Prctica No.

Cuantificacin de hierro por espectrofotometra en el visible

Resumen
La espectrofotometra es la medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe o transmite un sistema
qumico en funcin de la longitud de onda; es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones
qumicas y bioqumicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o
transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia. En base a esto el objetivo de la prctica fue aplicar los principios bsicos de
cuantificacin por espectrofotometra y conocer el funcionamiento bsico de un espectrofotmetro UV-Vis. Para
esto se llev a cabo la absorcin para la determinacin de hierro, para la cual se tomaron 7 volmenes
diferentes, uno de ellos era el blanco el cual estaba compuesto por 0,75 mL de FeCl3, cinco de ellos fueron los
patrones, adems de una muestra problema y se determinaron sus absorbancias respectivamente. Con los
datos obtenidos se realiz una curva de calibracin de absorbancia vs concentracin.

Palabras-clave: Espectrofotometra, Absorbancia, Curva de calibracin y Muestra problema.

Introduccin
La espectrofotometra UV-Visible es una tcnica analtica que permite determinar la concentracin de un
compuesto en solucin. Se basa en que las molculas absorber las radiaciones electromagnticas y a su vez
que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de medidas
se emplea un espectrofotmetro, en el cual se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una
solucin y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. 1
De esta manera la espectroscopia se debe a la capacidad de las molculas para absorber radiaciones entre ellas
las radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV- visible. Las longitudes de onda de las
radiaciones que una molcula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben depende de la estructura
atmica y de las condiciones del medio como el pH, temperatura, fuerza inica, constante dielctrica, puesto que
dicha tcnica constituye un valioso instrumento para a determinacin y caracterizacin de biomolculas.[1]
Por otra parte tenemos los instrumentos para la regin visible, los espectrofotmetros para la regin visible son
generalmente instrumentos de red, has simple. La mayora de las aplicaciones comunes de estos instrumentos
son anlisis cuantitativos a longitud de onda fija, a pesar de que algunos producen espectros de absorcin
notoriamente buenos, que pueden servir tambin en el anlisis cualitativo. 2
Tambin existen varias aplicaciones importantes de la fotometra y de la espectrofotometra en la regin visible
radican en la determinacin de trazas de iones orgnicos aunque algunos de ellos son suficientemente
coloreados para permitir su determinacin directa, la mayor parte de los iones inorgnicos no absorben
intensamente la radiacin visible o ultravioleta. La mayora pueden dar, no obstante, soluciones intensamente
coloreadas por reaccin con reactivos complejantes adecuados, y ser de este modo analizados. Los mtodos
colorimtricos figuran entre los procedimientos analticos de mayor sensibilidad. 2
De este modo, el objetivo de la prctica fue aplicar los principios bsicos de cuantificacin por espectrofotometra
y Conocer el funcionamiento bsico de un espectrofotmetro UV-Vis.

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Parte experimental
El diseo del experimento fue de tipo controlado para el cual fueron utilizados diferentes tipos de instrumentos de
medida de volmenes tales como: pipetas graduadas, matraz aforado de 25 mL, beakers. Tambin se utiliz otro
tipo de instrumento como: varilla de agitacin.
Preparacin de disoluciones.
Como primer punto se prepar las disoluciones de cido clorhdrico (HCl) con concentracin 0,05 M como
tambin: cloruro frrico (FeCl3) 1 x10-4 M y Tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M.
Determinacin del Espectro de Absorcin del Complejo Tiocianato de Hierro (III)
Se tom un tubo de ensayo en el cual se coloc 5mL de la disolucin de cloruro frrico, con 0,3 mL de Tiocianto
de amonio y a su vez se le adiciono 4,7 mL de agua destilada la cual sirve para diluir la solucin se tap y se
agito por inversin. Esta solucin es llevada hacia el espectrofotmetro en la cual la solucin preparada es
transferida a una celda y se realiza el barrido de 400 a 500 nm. Para el ajuste de la absorbancia se lo realizo con
la solucin de un blanco preparado con 0,75 mL de Tiocianato de amonio.
Elaboracin de la curva de calibracin del complejo Tiocianato de Hierro ( III )
Baln volumtrico
25 mL

Disolucin de
FeCl3
1 x 10-4 M (mL)

Blanco
Muestra problema
1
2
3
4

10
2,5
5
7,5
12,5

Disolucin de
NH4SCN
0,5 M (mL)
0,75
0,75
0,75
0,75
0,75
0,75

17,5

0,75

Agua destilada
(mL)

6,75

24,25
14,25
21,75
19,25
16,75
11,75

Se ley la absorbancia a la longitud de onda de mxima absorbancia (Max) y se ajust la absorbancia con el
blanco.
Determinacin de la concentracin de Fe3+ en la disolucin problema
Para este apartado se tom en un baln volumtrico de 25 mL al cual se le adiciono 5 mL de la disolucin
problema de cloruro frrico ms 0,3 mL de la solucin de Tiocianato de amonio y se la disolvi en 4,7 mL de
agua destilada, se tap y se agito por inversin. Terminado el aforado se tom un volumen de la muestra
preparada y fue transferida a la celda del espectrofotmetro, donde se ley la longitud de onda de mxima
absorbancia (Max).

