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1Avaliao do potencial antioxidante e termoxidativo das cascas de diferentes tipos de soja


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3Alline L. S. Pontesa,b*, Poliana S. Epaminondasa,c, Kassandra L. G. V. Arajoa, Jaqueline A. Nascimentoa, Ingrid
4Conceio Dantas Guerrad, Raul Rosenhaime, Antonio G. Souzae
6a Programa de Ps-Graduao em Cincia e Tecnologia de Alimentos, CT, Universidade Federal da Paraba
7(UFPB), 58051-970, Campus I, Joo Pessoa - Paraba, Brasil.
8b Laboratrio de Fsico-qumica, Departamento de Tecnologia de Alimentos, CTDR, Universidade Federal da
9Paraba (UFPB), 58055-000, Campus V, Joo Pessoa - Paraba, Brasil.
10c Unidade Acadmica de Tecnologia de Alimentos e Agroindstria, Instituto Federal de Educao, Cincia e
11Tecnologia (IFPB), 58800-970, Campus Sousa, Sousa - Paraba, Brasil.
12d Departamento de Gastronomia, CTDR, Universidade Federal da Paraba (UFPB), 58055-000, Campus I,
13Unidade Mangabeira, Joo Pessoa - Paraba, Brasil.
14e Laboratrio de Combustveis e Materiais (LACOM), Departamento de Qumica, CCEN, Universidade Federal
15da Paraba (UFPB), 58059-900, Campus I, Joo Pessoa - Paraba, Brasil.
16* Corresponding author. Tel/Fax.: + 55 83 3216 7441.
17E-mail address: allinesouza@hotmail.com (Alline L.S. Pontes).
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19Abstract
20O objetivo deste estudo foi a obteno dos extratos das cascas de trs tipos de soja, pela utilizao de diferentes
21concentraes de solventes (acetona, cido actico e gua), para compar-los quanto ao teor de fenlicos totais
22(Folin-Ciocalteau) TPC, a atividade antioxidante pelos seguinte mtodos: (Radical scavenging activity DPPH)
23- RSA-DPPH, Ferric reducing antioxidant power FRAP, -Carotene bleaching e 2,2- azinobis (3-ethyl24benzothiazoline-6-sulfonic acid) ABTS, alm do teor de antocianinas e de flavonoides. O comportamento
25termogravimtrico de cada extrato tambm foi avaliado. Os resultados mostraram que o extrato de acetona 80%
26da casca de soja amarela apresentou melhores resultados quanto ao RSA-DPPH e ao FRAP (adicionar
27betacaroteno, antocianinas e flavonoides), enquanto os extratos da casca marrom e preta, de acetona 80% e
28cido-acetnico 70% (cido actico a 0,5%) respectivamente, se destacaram em relao ao maior RSA-DPPH
29(adicionar betacaroteno, antocianinas e flavonoides). O extrato cido-acetnico 70% (cido actico a 0,5%) da
30casca de soja preta se destacou pelo menor EC 50, que lhe confere uma maior efetividade antioxidante entre os

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4

31diferentes extratos obtidos. Estes resultados indicaram que a polaridade do solvente pode interferir na extrao e
32na determinao dos teores de fenlicos totais, bem como na avaliao antioxidante das diferentes amostras.
33Diante disso, possvel otimizar a extrao de compostos antioxidantes naturais, em especial, a da casca de soja
34preta, tornando vivel sua utilizao pela indstria de alimentos, como alternativa de substituio total ou parcial
35de antioxidantes sintticos.
36Keyworks: soja, casca, antioxidante, solvente de extrao, compostos fenlicos.
371. Introduction
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A soja [Glycine max (L.) Merrill] um tipo de leguminosa, originria da China, considerada um produto

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agrcola de grande importncia econmica mundial, utilizada h sculos como alimento bsico e

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medicamento nos pases orientais, por seu valor nutricional e funcional, que promovem efeitos benficos

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sade, diminuindo a incidncia de doenas crnicas, como as cardiovasculares, diabetes e cncer (CHO et al,

42

2013; Malencic, 2012, Kumar, 2010).

