Dr.

Francisco Nez de Cceres Gonzlez

Laboratorio de Sistemtica Molecular.
Centro de Investigaciones Biolgicas.
Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo.

El descubrimiento del ADN

Friedrich Miescher

Friedrich Miescher, un medico suizo, realizaba

investigaciones sobre qumica de tejidos en el
laboratorio Hoppe-Seyler en Tubingen, Alemania.
Su objetivo era aislar leucocitos de muestras de
pus de una clnica cercana. Durante sus
experimentos logro aislar una molcula con
caractersticas diferentes, era muy grande, de
carcter cido y rica en fosforo. A esta molcula
la denomino nucleina y determin que estaba
compuesta por hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y
fosforo y con una relacin entre nitrgeno y
fosforo nica. Sus resultados fueron publicados
en 1871 y continuo con sus estudios usando
semen de salmn en sustitucin de pus. En 1889
Richard Altmann, un discpulo de Miescher,
desarroll los mtodos para purificar ADN libre de
protenas de varios tejidos animales y levaduras y
fue el quien acu el trmino Acido Nucleco.

Frederick Griffith

Los resultados de los experimentos de Griffith en

1928 fueron de los primeros en sugerir que las
bacterias eran capaces de transferir informacin
gentica (en ese momento desconocida) a travs
de un proceso llamado transformacin. En sus
experimentos inyecto ratones con dos tipos de
bacterias III-S (letales) eliminadas por calor y II-R
vivas (no letales). Al inyectar una combinacin de
ambas bacterias a otro grupo de ratones y ver
que estos moran Griffith determino que era
imposible que las bacterias muertas revivieran
por lo que estas haban transferido algo a las
bacterias vivas lo cual denomino Principio
transformante. Cuando crecieron en cultivo, las
bacterias siguieron produciendo clulas tipo III-S
por lo que el cambio era estable y permanente.
Durante los siguientes 15 aos se enfoc en
purificar ese principio transformante y entender
su naturaleza qumica.

Oswald Avery

Colin MacLeod

Maclyn MacCarty

Interesados en los experimentos de Griffith. Estos tres investigadores se enfocaron a analizar la actividad
transformadora de cada uno de los componentes de la lisis de los cultivos bacterianos de usados por Griffith.
Inicialmente incubaron la lisis de la cepa lisa muerta por calor con una enzima que consume completamente la
cubierta de azcar. Esta segua siendo til para transformar lo que indicaba que las cepas R no creaban una
nueva capa a partir de las partes de la cubierta de cepa lisa. Despus incubaron la lisis de cepa lisa sin
cubierta con enzimas que digieren protenas (tripsina y quimotripsina) y descubrieron que la actividad
transformadora se mantena, infiriendo as que el principio trasformador no era una protena. Cuando vieron
que el principio transformante no estaba en la cubierta de azcar, ni era una protena sospecharon que tal
vez estara en uno de los cidos nucleicos.
Disolvieron la mezcla con alcohol en agua, precipitando as los cidos nucleicos y adicionaron la enzima
RNAsa para digerir el RNA. Esta solucin todava tena capacidad para transformar, de tal manera que el ARN
fue descartado. Teniendo ya ADN virtualmente puro, lo incubaron con la enzima digestora de ADN, DNAsa. Al
probar la capacidad trasformadora de esta solucin , sta fue incapaz de transformar. Avery y sus colegas
concluyeron as que el ADN era el Principio transformante y publicaron sus resultados en 1944.

