Universidad Catlica Santa Mara

EXCELENCIA ACADEMICA Y PROFESIONAL

Facultad de Ciencias e Ingenieras Biolgicas

y Qumicas
Programa Profesional de
Ingeniera de Industria Alimentaria
Curso: Anlisis Instrumental de los Alimentos
III
Tema: ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION
MOLECULAR ULTRAVIOLETA VISIBLE
INTEGRANTES:
Michelle Garcia Barrionuevo
Adriano Daniel Padilla Miovich
SEMESTRE: V
AREQUIPA- 2015

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION
MOLECULAR ULTRAVIOLETA VISIBLE
ndice:
1. Introduccin
3
2. Conceptos bsicos de estructura molecular
3
3. Orbitales moleculares y enlace qumico
3
4. Radiacin electromagntica (R.E.)
4
5. Parmetros ondulatorios
5
6. Propiedades corpusculares de la radiacin electromagntica
6
7. Interacciones entre la materia y la energa radiante (E.R.)
7
8. Absorcin de la radiacin
8
8.1. Absorcin molecular
8
8..2 Espectro de absorcin
9
8.3 Medidas cuantitativas de la radiacin - Ley de Beer
9
8.4 Medicin experimental de la absorcin
10
8.5 Limitaciones a la aplicabilidad de la Ley de Beer
11
9. Aplicaciones de las mediciones de absorcin de radiacin
ultravioleta
y visible
12
9.1 Especies absorbentes
13
9.2 Explotacin analtica
14
10. Instrumentacin
15
10.1 Breve descripcin de los principales componentes de
instrumentos convencionales
16
10.2 Esquema general de los sistemas pticos de espectrofotmetros
11. Anlisis cualitativo y cuantitativo
17
11.1 Tcnicas cualitativas
18
11.2 Anlisis cuantitativo
18

13. Otras aplicaciones

13.1 Anlisis de mezclas
20
14. MATERIALES, PROCEDIMIENTOS Y METODOLOGAS
21
14.1. Procedimiento
22
15. Resultados
16. Clculos
25
17. Discusin
26
18. Conclusiones
19. Bibliografa
20. Anexos

19

24

28
29
30

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION
MOLECULAR ULTRAVIOLETAVISIBLE

1. INTRODUCCIN
La espectrofotometra de absorcin molecular ultravioleta visible, comnmente llamada
espectrofotometra UV-VIS, tiene una larga y continua historia en el campo de la
qumica analtica. Esta tcnica est basada en la medicin de absorcin de radiacin
U.V. o visible por determinadas molculas. La radiacin correspondiente a estas
regiones del espectro electromagntico provocan transiciones electrnicas a
longitudes de ondas caractersticas de la estructura molecular de un compuesto.

2. CONCEPTOS BSICOS DE ESTRUCTURA MOLECULAR

Toda consideracin de la estructura de las molculas debe comenzar con un estudio
de los enlaces qumicos, las fuerzas que mantienen unidos a los tomos en una
molcula.
Enlace inico:

el enlace inico es un enlace que se forma por la transferencia de uno o

ms electrones de un tomo o grupo de tomos.

se forma cuando dos tomos comparten uno o ms pares de electrones. La

mayora de estos enlaces abarcan dos o tres pares de electrones. As dos
Enlace covalente: tomos forman un enlace covalente simple cuando comparten un par de
electrones; un enlace covalente doble, dos pares de electrones y un triple
enlace tres pares de electrones.
CH3 - CH3; CH2 = CH2; CH = CH

3. ORBITALES MOLECULARES Y ENLACE QUMICO

Las distribuciones espaciales de los electrones en las molculas se
denominan orbitales moleculares (O.M.) y de una manera simple se puede suponer
que el orbital molecular es la suma de los orbitales atmicos (O.A.) enlazantes y que el
nmero de orbitales resultante es igual al nmero de orbitales utilizados en la
combinacin.
Cuando se combinan dos O.A. resulta un orbital molecular de enlace de baja energa
y un orbital molecular antienlazante de alta energa .
O.A. sigma ():

O.A. pi ():

en las molculas orgnicas est asociado con el enlace simple. Resulta del
solapamiento frontal de dos orbitales atmicos.
O. Molecular enlazante ; O. Molecular * antienlazante.
el doble enlace en las molculas orgnicas contiene dos tipos de orbitales
moleculares, un orbital y un orbital .
Los orbitales moleculares resultan del solapamiento lateral de orbitales
atmicos .
O. Molecular enlazante ; O. Molecular * antienlazante.

