema, el
cual permanece a baja presin, permite que el proceso sea ms
rpido identificando as los componentes de la muestra.
En muchas situaciones el proceso se da de forma lenta, a pesar
que est sometido a baja presin, por eso la adicin de pequeas
cantidades de acetona acelera el proceso; aunque el intervalo de
tiempo fue demasiado largo (110 minutos).
En el experimento se logra distinguir dos tipos de componentes,
cuya caracterstica principal y observable es en base al color que
presentan; y que conforme se va extrayendo la mezcla (n-hexano
y componente) en los tubos de ensayo, estas disminuyen su
concentracin en cada extraccin sucesiva.
El no empleo de la arena para la presente experiencia se debi a
que la arena se hallaba muy contaminada.

Para la cromatografa de capa fina

El sistema donde se lleva a cabo el proceso permanece cerrado

(aunque solo es una aproximacin), para evitar que la solucin
(fase mvil) mediante sus vapores logre separar de forma efectiva
los componentes de la muestra.

Durante este proceso la muestra va formando un camino de

recorrido no homogneo, es decir, se aprecia una degradacin
paulatina del color de la siembra, debido a las diferentes
velocidades de desplazamiento que presentan.

El tiempo de separacin es aproximadamente 2 a 5 minutos, en el

seguimiento del experimento, no es notorio el color de los
componentes, pues se aprecia puntos de concentracin de similar
color pero en diferentes posiciones, con lo cual puedes hallar las
velocidades de desplazamiento de los componentes.

VI.CONCLUSIONES:
Considerando que las condiciones de operacin durante los
experimentos se mantienes constantes, concluimos:

La cromatografa de columna se lleva a cabo en mayor tiempo que

la cromatografa de capa fina, es decir la velocidad de separacin
es demasiado lenta, respecto a la segunda, pero permite distinguir
claramente los componentes mediante la coloracin.
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Las propiedades fsicas y qumicas que presenta una muestra es

de vital importancia en la identificacin de los componentes de la
misma, ya que estas son de similar naturaleza y comportamiento
y por ende permiten percibir las caractersticas principales de la
muestra (pigmento).
La naturaleza de la fase estacionaria o absorbente y mvil o
diluyente, es de suma importancia en la cromatografa, ya que
definen la ocurrencia del proceso y la identificacin de los
componentes, adems podemos decir que la propiedad ms
notable, es el color caracterstico que presentan.
Las diferencias que pueden verse al usar en fase estacionaria
silica gel o almina y la fase mvil hexano o acetona son
explicadas por las fuerzas de Van Der Waals diferenciadas, es
decir las pequeas diferencias en la polaridad de la molcula en
distintas fases de la molcula generan estas diferencias.
Las cromatografas son un grupo de tcnicas de separacin
selectiva de molculas.
En la cromatografa de capa fina, la fase estacionaria (silica gel) es
polar y el liquido (eluyente) donde est inmerso la placa es apolar
orgnico.
Se puede comprobar y ver como en la cromatografa de columna
las molculas son separadas en base a la afinidad que tienen con
ciertos solventes orgnicas, de la fase estacionaria o la fase mvil.
La eleccin del eluyente depende del componente que se va a
separar.
En la cromatografa de capa fina, el eluyente asciende por
capilaridad.
La cromatografa de capa fina se realizo en un vaso de
precipitados cerrado con una de reloj, pero para lograr que toda la
atmosfera dentro del vaso se sature del eluyente se forra con un
papel filtro humedecido con esta solucin.
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre
la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las
condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, etc.).
Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr
duplicados de la misma placa.
Actualmente se cuentan con equipos sofisticados para analizar la
separacin de analitos. Es decir hoy en da se cuentan con
equipos automatizados que permiten hacer anlisis qumicos en
base a cromatografa.
Los pigmentos amarillo indicaban presencia de xantofilas, verde
azul presencia de clorofila a y verde olivo presencia de clorofila b.
La acetona permita el avance del pigmento verde, la clorofila tiene
naturaleza polar, con facilidad se absorbe a la almina (solido con
puntos de acido de Lewis ) es decir atrae lo polar. El beta caroteno
avanza con la adicin de hexano.

VII.BIBLIOGRAFA:
Pginas web
http://www.monografias.com/trabajos35/alumina/alumina.shtml#propi
ed
http://www.pucpr.edu/marc/facultad/santos/Lizette%20Santos
%20%20M%-C3% A9todos%20de %20 Biotecnolog
%C3%ADa/Cromatograf%C3%ADa.pdf
http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentos-yAplicaciones
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0002192X2003000400006&script=sci arttext&tlng=pt

VIII.APNDICE:
PIGMENTOS CAROTENOIDES IDENTIFICADOS Y PURIFICADOS
EN ACEITE DE PALMA MEDIANTE EL USO DE CROMATOGRAFIA
DE CAPA FINA
RESUMEN
El aceite de palma, Elaeis guineensis, crudo es un alimento graso rico
en carotenoides principalmente el -caroteno y a -caroteno, los
cuales le proporcionan una fortaleza nutricional, ya que estos
pigmentos son precursores de la vitamina A y estn directamente
relacionados con sus propiedades protectoras contra el dao de los
radicales libres. Sin embargo, este aceite es refinado para su
posterior consumo trayendo como consecuencia una prdida de sus
propiedades. En este trabajo se aplicaron tcnicas para extraer,
purificar, identificar y cuantificar algunos pigmentos y carotenoides
presentes en el aceite de palma crudo, pre-tratado y refinado; con la
finalidad de realizar un posterior estudio de los factores ms
preponderantes en el proceso de refinacin, que puedan ser
optimizados para obtener un aceite con mayores cualidades
8

nutricionales. Las tcnicas cromatogrficas empleadas fueron:

cromatografa en capa fina (TLC) y cromatografa lquida de
alta resolucin (HPLC) en fase reversa, previa saponificacin con
KOH metanlico, del aceite disuelto en acetona. Fueron identificados
los pigmentos: -caroteno y sus ismeros, a -caroteno, lutena y
licopeno en el aceite crudo pre-tratado. En el caso del aceite refinado
no se observ la presencia de ningn pigmento carotenoide. Fueron
cuantificados el -caroteno y sus ismeros: 1 158,198 mg kg-1;
lutena y sus someros: 42,819 mg kg-1; y licopeno: 14,179 mg kg-1.
El objetivo de esta investigacin fue aplicar las tcnicas de
cromatografa en capa fina (TLC) y cromatografa lquida de alta
resolucin para extraer y purificar e identificar pigmentos
caratenoides presentes en el aceite de palma crudo para
posteriormente comprender estudios que contribuyan a mejorar el
proceso de refinacin de este aceite.