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Objetivo

Na primeira prtica o objetivo era analisar de forma qualitativa a separao e os


tempos de retenes das amostras. Enquanto que na segunda prtica, o objetivo era
analisar de forma quantitativa a cafena em diferentes tipos de bebidas. Em comum as
duas prticas tm o objetivo de ensinar na prtica o funcionamento deste mtodo,
juntamente com o funcionamento dos equipamentos.

Introduo
A Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE ou HPLC) se desenvolveu muito nos
ltimos anos, recebendo o nome de cromatografia lquida por que a sua fase mvel
um solvente. Seus componentes so: bomba, coluna cromatogrfica, detector e o
registrador. Este mtodo pode ser usado para separao, porm se mostra mais
eficiente como um mtodo qualitativo de identificao.
Alguns aspectos neste mtodo devem ser analisados, como por exemplo, a polaridade
das fases da amostra, o que quer dizer que, pode haver fase reversa, que pode ser
definida como a fase estacionria apolar e a fase mvel polar. No caso da fase
normal ocorre o contrrio. Outra caracterstica importante o eluente, que deve ser
controlada a sua polaridade, a fim da amostra no passar muito rpido, sendo assim
menos eficaz. Outro fator relevante que a fase mvel deve seguir algumas regras,
que so elas, a de que esta fase deve ter alto grau de pureza ou ser de fcil
purificao, para que se possam fazer anlises de alta sensibilidade, pois as
impurezas podem interferir na deteco do analito por ultravioleta (UV). A fase mvel
deve ser compatvel com o detector empregado e, tambm possuir polaridade
adequada para permitir uma separao conveniente dos componentes da amostra.
Para a avaliao do desempenho cromatogrfico so necessrios uma srie de
parmetros cromatogrficos, que so eles:

Tempo de Reteno
Fatos de Reteno
Fator de Separao
Nmero de Pratos
Resoluo

Procedimento Experimental
Pratica 1:
O Naftaleno foi introduzido no injetor com a ajuda de uma seringa de injeo e em
seguida foram bombeadas em ritmo constante por uma fase mvel que era uma
mistura de MeOH/H2O(9:1), em um fluxo de 1,8mL. E o processo se repetiu para as
amostras de Bifenila e Antraceno. Por ultimo misturou-se todas as amostras e esta
mistura foi colocada no injetor a fim de comparao e identificao de cada amostra. A
fase estacionria consistia em uma coluna C18(250mm x 4,6mm).
Prtica 2:
Todas as amostras de Coca-Cola, RedBull, Ch Preto, Mate, Caf, Caf Expresso e a
prpria cafena, para fins de comparao entre os resultados, foram introduzidas no
injetor, com ajuda de uma seringa de injeo e em seguida foram bombeadas em ritmo
constante por uma fase mvel que era uma soluo de MeOH/H2O(9:1), em um fluxo
de 1,8mL. A fase estacionria consistia em uma coluna C18(250mm x 4,6mm).

Resultados e Discusso
Prtica 1:
Observando os compostos utilizados para a fase estacionria e para a fase mvel,
pode-se perceber que trata-se do tipo de Fase reversa, onde a fase mvel polar e a
fase estacionria apolar. Nesta prtica, o objetivo era definir os tempos de reteno
de cada amostra, o que pode ser observado na tabela abaixo e no grfico(Anexo 1)
pode-se observar claramente as separaes bem definidas de cada amostra
analisada, o que facilita quando h a mistura das substncias, sendo fcil a
visualizao e identificao da substncia desejada.
Amostras
Naftaleno
Bifenila
Antraceno

Tempo de Reteno(Pico da amostra)


~3,25min
~4,25min
~6,4min

Prtica 2:
Observando os compostos utilizados para a fase estacionria e para a fase mvel,
pode-se perceber que trata-se do tipo de Fase reversa, onde a fase mvel polar e a
fase estacionria apolar. Nesta prtica o objetivo comparar de forma quatitativa a
concentrao de cafena na amostras observadas, e comparar com o padro. O tempo
de reteno foi o mesmo em todos os casos, visto que se trata da mesma substncia.
Os dados obtidos durante a prtica podem ser observados na tabela abaixo e nos
grficos(Anexos 2 e 3). Provavelmente por estarem mais concentradas, algumas
substncias mostraram maior grau de absorvncia do que o prprio padro.
Padro
Cafena
Amostras
Coca-Cola
RedBull
Ch Preto
Mate
Caf
Caf Expresso

Absorvncia
580,00
Absorvncia
180,00
450,00
~1100,00
~1100,00
~1500,00
~1060,0

Tempo de Reteno
1,4min
Tempo de Reteno
1,4min
1,4min
1,4min
1,4min
1,4min
1,4min

Concluso
Com a ajuda dos grficos, pode-se perceber claramente a similaridade de compostos
iguais quando comparado ao seu tempo de reteno, ao mesmo tempo mesmo por
no ser o melhor mtodo de separao, um timo mtodo para definir o tipo de
substncia devido ao seu maior grau de sensibilidade. Alm de facilitar a identificao
de uma amostra desconhecida de forma mais precisa.

Referncias Bibliogrficas
http://www.crq4.org.br/
http://pfarma.com.br/
http://www.scielo.br/