Adems de los electrones y , muchas molculas orgnicas contienen electrones

que no forman enlaces. Estos electrones no compartidos se representan en el smbolo
.
Figura 3.1. Transiciones electrnicas entre orbitales , , y .

Tabla 3.1. Caractersticas de transiciones electrnicas entre orbitales , y

Transicin

(nm)

(L mol cm )

Ejemplo

<200

Hidrocarburos saturados

200500

104

160260

10 10

250600

10 103

-1

Alquenos, alquinos aromticos

3

H2O, CH3OH, CH3CL

Carbonilos, nitro, nitrato, carbonilo.

4. RADIACIN ELECTROMAGNTICA (R.E.)

La radiacin electromagntica es un tipo de energa que se transmite por el espacio a
enormes velocidades. Muchas de las propiedades de la R.E. se explican
convenientemente mediante la teora ondulatoria clsica con parmetros como
velocidad, frecuencia, longitud de onda y amplitud. En contraste con otros fenmenos
ondulatorios, como el sonido, la R.E. no requiere un medio de transporte para su
transmisin, por lo tanto se transmite fcilmente en el vaco.
La teora ondulatoria para la R.E. no explica completamente los fenmenos asociados
con la absorcin o la emisin de energia radiante, para estos procesos es necesario
considerar la energa radiante como un flujo de partculas discretas de energa
llamados fotones o cuantos.
Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partcula) y se
aplican tanto al flujo de electrones como al de otras partculas elementales.
En la Figura 3.2. se ha representado el vector elctrico en la ordenada, de una onda
electromagntica.
Figura 3.2. Haz de radiacin electromagntica

5. PARMETROS ONDULATORIOS
tiempo necesario para que dos mximos sucesivos de una onda pasen por
un punto.
nmero de oscilaciones del campo elctrico por segundo y es igual 1/p (1
Frecuencia (v): ciclo por segundo = 1 Hertz, Hz). La frecuencia es una magnitud invariable
que est determinada por la fuente de radiacin.
velocidad a la que un frente de onda se desplaza a travs de un medio,
Velocidad
depende tanto de la densidad del medio como de v. En el vaco la velocidad
de propagacin
de la R.E. es independiente de la frecuencia: C vaco =2.997 1010 cm/s 3.0
(V1):
1010 cm/s
Longitud de
es la distancia lineal entre dos mximo o dos mnimos sucesivos de una
onda ():
onda.
Perodo (p):

Unidades de
Angstrm

10-10m

(rayos X; UV en el vaco)

Nanometro nm

10-9m

(UV-VIS)

Micrometro m

10-6m

(IR)

Nmero de onda:
1/ (cm-1).

6.

se define como el nmero de ondas por centmetro y es igual a

PROPIEDADES

ELECTROMAGNTICA

CORPUSCULARES

DE

LA

RADIACIN

7
Ciertas interacciones de la radiacin con la materia requieren que la R.E. sea tratada
como paquetes de energa llamados fotones o cuantos.

donde h es la constante de Planck, h = 6.63. 10-27 erg.s

7. INTERACCIONES ENTRE LA MATERIA Y LA ENERGA RADIANTE (E.R.)

Cuando la radiacin pasa desde el vaco a la superficie de una porcin de materia, el
vector elctrico de la radiacin interacciona con los tomos y molculas del medio. La
naturaleza de esta interaccin depende de las propiedades de la materia y puede dar
lugar a latransmisin, la absorcin o la dispersin de la radiacin.

FENMENO

EXPLOTACIN ANALTICA

Transmisin
Dispersin
Absorcin

Indice de refraccin
Reflexin. Efecto Tyndal. Nefelometria
Molecular, atmica

8. ABSORCIN DE LA RADIACIN
Al pasar R.E. por una capa transparente de un slido, lquido o gas, pueden eliminarse
selectivamente ciertas frecuencias como consecuencia del proceso llamado absorcin.
En este caso la E.R. se transfiere a los tomos o molculas que constituyen la
muestra, como resultado de ello estas partculas pasan del estado de menor energa a
estados de mayor energia o estados excitados.