Alfred Hershey

Martha Chase

Con el objetivo de refutar los resultados y teoras de Avery y sus colegas, Alfred Hershey junto a su tcnica de
laboratorio Martha Chase (Cold Spring Harbour Lab) decidieron analizar la transferencia de protenas y ADN de
un virus a su husped. Ellos usaron el fago T2, un virus que consiste nicamente en una cubierta proteica o
cpside que contiene su material gentico, e infecta a una bacteria cuando se adhiere a su membrana externa,
inyecta dicho material y le deja acoplado el cpside. Como consecuencia, el sistema gentico de la bacteria
reproduce el virus y posteriormente esta muere. En un primer experimento, marcaron el DNA de los fagos con
el istopo radiactivo fsforo-32 (P-32). Dejaron que los fagos del cultivo infectaran a las bacterias E. coli y
posteriormente retiraron las cubiertas proteicas de las clulas infectadas mediante una licuadora y
una centrfuga. Hallaron que el indicador radiactivo era visible slo en las clulas bacterianas, y no en las
cubiertas proteicas. Posteriormente, marcaron los fagos con el istopo azufre-35 (S-35). Los
aminocidos cistena y metionina contienen azufre, no as el ADN. Tras la separacin, se hall que el indicador
estaba presente en las cubiertas proteicas, pero no en las bacterias infectadas, con lo que se confirm que era
el ADN lo que se transfera e infectaba a las bacterias.

Interesado por los resultados publicados por

Avery y su grupo, el bioqumico austriaco
Erwin Chargaff basado en los resultados de
sus experimentos en laboratorio propuso dos
reglas, la primera era que la cantidad de
adeninas era siempre igual a la de timinas y
la de guaninas a la de citosinas dando as
los
primeros
indicios
de
su
complementariedad. La segunda regla era
que la proporcin de bases es diferente en
cada especie, sugiriendo que era el ADN el
que contena el material gentico y no las
protenas. En 1952 se reuni con Watson y
Crick en Cambridge siendo este evento uno
de los que daran mas fuerza al modelo
propuesto por los ltimos en 1953.
Erwin Chargaff

Rosalind Franklin

Maurice Wilkins

Rosalind Franklin trabaj en 1951 como investigadora asociada en el laboratorio de John Randall en el King's
College de Londres. Rosalind Franklin mantuvo aqu una relacin compleja con Maurice Wilkins quien tambin
trabajaba en cristalografa de rayos X. Wilkins mostr sin su permiso la famosa imagen 51 de difraccin de
rayos X del ADN de Franklin a James Watson y Francis Crick. Esta fotografa confirmaba la teora de una
estructura tridimensional del ADN siendo este el impulso mas fuerte para la publicacin por ellos, en 1953, de
la estructura del ADN. En febrero de 1953, a la edad de 33 aos, Rosalind escribi en sus notas de trabajo "la
estructura del DNA tiene dos cadenas". Para ese entonces, ella tambin saba que la molcula del DNA tiene
sus grupos fosfato hacia afuera y que existe en dos formas. Franklin muri prematuramente, de cncer de
ovario, en 1958 muy probablemente por las repetidas exposiciones a la radiacin durante sus investigaciones.
Las condiciones que como mujer tuvo que soportar en Cambridge y ciertas palabras despectivas de James
Watson, hacen aparecer como un agravio la concesin del Premio Nobel de Fisiologa o Medicina slo a
Watson, Crick y Wilkins en 1962.

En noviembre de 1952, Pauling estaba

decidido a descifrar la estructura del ADN.
Basado en imgenes de microscopio
electrnico obtenidas por Robley Williams en
Caltech y en clculos del mismo investigador
respecto al tamao de las estructuras
observadas Pauling quedo convencido de
que la molcula de ADN estaba conformada
por una triple hlice con los fosfatos en la
parte interior. Cabe notar que en ese
momento Watson y Crick estaban tambin
convencidos de esta teora de triple hlice
hasta que los resultados de Rosalind
Franklin mostraron la verdadera estructura.
Linus Pauling

James Watson y Francis Crick

Inspirados por el trabajo de Linus Pauling, el estudiante de posgrado Francis Crick y el
investigador James Watson (Cambridge University) enfocaron su investigacin a descifrar la
estructura de ADN para poder comprender mejor su funcionamiento. En 1953, basados en los
resultados de Franklin y con el conocimiento de los experimentos de Chargaff, los investigadores
propusieron el modelo de la doble hlice como se conoce en la actualidad. Ellos mostraron que
cada hebra de ADN era una plantilla para la otra y que durante la divisin celular estas hebras se
separaban y una nueva hebra se produca por cada una. De esta forma el ADN se poda duplicar
a si mismo si sufrir cambios en la estructura. El modelo se ajustaba perfectamente a los datos
experimentales por lo que fue aceptado casi de inmediato. Este descubrimiento ha dado paso a
los avances que muchos aos despus se tienen sobre los genes y su funcin. Ellos junto a
Maurice Wilkins fueron galardonados con el Premio Nobel en 1962

