EFECTO DEL PH SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA

1. OBJETIVOS
Estudiar la influencia del pH sobre la glucosa oxidasa

2. FUNDAMENTO TEORICO
Para cada enzima existe un ptimo de pH en el que se crean las condiciones ms
favorables para el mantenimiento de la conformacin funcionalmente activa de la
molcula. Los grupos amino y carboxilo de los restos de los aminocidos ionizados a una
magnitud de pH determinada, participan en el mantenimiento de la conformacin de la
molcula protenica necesaria para la confrontacin de los centros catalticos de la enzima
y favorecen tambin a su ligacin con el sustrato. A magnitud de PH distinta se altera la
ionizacin de los grupos correspondientes, y como resultado se rompen los enlaces que
aseguran la formacin de los centros catalticos, y la enzima se inactiva. A los valores de
pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan.

3. REACTIVOS DE TRABAJO

Glucosa oxidasa
Peroxidasa
Indicador oxido-reduccin(cromgeno)
cido clorhdrico (HCl)
Hidrxido de sodio (NaOH)
glucosa

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa se agreg HCl (grupo 1 y 7) y

encubar por 10 minutos para luego llevar al espectrofotmetro y medir la
absorbancia.
En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa se agreg NaOH (grupo 3 y 9) y
encubar por 10 minutos para luego llevar al espectrofotmetro y medir la
absorbancia.
En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa se le agrega glucosa (grupo 5 y
11) y encubar por 10 minutos para luego llevar al espectrofotmetro y medir la
absorbancia.

GRUPO 1 y 7

GRUPO 3 y 9

GRUPO 5 y 11

Reactivo de trabajo
Agregar HCl 0.01M
Agregar NaOH 0.01M
Agregar glucosa (ul)
Incubar a 37 C por 10

1 ml
0.1 ml
-10
*

1 ml
-0.1 ml
10
*

1 ml
--10
*

min.
LECTURA: EL espectrofotmetro utiliza una longitud de onda de 505 nm para la medicin
de la absorbancia

5. CALCULOS y RESULTADOS DE LA EXPERIMENTACIN

[Glucosa]= F*absorbancia del tubo problema
F=

(glucosa)
=229mg /dl
absorvid . del estandar

GRUPO 1 y 7

GRUPO 3 y 9

GRUPO 5 y 11

Absorbancia

0.100 0.058

0.121

0.179

0.293

0.105

[Glucosa]
mg/dl

22.90 13.282 27.70

0
9

40.99
1

67.09
7

24.04
5

Las observaciones ms visibles fueron con los ensayos del reactivo de trabajo
cuando se le modifico el pH (agregando NaOH), cambiando de color la muestra. A
comparacin de los ensayos en la cual solo se agreg glucosa no se modific el
color de la muestra.

6. DISCUSIN
Uno de los atributos ms sobresalientes de las enzimas es el de su especificidad de
actuacin, de suerte que tan solo ciertos sustratos experimentan su accin y
nicamente tiene lugar a un tipo de reaccin sin que se produzca reacciones laterales
o sus productos. Sin embargo al modificar el pH de una enzima puede modificar as
tambin su naturaleza (el pH desnaturaliza las enzimas).

7. CONCLUSIN
Se estudi y comprob que la glucosa oxidasa pierde su naturaleza (desnaturaliza), al
ser modificado su pH por una solucin.

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBBRE LA GLUCOSA OXIDASA

1. OBJETIVOS

Demostrar el efecto de la temperatura sobre la glucosa oxidasa

2. FUNDAMENTO TEORICO

La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. La temperatura

ptima para la accin de enzimas es la temperatura del cuerpo de los animales que
oscilan en el intervalo de 36 a 41 C. Con cierto aumento de la temperatura del medio
ocurre aceleracin de la reaccin a consecuencia de la activacin de las molculas del
sustrato. A la vez, incluso un aumento pequeo de la temperatura conduce al
debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformacin de las molculas de las
enzimas, necesaria para la manifestacin de su actividad cataltica.
Empieza gradualmente, la desnaturalizacin de la enzima cuando se acelera bruscamente
la temperatura y esta sobrepasa los 50 C. La inactivacin de la enzima con aumento de
la temperatura del medio es irreversible. Al bajar la temperatura la actividad de la enzima
disminuye. El mecanismo de este proceso no est claro. Sin embargo, el enfriamiento no
causa desnaturalizacin de la enzima por lo tanto su inactivacin puede ser reversible.

3. REACTIVOS DE TRABAJO

Glucosa oxidasa
Peroxidasa
Indicador oxido-reduccin(cromgeno)
cido clorhdrico (HCl)
Hidrxido de sodio (NaOH)
Glucosa
Agua destilada

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa (grupo 4 y 10), llevar los tubos a

una temperatura de 0C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar
nuevamente por 10 minutos a 0C; para luego llevar al espectrofotmetro y
medir su absorbancia.

En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa (grupo 2 y 8), llevar los tubos a

una temperatura de 37C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar
nuevamente por 10 minutos a 37C; para luego llevar al espectrofotmetro y
medir su absorbancia.
En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa (grupo 6 y 12), llevar los tubos a
una temperatura de 70C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar
nuevamente por 10 minutos a 70C; para luego llevar al espectrofotmetro y
medir su absorbancia.

GRUPO 4 y 10

GRUPO 2 y 8

GRUPO 6 y 12

Reactivo de trabajo
Llevar lo tubos (RT) a
temperatura(C)
Encubar 10 minutos
Agregar glucosa (ul)
Incubar 10 minutos

1 ml
0

1 ml
37

1 ml
70

*
10
0

*
10
37

*
10
70

(C)
LECTURA: EL espectrofotmetro utiliza una longitud de onda de 505 nm para la medicin
de la absorbancia

5. CALCULOS y RESULTADOS DE LA EXPERIMENTACIN

[Glucosa]= F*absorbancia del tubo problema
F=

(glucosa)
=229mg /dl
absorvid . del estandar

GRUPO 4 y 10 GRUPO 2 y 8

GRUPO 6 y 1

Absorbancia

0.299 0.196

0.092

0.315

[Glucosa]
mg/dl

68.47 44.884 21.06

1
8

72.13
5

0.0.5
4
12.36
6

0.239
54.73
1

6. DISCUSIN
Uno de los atributos ms sobresalientes de las enzimas es el de su especificidad de
actuacin, de suerte que tan solo ciertos sustratos experimentan su accin y
nicamente tiene lugar a un tipo de reaccin sin que se produzca reacciones laterales
o sus productos. Sin embargo al modificar la temperatura a una ms alta de una
enzima puede modificar as tambin su naturaleza (la temperatura elevada
desnaturaliza las enzimas).

7. CONCLUSIN
Comprob que la glucosa oxidasa pierde su naturaleza (desnaturaliza), al ser
modificado la temperatura ( elevar la temperatura).

8. BIBLIOGRAFIA
Libro bioqumica lehninger.

AO DE LA DIVERSIFICACION PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA

EDUCACION
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA
CURSO: BIOQUIMICA
TRABAJO: INFORME DE LABORATORIO N 3 y 4
TEMA: efecto de la temperatura y pH sobre la glucosa oxidasa
CICLO: V SEMESTRE 2015-I
DOCENTE DE TEORIA: CESAR TORRES DIAZ
DOCENTE DE PRACTICAS: JORGE BERMEJO BENITES
INTEGRANTES DEL GRUPO N 11
ABAD ABAD MILAGROS DEL SOCORRO
PANTA FIESTAS JOSE NARCISO

UNP PIURA- PERU- 2015