Você está na página 1de 8

104

X Salo de
Iniciao Cientfica
PUCRS

Atividade das Ectonucleotidases em Sinaptossomas de Crtex


Cerebral de Ratos Jovens Expostos a uma Dieta Hiperlipdica
e Suplementados com Vitamina E

Gutierres, J.M; Kaizer, R.R; Spanevello, R; Schmatz; Corra, M.C.; Jaques, J. A. S; Becker,
L; Rosa, C. S; Baldissarelli, J; Martins, C. C; Morsch, V.M; Maria Rosa Chitolina Schetinger
(Orientador)
1

Universidade Federal de Santa Maria, UFSM, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, UFRGS,
Departamento de Qumica, RS

Resumo
As doenas crnicas degenerativas e patologias relacionadas a uma disfuno cognitiva
esto intimamente ligadas aos hbitos alimentares. O consumo de dietas ricas em gordura
saturada resultam na formao de radicais livres e conseqente alteraes em importantes
enzimas do sistema nervoso central (SNC). Em adio, a vitamina E tem sido considerada um
agente neuroprotetor importante, devido sua capacidade antioxidante. Assim, o objetivo deste
trabalho foi investigar os efeitos da ingesto de dieta hiperlipdica e suplementao com
vitamina E sobre a atividade das enzimas NTPDase e 5nucelotidase em sinaptossomas de
crtex cerebral de ratos jovens por um perodo de 3 meses. O crtex cerebral foi removido
para as dosagens enzimticas. Foi utilizado ratos machos Wistar (21 dias, 50-60 g) divididos
em seis grupos (n=8): grupo A controle; grupo B, dieta hiperlipdica (DHp); grupo C leo de
canola (Oc), D (DHp+Oc); grupo E, Vitamina E (VE) e grupo F (DHp+VE). Nossos
resultados demonstraram uma maior atividade das enzimas NTPDase e 5-nucleotidase para a
hidrlise de ATP, ADP e AMP de 31,46%; 52,76% e 56,69% respectivamente, nos grupos
que receberam vitamina E comparado ao controle, e uma diminuio significativa no grupo
que recebeu a dieta hiperlipdica em relao ao controle para a hidrolise de ATP, ADP e AMP
de 28,93%; 27,83% e 31% respectivamente . Estes resultados indicam um possvel efeito
compensatrio do organismo mediante a exposio do SNC a dieta hiperlipidica,
demonstrando que a vitamina E foi capaz de aumentar os nveis de adenosina, um importante
neuroprotetor.

