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Departamento de Microbiologia

Instituto de Cincias Biolgicas


Universidade Federal de Minas Gerais
http://www.icb.ufmg.br/mic

Colorao de Ziehl-Neelsen
Introduo
O estudo das micobactrias apresenta grande importncia em medicina humana e animal. No gnero Mycobacterium incluem-se os agentes da tuberculose (M. tuberculosis, M. bovis e M. avium) e da
lepra (M. leprae), alm de outras espcies, algumas saprfitas e outras de patogenicidade peculiar.
So caractersticas do gnero:
- Aerobiose estrita;
- Reproduo lenta, mesmo em condies timas (seu perodo de duplicao de 12 a 18
horas enquanto outras bactrias podem se duplicar em 20 minutos);
- Reaes tintoriais prprias que as fazem conhecidas com lcool-cido-resistentes
(B.A.A.R.) evidenciadas pela colorao de Ziehl-Neelsen. Coram-se pela mistura fucsina mais cido
fnico aquecido, que penetra no citoplasma e resistem descolorao com uma mistura de cido e
lcool.
- Grande resistncia ao dos agentes qumicos, o que permite o seu isolamento em material contaminado com outros microrganismos;
- Exigncia nutritiva: nos meios comumente usados (Lowenstein-Jensen e Petragnani, base
de ovo), o crescimento se d aps 12 a 15 dias, mas as culturas devem ser mantidas em observao
por at 6 a 8 semanas. Antes da semeadura do material, se contaminado com outras bactrias,
deve-se proceder descontaminao. O isolamento do germe permite a sua tipificao, quer pelo
aspecto da colnia desenvolvida (eugnica ou disgnica), quer por provas bioqumicas ou fagotipagem. Tambm o aspecto microscpico da colnia importante (fator corda).
- Patogenia peculiar: o parasitismo intracelular, levando a leses que tendem cronicidade, com aparecimento de hipersensibilidade do tipo tardio. Os anticorpos participam da imunidade
que se desenvolve contra o microrganismo. M. leprae no cultivvel, sendo visvel apenas em
material colhido de paciente, com a disposio tpica de globias (bacilos em forma de cachos, onde
os bacilos se acham reunidos por uma substncia de concentrao no corvel, a glia). Entre as
micobactrias atpicas, algumas so patognicas para o homem.

Material para colorao de ziehl-neelsen


- Lminas com esfregao de escarro bacilfero de paciente tuberculoso;
- Bateria de corantes de Ziehl-Neelsen:
- Fucsina: Dissolver 3g de fucsina bsica em 10 ml de etanol 90%-95%, em seguida adicionar
90 ml de uma soluo aquosa de fenol a 5%
- lcool cido: Adicionar 3 ml de HCl concentrado em 97 ml de etanol a 90%-95%.
- Azul de Metileno: Dissolver 0.3 g de azul de metileno em 100 ml de gua destilada.

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Execuo

- Cobrir a lmina, previamente fixada pelo calor, com fuscina fenicada. Aquecer at a emisso
de vapores, sem deixar o corante secar, por 3 a 5 minutos;

- Lavar em gua corrente;

- Em seguida descorar completamente com lcool-cido;

- Lavar em gua corrente novamente;

- Contracorar com azul de metileno por 30 segundos;

- Lavar em gua corrente novamente;

- Examinar a lmina ao microscpio com objetiva de imerso.

Leitura e interpretao
Os B.A.A.R. apresentam-se como bastonetes finos, corados em vermelho, sobre fundo corado em
azul (figura 01). O resultado do exame de escarro corado pelo Ziehl-Neelsen pode ser dado conforme a seguinte tabela do Servio Nacional de Tuberculose.
Resultado
Negativo

Interpretao
Ausncia de B.A.A.R. em 100 campos microscpicos (CM).

Exame a ser repetido

1 a 2 B.A.A.R. em 100 campos microscpicos.

Positivo

(+)
(++)
(+++)
(++++)

A bacterioscopia do escarro pela colorao de


Ziehl-Neelsen um mtodo simples, porm
de extrema valia no diagnstico da tuberculose pulmonar. Este mtodo largamente
utilizado para a deteco de novos casos da
doena. O diagnstico da tuberculose est
sendo feito pelos rgos de sade estaduais,
atravs de diversos postos, estrategicamente distribudos e o tratamento, sempre que
possvel, ambulatorial e somente feito em
hospitais centrais.Vale ressaltar que o mtodo apresenta apenas valor presuntivo e no
de certeza, isto , outras espcies de micobactrias podem se corar. Assim o resultado
do B.A.A.R. positivo num escarro implica na
ideia de que se trata do M. tuberculosis com
margem grande de segurana, mas no deve
ser encarado como um valor absoluto.
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Menos de 10 B.A.A.R. em 100 CM


1 a 10 B.A.A.R. em 10 CM
11 a 100 B.A.A.R. em 10 CM
Mais de 100 B.A.A.R. em 10 CM

Figura 1: Bactrias do gnero Mycobacterium coradas pela tcnica Ziehl-Neelsen. As bactrias se


apresentam em forma de bacilos longos corados
em vermelho.

Contudo, isto no desvaloriza o mtodo e, quando executado por tcnico habilitado, permite o diagnstico muitas vezes precoce. Atravs da diminuio do nmero de bacilos (por campo microscpico) e de modificaes da morfologia dos bacilos, o mtodo permite acompanhar a evoluo do
tratamento.
Alm do escarro, outros materiais biolgicos podem ser usados para o diagnstico da tuberculose
pulmonar (lavado brnquico, lavado gstrico, swab da laringe) e de outros rgos (urina, lquor,
peas de bipsia, etc.).

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Leiteratura Sugerida
MURRAY, P. R. et al. Microbiologia mdica. 5 ed. - Rio de Janeiro (RJ) Elsevier, 2006.
SIQUEIRA, L. F. de G.; BELDA, W.; ALMEIDA, R. G de. Modificao da colorao de fundo da tcnica
de Ziehl-Neelsen na identificao do Mycobacterium leprae. Hansenologia internatinalis; 7(2): 8894, dez. 1982.

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