FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

GRACE FLORES
08/05/2015
QUIMICA FARMACEUTICA II
Revista Cubana de Farmacia
versin On-line ISSN 1561-2988
Rev Cubana Farm v.32 n.2 Ciudad de la Habana Mayo-ago. 1998
Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos
Formulacin y estudio de estabilidad de acetilcolina 20 mg, liofilizado para solucin
oftlmica
Dinorah Granda Cortada y Arturo Serrano Prez
RESUMEN
Se desarroll la formulacin y la tecnologa de fabricacin de acetilcolina 20 mg,
liofilizado para solucin oftlmica, produccin nacional, con el objetivo de sustituir
importacin del producto comercial. Se present el estudio de estabilidad del producto,
realizado por el mtodo acelerado y corroborado por el estudio de vida de estante, segn el
mtodo de anlisis reportado en la USP XXIII. Se demostr que el medicamento tiene la
calidad farmacutica requerida para este tipo de preparaciones estriles y cumple con todas
las especificaciones de calidad de la USP XXIII. Se obtuvo una fecha de vencimiento por el
mtodo acelerado de 3 aos a temperatura ambiente, lo cual fue comprobado en el estudio
de vida de estante.
Descriptores DeCS: ACETILCOLINA; QUIMICA FARMACEUTICA; ESTABILIDAD
DE
MEDICAMENTOS;
LIOFILIZACION;
VENCIMIENTO
DE
LOS
MEDICAMENTOS; CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; SOLUCIONES
OFTALMICAS.
La acetilcolina es un trasmisor qumico que presenta un amplio rango de acciones en el
organismo; sus acciones muscarnicas fundamentales son la actividad depresora del sistema
cardiovascular y la actividad vasodilatadora en reas vasculares perifricas. Estimula el
nervio vago y el sistema nervioso parasimptico. Entre sus acciones nicotnicas ms
relevantes se encuentran la actividad estimulante del msculo esqueltico, los ganglios
autnomos y la mdula adrenal.
Los frmacos de esta clase no deben administrarse por va intravenosa o intramuscular
porque se pierde la selectividad y aumenta la incidencia de efectos adversos y txicos. 3,4 En

la actualidad la acetilcolina slo se emplea en la aplicacin ocular local de ciertas

intervenciones quirrgicas del segmento anterior del ojo, para producir miosis instantnea
y de una duracin aproximada de 10 a 15 min, sin ocurrencia significativa de efectos
txicos.4 Desde el punto de vista qumico, el cloruro de acetilcolina es un polvo blanco muy
delicuescente y en solucin acuosa se descompone fcilmente por el calor, los cidos y los
lcalis;5,6 de acuerdo con estas carasteristicas, la forma farmacutica ms idnea para este
frmaco es el producto liofilizado.
El presente trabajo tiene como objetivos fundamentales el desarrollo de la formulacin de
acetilcolina 20 mg, liofilizado para solucin oftlmica de produccin nacional, que rena
los requisitos de calidad exigidos para esta forma farmacutica, y el estudio de estabilidad
por el mtodo acelerado, mediante la tcnica analtica reportada en la USP XXIII, para
obtener un pronstico de la fecha de vencimiento del medicamento, corroborada mediante
los estudios de vida de estante.
MTODOS
Se elaboraron 3 lotes de acetilcolina cloruro 20 mg, liofilizado para solucin oftlmica,
identificados como E-068, E-122 y E-123, para lo cual se utilizaron las materias primas
acetylcholine chloride (lote 874332, Alemania) y manitol (Merck, Alemania) de acuerdo
con el esquema tecnolgico abreviado siguiente:
Disolver la acetilcolina y el manitol en una cantidad adecuada de agua estril para
inyeccin.
Ajustar el pH.
Enrasar con agua para inyeccin y homogeneizar. Corroborar el pH.
Filtrar por membrana esterilizante de 0,2 mm.
Dosificar 2 mL de la solucin filtrada en bulbos y colocar los tapones.
Liofilizar con los parmetros de liofilizacin previamente establecidos.
La produccin se realiz en un rea limpia convencional, en la cual se tomaron todas las
medidas de asepsia y desinfeccin necesarias.7,8 La liofilizacin se efectu en una
liofilizadora Edwards, modelo L-40 (Reino Unido). La membrana filtrante empleada fue
Sartorius, acetato de celulosa 0,22 mm. Se us un pHmetro Metrohm AG (Suiza), calibrado
con tampones de pH 4,0 y 7,0 de la misma firma.
Se emplearon bulbos de vidrio transparente de calidad hidroltica II con capacidad
adecuada, tapones de espiga de goma para liofilizar y sellos de aluminio anodizados. La
dosificacin de los bulbos se realiz en un flujo laminar horizontal GELAIRE (Italia), clase
100. Los anlisis de control de la calidad del producto terminado se efectuaron segn la
monografa del producto terminado de la USP XXIII.9 La determinacin del contenido de
manitol se realiz por la Farmacopea Mexicana.10
En el estudio de estabilidad se confeccion un diseo analtico y un programa de muestreo
peridico para evaluar las muestras colocadas a diferentes condiciones de temperatura: 40,
50, 60 y 70 oC en hornos Memmert y a temperatura ambiente, segn el mtodo de