Estructura de los cidos nucleicos

La estructura de los cidos nucleicos esta constituida por unidades qumicas
repetidas formadas por un grupo Fosfato, un Azcar y una Base Nitrogenada.
Dichas unidades qumicas son denominadas NUCLETIDOS.

RIBOSA

FOSFATO

DESOXIRIBOSA

BASES

Las bases nitrogenadas a su vez se dividen en dos grupos dependiendo su

estructura. Las Pirimidinas y las Purinas.

Los nucletidos estn

unidos entre si de forma
covalente para formar un
polmero lineal, o cadena,
con
un
esqueleto
compuesto de azcares
que se alternan con
grupos fosfato, unidos
por
enlaces
3-5
fosfodiester.

En 1950 Erwin Chargaff (Columbia University) mediante experimentos de

hidrlisis de las bases fijas de los azcares intent determinar la composicin
de bases de diversas muestras de ADN. Se esperaba que la relacin de bases
en el ADN fuera de 1:1:1:1 pero sus resultados mostraron algo muy distinto.

Uno de los resultados mas interesantes fue el que el nmero de adeninas

siempre era igual al de timinas y el nmero de guaninas igual al de citosinas.
Esto mostraba una relacin directa entre dichas bases.

[A]=[T],[G]=[C],[A]+[T][G]+[C]

La siguiente tabla es un extracto de los datos reportados por Chargaff, listando la

composicin de bases del ADN de varios organismos.

Las bases nitrogenadas que componen al DNA tienen una relacin estequiomtrica
constante y estable mediada por puentes de hidrgeno.

Esto se conoce como principio de Chargaff , aplicables nicamente al ADN. En los

procariontes y organismos inferiores hay un predominio de la dupla GC sobre AT,
mientras que en eucariontes el predominio es inverso.

Tras estos descubrimientos, y basndose en los datos de difraccin de rayos X

obtenidos por Rosalind Franklin y Maurice Wilkins (Kings College) James
Watson y Francis Crick (Cambridge) propusieron un modelo de la estructura de
ADN en 1953.

Los puntos principales de su propuesta eran:

La molcula est formada por dos cadenas de nucletidos.

Las dos cadenas se enrollan en espiral formando un par de hlices
dextrgiras.

Las dos cadenas discurren en direccin opuesta, es decir, son

antiparalelas.
El esqueleto de azcar-fosfato-azcar-fosfato se encuentra en el exterior
de la molcula con dos grupos de bases hacia el centro.
Las dos cadenas se mantienen unidas mediante puentes de hidrgeno
entre las bases, una pirimidina en una cadena siempre esta pareada con
una purina en la cadena complementaria siendo los nicos pares posibles
A-T y G-C.

Los puntos principales de su propuesta eran:

La distancia entre el eje y un tomo de fsforo es de 1 nm haciendo el

ancho de la doble hlice de 2 nm.
Los espacios entre los giros que forman la hlice crean dos surcos (surco
mayor y surco menor).
La doble hlice da una vuelta completa cada 10 residuos de nucletido ( 3.5
nm).
Debido a la nica unin entre A y T y entre G y C, ambas cadenas de la
doble hlice son complementarias entre si.

Modelo estructural de doble hlice

Puentes de hidrgeno y distancias

entre las bases nitrogenadas

Modelo estructural de doble hlice

EVALUACIN

Realizar un ensayo de 3 hojas con al menos 5 referencias

bibliogrficas donde discutas que impacto histrico, cientfico y
social ha tenido el descubrimiento del ADN y su estructura.

Formas y organizacin del ADN

Como ya lo hemos mencionado,

el DNA se organiza en una cadena
bicatenaria complementaria en
situacin antiparalela. Esta doble
hebra puede ser observada desde
distintos niveles.