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Nos pases ocidentais, seu processamento d origem ao leo e ao farelo, matrias primas usadas em

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diversos segmentos industriais, em especial na indstria alimentcia, uma vez que o gro rico em lipdios

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polinsaturados, protenas, vitaminas, minerais e compostos bioativos, como as saponinas, fitatos,

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triterpenides, cidos fenlicos e flavonides (FuKuda, 2011, Malencic, 2012).

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Outro subproduto obtido a partir da soja a casca, uma pelcula que reveste o gro,

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representando 10% do peso total da semente e que atua como uma barreira protetora contra fungos

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e insetos, mantendo sua integridade (Xu, Chang, 2008 - 2011). comumente encontrada na cor

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amarela, mas devido a mutaes espontneas e aos estudos de melhoramento gentico, pode ser encontrada,

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nos diferentes gentipos da leguminosa, nas cores verde, preta e marrom. Alm de rica em fibras e protenas

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de alto valor biolgico, a casca destaca-se pela presena de polifenis, cujas concentraes variam

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significativamente de acordo com a cor do revestimento da semente, atingindo altos teores de flavonoides

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solveis, como as proantocianidinas, catequinas e antocianinas, em pelculas mais escuras (Dalto e Fiorese,

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2012, Cho et al, 2013, Zhang et al, 2011).

56

Segundo Zambom (Zambom et al. 2001), a cada tonelada de soja processada, so gerados 2%

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de resduo da casca de soja, que como a maioria dos subprodutos e/ou resduos do processamento

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agroindustrial, tem sido usada na alimentao animal sob forma de farelo de soja. Entretanto, a

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crescente preocupao com o elevado ndice de desperdcio causado pelas indstrias de alimentos e os

5
6

60

impactos ambientais, tem levado busca de alternativas viveis de aproveitamento desses resduos para

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gerao de novos produtos, com maior valor agregado, para consumo humano (Dalto, 2012).

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Alm de ser fonte de nutrientes, os resduos constituem uma fonte natural de antioxidantes, que

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podem minimizar a utilizao e a aditivao de alimentos com antioxidantes sintticos, como butylated

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hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), tertiary butylhydroquinone, (TBHQ), propyl

65

gallate (PG), entre outros, pois seu uso tem sido questionado devido aos possveis efeitos txicos, alergnicos

66

e carcinognicos (Sun-Waterhouse et al., 2011). Extratos naturais de matrizes alimentares diversas,

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constitudos de compostos fenlicos, cido ascrbico, carotenoides, tocoferois, entre outros, so uma

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alternativa capaz de combater radicais livres e impedir a oxidao, sem ocasionar danos sade humana

69

(Michotte et al., 2011; Sun-Waterhouse et al., 2011).

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Diversos mtodos e sistemas de solventes vm sendo usados para a extrao de fitoqumicos de

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matrias vegetais, para a determinao de sua atividade antioxidante, ou seja, da capacidade de transferncia

72

de eltrons e de tomos de hidrognio, que pode ser afetada pelo tipo e polaridade do solvente e pela

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presena de compostos no antioxidantes nas solues (Rochenbach et al., 2008).

74

Considerando a casca de soja das variedades amarela, marrom e preta como fontes naturais de

75compostos com potencial antioxidante, o objetivo deste estudo foi avaliar a melhor concentrao de solvente
76para a extrao dos fenlicos totais, flavonoides e antocianinas e sua atividade antioxidante pelos mtodos de
77DPPH, FRAP, ABTS e sistema -caroteno-cido linoleico, alm de comparar a estabilidade trmica dos extratos
78utilizando a termogravimetria.
792. Materiais e mtodos
802.1 Materiais
81

