1.

INTRODUO
Colorao de Gram uma tcnica de colorao para diferenciao de
microorganismos atravs das cores, para serem observados em microscpio
ptico. A tcnica recebeu este nome em homenagem ao mdico dinamarqus
Hans Cristian Joaquim Gram.
Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactrias, aps serem tratadas
com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas.

Assim, as que

ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam

vermelhas,

foram

chamadas

de Gram-negativas. A tcnica

de

Gram

fundamental para a taxonomia e identificao das bactrias, sendo muito

utilizada atualmente, como tcnica de rotina em laboratrios de bacteriologia.

2. OBJETIVOS
Aprender a preparar esfregao de bactrias;
Realizar a tcnica de Colorao de Gram;
Aprender o fundamento do mtodo de colorao de Gram;
Comparar a estrutura da parede celular das bactrias Gram-positivas e
Gram-negativas;

3. MATERIAIS E MTODOS

3.1- MATERIAIS
Foram utilizados os seguintes materiais:

Ala Bacteriolgica

Placas de cultura contendo escherichia coli

Staphylococcus aureus (Gram Positiva)

Recipiente para a colorao de gram

Lmina de vidro

Lugol

lcool

Fucsina

Cristal de Violeta

Bico de Bunsen

Fosforo

Papel Toalha

Microscpico

leo de imerso

3.2- METODOS

(Gram negativa) e

1) Esfregao da Cultura Bacteriana Slida:

Flambou-se a ala de platina, resfriou-se em um tubo com gua
esterilizada. A partir da todo procedimento foi realizado prximo da chama
do bico de bunsen. Em seguida, foi retirada uma gota de gua estril e
depositou-se na lmina. Foi novamente flambado a ala, resfriou-se e assim
foi coletada uma amostra da cultura slida, onde foi levada at a gua
depositada sobre a lmina. Foi homogeneizado com movimentos circulares,
obtendo-se um esfregao oval, uniforme e fino. Aps fixou-se o esfregao
passando a lmina na chama do bico de bunsen, como se cortando a
chama 3 vezes, para que o material fique bem aderido.

2) Adio de Corantes:
Colocou-se a lmina com o esfregao sobre um suporte na pia. Onde foi
realizada a colorao seguindo-se a seguinte sequencia:
Cobriu-se a lmina com cristal violeta foi deixado agir por 1minuto, com isso foi
desprezado o corante no recipiente. 2- Cobriu-se ento com lugol, onde foi
deixado agir por 1 minuto e foi desprendido o corante no recipiente. 3- Cobriuse a lmina com lcool , at que no houvesse desprendimento do corante.
Lavou-se a lmina rapidamente com gua corrente. Cobriu-se a lmina com
safranina e foi deixado agir por 30 segundos, e, novamente lavou-se a lmina.
Aps a lmina foi secada do lado oposto ao esfregao com papel toalha e, em
seguida levada ao microscpio, onde foi primeiro observada na objetiva de 10x
para se ter uma viso se tem esfregao ou no. E depois de observada na
objetiva de imerso.

4. RESULTADOS E DISCUSSES
4.1 Resultados Obtidos com a colorizao de Gram

Staphylococcus aureus

Aps proceder o mtodo de colorao de Gram na bactria Staphylococcus

aureus a colorao final obtida havia sido roxa, em seguida pela anlise
microscpica foi possvel visualizar que as mesmas possuam formato esfrico
e arranjo em cachos.A colorao final roxa obtida permite a classificao da
bactria Staphylococcus aureus como Gram positivas, as quais contm uma
espessa parede celular de peptidoglicano dando s bactrias a capacidade de
reter a cor arroxeada.

Escherichia coli

Bactria Gram-negativa
Forma: bastonete
Aps proceder o mtodo de colorao de Gram na Bactria Eschericha
Coli a colorao final obtida havia sido vermelha, e foi possvel
observa que possuam forma de bastonete.

4.2 Desenhos observados no Microscpico

(desenhar)
Staphylococcus aureus (Gram Positiva)

Escherichia coli (Gram Negativa)

5. CONCLUSO
A tcnica da colorao diferencial de Gram mostrou-se muito eficiente, pois foi
possvel chegar a uma concluso sobre a forma e o arranjo das bactrias que
nos foi proposto analisar.

6. REFERNCIAS
TORTORA, G. J., FUNKE, B. R., CASE, C. L.. Microbiologia. 8ed. Porto Alegre
Artmed,2005.