Estructura primaria del ADN

La estructura primaria se
considera la secuencia de
nucletidos encadenados. Es en
estas cadenas donde se encuentra
la informacin gentica, y dado
que el esqueleto es el mismo para
todos, la diferencia de la
informacin radica en la distinta
secuencia de bases nitrogenadas.
Esta secuencia presenta un
cdigo, que determina una
informacin u otra, segn el orden
de las bases.

Estructura secundaria del ADN

Esta se refiere a la conformacin
tridimensional del ADN que asume como
resultado de la estructura primaria. Es una
cadena doble, dextrgira o levgira,
segn el tipo de DNA. El polmero muestra
una periodicidad de 3.4 correspondiente
a la distancia entre dos bases y otra
periodicidad de 34 correspondiente a la
distancia de un giro de la doble hlice
Ambas cadenas son complementarias,
pues la adenina y la guanina de una
cadena se unen, respectivamente, a la
timina y la citosina de la otra mediante
puentes de hidrgeno. Dichas cadenas
son antiparalelas, pues el extremo 3 de
una se enfrenta al extremo 5 de la
homloga.

Estructura secundaria del ADN

Las
bases
nitrogenadas
son
hidrofbicas y se orientan hacia el
interior de la molcula mientras que el
grupo fosfato y el azcar son
hidroflicas y se orientan hacia afuera.
La doble hlice es una molcula rgida
y un tanto viscosa de un dimetro
pequeo y una longitud muy grande.
Presenta una hendidura o surco menor
el cual se encuentra entre cada par de
bases y un surco mayor entre cada
giro de la doble hlice. Existen tres
modelos de ADN. El de tipo B que es el
ms abundante y es el que tiene la
estructura descrita por Watson y Crick,
tambin se conoce el modelo A y el
modelo Z

Estructura secundaria del ADN

El
DNA
existe
en
diversas
conformaciones. Sin embargo, en
organismos vivos slo se han
observado, como ya se mencion, las
conformaciones A, B y Z. La
conformacin que adopta el DNA
depende de su secuencia, la cantidad y
direccin de superenrollamiento que
presenta, la presencia de modificaciones
qumicas en las bases y las condiciones
de la solucin, tales como la
concentracin de iones de metales y
poliaminas. De las tres conformaciones,
la forma "B" es la ms comn en las
condiciones existentes en las clulas.

Estructura secundaria del ADN

La forma "A" es una espiral que gira
hacia la derecha, ms amplia que la
"B", con una hendidura menor
superficial y ms amplia, y una
hendidura mayor ms estrecha y
profunda. La forma "A" ocurre en
condiciones no fisiolgicas en formas
deshidratadas de DNA como las
usadas
en
experimentos
de
cristalografa, mientras que en la
clula
puede
producirse
en
apareamientos hbridos de hebras
DNA-RNA, adems de en complejos
enzima-DNA. Los pares de bases no
se encuentran perpendiculares al eje
como si lo estn en la forma B.

Estructura secundaria del ADN

En el modelo Z, las hebras giran
alrededor del eje de la hlice en una
espiral que gira a mano izquierda, lo
opuesto a la forma "B" ms frecuente. La
estructura se repite cada 2 pares de
bases y las hendiduras mayor y menor
tienen muy poca diferencia en su tamao.
Estas estructuras poco frecuentes
pueden ser reconocidas por protenas
especficas que se unen a ADN-Z y
posiblemente estn implicadas en la
regulacin de la transcripcin. El modelo
Z ha sido difcil de estudiar debido a que
no se encuentra en una forma estable
sino que es inducida por ciertas
actividades biolgicas y posteriormente
desaparece.

Estructura secundaria del ADN

En cuanto a la funcin de las hendiduras o surcos en la doble hlice, estas sirven para
facilitar el reconocimiento de secuencias de ADN por parte de diferentes protenas sin la
necesidad de abrir la doble hlice. As, protenas como los factores de transcripcin que
pueden unirse a secuencias especficas, frecuentemente contactan con los laterales de las
bases expuestos en la hendidura mayor. Por el contrario, los grupos qumicos que quedan
expuestos en la hendidura menor son similares, de forma que el reconocimiento de los
pares de bases es ms difcil; por ello se dice que la hendidura mayor contiene ms
informacin que la hendidura menor.