As sementes de soja amarela e preta foram adquiridas no comrcio local de Recife/PE, Brasil, enquanto

82a soja marrom (cultivar BRSMG 800 A) foi doada pela Embrapa Soja/ Epamig MG, Brasil. Os reagentes
83Folin-Ciocalteau, 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchoman-2-carboxylic
84acid (Trolox), Tween 40, linoleic acid, 2,4,6-Tris (2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ) foram adquiridos na Sigma85Aldrich (Steinheim, Germany). Ferric choride hexahydrate, ferrous sulphate heptahydrate, 3,4,586trihydroxybenzoic acid (gallic acid), -carotene e demais reagentes e solventes foram obtidos na Merck
87(Dusseldorf, Germany).

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882.2 Preparao dos extratos


89

Aps a quebra das sementes secas, as cascas dos trs tipos de soja (G. max L.) foram retiradas manualmente,

90trituradas em processador domstico e acondicionadas vcuo em sacos de polipropileno.


91

A partir da metodologia de Xu e Chang (2007), foram obtidos os extratos cido-acetnico (AAcE) e

92acetnico (AE) das amostras, usando 10 g das cascas, acrescidos de 100 mL de solvente nas seguintes
93concentraes: acetona/ gua (50:50, v/v) para a soja amarela (SA 50%); acetona/ gua/ cido actico
94(70:29.5:0.5, v/v/v) para soja marrom (SM) e preta (SP) e acetona/ gua (80:20, v/v) para as trs variedades (SA
9580%, SM 80%, SP 80%). As misturas foram homogeneizadas em banho termostatizado a 25 C, sob agitao,
96por 3 horas e em seguida, colocados em repouso em ambiente escuro, por 12 horas. Os extratos foram
97centrifugados a 5000 rpm/ 30 minutos e seus sobrenadantes, filtrados e acondicionados em frasco mbar,
98armazenados a 4C em atmosfera inerte at a utilizao. As extraes foram realizadas em duas repeties para
99cada combinao de cascas-solvente.
100

Para determinar o rendimento em matria seca, 1 mL dos extratos, em triplicata, foram acondicionados em

101bqueres previamente secos e pesados, sendo mantidos em estufa a 105 C, at peso constante. O resultado do
102rendimento foi expresso em percentual de extrato por 100 g de casca.
1032.3 Determination of total phenolic content (TPC)
104

Foi utilizado o mtodo Folin-Ciocalteau (Slinkard, Singleton, 1977) para estimar colorimetricamente o

105TPC dos extratos. Alquotas de 4.0 mL de SA 50%, SM, SP, SA 80%, SM 80% e SP 80% foram diludos em
106gua, foram adicionados de 0.25 mL do reagente Folin-Ciocalteau, seguidos, aps 8 minutos de intervalo, da
107adio de 0.75 mL de carbonato de sdio a 20%. Aps agitao, o sistema foi mantido em ambiente escuro por
108duas horas. A leitura da absorbncia das amostras foi realizada em espectrofotmetro UV-vis (model UV-2550,
109Shimadzu, Japan), a 765 nm, utilizando-se gua com os mesmos reagentes supracitados, como controle. Uma
110curva de calibrao do padro cido glico (50-500 mg.L-1) foi obtida para expressar os resultados em mdia
111desvio padro de gallic acid equivalent (mg GAE.g-1 dried extract (D.E.) e mg GAE.100g-1 casca seca).
1122.4 Determinao do teor de antocianinas e flavonoides
113

A quantificao do teor de antocianinas foi determinada segundo metodologia de Francis (1982), a partir

114de 1g de amostra, acrescida de 30 mL da soluo de etanol-HCL (1,5N) (85:15%). Homogeneizou-se e logo