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

105

Introduo
O progresso das sociedades ocidentais trouxe o consumo de dietas ricas em acarrefinado e gordura saturada. Estudos relatam que essas dietas contribuem para o declnio
cognitivo no envelhecimento (Knopman et al., 2001) e aceleram o curso da demncia na
doena de Alzheimer (AD) (Kalmijin et al., 1997, 2002). Alm disso, tem sido demonstrado
que a gordura saturada presente nas dietas causa alteraes na atividade de importantes
enzimas do sistema nervoso, alm de induzir peroxidao lipdica alterando desta forma a
composio e a funo das membranas biolgicas (Winocur et al., 1999).
A Vitamina E a denominao genrica desses oito compostos lipossolveis, cada um
dos quais com atividades biolgicas especficas, sendo que o -tocoferol o mais potente
antioxidante (Bianchini et al., 2003; Ball et al., 1998).
O papel teraputico da Vitamina E tem sido estudado em inmeras patologias, e tem
sido demonstrado que este composto possui potente capacidade antioxidante. Est envolvido
no retardamento do envelhecimento e na proteo a doenas crnicas no transmissveis, tais
como aterosclerose, acidente vascular cerebral, doena de Alzheimer, Diabetes mellitus tipos
I e II, e at mesmo na obesidade que resultam em um excesso na formao de radicais livres
(Davies, 1995; Keaney et al., 2003; Maritim et al., 2003; Ceriello e Motz, 2004).
Os nucleotdeos e nucleosdeos de adenina, em especial o ATP e a adenosina so
importantes molculas sinalizadoras no sistema nervoso central. O ATP atua como um
neurotransmissor nas sinapses purinrgicas, e esto envolvidos nos processos de
sinaptognese, crescimento neurtico e controle do fluxo sanguneo cerebral (Molteni et al.,
2002).
A sinalizao induzida pelo ATP na cascata purinrgica, correlaciona-se diretamente
atividade das enzimas NTPDase e 5nucleotitase. A NTPDase uma ecto enzima capaz de
hidrolisar nucleotdeos tri e di fosfatados, como ATP e ADP, seu respectivo nucleotdeo
monofosfatado AMP (Zimmermann, 2001). A 5-nucleotidase em associao NTPDase,
completa a hidrlise dos nucleotdeos, com a hidrlise do AMP at a produo de adenosina
(Zimmermann, 1992). Alm disso, NTPDase e 5'-nucleotidase so amplamente distribudas
no SNC (Bonan et al., 1998).
Desta forma, considerando um possvel envolvimento do consumo de dietas ricas em
gordura saturada na etiologia de diversas desordens neurolgicas, foi relevante investigar a
atividade das enzimas NTPDase, 5-nucleotidase em sinaptossomas de crtex cerebral de
ratos jovens, submetidos a uma dieta hiperlipdica e suplementados com vitamina E.

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

106

Metodologia
Animais

Foram utilizados ratos machos Wistar (21 dias, 50-60g) divididos em seis grupos
(n=8): grupo A controle, grupo B dieta hiperlipdica (DHp), grupo C leo de canola (Oc),
grupo D (DHp+Oc), grupo E vitamina E (VE) e F (DHp+VE). Esses animais foram obtidos
do biotrio central da UFSM e mantidos em condies padro com temperatura controlada de
250 C e ciclo claro - escuro de 12 horas cada, recebendo gua e rao ad libtum.

Tratamento

A vitamina E utilizada foi diluda em leo de canola (1ml/kg), na dose de 50 mg/kg e


administrada por gavagem num perodo de 3 meses. A dieta utilizada foi de acordo com
Kaizer, et al. (2007).

Atividades Enzimticas

O crtex cerebral foi cuidadosamente retirado e utilizado para a preparao de


sinaptossomas de acordo com o mtodo de Nagy & Delgado Escueta (1984) usando um
gradiente descontnuo de Percoll. A atividade das enzimas NTPDase e 5-nucleotidase em
sinaptossomas foi determinada segundo Schetinger et al. (.2000) e Heyman et al. (1984)
respectivamente.

Determinao de Protena

A protena foi determinada pelo mtodo de Bradford (1976), usando albumina bovina
srica como padro.

Anlise Estatstica

Os dados foram submetidos anlise de varincia de uma via (ANOVA), utilizando o


teste post-hoc de Duncan, adequado com 95% de significncia (p<0,05).

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

107

Resultados e Discusso

Nossos resultados mostraram que para a hidrlise de ATP no grupo E (458,8211,88)


teve um aumento significativo (p<0,05) em comparao ao A (349,0138,33) e os demais
grupos, o grupo F (359,2432,50) teve um aumento significativo para a hidrolise de ATP
quando comparado com B (248,050,84), F (263,7418,11) e C, mas no foi significativo em
relao a A. O grupo B apresentou um decrscimo significativo na hidrolise de ATP
(248,050,84) quando comparado com os grupos A, C, E e F.
Na hidrlise de ADP, os resultados foram semelhantes aos obtidos em ATP no grupo
E e B (558,8375,42 e 264,0242,07) respectivamente, ou seja em E uma aumento
significativo na hidrolise de ADP em relao a todos os grupos, e em B um decrscimo
significativo na hidrolise de ADP em relao a A (365,8214,7), C (342,1333,77), E e F, e o
grupo F (449,7728,68) teve um aumento significativo na hidrolise de ADP em relao a
todos os grupos.
Em AMP os grupos E (141,7016,36) e F (106,502,91) obtiveram um aumento
significativo em relao a todos os grupos, e uma diminuio significativa no grupo B
(62,434,75) em comparao com A (90,474,30), C (81,788,66), E e F, respectivamente (p
<0,05).
Os resultados obtidos esto representados tambm na forma de grficos (mdia
desvio padro), como segue abaixo:

Figure 1 Atividadeda enzima NTPDase em sinaptossomas de crtex cerebral utilizando ATP como substrato.
Os valores para o controle A foram 349.01 38.33. * Representa diferena significativa para os grupos B, D e E.
** Representa diferena significativa para os grupos B, D e E. *** Representa diferena significativa para os
todos os grupos. As colunas esto representadas como mdia desvio padro, com n=4. (ANOVA de uma via
Duncan Test) (p<0.05).

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

108

Figure 2 Atividade da NTPDase em sinaptossomas de crtex cerebral utilizando ADP como substrato. Os
valores do controle foram 365.8 14.7. * Representa diferena significativa para os grupos B, D e E. **
Representa diferena significativa para os grupos B, D e E. *** Representa diferena significativa para os
todos os grupos. As colunas esto representadas como mdia desvio padro, com n=4. (ANOVA de uma via
Duncan Test) (p<0.05).

Figure 3 Atividade da 5-nucleotidase em sinaptossomas de crtex cerebral utilizando AMP como substrato.
Os valores do controle foram 90.53 4.3. ** Representa diferena significativa para os grupos B, D e E. ***
Representa diferena significativa para os todos os grupos. As colunas esto representadas como mdia desvio
padro, com n=4. (ANOVA de uma via Duncan Test) (p<0.05).

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

109

As alteraes na atividade da NTPDase e 5'-nucleotidase parecem estar relacionados


com distrbios neurolgicos, tais como em modelo experimental de isquemia cerebral e
epilepsia (Schetinger et al., 1998) e de desmielinizao experimental (Spanevello, 2006), mas
tambm na induo de diabetes em ratos (Schmatz, 2009).
Os resultados aqui apresentados mostram um aumento significativo para a hidrlise de
ATP, ADP e AMP nos grupos que receberam vitamina E, e uma diminuio significativa nos
grupos que receberam a dieta hiprlipidica. A NTPDase em associao com a 5nucleotidase
completam a hidrlise dos nucleotdeos, podendo assim ser observado neste trabalho um
aumento dos nveis de adenosina, produto gerado do metabolismo do ATP extracelular,
demonstrando dessa forma que a adenosina tem um papel importante na modulao e
regulao da plasticidade sinptica em ratos (De Mendona e Ribeiro, 1997) alm de a
adenosina ser neuromodulator endgeno que possui propriedades

neuroprotetoras

(Kostopoulos, 1988).

Concluso
Os resultados demonstraram que a dieta hiperlipidica causou uma diminuio na
atividade das ectonucleotidases e que a vitamina E foi capaz de reverter esta diminuio. Este
efeito da vitamina E pode ser muito importante por aumentar os nveis de adenosina
extracelular, uma molcula com propriedades neuroprotetoras.

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

110

Referncias
Ball, G.F.M. (1998). Vitamin E. In: Bioavailability and analysis of vitamin in foods.
London: Chapman & Hall; p.195-239.
Bianchini, R., Penteado MVC. (2003) Vitamina E. In: Vitaminas: aspectos nutricionais,
bioqumicos, clnicos e analticos. Barueri: Manole; p.23-164.