Estructura secundaria del ADN

El DNA puede retorcerse como una cuerda en un proceso que se denomina superenrollamiento del
DNA (supercoiling, en ingls). Cuando el DNA est en un estado "relajado", una hebra
normalmente gira alrededor del eje de la doble hlice una vez cada 10,4 pares de bases, pero si el
DNA est retorcido las hebras pueden estar unidas ms estrechamente. Si el DNA est retorcido en
la direccin de la hlice, se dice que el superenrollamiento es positivo, y las bases se mantienen
juntas de forma ms estrecha. Si el DNA se retuerce en la direccin opuesta, el superenrollamiento
se llama negativo, y las bases se alejan. En la naturaleza, la mayor parte del DNA tiene un ligero
superenrollamiento negativo que es producido por enzimas denominadas topoisomerasas. Estas
enzimas tambin son necesarias para liberar las fuerzas de torsin introducidas en las hebras de
DNA durante procesos como la transcripcin y la replicacin.

Estructura terciaria del ADN

El ADN se asocia con protenas llamadas histonas para conformar la cromatina. Esta se
encuentra presente en el ncleo y tiene un grosor de 300 , pues la fibra de cromatina de
100 se enrolla formando una fibra de cromatina de 300 . El enrollamiento de los
nucleosomas recibe el nombre de solenoide. Dichos solenoides se enrollan formando la
cromatina del ncleo interfsico de la clula eucariota. Cuando la clula entra en divisin,
el DNA se compacta ms, formando as los cromosomas.

Estructura terciaria del ADN

Las histonas forman un complejo de forma cilndrica denominado nucleosoma, en torno al
cual se enrollan casi dos vueltas de ADN de doble hlice. Estas interacciones
inespecficas quedan determinadas por la existencia de residuos bsicos en las histonas,
que forman enlaces inicos con el esqueleto de azcar-fosfato del ADN y, por tanto, son
en gran parte independientes de la secuencia de bases. Estos aminocidos bsicos
experimentan modificaciones qumicas de metilacin, fosforilacin y acetilacin, que
alteran la fuerza de la interaccin entre el DNA y las histonas, haciendo al DNA ms o
menos accesible a los factores de transcripcin y por tanto modificando la tasa de
transcripcin.

Estructura cuaternaria del ADN

Esta es la estructura que adopta el ADN
cuando se almacena en un espacio
reducido, para formar los cromosomas.
Vara segn se trate de organismos
procariotas o eucariotas. En procariotas el
ADN se pliega como una sper-hlice,
generalmente en forma circular y asociada
a una pequea cantidad de protenas. Lo
mismo ocurre en orgnulos celulares como
las mitocondrias y en los cloroplastos. En
eucariotas, dado que la cantidad de ADN
contenido en un cromosoma es muy
grande, el empaquetamiento ha de ser ms
complejo y compacto; sirvindose de la
presencia de protenas, como las histonas
y otras protenas de naturaleza no
histnica (en los espermatozoides estas
protenas son las protaminas) para ser
reorganizado.

Gen
El ADN contiene cdigos determinados por su secuencia de bases nitrogenadas. Dichos
cdigos son capaces de expresar su informacin en forma de protenas. Se denomina
Gen a la mnima secuencia capaz de ser traducida en forma de una protena. Un gen
entonces contiene la informacin necesaria para elaborar un pptido. Muchas veces se
requieren mltiples genes para completar una protena completa, particularmente en el
caso de protenas polimricas.

Gen
Un gen esta conformado por secuencias denominadas Intrones y Exones ya que la
informacin contenida dentro de cada gen no se lee de corrido. Los intrones son
segmentos de la secuencia del gen que no codifican, es decir, que no van a ser
traducidos. Los segmentos codificantes llamados Exones necesitan transmitir su
informacin de manera que se pueda unir posteriormente, este proceso se conoce como
splicing (deslizamiento) y sucede durante la traduccin del ADN al ARN.

