Você está na página 1de 39

Cromatografia em camada

delgada
Parte Experimental
Camila Sangaleti Repisso
Michelle dos Santos de Oliveira

A Cromatografia em Camada Delgada (CCD)


uma tcnica simples, sendo desenvolvida sobre
uma placa de vidro, que contm uma fina camada
de adsorvente. um tipo de cromatografia
lquido-slido
uma tcnica utilizada para analisar,
identificar ou separar os componentes de uma
mistura. A cromatografia definida como a
separao de dois ou mais compostos diferentes
por distribuio entre fases, sendo que uma se
locomove atravs de uma outra. Assim, a fase
que se move denomina-se fase mvel, e a que
no se locomove denomina-se fase estacionria
ou suporte.

Como os componente so retidos?


O processo de separao desta tcnica est
fundamentado principalmente no fenmeno de
adsorso de substncia na fase estacionria ou
adsorvente
Os componentes da mistura adsorvem-se com
as partculas de slido devido a interao de
diversas foras intermoleculares. O composto
ter uma maior ou menor adsoro,
dependendo das foras de interao, que
variam na seguinte ordem: formao de sais >
coordenao > pontes de hidrognio > dipolodipolo > Van der Waals.

Aplicaes da CCD em Qumica Orgnica


A CCD pode ser usada em Qumica Orgnica para:
estabelecer a identidade de dois compostos;
determinar o nmero de componentes de uma mistura;
determinar o solvente apropriado para uma separao por
cromatografia em coluna;
monitorar uma separao realizada por cromatografia em
coluna;
verificar a eficincia de uma separao;
monitorar o andamento de uma reao.
Em todas estas aplicaes, a CCD tem a vantagem de
utilizar pequenas quantidades de amostras.

A placa imersa em
uma cuba
cromatogrfica, que
contm uma pequena
quantidade de solvente
(eluente). Este eluir
pela camada do
adsorvente por ao
capilar. As amostras
devem ser colocadas, na
placa, acima da linha do
eluente.

Preparao da suspenso do
adsorvente
No preparo das suspenses emprega-se geralmente gua, que
pode conter cidos , base, sais ou agentes complexantes,
sendo que a parte slida o adsorvente.
Como adsorvente usa-se geralmente slica gel G, terra
diatomcea, celulose, poliamida e outros
O maior problema do preparo da suspenso a obteno da
viscosidade adequada para o espalhamento

Se a suspenso for muito fina (pouco viscosa), obtm-se


camadas finas demais

Se for muito viscosa, ela no escoa adequadamente,


podendo formar camadas sem uniformidade de espessura

Preparao da suspenso do
adsorvente
Celulose

Slica Gel

Alumina

Celulose
Aplicao: Utilizada para separao de
compostos hidroflicos (acares,
aminocidos, ons inorgnicos, cidos
nuclicos).
Preparao: 20g de celulose microcristalina +
60 mL de H2O. Rendimento: 5 placas 20 x
20 cm, 300 um.
Ativao: 105C, 10 min.

Slica Gel
cido Silcio amorfo, altamente poroso.
o
adsorvente mais utilizado em cromatografia.
Aplicao: Utilizada para separao de
compostos hidroflicos (acares, aldedos,
cetonas, fenis, aminocidos, ons inorgnicos,
etc).
Preparao: 20g de slica + 60-70 mL de H2O.
Rendimento: 5 placas 20 x 20 cm, 300 um.
Ativao: 105C- 110C, 30 min.

Alumina
Depois da Slica, o adsorvente mais utilizado.
Assim como a slica empregado na separao de
compostos lipoflicos.
Aplicao: A atividade depende dos tomos O e
Al: cida- (pH = 4) Pigmentos sintticos e
naturais, aminocidos, cidos carboxlicos. Neutra(pH = 6,9-7,1)- Aldeidos, cetonas, substncias
instveis em meio alcalino. Alcalina- (pH = 9,5-10,5)Hidrocarbonetos aromticos e insaturados, corantes
sintticos, alcalides.
Preparao: 30g + 60 mL de H2O.
Ativao: 105C, 10 min.