8.1. Absorcin molecular

La absorcin por molculas poliatmicas, es un proceso considerablemente ms
complejo que la absorcin atmica, ya que el nmero de estados de energa est muy
aumentado. Aqu la energia total de una molcula est dada por:
E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional
Para cada estado de energa electrnica de la molcula hay normalmente varios
estados vibratorios posibles y a su vez, para cada uno de stos existen numerosos
estados rotatorios. Como consecuencia el nmero de posibles niveles de energa de
una molcula es mucho mayor que el de una partcula atmica. Es por ello que los
espectros de absorcin aparecen como anchas bandas.

8..2 Espectro de absorcin

8
Tanto las molculas como los tomos tienen un nmero limitado de niveles o estados
energticos cuantizados. Para que se produzca absorcin de radiacin, la energa del
fotn excitante (incidente) debe igualar a la diferencia de energa entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de la especie absorbente. Estas
diferencias de energa (E) son nicas, por lo tanto permiten caracterizar los
constituyentes de una muestra. Para este objeto se obtiene experimentalmente una
representacin grfica de la variacin de la absorbancia en funcin de la longitud de
onda.
Figura 3.4. Espectros de absorcin molecular caractersticos

8.3 Medidas cuantitativas de la radiacin - Ley de Beer

La Figura 3.5. esquematiza el fenmeno de absorcin, aqu un haz de radiacin
monocromtico, pasa a travs de una capa de solucin de b cm de espesor y que
contiene una especie molecular absorbente cuya concentracin es c.
Figura 3.5. Fenmeno de absorcin

9
Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partculas
absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po a P. Por lo tanto la transmitancia T
de la solucin es la fraccin de radiacin incidente transmitida (o no absorbida) por la
solucin segn:

Segn la Ley de Beer, entonces, la absorcin A estar determinada por:

donde:

absortividad molar
b longitud de paso ptico
c concentracin en moles/l

8.4 Medicin experimental de la absorcin

Segn vimos en el esquema anterior la absorcin es directamente proporcional a la
longitud (b) de la trayectoria de la radiacin a travs de la solucin y a la concentracin
(c) de la especie absorbente: A = a . b . c (con a: cte. de proporcionalidad).
Si c se expresa en moles por litro y b en cm, entonces la absortividad se
denomina absortividad molar ():A=.b.c.
La Ley de Beer se cumple igualmente en soluciones que contienen ms de una
especie absorbente, siempre que no haya interaccin entre dichas especies. Por tanto,
para un sistema multicomponente la relacin ser:
AT =
AT = 1bc1+2bc2++nbcn

A1+A2++An

8.5 Limitaciones a la aplicabilidad de la Ley de Beer

Se observan frecuentemente desviaciones de la proporcionalidad entre A y c (cuando
b es constante). Algunas de estas desviaciones son importantes y representan
limitaciones reales de la ley. Estas son de tipo:

qumico;

instrumental.

La Ley de Beer es slo aplicable a soluciones en las que las interacciones

dependientes de la concentracin de las molculas o iones son mnimas.
Concentraciones alts alteran las absortividades molares y por lo tanto conducen a
una relacin no lineal entre A y c.
a) Desviaciones qumicas
Cuando las especies absorbentes experimentan asociacin, disociacin o reaccin
con el solvente originan productos con caractersticas absorbentes distintas de las del
analito.

10
Un ejemplo tpico se observa con soluciones de dicromato potsico no amortiguadas,
en las que existen los siguientes equilibrios:
Cr2O7+H2O 2HCrO4 2H+ + 2CrO4-2
A casi todas las longitudes de onda los valores de del ion dicromato y las dos
especies de cromatos son muy diferentes.
b) Desviaciones instrumentales
el requisito bsico para el cumplimiento de la Ley de Beer es que la
radiacin incidente sea monocromtica. Dependiendo de las
Radiacinpolicromtica: caractersticas tecnolgicas del sistema ptico del instrumento ser
ms o menos accesible poder utilizar en forma prctica una
radiacin una radiacin limitada a una sola longitud de onda.
la radiacin dispersa suele diferir considerablemente en longitud de
Radiacin dispersa:
onda con respecto a la radiacin principal; adems puede alcanzar
el detector sin haber pasado a travs de la muestra.

