TCNICAS DE DNA RECOMBINANTE

Desde a elucidao da complexa estrutura da molcula de DNA, em 1953,

segundo modelo proposto por Francis Crick e James Watson, a Cincia nunca
mais foi a mesma. Mais tarde, em 1958, Crick relaciona o DNA, o RNA e as
protenas, salientando o fluxo unidirecional da informao, do DNA protena.
Apesar destas descobertas e dos avanos obtidos, de acordo com Nascimento
et al (2003) at o incio da dcada de 70 o material gentico dos organismos
era o componente qumico mais difcil de ser analisado, quando ento
comearam a surgir as primeiras tcnicas de isolamento e purificao de genes
especficos, atravs do processo de clonagem gnica.
Muitas dessas tcnicas eram provenientes da Microbiologia, Bioqumica,
Imunologia e Gentica Microbiana e permitiram que a molcula de DNA
ganhasse um novo enfoque. A partir da tornaram o DNA mais fcil de ser
analisado, possibilitando o isolamento de regies especficas da molcula,
obt-las em grandes quantidades e determinar a sua seqncia numa
velocidade de milhares de nucleotdeos por dia (NASCIMENTO et al, 2003;
PIERCE, 2004).
Em conjunto, estas descobertas foram decisivas e de fundamental importncia
para o surgimento de uma nova rea de pesquisa dentro do campo da Biologia:
a Tecnologia do DNA Recombinante.
Segundo Pierce (2004), a Tecnologia do DNA Recombinante, tambm
chamada engenharia gentica ou simplesmente biotecnologia, um conjunto
de tcnicas para localizar, isolar, alterar e estudar segmentos de DNA. O termo
recombinante devido freqentemente tais tcnicas serem usadas para
combinar o material gentico de fontes distintas, tornando-o bem sugestivo.
Vantagens do DNA recombinante
Criar mutaes e observar alteraes no fentipo;
Fornecer mais informaes sobre a estrutura e o funcionamento dos genes;

Detectar a existncia de cdons no universais no DNA mitocondrial;

Aperfeioamento da replicao, transcrio, traduo, processamento de DNA
e regulao gnica;
Criao de Drogas, hormnios e enzimas;
Diagnosticar doenas genticas e infecciosas;
TCNICAS DE RECOMBINAO GNICA
CORTE E UNIO DE FRAGMENTOS DE DNA
Mtodo feito por endonucleases de restrio, que vo reconhecer e fazer
cortes bifilamentares na seqncia acar-fosfato das molculas de DNA, em
seqncias especificas de nucleotdeos.
Nas bactrias, as endonucleases de restrio reconhecem seqncias
particulares do DNA viral e as cortam. Elas tambm modificam a seqncia de
reconhecimento e adicionam grupos metila ao seu DNA.
Existem trs tipos de enzimas de restrio em bactrias:
Enzimas de restrio do tipo I: Cortam o DNA em stios aleatrios distante
do sitio de reconhecimento.
Enzimas de restrio do tipo II: Cortam o DNA dentro da seqncia de
reconhecimento
Enzimas de restrio do tipo III: Cortam o DNA em stios prximos ao sitio
de reconhecimento

TCNICAS DE RECOMBINAO GNICA

VISUALIZAO DOS FRAGMENTOS DE DNA
Ocorre devido a uma tcnica bioqumica padro, chamada Eletroforese que
separa molculas com base em seu tamanho e carga eltrica. Existem vrios

tipos de eletroforese; mas para separar as molculas de DNA utilizada a

eletroforese em gel. Essa tcnica empregada para determinar o nmero,
tamanho ou isolar os fragmentos de DNA.
LOCALIZAO DOS FRAGMENTOS DE DNA COM A TRANSFERNCIA DE
SOUTHERN E SONDAS
Transferncia de Southern: uma tcnica usada para transferir os fragmentos
unifilamentares desnaturados de um gel para um suporte slido.
Sonda: uma molcula de DNA ou RNA com uma sequencia de bases
complementares a uma sequencia no gene de interesse.
CLONAGEM GNICA
um mtodo utilizado para obteno de cpias idnticas, atravs do fragmento
de uma bactria para que esta replique o DNA. So utilizados alguns tipos de
vetores de clonagem:
Vetores Plasmdiais
Os plasmdios so molculas circulares de DNA existentes em bactrias, que
contem origens de replicao e so portanto capaz de se replicar
independentemente do cromossomo bacteriano.
Bacterifagos vetores
Transfere DNA para uma bactria e garante que o fragmento de DNA exgeno
seja replicado aps entrar na clula.
Cosmdeo vetores
So pequenos plamideos que elevam stios cos de fago . Eles podem ser
embalados em capas virais e transferidos para bactrias por infeco viral.
Vetores de Expresso

 um mtodo, que, em replicao, sitio de restrio e marcadores

selecionveis, contem as sequencias necessrias para que o gene clonado
seja transcrito e traduzido em bactrias.
Vetores de clonagem para Eucariontes
So utilizados vetores especiais para introduzir genes em eucariontes. Eles
incluem vetores de transporte que podem se reproduzir em dois hospedeiros
diferentes: Leveduras e cromossomos artificiais de bactrias. Eles possuem
fragmentos de DNA com milhares de pares de bases e o plasmideo Ti, que
transfere genes para plantas.

REFERNCIAS
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAA-v8AC/tecnologia-dna-recombinante
http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/recombinante.php
http://www.webartigos.com/artigos/a-tecnologia-do-dna-recombinante-e-suas-multiplasaplicacoes/10701/#ixzz3VUBpkIzv