Seleo da fase mvel


Tem papel fundamental na separao de misturas
Para sua escolha devemos levar em considerao a
natureza qumica das substncias a serem
separadas e a polaridade da fase mvel
Pequenas variaes na composio da fase mvel
leva a grandes alteraes no deslocamento das
manchas.

Escolha da Fase Mvel


Srie de eluentes - polaridade e poder de eluio aumenta
de cima para baixo
Srie 1
n-pentano
ter de petrleo
n-hexano
n-heptano
Ciclohexano
Tetracloreto de carbono
Triclorotileno
Benzeno
Diclorometano
Clorofrmio livre de lcool

Srie 2
ter de petrleo (p.e. 30-50C)
ter de petrleo (p.e. 50-70C)
ter de petrleo (p.e. 70-100C)
Tetracloreto de carbono
Ciclohexano
Sulfeto de carbono
ter dietlico
Acetona
Benzeno
Tolueno

Sobre uma cromatoplaca, colocar algumas gotas da


amostra. Sobre cada uma delas, gotejar diferentes
tipos de solventes. Em poucos minutos, sero
observados deslocamentos concntricos das
manchas, o que permitir a identificao da melhor.

As cubas cromatogrficas, em geral de


vidro com fundo plano, devem ter junto
s paredes um pedao de papel de filtro
que permita a subida da fase mvel,
saturando rapidamente o interior das
mesmas.

Ativao das placas


A ativao consiste em aquecer as placas em temperaturas
relativamente elevadas, por tempo prolongado. Isto aumenta o
seu poder de adsorso.
Este processo promove a remoo de vapor dgua e outros
resduos possivelmente adsorvidos na placa.
Slica, alumina e terra diatomcea so ativadas a 105-110C por
30 a 60 minutos. A celulose no deve ser aquecida por mais de
10 minutos a 105C
O tempo e a temperatura so fatores importante nesse processo,
dependem do adsorvente utilizado e da utilidade que elas tero
para com os testes.

Aps estarem as
placas todas
ativadas, costumase riscar as placas
de formas a fazer
com que uma
amostra, na sua
asceno, no
interfira na da
outra amostra.

Aplicaes das amostras nas


cromatoplacas
So aplicadas na
forma de solues, em
solventes bastante
volteis
Aplica-se atravs de
micropipetas, o
microseringas ou tubo
capilar

As amostras devem ser


aplicadas 1,5 a 2,0 cm acima do
bordo inferior
Grandes quantidades de
amostras geram manchas muito
grandes, o que no desejado
Costuma-se riscar as placas de
forma a fazer com que uma
amostra, na sua ascenso, no
interfira na da outra amostra
Pode ser aplicada na forma de
ponto (anlise qualitativa), ou
na forma de faixa (anlise
quantitativa e preparativa)

A amostra colocada na parte inferior


da placa, atravs de aplicaes
sucessivas de uma soluo da amostra
com um pequeno capilar. Deve-se
formar uma pequena mancha circular.
medida que o solvente sobe pela
placa, a amostra compartilhada entre
a fase lquida mvel e a fase slida
estacionria. Durante este processo, os
diversos componentes da mistura so
separados.

DESENVOLVIMENTO DA
CROMATOGRAFIA
As placas so colocadas numa cuba
cromatogrfica quase na posio vertical,
apoiadas no fundo da cuba e inclinadas para
as paredes laterais. Quando a fase mvel
atinge uma determinada posio nas placas
(2 cm do topo), estas devem ser retiradas e
importante marcar imediatamente a
distncia percorrida pela fase mvel,
possibilitando o clculo dos valores de Rf

Clculo do Rf
Rf = dr / dm
onde dr a distncia
percorrida pela
amostra e dm a distncia
percorrida pela fase mvel

Revelao dos cromatogramas


Aps a eluio, as cromatoplacas so secas
e reveladas, tornando visvel as substncias
incolores existentes na amostra. Os mtodos
podem ser:
Fsicos
Qumicos
Biolgicos

Fsicos
Muitos compostos se tornam fluorescentes
quando excitados por luz UV, ou utiliza-se o
adsorvente contendo uma substncia
fluorescente