9. APLICACIONES DE LAS MEDICIONES DE ABSORCIN DE RADIACIN

ULTRAVIOLETA Y VISIBLE

9.1 Especies absorbentes

La absorcin de radiacin ultravioleta y visible por una especie M, puede considerarse
como un proceso en dos etapas, la primera de las cuales corresponde a la excitacin
segn:
M+h.vM*
donde M* representa la partcula atmica o molecular en su estado electrnico
excitado que se produce como resultado de la absorcin del fotn h v. Este estado
excitado tiene un breve tiempo de existencia (10 -8 a 10-9 s) y desaparece a travs de
travs de algunos de los diferentes procesos de relajacin (calor).
M*M+calor
La absorcin de la radiacin ultravioleta o visible, se produce por lo general como
consecuencia de la excitacin de los electrones de enlace; debido a esto, la longitud
de onda de los picos de absorcin se puede correlacionar con los tipos de enlace
existentes en la especie que se estudia.

9.2 Explotacin analtica

Identificacin proximal de los grupos funcionales en una molcula.

Mtodo bastante selectivo para el anlisis cuantitativo de compuestos cuyos

enlaces producen absorcin.

Conviene considerar tres tipos de transiciones electrnicas que permiten explicar

porqu algunas especies pueden absorber energa radiante. Estos tres tipos son:

Los electrones , y .

11

Los electrones d y f.

Los electrones de transferencia de carga.

a) Especies qumicas absorbentes que contienen electrones , y

La absorcin de radiacin ultravioleta y visible (200800 nm) se restringe a un nmero
limitado de grupos funcionales, llamados cromforos, que contienen electrones de
valencia con energas de excitacin relativamente bajos.

Tabla 3.2. Caracteristicas de absorcin de algunos cromforos comunes

Cromforo Ejemplo

Disolvente mx (nm) mx

Alqueno

C6H13CH = CH2

n-Heptano

Alquino

C5H11C=CCH3 n-Hexano

Carbonilo

Tipo de transicin

177

13,000 *

178
196
225

10,000 *
2,000 160
-

n-Heptano

186
280

1,000
16

*
*

n-Hexano

180

larga

*
*

Etanol

204

41

Agua

214

60

Carboxilo

Amido
Azo

CH3N=NCH3

Etanol

339

Nitro

CH3NO2

Isooctano

280

22

Nitroso

C4H9NO

ter etlico

300
665

100
20

Nitrato

C2H5ONO2

Dioxano

270

12

b) Absorcin en la que participah los electrones d y f

Iones de los metales de transicin

Serie de los lantnidos y actnidos

12
Los iones y complejos de los 18 elementos de las dos primeras series de transicin
son coloreados en uno de sus estados de oxidacin o en todos ellos. Dependiendo las
caractersticas colorimtricas del complejo; del tipo de ligando (agente complejante) y
del estado de oxidacin.

Tabla 3.3. Efecto de los ligantes sobre los mximos de absorcin asociados
con transiciones d-d
mx (nm) para los ligantes indicados
Aumento de fuerza del campo de unin
Ion central

6CI

6H2O

6NH3

3en(1)

6CN-

Cr (III)

736

573

462

456

380

Co (III)

538

435

428

294

Co (II)

1345

980

909

Ni (II)

1370

1279

925

863

Cu (II)

794

663

610

(1) en = etilendiamina, un ligante bidentado.

c) Absorcin por transferencia de carga

Para fines analticos es el tipo ms importante de absorcin por especies inorgnicas,
debido a que las absortividades molares de los picos son muy grandes ( < 10 5). Esta
es una particular caracterstica de los complejos inorgnicos denominados tambin,
complejos de transferencia de carga.
Ejemplos:

Hierro III- ion tiocianato

Hierro II - (o-Fenantrolina)

Ion triyoduro I3-

10. INSTRUMENTACIN
Los instrumentos que miden la absorcin selectiva de la radiacin en las soluciones se
conocen con los nombres de: colormetros, fotmetros y espectrofotmetros. Hoy en
da es pertinente diferenciar los instrumentos segn su sistema de deteccin:
detectores simples (convencional) o detectores multicanal (arreglo de diodo).
Algunos de los diseos bsicos de los instrumentos usados en la medicin de la
absorcin de Energa Radiante se ilustra en el siguiente esquema:
Figura 3.6. Diagrama de bloques de diferentes tipos de instrumentos de medicin de la
absorcin molecular

13

10.1 Breve descripcin de los principales componentes de

instrumentos convencionales
a) Fuente de energa radiante
Debe producir un haz de radiacin cuya potencia sea suficiente para facilitar la
deteccin y medida; debe ser estable. Ej.:

Lmpara de hidrgeno

Lmpara de deuterio.