envejecimiento acelerado. El mtodo analtico empleado para la valoracin del principio

activo fue reportado en la USP XXIII,9 el cual demostr ser especfico para cuantificar el
frmaco en presencia de sus productos de degradacin.
Se emple un cromatgrafo lquido de alta resolucin, un sistema de par inico y deteccin
por ndice de refraccin KNAUER (Alemania); se utiliz una sustancia de referencia (SR)
para realizar los clculos por el mtodo del estndar externo. Inicialmente se valor la
concentracin del principio activo. Todos los anlisis se hicieron por triplicado. El
procesamiento de los datos y los clculos se realizaron por el mtodo y la ecuacin de
Arrhenius para la prediccin de la fecha de vencimiento mediante mtodos cinticos con la
ayuda del programa ARRHEN.11-13
Se efectu la comprobacin de la vida til del medicamento durante un perodo de 4 aos
posteriores a la fecha de fabricacin para los lotes analizados, as como las caractersticas
organolpticas del producto terminado, de la solucin reconstituida y la acidez.
RESULTADOS
Desde el punto de vista organolptico se obtuvo para los 3 lotes un producto liofilizado
blanco, uniformemente dispuesto en el fondo del bulbo, el cual se reconstituy con 2 mL de
agua para inyeccin, ocurriendo la disolucin inmediata del slido y formando una solucin
clara, transparente, libre de partculas sin disolver. Los 3 lotes analizados cumplieron con
los requisitos de calidad de la USP XXIII: identificacin, contenido de agua, acidez,
valoracin de acetilcolina, uniformidad de contenido y contenido de manitol, as como en
lo referente a la esterilidad y la apirogenicidad. Los lmites especificados en la Farmacopea
para la valoracin del principio activo son del 90 al 115 %.
En la tabla 1 se muestran los resultados de las determinaciones realizadas a las diferentes
temperaturas evaluadas en funcin del tiempo. El orden de la reaccin se vida media se
tom como 0 el orden de la reaccin. Se obtuvo un grfico de la ecuacin de Arrhenius log
K vs. 1/T, con un coeficiente de correlacin de 0,9703 y una energa de activacin = 24,0
kcal/mol. La ecuacin de la recta obtenida fue log K = 15,5462 - 5,244 x 1/T. Los
resultados obtenidos se representan en las figuras 1 y 2. Al extrapolar los resultados a
temperatura ambiente (25 oC) se obtuvo una prediccin de 3,1 aos de vida til. En la tabla
2 se muestran los resultados de la vida de estante, los cuales corroboran el estudio
acelerado. No se observaron cambios en las caractersticas organolpticas del liofilizado y
de la solucin reconstituida en el tiempo estudiado.

FIG
1.
o
a 40, 50, 60 y 70 C

Concentracin vs. tiempo

para el lote E-068.

FIG 2. Ecuacin de Arrhenius. Acetilcolina cloruro 20 mg, lote E-068.

TABLA 1. Concentracin de acetilcolina* en funcin del tiempo a 40, 50, 60 y 70 oC para
el lote E-068

Conc.
(%)
101,2
102,0
88,5
68,1
62,3
*

Valores promedio de 3 determinaciones.

TABLA 2. Resultados de la valoracin del principio activo y la acidez en el tiempo. Vida
de estante

1 ao
Acidez
(mL de NaOH)

(%)

0,46

98,58

0,38

99,12

0,34

100,0

Lmites de la acidez: no ms de 0,5 mL de NaOH 0,01 N.