Resultados y discusin.
Determinacin del espectro de absorcin del complejo Tiocianato de hierro (III)

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Curva de calibracin del complejo Tiocianato de hierro (III)

La reaccin que se llev a cabo en este procedimiento fue la siguiente:

FeCl 3 + KSCN --

Fe (SCN) +2

Se determin la concentracin de hierro en las soluciones con las cuales se realiz la curva de calibracin de la
siguiente manera

C1 V 1=C 2 V 2

Baln volumtrico
25 mL
1
2
3
4

FeCl
3 (mL)
2,5
5
7,5
12,5

concentracin

Absorbancia

Longitud de onda

8X10-6
2x10-5
3x10-5
5x10-5

0,037
0,056
0,118
0,205

467,0
467,0
467,0
467,0

17,5

7x10-3

0,288

467,0

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A partir de la anterior grfica y de la ecuacin obtenida despus de aplicar de regresin lnea se encuentro la
concentracin de hierro en la muestra problema

y=0,0651 x0,0545
Dnde:
Entonces
Y: Absorbancia de la muestra problema

y=mX +b

x=

x=

X: Concentracin de la muestra problema

y+ b
m

0,1290,0901
0,5817

x=0,066873

C=

0,066873 x 25 mL
10 mL
C=0,1670

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Cuestionario
1. El cloruro frrico no absorbe en la regin del visible, Qu pasa cuando se le combina con el tiocianato
de potasio? Por qu se desarroll un color rojo? Como se llama los reactivos como el tiocianato de
potasio que al combinarse con el analito generan un color que puede absorber en la regin del visible ?.

Ecuacin qumica que representa la reaccin entre el catin frrico y el anion tiocianato. A la izquierda de
las flechas de reaccin se especifican los reactivos que se mezclan y, a la derecha, los productos
obtenidos y se trata de una reaccin reversible. [1]

2. Cules son los factores que se deben tomar en cuenta para la determinacin espectrofotomtrica de
iones inorgnicos por formacin de complejos?
Los factores que se deben tomar en cuenta son: formacin de insaturaciones, temperatura tiempo,
velocidad a la que reacciona y su equilibrio quimico.
3. cual es al diferencia entre absortividad y absortividad molar?
Se conoce como absortividad molar (E) a la absortividad definida en trminos
de concentraciones expresadas en moles por litro. Antes conocida como coeficiente molar de extincin.
La absortividad especfica (a) es la absortividad definida en trminos de concentraciones expresadas
en gramos por litro. Antes conocida como coeficiente msico de extincin [ 2 ]

4. Que cuidados que se deben tener con las celdas de un espectrofotmetro?

Las celdas espectrofotomtricas deben ser manejadas adecuadamente, si se desean resultados
confiables. Algunas reglas tiles:
1. Inspeccione si hay araazos en las ventanas. Nunca toque las superficies pticas de las
celdas con sus dedos.
2. Utilizar una nica celda para toda una serie de mediciones, o asegurar que todas las celdas
que se utilizan tienen la misma longitud de camino, b, para transmitancias similares.
3. Al llenar las celdas, enjuguelos a fondo con la solucin a medir, y luego rellenar, asegurando
que no haya burbujas de aire que se adhieran a las ventanas. Secar el exterior de la celda con
etanol. Nunca use una toalla de papel.
4. Coloque las celdas dentro del instrumento con cuidado, asegurando que estn bien sentados
en el compartimiento. Utilice la misma orientacin de la celda cada vez que realice la medida.
5. Si se utiliza un disolvente voltil, colocar una tapa sobre la celda para reducir la evaporacin.

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6. Nunca almacene soluciones en las celdas. Enjuagar a fondo cuando haya terminado y dejar
secar en un lugar libre de polvo. Las soluciones bsicas corroen y dejan grabados en las celdas
si no se limpian correctamente.
7. Siempre mantenga las celdas en soportes o cajas para cubetas cuando no estn dentro del
instrumento. [2]
5. Plantee tres problemas en donde se aplique la ley de beer. Ponga atencin en proporcionar todos los
datos requeridos para su resolucin

Una disolucin de KMnO4 es de 1,28 x10-4 M y presenta una transmitancia del 50% a 525 nm utilizando
una celda de 1cm de paso ptico. [3]
a. Cul es la absorbancia de la disolucin?

Solucion:

Conclusin:

En este laboratorio se llevaron a cabo procedimientos de espectrofotometra con el fin de determinar la

longitud de onda de mxima absorbancia del complejo formado haciendo la medicin en toda la regin y
se encuentro la concentracin de hierro en la muestra problema

Cabe mencionar que la espectrofotometra de absorcin es muy til en diversos campos para un anlisis
de muestras que se encuentran en disolucin o que mediante un mtodo u otro puedan llegar a
disolverse. Existen diversas aplicaciones de esta tcnica en estudios medio ambientales, en la
determinacin de sustancias contaminantes a nivel de trazas y en particular la de metales pesados entre
otras.

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Referencias:
[1]. Abril D Nieves. (2009) Espectrofotometra: espectros de Absorcin Y Cuantificacin Colorimtrica
De Biomolculas. Departamento De Bioqumica, Facultad De Medicina, Campus Universitario De
Rabanales
[2 ]http://reuredc.uca.es/index.php/tavira/article/viewFile/234/pdf_92

[3] http://es.wikipedia.org/wiki/Absortividad
[4]. http://datateca.unad.edu.co/contenidos/401539/exe-2%20de
%20agosto/leccin_5_instrumentacin_de_la_espectrofotometra_uvvis.html
[5]http://dadun.unav.edu/bitstream/10171/34794/1/(C)%202002%20Dr%20JM
%20Fernandez%20MANERES.pdf

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