9
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115aps, transferiu-se o contedo para um balo volumtrico de 50 mL, aferindo-se o volume com etanol-HCL
116(1,5N) (85:15%). Em seguida, o material foi transferido para um frasco de vidro, envolto em papel de alumnio,
117ficando por 12 horas, em macerao, na geladeira. Posteriormente, filtrou-se o macerado e a leitura da
118absorbncia do filtrado foi realizada em espectrofotmetro UV-vis (model UV-2550, Shimadzu, Japan) a 535nm,
119utilizando-se como controle a soluo de etanol-HCL(1,5N). O clculo de antocianina total foi feito atravs da
120frmula:
121

Antocianinas ( % ) =

Absorbncia x fator de diluio


98,2

122
123

A determinao do teor de flavonoides foi realizada utilizando o mesmo filtrado, sendo a leitura feita a

124374nm.
1252.5 Radical-scavenging activity of the 2,2 '-diphenyl--picrylhydrazyl radical (RSA-DPPH) assay
126

A atividade antioxidante das amostras de SA 50%, SM, SP, SA 80%, SM 80% e SP 80% foram

127comparadas entre as variedades, quanto radical scavenging activity (RSA), determinada pelo mtodo RSA128DPPH (Blois, 1958), com modificaes (Brand-Williams, Cuvelier, Berset, 1995). Alquotas de 3.0 mL dos
129extratos, em diferentes diluies e em triplicata, foram adicionados de 0.1 mL de soluo etanlica de DPPH,
130concentrao de 0.1 mol.L-1. Para cada diluio, fez-se um controle, utilizando-se 3.0 mL de amostra adicionados
131de 0.1 mL de etanol e um controle negativo, que consistiu em 3.0 mL de etanol com 0.1 mL da soluo de
132DPPH. O decrscimo da absorbncia 515 nm foi mensurado em espectrofotmetro UV-vis (model UV-2550,
133Shimadzu, Japan), aps 120 min em ambiente escuro. RSA-DPPH foi calculado utilizando-se a equao:

Aa- Ab
DPPH
radical
scavenging
activity
(
%
)
=[(1)100]
134
Ac

135where Aa is the absorbance of samples, Ab is the absorbance of control samples of each extract and Ac is the
136absorbance of the negative control.
137

O EC50 (concentrao da amostra capaz de reduzir 50% do DPPH inicial) foi calculado substituindo o

138valor de y da equao da reta por 50 e a eficincia antirradicalar, determinada pela relao inversa do EC 50, em
139mg.mL-1 (EC50-1).

11
12

1402.6 Atividade sequestrante do o radical 2,2-azino-bis-(3-etilbezotiazolina-6-cido sulfnico) (ABTS)


141O ensaio da atividade antioxidante foi analisada segundo metodologia descrita por RE et al. (1999). O radical
142ABTS foi formado pela reao da soluo aquosa de ABTS (7mM) com 2,45 mM de persulfato de potssio,
143mantidas temperatura ambiente e no escuro, por 16 horas. A soluo do radical ABTS foi diluda, em etanol,
144at obter uma medida de absorbncia de 0.700 0.05 a 734 nm. A partir dos extratos, foram preparadas
145diluies, em triplicata e em ambiente escuro, alquotas de 100 L foram adicionadas da soluo de ABTS (10
146mL), sendo agitadas vigorosamente. Aps permanecer temperatura ambiente por 6 min, a absorbncia da
147mistura foi verificada a 734 nm, em espectrofotmetro UV-vis (model UV-2550, Shimadzu, Japan), utilizando-se
148etanol e o radical ABTS, como controle. Para a determinao da curva padro, foram utilizadas concentraes
149de 100 -2000 mol/ L-1 do antioxidante sinttico Trolox. Os resultados foram expressos em mdia desvio
150padro de mmol de Trolox por g de amostra (mmol TEAC.g-1).
1512.7 Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) assay
152

Para cada extrato estudado, a atividade antioxidante foi determinada por FRAP assay (Benzie, Strain,