Qumicos
Utiliza-se agentes cromognicos que, em contato
com as substncias da amostra, tornam-nas
coloridas e, portanto, visveis. O mais utilizado o
iodo, que torna as manchas marrons
Aplicadores de vidro para
revelador qumico

Reagente
Procedimento
Tratamento
Notas
Dragendorffs Adicionar 10mL de uma soluo aquosa de KI Geralmente
no
requer um mtodo tradicional para
40% a 10mL da soluo (0,85 g de subnitrato aquecimento, mas se a reao determinao de alcalides,
bsico de bismuto em 10mL de cido actico) no for espontnea, aquecer at embora possa dar reao positiva
e adicionar 50 mL de gua destilada.
a colorao aparecer. O para no alcalides, irridides e
procedimento pode ser mas alguns flavanides. Alcalides
Diluir a soluo resultante com cido actico e eficiente se descolorir a placa desenvolvem uma colorao
gua na proporo (1 : 2 : 10)
com vapor
de amnia escura (laranja vermelho)
concentrado.
Cloreto frrico 5,0 % de cloreto frrico em 0,5 N HCl
Geralmente
no
requer Para determinao de fenlicos
aquecimento, mas se necessrio
aquecer moderadamente

de
vrios
Anisaldedo / Adicionar 1,0 mL de H2SO4 concentrado em Aquecer a 100 0 C at o Determinao
compostos,
especialmente
H2SO4
50,0 mL de cido actico contendo 0,5 mL de desenvolvimento de cor
terpenos, acares, fenis e
anisaldedo
esterides

Biolgicos
Utiliza-se reaes enzimticas ou
bacterianas para tornar a mancha visvel.
Placa de slica, eluda com
diclorometano:metanol (97:3). A
placa foi borrifada com soluo
esporos de fungos e, onde apareceram
manchas brancas porque houve
inibio dos fungos pelas substncias
contidas nos extratos de uma planta.

REVELAO COM APLICADOR


COMERCIAL
Revelando o cromatograma

Modo de dirigir o
jato ao longo da placa
cromatogrfica

Preparao da cuba:
1,2 dicloroetano / cido
actico
12 : 1

1. Colocar essa soluo em uma cuba


cromatogrfica at atingir a altura de 1,5 cm.
2. Colocar na cuba uma folha de papel de filtro,
afim de deixar saturar at que toda a folha
fique umedecida.

Preparao das solues padro:


0,1 g de cada padro (cafena,
cido acetilsalicilico e
acetoaminofen)

1.

Dissolver cada padro em 5,0 mL da mistura etanol /


diclorometano (1:1)

2.

Se necessrio, aquecer em banho-maria, evitando


evaporar a mistura do solvente

3.

Pipetar 1,0 mL de cada soluo dos padres em um


tubo de ensaio

4.

Agitar afim de homogeneizar, obtendo assim a mistura


de referncia.

Preparao da placa:
Placa de slica

1.

Riscar a placa, dividindo-a em quatro colunas para a


aplicao das solues padro e a mistura de
referncia.

2.

Ativar a placa em estufa a 110C por 10 minutos

Fase estacionria: Placa de


slica anteriormente
preparada
Aplicar com o auxlio de um capilar cada soluo
(padro e referncia) no centro de cada coluna a
cerca de 2 cm da base.
Cuba cromatogrfica (fase
mvel: 1,2 dicloroetano /
acdo actico)
1. Esperar at toda fase mvel atingir o limite
delimitado por um rico traado anteriormente.
2. Aguardar a evaporao do solvente.
Revelao da placa
3. Revelar as manchas com o auxilio da luz
ultra violeta e posteriormente pela exposio a
vapores de iodo
4. Medir as distncias dos centros de massas
das manchas at a origem para a realizao dos
clculos de Rf