Ambas lmparas producen un espectro continuo entre 160375 nm y deben

emplearse ventanas de cuarzo en los tubos: ya que el vidrio absorbe fuertemente en
esta regin del espectro electromagntico.

Lmpara de filamento de tungsteno

Es la fuente ms comn para la zona del visible e infrarrojo. Esta lmpara es til para
la regin entre 320 2,500 nm.
b) Sistema selector de la longitud de onda de trabajo
(i) Fotmetro (colormetro): este tipo de instrumentos utiliza filtros que permiten
obtener bandas de radiacin que abarcan un intervalo limitado de longitudes de onda

14
(con un fotmetro no es posible obtener una banda de absorcin variable en forma
continua).

Regin (nm

Color filtro

Color solucin

380435

Azul

Amarillo

480490

Verde azuloso

Rojo

500560

Verde amarillento

Violeta

580595

Anaranjado

Azul verdoso

595650

Rojo

Verde azuloso

(ii) Espectrofotmetro: utilizan un complejo sistema ptico de seleccin de longitud de

onda (sistema monocromador). el cual consta de variados componentes tales como:

prisma o rejilla;

lentes;

espejos;

ranuras de entrada y salida.

Estos instrumentos pueden seleccionar longitud de onda en forma continua y en

algunos casos con precisin de dcimas de nm. Por lo tanto, es posible obtener en
forma continua el espectro de absorcin de una molcula.
c) Recipientes para la muestra
La mayor parte de las aplicaciones espectrofotomtricas utiliza las muestras en
solucin lquida, por esta razn se requieren recipientes para colocar la muestra
(celdas). La celda debe transmitir el 100% de la energa radiante en la zona espectral
de trabajo.
Regin U.V.
(2002,000
Celdas de cuarzo
=
nm)
Regin VIS
(3502,000
Celdas de vidrio
=
nm)
Algn
tipo
de
plstico.

La longitud ms comn para el trabajo en las regiones UV-VIS es 1 cm (otras son: 2, 5

y 10 cm).
d) Deteccin de la radiacin
Dispositivo electrnico llamado transductor que convierten la energa radiante en una
seal elctrica.
Requisitos:
Responder a la E.R. en un amplio intervalo de .
Respuesta lineal.

Poseer elevada sensibilidad.

Tiempo de respuesta rpido, etc

15
Detectores de fotones:
Celdas fotovoltaicas.
Fototubos.

Tubos fotomultiplicadores.
Diodo de silicio.

e) Procesadores de seales e instrumento de lectura

Dispositivo electrnico que amplifica la seal elctrica generada en un detector. En
este sentido existe una amplia gama de alternativas, desde galvanmetros hasta
avanzadas computadoras.
Figura 3.7. Componentes y materiales de los instrumentos espectroscpicos

16

10.2
Esquema
general
espectrofotmetros

de

los

Figura 3.8. Sistema con arreglo de diodo mono haz

sistemas

pticos

de

17

Figura 3.9. Sistema convencional doble haz

11. ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO

11.1 Tcnicas cualitativas

18
Las aplicaciones cualitativas no ofrecen una herramienta muy til, ya que con estos
espectros existe un nmero relativamente escaso de mximos y mnimos. Sin
embargo el anlisis cualitativo es una excelente herramienta cuando va precedido de
algn mtodo de separacin.

11.2 Anlisis cuantitativo

a) Aplicacin:
Compuestos
orgnicos:

Aldehdos y cetonas
Aromticos
Drogas
Vitaminas, etc
(especies
absorbentes)
absorbentes

Compuestos
inorgnicos:
Compuestos
no
Derivatizacin
(Por ej.: formacin
coloreados).

de

complejos

b) Principales caractersticas:

Alta sensibilidad:

Absortividades molares 105

Intervalos de concentracin 10-4 a 10-6M.

