Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Mtodos de Anlisis

Prctica

Verificacin del funcionamiento de un espectrofotmetro

Profesor: Francisco C. Fernndez Lpez

Seccin 1
Grupo: 4IM1
Alumno: Erick Barron Gasca

Fecha 03/06/15

Objetivos
El alumno:

Evaluar el rendimiento instrumental de un espectrofotmetro

Verificar la exactitud de la escala de longitud de onda, la presencia de radiacin dispersa, el ancho de
banda, la exactitud fotomtrica, la proporcionalidad de respuesta y el rendimiento global del
instrumento.

Introduccin
La obtencin de resultados confiables empleando mtodos espectrofotomtricos, requiere en primer lugar,
verificar que el instrumento de medicin est funcionando correctamente.
La revisin del rendimiento de los espectrofotmetros UV VIS es indispensable en el control de calidad. Para
llevar a cabo este tipo de comprobaciones es comn el empleo de substancias estndar, cuyas propiedades
espectrales han sido estudiadas cuidadosamente, Posteriormente, se evala el funcionamiento del
instrumento en funcin de los resultados obtenidos del anlisis de estos estndares. Aunque no se han
definido claramente cules son los parmetros que deben valorarse para asegurar un funcionamiento optimo,
algunos fabricantes y usuarios han acordado evaluar los criterios que se describen a continuacin:
Exactitud en la escala de la longitud de onda.

En condiciones normales de operacin, la mayora de los instrumentos mantendr por un tiempo

indefinido una correspondencia entre la radiacin que atraviesa una muestra y el valor de longitud de
onda sealado en el indicador respectivo, sin embargo hay situaciones que es necesario verificarlo.

La absorbancia de un cromforo es medida a la longitud de onda de mxima absortividad. Si la

longitud de onda de calibracin de un instrumento cambia, la absorbancia cambia. La magnitud del
error depende de la localizacin relativa del punto en el espectro y adems del tipo de espectro si es
ancho o estrecho.

Luz dispersa

Luz dispersa, luz parsita, luz espuria hace referencia a toda la radiacin no contemplada en el control
del monocromador, que cruza por la rendija de salida sin haber pasado a travs de la muestra,
producindose as una alteracin en las estimaciones de absorbancia.

La radiacin parsita se suma al haz transmitido que es captado por el detector. Con altas
concentraciones el error es significativo ya que se producirn desviaciones negativas a la Ley de Beer.

La radiacin parsita puede originarse de mltiples maneras: reflexiones dentro del instrumento, polvo
acumulado sobre las lentes, espejos sucios o corrodos o rallados, grietas o una abertura en el
gabinete.

Dispersin por partculas de polvo.

Puede aumentar por el uso de lmparas y/o detectores inapropiados por tener mejor respuesta a un rango
distinto al de inters

Mtodos para detectar radiacin parsita:

1. Filtros de corte rpido
2. Soluciones

Estos materiales tienen una alta transmisin en una parte del espectro pero sbitamente se vuelven opacos
(absorben la mayor parte de la radiacin) a partir de una longitud de onda lmite.
Si la cantidad de luz transmitida en presencia de estos filtros se incrementa ms all del 1% se considera la
presencia de luz dispersa.
Exactitud fotomtrica
Se define como la exactitud en la medida de Absorbancia, o del % de Transmitancia en la escala de un
espectrofotmetro.
La exactitud en los valores de absorbancia es fundamental cuando no se trabajan estndares.
Un estndar de absorbancia debe tener una absorbancia constante y estable a una determinada longitud de
onda, ser insensible al ancho de banda.
Mtodos empleados:

Filtro de vidrio neutro que proporciona transmitancias o absorbancias constantes en un intervalo de

longitud de onda.
Soluciones

Dicromato de potasio
Sulfato de cobalto amnico
Ancho de banda
Denota la fraccin de longitudes de onda que cruzan la rendija de salida y producen una lectura del 50% T
alrededor de la longitud de onda de mxima transmitancia.
Algunos espectrofotmetros permiten modificar el ancho de banda, otros lo tienen fijo, sin embargo es
conveniente verificarlo ya que la acumulacin de polvo en las ranuras del monocromador puede provocar su
reduccin
Muchas desviaciones negativas de la ley de Beer puede deberse al uso de instrumentos con un ancho de
banda muy amplio.
Proporcionalidad o linealidad fotomtrica
Es la capacidad de un sistema fotomtrico para dar una relacin lineal entre la potencia radiante incidente a
su detector y la lectura. Es deseable una relacin lineal entre ambas magnitudes.
La linealidad instrumental es un prerrequisito para la exactitud fotomtrica, as como para la exactitud
analtica.
Se pueden utilizar soluciones que sigan la ley de Beer.

Oxihemoglobina
Sulfato de cobalto amnico
Sulfato de cobre.