Gen
Los genes que se encuentran prximos dentro de los cromosomas se dice que
estn ligados ya que normalmente se segregan juntos en el momento de la
divisin celular. Sin embargo, existe la posibilidad de la recombinacin
cromosmica, lo que genera mayor diversidad gentica en las siguientes
generaciones.

Genoma

El genoma es el total de ADN

de
una
especie.
En
organismos eucariotas este
se agrupa en cromosomas los
cuales pueden ser mapeados
en un cariotipo y por bandeos
cromosmicos.
En
los
organismos dioicos, la mitad
de los cromosomas proviene
del padre y la otra mitad de la
madre, estos cromosomas se
consideran homlogos.

Genoma
En el caso de las bacterias, estas no presentan
cromosomas sino que su ADN se encuentra en
una molcula libre en el citoplasma que adopta
diferentes conformaciones. Adems, las
bacterias pueden tener pequeos fragmentos de
ADN circular llamados plsmidos.

Los plsmidos son capaces de transferir

informacin de una bacteria a otra y
pueden integrarse al cromosoma
bacteriano. Han sido muy utilizados en
ingeniera gentica para introducir genes
eucarioticos en bacterias para clonar
protenas especficas.

Estructura del ARN

Es una molcula polimrica muy similar
al ADN pero que se diferencia
principalmente por lo siguiente:
Es una molcula de hebra sencilla
en la mayora de sus funciones
biolgicas.
El azcar constitutivo es la ribosa,
hacindolo menos estable que el
ADN ya que es mas propenso a la
hidrlisis.
La base complementaria de la
Adenina es el Uracilo y no la Timina.

Tipos de ARN
Existen diversas formas de ARN que cumplen con una funcin especifica. El
ARN mensajero (mARN) transporta la informacin obtenida a partir del ADN en
el proceso de transcripcin hacia los ribosomas para ser trasformado en una
protena. En clulas eucariotas se tiene primero un ARN precursor (pre-mARN)
el cual es madurado posteriormente durante el transporte a los ribosomas.

Tipos de ARN
El ARN de transferencia (tARN)
es una pequea cadena de
aproximadamente
80
nucletidos que transporta un
aminocido especifico a una
cadena polipeptdica creciente
durante
el
proceso
de
traduccin. Cuenta con sitios de
anclaje
para
aminocidos
especficos as como sitios de
reconocimiento
llamados
codones que identificaran a las
molculas especificas de mARN
durante el mismo proceso.

Tipos de ARN
El ARN ribosomal (rARN) es
el componente cataltico de
los ribosomas. Las clulas
eucariotas contienen cuatro
molculas diferentes de
rARN (18S, 5.8S, 28S y 5S).
En el citoplasma, el rARN
conformar despus una
nucleoprotena
llamada
ribosoma la cual se unir al
mARN y llevara a cabo la
sntesis de la protena en el
proceso de traduccin.

Tipos de ARN
Existen tambin molculas de ARN cuya funcin es la de regular
la expresin gnica en un organismo al ser parte
complementaria de una molcula de mARN o de ADN. Los Micro
ARNs (miARN) se encuentran en clulas eucariotas y estn
formados por aproximadamente 21 nucletidos y actan
mediante la interferencia de ARN (iARN) para bloquear la
traduccin del mARN o acelerar su degradacin. El equivalente
en organismos procariontes son los CRISPR (agregados
regularmente interespaciados de pequeas repeticiones
palindrmicas) ARNs. Los pequeos ARNs de interferencia
(siARN) estn formados por 20 a 25 nucletidos y son
producidos normalmente por la ruptura del ARN viral. Tienen
una funcin muy similar a los miARNs.

EVALUACIN
Realizar una maqueta del ADN, basada en el modelo propuesto por Watson y Crick
en donde se puedan observar los elementos que conforman a los nucletidos, el
emparejamiento de las bases nitrogenadas pricas y pirimdicas y la contra
direccin de las cadenas de fsforo.