Selectividad: seleccin de la longitud de onda en la que el nico componente

absorbente de una muestra sea la sustancia que se determina.

Precisin y exactitud: dependiendo del nivel de concentracin es posible lograr

valores menores que 1% de error relativo.

11.3 Procedimiento en el anlisis cuantitativo

a) Recopilacin de antecedentes:

Referencias bibliogrficas.

Mtodos normalizados.

b) Preparacin y/o tratamiento de la muestra:

Separacin del compuesto de inters (precipitacin, extraccin por solvente,

cromatografa, etc).

Derivatizacin si es necesaria.

c) Seleccin de la longitud de onda de trabajo ( mx.):

19
Obtencin del espectro de absorcin:

En el espectro de mono haz, se va alternando la medida de la absorbancia

entre el disolvente (blanco) y la solucin que contiene la muestra en la medida
que se va variando gradualmente la longitud de onda.

En el espectro de doble haz, la operacin descrita anteriormente es posible

hacerla automtica y simultneamente.

Para ello los instrumentos disponen de sistemas con microprocesador que permiten
una fcil y expedita obtencin de la informacin. Mediante estos instrumentos es
posible hacer barrido de longitudes de ondas en determinadas zonas del espectro y a
diferentes velocidades.
La excepcin a esto ltimo la proporcionan los espectrofotmetros de Arreglo de
Diodos ya que dada su configuracin es posible obtener el espectro de absorcin en
un amplio rango de longitudes de onda (200800 nm) en fraccin de segundos.
Una vez establecida la longitud de mx. (mxima sensibilidad) se prepara la curva de
calibracin.

12. CURVA DE CALIBRACIN

Set de soluciones de concentraciones crecientes del analito, en un rango tal que se
cumple la Ley de Beer.
No es conveniente suponer que para una determinada concentracin se cumple la
Ley de Beer y por ello utilizar un patrn nico como referencia .
Una vez obtenidos los distintos puntos (o niveles de calibracin) se debe determinar la
ecuacin de la recta mediante anlisis de regresin lineal (o ajuste de la curva por
mnimos cuadrados). Los instrumentos automatizados traen estas funciones ya
incorporadas en su sistema de clculo, lo cual permite obtener el resultado final
directamente.
La ecuacin que relaciona la absorbancia con la concentracin ms comn es del tipo:
Y = Ax + B

donde:

A = pendiente
()
B = intercepto

r es un parmetro estadstico que da cuenta de la calidad de la curva de calibracin y

se denomina coeficiente de regresin. En anlisis cuantitativo se considera buena una
curva cuando su valor de r es mayor que 0.99.

13. OTRAS APLICACIONES

13.1 Anlisis de mezclas

20
Definimos anteriormente que en una mezcla de sustancias absorbentes, a una misma
longitud de onda las absorbancias son aditivas.
Considerando esto, es posible determinar componentes en una mezcla determinando
las respectivas absorbancias a diferentes longitudes de onda.
As tendremos:
A1 =
Cxx +
A2 = Cxx + Cyy a 2

Cyy a

A partir de estndares puros de las especies X e Y se obtienen, por separado los

respectivos valores de las absortividades molares de X e Y. Luego quedan como
incgnitas las concentraciones de X e Y a ambas longitudes de onda y se resuelve el
sistema de ecuaciones.
Figura 3.10. Espectros de absorcin mezcla componentes

13.2 Titulaciones
Las titulaciones espectrofotomtricas son otras aplicacines mediante las cuales es
posible determinar constantes termodinmicas tales como de formacin de complejos
metlicos, etc

14. MATERIALES, PROCEDIMIENTOS Y METODOLOGAS

Los materiales utilizados en el laboratorio de espectrofotometra fueron:

21

Cinco tubos de ensayo para examinar cinco soluciones

de concentraciones distintas, adems de un tubo
adicional que contena una muestra problema que fue
utilizada en la tercera prctica del
laboratorio y sus respectivas etiquetas
enumeradas.
Dos pipetas graduadas a mililitros, las cuales permitan la correcta medicin de
soluto y solvente utilizado dentro de las soluciones trabajadas.
Un pipeteador automtico, que permita la captacin de
la cantidad indicada de soluto o solvente dentro del
proceso del laboratorio.
Un recipiente que contena agua destilada, la cual fue usada como
solvente para la sustancia que se trabaj.
Un recipiente adicional que sirvi como contenedor del soluto
trabajado en el laboratorio, el cual en el caso particular del
presente grupo fue naranja de metilo (327.34 g/mol) a 100
mg/mL.
Un espectrofotmetro con dos cubetas de cuarzo,
instrumentos principales en el laboratorio de
espectrofotometra, puesto que su utilizacin ayud a
la cuantificacin de las sustancias a partir de la
longitud de onda con las que se trabaj.