Constantes Fsicas das substncias qumicas envolvidas no


Substncia

Densidad
e

p.e./
C

p.f/
C

P.M

Form.molecul
ar

Toxidade

Solubilidade

Etanol

0,789

78,4

114,
1

46,0
7

C2H5OH

Causa nusea, vmito


e depresso

Solvel em gua e em
solventes orgnicos

cido actico

1,050

118

60,5

C2H4O2

Se ingerido causa
vmito, diarria e
colapso circulatrio

gua, lcool,ter,te-tra
cloreto de carbono

Diclorometano

1,325

39,7
5

84,9
4

Narctico em altas
concentraes

1,2
Dicloroetano

1,280

55

96,9
5

Causa irritao e
narctico

Aspirina

1,40

135

180,
16

C9H8O4

Acetaminofen

1,293

170.
5

151,
17

C8H9NO2

Cafena

1,23

238

194,
19

C8H10N4O2

Preparao da amostra:
Comprimidos de
analgsico

1.

Triturar cada uma dos trs comprimidos a


serem analisados.

2.

Transferir para trs bqueres de 10 mL

3.

Adicionar 5,0 mL de etanol / diclorometano


(1:1) a cada um dos bqueres

4.

Se necessrio aquecer rapidamente em


banho-maria, evitando evaporar a mistura
de solventes

Obs.: O procedimento para a preparao da


cuba cromatogrfica e da placa esto
descritos anteriormente.

Fase estacionria: Placa de


slica anteriormente preparada
Aplicar com o auxlio de um capilar cada soluo (padro e
referncia) no centro de cada coluna a cerca de 2 cm da base.
Cuba cromatogrfica (fase mvel:
1,2 dicloroetano / acdo actico)
1. Esperar at toda fase mvel atingir o limite
delimitado por um risco traado
anteriormente.
2. Aguardar a evaporao do solvente.
Revelao da placa
3. Revelar as manchas com o auxilio da luz ultra violeta
e posteriormente pela exposio a vapores de iodo
4. Medir as distncias dos centros de massas das
manchas at a origem para a realizao dos clculos de
Rf
5. Determinar a composio de cada analgsico

Analgsico e cafena em
algumas preparaes comuns
Aspirina (g)

Acetominofen (g)

Cafena (g)

Aspirina

0,325

------

------

Anacin

0,400

------

0,032

Bufferin

0,324

------

------

Excedrin

0,250

0,250

0,065

Tylenol

------

0,325

------

Mtodo B
Preparao da amostra:

0,1 g do comprimido

acetato de etila /
hidrxido de amnia /
gua (10 : 0,25 : 0,25)

1.

Triturar um comprimido

2.

Transferir esta quantidade para um tubo de ensaio e


adicionar 0,5 mL de metanol.

3.

Agitar vigorosamente por 01 minuto.

4.

Centrifugar 05 minutos.

5.

Transferir o sobrenadante para um tubo limpo

Preparao da cuba cromatogrfica:


1.

Colocar essa soluo em uma cuba cromatogrfica at


atingir a altura de 1,5 cm.

2.

Colocar na cuba uma folha de papel de filtro, afim de


deixar saturar at que toda a folha fique umedecida.

Fase estacionria: Placa


de slica gel G
anteriormente preparada
Aplicar com o auxlio de um capilar cada soluo (padro e
referncia) no centro de cada coluna a cerca de 2 cm da base.
Cuba cromatogrfica (fase mvel:
acetato de etila / hidrxido de
amnia / gua (10 : 0,25 : 0,25))
1. Esperar at toda fase mvel atingir o limite
delimitado por um rico traado anteriormente.
2. Secar a placa com o auxilio de um secador de cabelo
Revelao da placa
3. Revelar a placa com o auxilio de uma soluo de cloreto frrico
4. Aquecer a placa a 110C por 10 minutos
5. Marcar as posies das manchas reveladas
6. Revelar com solo de Dragendorff.
7. Medir as distncias dos centros de massas das manchas at a
origem para a realizao dos clculos de Rf
8. Com base nas cores das manhas identificar o frmaco.

A figura abaixo representa o resultado de um cromatograma de


uma amostra contendo 3 compostos diferentes:
PERGUNTA:
Sabendo que o eluente era gua, e que a amostra continha os 3
compostos abaixo, relacione o nmero da mancha com a estrutura
dos compostos abaixo

Mancha 2

Mancha 3

Mancha 1

Simulao CCD
Simulao Clculo de Rf