1531996), com modificaes (Pulido, Bravo, Saura-Calixto, 2000). Alquotas 90 L de cada extrato estudado foram
154homogeneizadas com 2,7 mL de reagente FRAP, recm-preparado (TPTZ 10 mM, FeCl3 20 mM e tampo
155acetato) e 270 L de gua destilada. Aps manter as amostras em banho termostatizado a 37 C por 30 minutos,
156as absorbncias foram estimadas a 595 nm, utilizando o reagente FRAP como controle negativo para calibrao
157do espectrofotmetro UV-vis (model UV-2550, Shimadzu, Japan). Para a determinao da curva padro, foram
158utilizadas concentraes de 500-2000 mol/L-1 de sulfato ferroso (FeSO47H2O). Os resultados foram expressos
159como mdia desvio padro de mmol de sulfato ferroso por g de amostra.
1602.8 -Carotene bleaching method
161

A atividade antioxidante das amostras estudadas tambm foi avaliada pelo -carotene/linoleic acid

162system model (Marco, 1968), com modificaes (Miller, 1971). As solues foram preparadas misturando-se 5
163mL da soluo sistema -caroteno/cido linoleico (40 L de cido linoleico, 530 L de Tween 40, 50 L de
164soluo -caroteno 20 mg.mL-1, 1mL clorofrmio) e 0,4 mL de cada extrato/ antioxidante sinttico ou soluo
165de trolox (0.05 mg.mL-1). Essa concentrao foi adotada para que fosse possvel a comparao da atividade dos
166extratos, em relao concentrao de fenlicos neles existentes, que atuariam concomitantemente ao Trolox. O

13
14

167controle negativo consistiu de 5 mL da soluo sistema de -caroteno/cido linoleico e 0,4 mL de etanol. A


168absorbncia das amostras a 470 nm (espectrofotmetro UV-vis, model UV-2550, Shimadzu, Japan) foi lida no
169tempo inicial e a cada 15 minutos, permanecendo as amostras temperatura de 40 C, em banho termostatizado,
170at completar 120 minutos de anlise. Os resultados foram expressos como percentagens de inibio da
171peroxidao, usando a equao:

172

Peroxidation inhibition percentage ( P I% ) =[(1-

Ai - A f
)100]
Ci - Cf

173em que Ai o absorbncia inicial da amostra, Af absorbncia final da amostra, Ci a absorbncia inicial do
174controle e Cf a absorbncia final do controle negativo.
1752.9 Avaliao trmica dos extratos
176

As curvas termogravimtricas (TG) e a Anlise Trmica Diferencial (DTA) dos extratos das cascas de

177soja, do BHT e do TBHQ foram obtidas em Analisador Trmico Simultneo DTA-TG-DTG, modelo H-60,
178marca Shimadzu. Utilizou-se cerca de 10 mg de cada amostra em cadinho de platina, atmosfera de ar sinttico
179com fluxo de 50 mL.min-1, aquecidas a 10 C.min-1 at 700 C, a partir de anlises no-isotrmicas. As
180temperaturas onset (Tonset) (Nascimento et al., 2013) e inicial (T0) foram utilizadas como parmetro para
181determinao da estabilidade trmica dos extratos, do BHT e do TBHQ, respectivamente.
1822.10 Anlises estatsticas
183

Os resultados dos ensaios, realizados em triplicata, foram expressos como mdia desvio-padro,

184sendo comparados por anlise de varincia (ANOVA) e teste de Tukey, com auxlio do programa estatstico
185Statistica 7.0, considerando P 0,05. Os grficos foram elaborados com auxlio do programa GraphPad Prism
1865.0.
1873. Resultados e discusso
1883.1 Contedo de TPC, antocianinas e flavonides
189

A tabela 1 mostra os teores de TPC em equivalentes de cido glico, dos extratos SA 50%, SM, SP, SA

19080%, SM 80% e SP 80%, BHT e TBHQ. Foram constatados altos valores para os extratos de soja preta SP e SP