DISCUSIN
Los resultados que se muestran en la tabla 1 demuestran que el mtodo acelerado es idneo
para la prediccin de la fecha de vencimiento del producto. Los valores de concentracin de
acetilcolina ( %) no cumplen los lmites especificados por la USP XXIII al cabo de los 40 d
para las temperaturas de 50, 60 y 70 oC; durante este tiempo se produce una degradacin
apreciable del medicamento por efecto de la temperatura. En la figura 1 se presentan las
isotermas obtenidas en funcin de la temperatura para el ensayo E-068 y como puede
apreciarse, los valores obtenidos se ajustan a la linealidad y demuestran que el orden de la
reaccin ha sido seleccionado adecuadamente.
En la tabla 2 se puede observar que el contenido de acetilcolina (%) se mantiene dentro de
los lmites establecidos por la USP XXIII (90-110 %), incluso a los 4 aos posteriores a la
fecha de fabricacin del inyectable. La acidez obtenida en los ensayos evaluados durante el
estudio de vida de estante se mantiene dentro de los lmites (no ms de 0,5 mL de NaOH
0,01 N), lo cual indica que el producto de degradacin cido es inferior al 10 %.
Por la corta vida media del principio activo en solucin y el hecho de que para la aplicacin
ocular se indica desechar la solucin no empleada, no se estudi la estabilidad del frmaco
en solucin, sino la observacin de las caractersticas organolpticas y la acidez.
En conclusin, la tecnologa de fabricacin y la formulacin de acetilcolina 20 mg,
liofilizado para solucin oftlmica, permite obtener un medicamento que cumple con todos
los requisitos de calidad farmacutica segn la USP XXIII. El inyectable obtenido tiene
buena estabilidad, 3 aos a temperatura ambiente, la cual ha sido corroborada mediante el
estudio por vida de estante. Todo lo anterior garantiza la exitosa sustitucin del similar
comercial de importacin.
SUMMARY
The formulation and manufacturing technology of acetylcholine 20 mg, lyophilized for
opthalmic solution, of national production, was developed aimed at subtituting the import
of the commercial product. The products stability study conducted by the accelerated
method and corroborated by the shelf life study was presented according to the method of

analysis reported in the USP XXIII. It was demonstrated that the drug has the
pharmaceutical quality required for this type of sterile preparations and that it fulfils all the
quality specifications of the USP XXIII. An expiration date was obtained by the accelerated
method of 3 years at ambient temperature, which was proved in the shelf life study.
Subject headings: ACETYLCHOLINE; CHEMISTRY, PHARMACEUTICAL; DRUG
STABILITY; FREEZE DRYING; DRUG EXPIRATION; DRUG QUALITY;
OPHTHALMIC SOLUTIONS.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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COMENTARIO
La formulacin de acetilcolina 20mg fue realizada para una solucin liofilizada oftlmica
para evitar su importacin obteniendo as un producto nacional. En su proceso de obtencin
utilizaron reglamentos que cumplieron con el USP XXIII con su estabilidad y su tiempo de
caducidad entre 3 aos. Siendo este aprobado para su comercializacin sin que afecte
paciente.

La acetilcolina es un neurotransmisor de amplio funcionamiento en el organismo y las

acciones del muscarnicas y nicotnicas son: la primera es depresor del sistema
cardiovascular y la actividad vasodilatadora y la segunda es estimulante del msculo
esqueltico, ganglios autnomos y mdula adrenal. Los frmacos realizados de acetilcolina
no es utilizado para su administracin por va oral o por va intramuscular o intravenoso ya
que podra causar efectos adversos adems el cloruro de acetilcolina es muy sensible al
calor muscular por lo que se deshace inmediatamente y esto causa efectos txicos al
organismo. Por ende este producto es utilizado va oftlmica en ciertas cirugas para su
administracin.
Para la realizacin de este producto se realiz 3 muestras a las que le denominaron E-068
E-122 E-123. Utilizando solamente cloruro de acetilcolina y manitol como reactivos, agua
de inyectable, membrana de filtracin, bulbos y un equipo de liofilizacin.
En los estudios realizados se obtuvo una conclusin siendo este que los procesos realizados
para el producto cumplen correctamente con las norma USP XXIII siendo este producto
muy bueno para su comercializacin. (Prez, 1998)

BIBLIOGRAFIA

Prez, Dinorah Granda Cortada y Arturo Serrano. 1998. SCielo.

SCielo. [En lnea] Ciencias Mdicas, 12 de enero de 1998. [Citado el:
viernes de mayo de 2015.] http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S003475151998000200002&script=sci_arttext.