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Inmovilizacin de enzimas
Buitrn L.; Campozano V.; Gualn I.*
BIOTECNOLOGA AGROINDUSTRIAL II
Grupo: 2
*Escuela Politcnica Nacional, Facultad de Ingeniera Qumica y
Agroindustria
Quito, Ecuador
e-mail: lucia.buitron@epn.edu.ec, vania.campozano@epn.edu.ec,
ines.gualan@epn.edu.ec

Resumen: El proceso de inmovilizacin de enzimas, es una

estrategia que facilita la obtencin de enzimas insolubles
reteniendo su actividad cataltica para poder ser utilizada y
reducir los costos de produccin de estas enzimas. En la
prctica se tuvo como objetivo inmovilizar papana, teniendo
como mtodo, la Cromatografa de Gel. Para ello se utiliz
una columna con gel de Sepharosa como fase estacionaria y
tampn fosfato. Tambin se utiliz BApNA p para visualizar
la existencia de protena retenida en la columna. Las
muestras obtenidas cada 3 minutos se analizaron tomando
como medida 280nm, para el primer conjunto de datos y 400
nm para las muestras que reaccionaron con BApNA, para
determinar la actividad cataltica de la protena. Con los
datos obtenidos se realiz un cromatograma para determinar
la inmovilizacin y retencin de la actividad enzimtica.
Palabras clave: Cataltica, Inmovilizacin, BApNA,
cromatograma.
Abstract: The enzyme immobilization process , is
a strategy that facilitates obtaining insoluble
enzyme retaining its catalytic activity to be used
and reduce the production costs of these
enzymes . In practice it aimed immobilizing
papain , with the method, Gel Chromatography .
For this a column with Sepharose gel as
stationary phase and phosphate buffer was used
. BApNA p is also used to visualize the existence
of protein retained in the column. The samples
obtained were analyzed every 3 minutes as
measured 280nm , for the first dataset and 400
nm for samples BApNA reacted , to determine
the catalytic activity of the protein. With the
data obtained a chromatogram was performed
to determine the immobilization and retention of
enzyme activit .
Keywords : Catalytic , Immobilization , BApNA ,
chromatogram.
1. MATERIALES Y METODOLOGA

Para la prctica se inici con preparar la columna, en

primer lugar se tomaron 100mL.de gel de Sepharosa
suspendido en etanol. Utilizando un sistema de filtracin de
vaco se lav el gel con agua destilada con agitacin
constante por 10 minutos, posteriormente se sigui lavando
con tampn fosfato 50 mM y se dej reposar. Una vez limpio
el gel se coloc lentamente el gel en la columna, evitando
que se compacte. Se dej reposar por 30 minutos y coloc el
resto del gel y finalmente se sell la columna.
Para la inmovilizacin de la enzima se dej pasar el tampn
por la columna hasta eliminar residuos de otras enzimas para
luego alimentar con la papana, al mismo tiempo se debe
tomar muestras 30 muestras, una cada 30 segundos. Al
terminarse la enzima, se alimenta la columna con BApNA
15mg/mL, la cual al reaccionar con la papana retenida en el
gel, cambiar de coloracin. Para poder reutilizar la
sepharosa, lavar con tampn fosfato.
Finalmente llevan las muestras a analizar con el
espectrofotmetro para determinar la absorbancia de cada
una de las muestras. Algunas muestras al encontrarse muy
concentradas, se disolvieron
para poder medir la
absrvancia a 400nM.