15
16

19180% (322.54 48.13 e 386.20 43.97 mg GAE.g-1 de extrato seco) e baixas concentraes de fenlicos para as
192demais amostras, quando comparadas aos antioxidantes sintticos puros. No foi encontrada diferena
193significativa (p < 0,05) da quantidade de compostos fenlicos dos extratos da soja preta em relao ao TBHQ.
194

Acredita-se que os altos teores de TPC nos extratos de SP e SP 80%, sejam atribudos dentre outros

195fatores, colorao enegrecida e maior solubilidade dos compostos fenlicos da casca de soja preta aos solventes
196utilizados para sua obteno ( Xu, Chang, 2007; Rockenbach et al, 2008, Michiels et al., 2012), demonstrada
197pelo maior rendimento de seus extratos secos (9.17 0.23 e 7.47 0.11). Alm disso, os dados corroboram a
198literatura, que relata a presena de flavonoides solveis, em especial, das antocianinas (Xu, Chang,2008-2011;
199Cho et al., 2013), extrada com eficincia devido a utilizao de soluo etanlica em meio acidificado
200(Rockenbach et al, 2008), cuja concentrao tambm se destacou (28.39 0.00 mg.g-1), apresentando diferena
201significativa quando comparada s das cascas da soja amarela (0.61 0.00 mg.g-1) e marrom (1.96 0.03 mg.g-1)
202(Tabela 2).
2033.2 Atividade antioxidante
204

A atividade antioxidante dos extratos naturais e sintticos foi avaliada por diferentes mtodos de

205deteco, para que fosse possvel compreender o comportamento de seus compostos antioxidantes quanto
206capacidade: sequestradora de radicais livres (RSA-DPPH ) e do radical ABTS redutora de metais (FRAP) e
207protetora sobre a peroxidao lipdica (sistema -caroteno/ cido linoleico).
2083.2.1 Free radical-scavenging activity (RSA - DPPH) and ABTS radicals
209

Na atividade antioxidante, avaliada pelo ensaio RSA- DPPH e radical ABTS+ (tabela 1), foram

210encontradas diferenas significativas entre os extratos dos trs tipos gentipos analisados. Os resultados de EC 50,
211atividade antiradicalar (EC50-1) e ABTS , mostraram atividades decrescentes dos extratos na seguinte ordem: soja
212preta > soja marrom > soja amarela.
213

Em relao ao EC50 e atividade antiradicalar (EC50-1), os extratos SP (2.97 0.05 g.mL-1 e 336.57

2146.31) e SP 80% (3.52 0.14 g.mL-1 e 284.16 10.87) foram mais eficientes frente ao radical DPPH quando
215comparados ao BHT (67.53 3.20g.mL-1 e 14.83 0.70) e aos extratos da soja amarela e marrom, que
216exibiram uma eficcia antioxidante muito discreta. Estes dados revelam uma correlao entre o teor de fenlicos
217e a capacidade antioxidante de SP, SP 80% e TBHQ, uma vez que, sua constituio qumica apresenta grupos

17
18

218hidroxila ligados a anis aromticos, capazes de doar um radical hidrognio ao radical livre, neutralizando-o e
219mantendo-se quimicamente estvel, interrompendo a reao em cadeia (Contreras-Caldern et al., 2011).
220

A atividade desempenhada pelos extratos SP e SP 80%, est relacionada concentrao das

221antocianinas, que possuem potencial antioxidante aumentado, em relao a outros compostos como a isoflavona,
222devido ao nmero, posio e tipo de grupos qumicos ligados aos seus anis aromticos (Jeng et al, 2010, VOLP
223et al., 2008), enquanto a superioridade antioxidante verificada para o TBHQ pode ser atribuda presena de
224dois grupos hidroxila em sua molcula e maior poder de doao de eltrons para os radicais livres (Santos et al,
2252012), quando comparado ao BHT e aos demais extratos de soja, assim como o relatado por Nascimento et al.
226(2013), no estudo de extratos etanlicos de Moringa olefera L. e os mesmos antioxidantes sintticos.
227