Bonan, C.D., Dias, M.M., Oliveira, A.M.O., Dias, R.D., Sarkis, J.J.F., (1998). Inhibitory
avoidance learning inhibits ectonucleotidases activities in hippocampal synaptosomes of
adult rats. Neurochemical. Research. 23, 979984.
Bradford, M.M., (1976) A rapid and sensitive method for the quantification of
Microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analylical
Biochemistry. v. 72, p. 218-54
Ceriello, A., Motz, E. (2004). Is Oxidative Stress the Pathogenic Mechanism Underlying
Insulin Resistance, Diabetes, and Cardiovascular Disease? The Common Soil Hypothesis
Revisited. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.
Davies, K.J., (1995). Oxidative stress: the paradox of aerobic life. Biochemical Society
Symposia; v.61, p. 131.
De Mendona, A., Ribeiro, J.A., (1997). Adenosine and neuronal plasticity. Life Science.
60, 245251.
Heymann, D.; Reddington M.; Kreutzberg G.W. (1984). Subcellular localization of 5nucleotidase in rat brain. Journal of Neurochemistry . v. 43, p. 971-978
Kaizer, R.R., da Silva, A.C., Corra, M.C., Schetinger, M.R., et al, (2004). Diet-induced
changes in AChE activity after long-term exposure. Neurochemistry Research. v.29,
p.2251-5.
Kalmijin, S., Launer, L.J., Ott, A., (1997). Dietary fat intake and the risck of incident
dementia in the Rotterdam Study. Annals of Neurology, v.42, p. 774-782

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009

111

Kalmijin, S., Foley, D., White, L., (2000). Metabolic cardiovascular syndrome and risk of
dementia in Japanese-american elderly men: the Honolulu-asia aging study.
Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, v. 20, p. 2255-2260.
Keaney, J.R., Larson, M.G., Vasan, R.S., et al., (2003). Obesity and systemic oxidative
stress: clinical correlates of oxidative stress in the Framingham Study. Arteriosclerosis,
Thrombosis, and Vascular Biology; v. 23, p. 4349.
Knopman, D., Boland, L.L., Mosley, T., et al., (2001). Cardiovascular risk factors and
cognitive decline in middle-aged adults. Neurology, v. 56, p. 42-48.
Maritim, A.C., Sanders, R.A., Watkins, 3rd. J.B., (2003). Diabetes, oxidative stress, and
antioxidants: a review. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology ; v. 17, p.2438.
Molteni, R., Barnard, Z.Y., Roberts, C.K., et al., (2002), F. A high-fat, refined sugar diet
reduces hippocampal brain-derived neurotrophic factor, neuronal plasticity, and
learning. Neuroscience, v. 112, p. 803-814.
Nagy, A., Delgado-Escueta A.V., (1984). Rapid preparation of synaptosomes from
mammalian brain using nontoxic isosmotic gradient material (Percoll). Journal of
neurochemistry; v. 43, p. 11141123
Schetinger,

M.R.C.;

Porto

N.M.

et

al

(2000).

New

benzodiazepines

alter

acetylcholinesterase and ATPDase activities. Neurochemical Research. v.25, p. 949955.


Spanevello, R. M. ; Mazzanti, C.M.; Carnagnelluti, D.; Hannel, L.; Corra, M.; Mazzanti, A.;
Graa, D.; Schetinger, M.R.C.; Morsch, V.M.; Kaizer, R.R. Apyrase and 5'-nucleotidase
activities in synaptosomes from the cerebral cortex of rats experimentally demyelinated
with ethidium bromide and treated with interferon beta.. Neurochemical Research, Nova
York - Estados Unidos, v. 31, p. 455-462, 2006.
Zimmermann, H., (2001). Ectonucleotidases: some recent developments and a note on
nomenclature. Drug Development Research, v. 52, p. 44-56.
Zimmerman, H., (1992). 5-nucleotidase-molecular structure and functional aspects. The
Biochemical Journal, v. 285. p. 345-365.

X Salo de Iniciao Cientfica PUCRS, 2009