14.1 Procedimientos:
El procedimiento consisti, en primera estancia, en determinar el punto mximo
de absorbancia de la sustancia correspondiente a cada grupo, en el caso
particular del presente grupo de informantes, fue, como antes se mencion, el
naranja de metilo (327.34 g/mol) a 100 mg/mL. Al principio de esta primer
prctica se calibr el espectrofotmetro a cero, con el Blanco (solucin con
todos los componentes de la solucin menos la sustancia trabajada, esto es,
sin el colorante, es decir, agua destilada), con una solucin de 5 mL de agua
destilada y 5 mL de naranja de metilo, luego se procede a hallar las
absorbancias a diferentes longitudes de onda, y como punto mximo de
absorbancia, en el caso particular, se obtuvo, a una longitud de onda de 460
nanmetros, una absorbancia de 0.145.

22

En segunda estancia, pasamos a elaborar una curva de calibracin del naranja

de metilo en diferentes concentraciones, como acto primordial a esta prctica,
se elaboraron cinco soluciones a diferentes concentraciones, luego, en el
espectrofotmetro, fueron medidas las absorbancias de cada una de ellas,
teniendo en cuenta el punto mximo de absorbancia de la prctica anterior,
entonces, como resultado, se obtuvo una tabla con valores ascendentes, de la
cual derivara una grfica concentracin versus absorbancia con una lnea
ascendente.
Por ltimo, pasamos a determinar la concentracin de una muestra problema,
la cual nos fue asignada por uno de los monitores del laboratorio, entonces,
puesto que de la solucin se desconoca su concentracin, se procedi a
averiguarla por dos medios, uno de ellos era una interpolacin, esto es, una
comparacin en la grfica elaborada a partir de la curva de calibracin. El otro
medio era por una frmula que contiene la absorbancia y la concentracin
estndares, que se tenan identificadas gracias a los puntos anteriores, y la
absorbancia y concentracin problemas o desconocidas, de las cuales se poda
conocer la absorbancia y poder despejar la concentracin de manera efectiva.
Metodologa:
La metodologa utilizada fue la de una gua preestablecida y una delimitacin
terica respecto a los procedimientos a trabajar antes de comenzar con la
actividad, una breve presentacin de los monitores y la ejecucin de la prctica
de laboratorio, con la ayuda de los mencionados tutores y el profesor a cargo
del ejercicio, se desarrollaron las prcticas propuestas en funcin de demostrar
y aplicar la ley de Lambert-Beer.

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15. RESULTADOS

Determinacin del espectro de absorcin de un colorante dado.

400nm

0.092

420nm

0.118

440nm

0.136

460nm

0.145

480nm

0.130

500nm

0.090

520nm

0.045

540nm

0.013

560nm

0.0

Para determinar el espectro de absorcin se utiliz metil-naranja

C14H14N3NaO3S con una concentracin estndar 100mg/ml a diferentes
longitudes de onda () y se encontr que a la longitud de onda de 460nm la
sustancia presenta la mxima Absorbancia ya que como se muestra en la tabla
tenemos valores inferiores de (A) con longitudes de onda mayores o menores.

Curva de calibracin del colorante asignado. La sustancia antes de los 460nm

la cantidad de energa radiante o flujo radiante que es absorbido como funcin
de la longitud de onda de dicha energa presenta una Absorbancia menor y
despus de los 460nm la Absorbancia vuelve a caer

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Tubo N
SLN Colorante
Agua Destilada
Absorbancia

1
1ml
9ml
0,025

2
2ml
8ml
0,052

3
3ml
7ml
0,080

4
4ml
6ml
0,122

5
5ml
5ml
O,145

Ubicamos la () en 460nm que es la mxima Absorbancia y variamos la

concentracin en cinco tubos como podemos ver en la tabla. Para obtener la
siguiente curva.
A
12
10
8
6
4
2
0

0,03

0.06

0,09

0,12

0,15

Concentracin (M)

Determinacin de la concentracin de la muestra problema.