Quanto a atividade antioxidante relativa ao radical ABTS + , embora os extratos SP 80% e SP (52933.13

228 16.00 e 40117.96 47.32 mmol TEAC.g-1, respectivamente) tenham se destacado, todos os extratos naturais
229tenham apresentado resultados mais expressivos quando comparados ao DPPH. Segundo Choi et al (2007), isso
230ocorre porque o DPPH usado para avaliar os efeitos da eliminao do radical pela doao dos ons hidrognio
231provenientes dos compostos fenlicos da semente da soja, em especial, as isoflavonas e antocianinas, enquanto o
232radical ABTS est correlacionado medio da capacidade de eliminao dos radicais pela doao de hidrognio
233e quebra da cadeia dos antioxidantes.
2343.2.2 FRAP assay
235

Quanto ao FRAP assay (Tabela 3), todos os extratos diferiram significativamente (p < 0,05). A amostra

236que apresentou considervel poder de reduo do ferro foi o TBHQ (30.29 0.10 mmol Fe2+.g-1 de extrato seco),
237seguido dos resultados de SP 80% (13.22 0.98 mmol Fe2+.g-1 de extrato seco) e SP (12.92 3.19 mmol Fe2+.g-1
238de extrato seco), no havendo reduo expressiva nos demais extratos.
239

A diferena entre os extratos naturais da soja preta pode est ligada ao teor, natureza e grau de

240hidroxilao dos compostos fenlicos, que podem variar dentro de uma mesma classe fenlica e no ter
241atividades antioxidantes semelhantes (TSAO et al., 2005). Alm disso, a oxidao ou reduo de radicais a ons
242bloqueia as reaes radicalares em cadeia, reduzindo a eliminao de radicais por transferncia de eltrons e
243mudando o mecanismo, que ocasionam a subestimao de resultados (Prior, Wu, & Schaich, 2005).
244
2453.2.3 Proteo contra peroxidao lipdica
246

19
20

10

247

Ao analisar a curva cintica dos extratos naturais e sintticos em relao descolorao do -caroteno

248(Figura 1), possvel observar que no houve diferena estatstica entre os extratos de soja amarela e marrom
249extradas com diferentes concentraes de solvente. Quanto aos extratos da soja preta, o extrato acetnico SP foi
250o que apresentou melhor atividade antioxidante em relao ao SP 80% e aos outros extratos, embora seu
251desempenho tenha sido discreto em relao aos compostos referncia (TBHQ, BHT e Trolox), na inibio da
252peroxidao do cido linoleico.
253

A diferena significativa de percentual de inibio comeou a ser observada nos primeiros 15 minutos

254entre o extrato SP e os compostos de referncia, que mantiveram a estabilidade do sistema -caroteno/ cido
255linoleico, apresentando estabilidade no mesmo perodo e leve decrscimo com o decorrer do tempo. Os
256compostos de referncia TBHQ, Trolox e BHT (83. 82 0.35, 82.09 0.13 e 81.76 0.52 %, respectivamente)
257no apresentaram diferena significativa entre si para capacidade inibitria da peroxidao lipdica, durante os
258120 minutos de anlise, enquanto SP apresentou o percentual de 51.91 5.61% ao final (Tabela 3).
259

A inibio da peroxidao lipdica exercida por SP pode ser atribuda ao dos fenlicos, em especial

260das antocianinas, encontrada em maiores concentraes devido ao solvente utilizado quando comparado ao
261extrato de SP 80% e exibindo resultados menos expressivos que os antioxidantes sintticos devidos s
262caractersticas volteis e trmicas das antocianinas.
263
264

A inibio da peroxidao lipdica por EEG e MAEG pode ser atribuda ao antioxidante de

265compostos organossulfurados e fenlicos constituintes do alho (Omar & Al-Wabel, 2010).