Una respuesta no lineal entre absorbancia y concentracin indica:

-Falla en la fuente de radiacin o en el monocromador.
-Falla en el detector
-Radiacin dispersa

Tablas y Grficas
Tabla1. Elaboracin de la curva de calibracin de sulfato de nquel
Tubo
Serie a

Serie a

NiSO4 6H2O
0.19 M (mL)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

0
0.2
0.6
1.4
2.2
3
3.2
3.6
3.8
4

HCl al 1%
(mL)

4
3.8
3.4
2.6
1.8
1
0.8
0.4
0.2
0

Concentraci
n de NiSO4
6H2O
0.19 M (mL)
0
0.0095
0.0285
0.0665
0.1045
0.1425
0.152
0.171
0.1805
0.19

Para calcular la concentracin de NiSO4 6H2O utilizamos la siguiente frmula:

V 1 M1 = V 2 M2
Despejar M2
M2 =

V 1M1
V2

Ejemplo tubo 2:
M2 =

( 0.2mL ) (0.19 M )
=0.0095 M
(4 mL)

A400
Serie a
Serie a

0.05
0.150
0.370
0.550
0.670
0.700
0.770
0.800
0.850

0.045
0.140
0.430
0.500
0.620
0.700
0.770
0.800
0.850

Intervalo Dinmico lineal de la concentracin

Curva de Calibracin de NiSO4 6H2O

0.9
0.8
0.7

f(x) = 4.28x + 0.05

R = 0.98

0.6
0.5
Absorbancia

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

Concentracin Molar

Coeficiente de correlacin r = 0.9920

Tabla 2. Espectro de transmisin del filtro de didimio
Longitud de onda
(nm)
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580

%T
43
53
56
50.5
45.8
47
47
44
48
57
55
42.8
30
30
48
65
61
34
11

0.14

0.16

0.18

0.2

590

Espectro de Transmisin del Filtro de Didimio

Espectro de transmisin del filtro de didimio

70
60
50
40
Absorbancia

30
20
10
0
350

400

450

500

550

Longitud de onda (nm)

Tabla 3. Espectro de transmisin de la solucin de NiSO4 6H2O al 20%

Longitud de onda
(nm)
380
390
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580

%T
5.5
4.5
4.9
7.1
28.5
26.5
32.8
63.5
43
75
84.1
92
92
93
90
87.5
84
80.9
79
73
63

600

650

590

54

Espectro de Transmisin de la solucin de NiSO4 H2O

Espectro de transmisin de la solucin de NiSO4 H2O

100
90
80
70
60
Axis Title

50
40
30
20
10
0
350

400

450

500
Axis Title

Tabla 4. Proporcionalidad entre A y para el NiSO4 al 20%

Longitud de onda
(nm)
530
540
550
560
570

Absorbancia
0.0579
0.0757
0.092
0.1023
0.1366

Grfico de Absorbancias vs. Longitud de onda para el NiSO4 H2O

550

600

650

Tabla 5. Resumen de resultados de evaluacin del funcionamiento del espectrofotmetro.

Valores de
referencia

Valores
experimentales

400 nm
490 nm
550 nm
470 nm
520 nm

490 nm
550 nm
560 nm
470 nm
520 nm

No cumple el mximo, el
mnimo si. La parte
involucrada
es
el
monocromador.

2. Solucin de NiSO46H2O al 20%

Mximos (, nm)

500 nm

510 nm

Mnimos (, nm)

400 nm

400 nm

El mximo no cumple, el
mnimo s. Parte del
espectrofotmetro:
El
monocromador

a= 0
b= 1
R=1

a= -0.91
b= 0.001
r = 0.9807

4.9%

4%

1%
1%

0
0

Parmetro estudiado
Exactitud de la escala de longitud
de onda
1. Filtro de didimio
Mximos (, nm)
Mnimos (, nm)

Conclusin

Proporcionalidad Fotomtrica
Datos de regresin de 530 a 570 nm

Luz Dispersa
%T a 400 nm (Solucin de
NiSO46H2O al 20%)
%T a 450 nm
%T a 500 nm
Ancho de Banda
%T a 510 nm

Exactitud fotomtrica
1. Mtodo del filtro de vidrio neutro
%T a 530 nm

93%

90%

88%

87%

Absorbancia a 400 nm

1.2- 1.4

1.5

Absorbancia a 500 nm

0.03- 0.04

0.04

2. Mtodo de la solucin de
NiSO46H2O al 20%

De acuerdo al coeficiente
de correlacin podemos
decir que no cumple.

Si los valores de %T son

cero,
no
existe
luz
dispersa
en
el
espectrofotometro
La variacin es igual al
3%, por lo tanto si cumple.
Parte
involucrada:
Monocromador.
La variacin es menor al
3% por lo que es exacta la
escala del
espectrofotmetro
Parte involucrada:
Detector
Sale del intervalo de
referencia
Cumple con el intervalo ya
que esta dentro de l.

Intervalo dinmico Lineal de

Concentracin
Datos de regresin lineal
Intervalo de concentracin

a= 0
b= 1
r= 1
0.0 M
0.19 M

a= 0.004
La relacin es lineal por lo
b= 4.27
que el detector codifica
bien los datos
R = 0.99
0.152 M
0.19M

Discusin
Para determinar el la eficiencia de un espectrofotmetro fue necesario evaluar varas partes que lo conforman,
monocromador, fuente, muestra y detector, dando como resultado numero cercanos a los de referencia que
fueron otorgados por el profesor, esto quiere decir que el espectrofotmetro utilizado tiene las condiciones
optimas para trabajar ya que no presenta alteraciones como luz dispersa, exactitud fotomtrica, etc.

Conclusin

Evaluamos el rendimiento instrumental de una espectrofotmetro

Verificamos las diferentes partes que conforman un espectrofoto

Bibliografa

Skoog, Douglas A., West, Donald M. Fundamentos de Qumica Analitica.Editorial Cengage

Learning 2014. Mexico DF. 9a Edicin pp 950
Whitten, K.W., Davis, R. E., Peck, M.L. Qumica General Editorial Cengage Learning 8va
Edicin. Mexico DF. Pp 1058.