Se entrega una muestra problema de metil naranja a la que se le mide la

Absorbancia esta es: 0,134 medida tambin con una longitud de onda de
460nm al igual que la muestra estndar que utilizamos con una Absorbancia
0,145 y con una concentracin conocida y calculada de 0,15M.

Utilizando la ecuacin que relaciona Absorbancia y concentracin se calculo

una concentracin de la muestra problema de 0,138M.

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Extrapolando en la curva de calibracin:

0,01 0,03

0.06 0,09 0,12 0,15

Concentracin (M)
La extrapolacin arroja un dato alejado al clculo de: 0,0125

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16. CALCULOS

Para los clculos en la curva de Absorbancia se requiri hallar la concentracin

en Molaridad:
1)

1mol de metil naranja -------------x-----------327,34g

0,0003moles
2)

<----------------------- O,1g } 100mg/mltubo 1

1mol de metil naranja ------------x------------327,34g

0,0006moles -------------------------------0,2g} tubo 2

3)

1mol de metil naranja ------------x------------327,34g

0,0009moles -------------------------------0,3g} tubo 3

4)

1mol de metil naranja ------------x------------327,34g

0,0012moles ---------------------------------0,4g } tubo 4

5)

1mol de metil naranja ------------x------------327,34g

0,0015moles--------------------------------0,5g } tubo 5

0,0003 moles
1)

M=-------------------= 0,03

0,0006moles
2)

0,01l

M=--------------------------=0,06

0,01l

0,0009moles

0,0012moles

3) M=-----------------------= 0,09

4) M= -----------------------=0,12

0,01l
0,0015moles
4) M=----------------------------=0,15
0,01l

0,01l

27

[?] de metil naranja

= 460nm
A=0,134
Aplicando la ecuacin: Ae/Ce=Ap/Cp
Ae= 0,145= Absorbancia estndar.

Ce= 0,15 concentracin del estndar.

Ap= 0,134 Absorbancia problema.

Cp=concentracin del problema.

Ae/Ce=Ap/Cp

0,145

0,134

---------------= -----------------0,15M

0,134 . 0,15M
X=------------------------= 0,138
0,145

28

17. DISCUCION
El espectro de absorcin del colorante asignado muestra una creciente al
comenzar porque la concentracin es muy parecida a la del blanco, entonces
comienza a separarse poco a poco del rango inicial y alcanza su punto mximo
de absorbancia, para as, entonces, permitir asegurar que la concentracin es
la que juega el papel ms importante dentro de la solucin, puesto que si tiene
muy poca, va a ser una absorbancia baja, porque se absorben aquellas
frecuencias que son capaces de producir excitacin electrnica, pero luego
desciende debido a que ya no existe un equilibrio en la solucin que le permita
al colorante absorber la intensidad incidente optimizando la transmitancia
mucho ms que la absorbancia.
La absorbancia es directamente proporcional a la concentracin, por tanto,
siempre que la concentracin de colorante se aumente, la absorbancia
aumenta tambin.
Toda vez que exista una grfica interpolable, ser posible, por medios grficos
determinar la concentracin de las sustancias problema pero debido a que es
un medio grfico, arroja un margen de error considerable, adems, el
espectrofotmetro presenta falencias para determinar la absorbancia.

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18. CONCLUSIONES
La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos para absorber
la radiacin electromagntica, pudimos observar cmo, dependiendo de la
concentracin y la longitud a la cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un
punto mximo de absorcin.
Segn esto la longitud y la absorbancia son proporcionales hasta alcanzar el
punto mximo y de all empieza a descender.
Segn la concentracin varia la absorbancia del compuesto.
Variando la cantidad de solvente (Siendo agua destilada) se puede disminuir la
absorbancia.

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19. BIBLIOGRAFA
Hewlett Packard. 1988. The Diode-Array Advantage in UV-VIS Spectroscopy.
Publication No12 - 55948912.
Inge, J.A. Jr. and Crouch, S.R. 1988. Spectrochemical Analysis. Prentice Hall
International, Inc.
Skoog, D.A. y West, D.M. 1984. Anlisis Instrumental. 2a edicin. Ed. Interamericana.

20. Anexos

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