266

Por se tratarem de matrizes de complexa composio, recomendado que alimentos de origem vegetal

267tenham sua capacidade antioxidante avaliada por variados mtodos in vitro de deteco, para que seja possvel
268obter dados relevantes, uma vez que os antioxidantes podem responder de forma diferente a fontes variadas de
269radicais ou agentes oxidantes (Bozin et al., 2008; Prior et al., 2005).
2703.3 Avaliao trmica dos extratos
271

As curvas TG e DTA dos extratos de alho e do BHT so apresentadas na Figura 2 e os dados obtidos a

272partir destas curvas encontram-se sumarizados na Tabela 2. EEG e MAEG apresentaram semelhantes perfis de
273decomposio, caracterizados por cinco eventos de perda de massa, sendo os dois primeiros endotrmicos e os
274demais exotrmicos. EEG apresentou maior estabilidade trmica (90 C) e menor perda de massa (5.5 %) na
275primeira etapa de decomposio, em relao a MAEG (68 C e 10.7 %) e ao BHT (71 C e 99%), provavelmente

21
22

11

276devido ao menor teor de umidade e de solvente residual; ao maior teor de compostos fenlicos que, diante do
277aquecimento, tm suas formas esterificadas e glicosiladas liberadas por clivagem, aumentando as formas livres,
278mais ativas (Xu et al., 2007); melhor atividade antioxidante, detectada pelos mtodos RSA-DPPH e FRAP, por
279contribuio dos compostos organossulfurados, alm da menor volatilizao/ decomposio de antioxidantes
280pouco estveis. Complexos antioxidantes de baixa estabilidade podem ser facilmente degradados, perdendo o
281poder antioxidante ou atuando como pr-oxidantes.
282

Outros fenmenos, como a volatilizao de compostos fenlicos e de outros antioxidantes mais estveis,

283a gelatinizao do amido e a desnaturao de protenas presentes nos extratos, podem caracterizar os dois
284primeiros eventos endotrmicos das curvas avaliadas (Epaminondas, Arajo, Souza, et al., 2011). Os eventos
285exotrmicos podem estar relacionados oxidao de compostos de natureza lipdica, decomposio e
286combusto de compostos termicamente mais estveis, como as protenas.
287

Nascimento et al. (2013) descreveram uma variao de estabilidade trmica de 66 a 83 C, para extratos

288etanlicos de folhas, flores e vagens de Moringa olefera L., enquanto que Santos et al. (2012) reportaram
289estabilidades trmicas de 71 C, 85 C, 98 C e 184 C, para os antioxidantes sintticos puros BHT, BHA, TBHQ
290e propilgalato (PG), respectivamente, e 68 C, 147 C, 170 C e 199 C, para os cidos glico, ferlico, cafeico e
291-tocoferol, respectivamente, classificados como antioxidantes naturais puros.
2923.4 Concluso
293

O leo de linhaa aditivado com extrato etanlico de A. sativum L., associado ao no ao TBHQ,

294apresentou estabilidade oxidativa at o oitavo dia de armazenamento a 60 C, conforme o valor Totox


295recomendado. EEG, isolado ou sinergicamente associado ao TBHQ ou ao BHT, protegeu o leo de linhaa de
296forma similar ou at superior aos antioxidantes sintticos isolados, durante o armazenamento acelerado, inibindo
297a formao de compostos de oxidao primria e secundria, detectados por PV, AV e FTIR. Isso sugere a
298possibilidade de substituio total ou parcial de antioxidantes sintticos por EEG pela indstria de leos
299comestveis. Tal proteo deveu-se maior estabilidade trmica e superior atividade antioxidante de EEG,
300quando comparado a MAEG, devido aos compostos fenlicos e organossulfurados naturalmente presentes no
301extrato e intensificados com o aquecimento, associados a outras substncias antioxidantes formadas.
302Agradecimentos

23
24

12

303

The authors acknowledge the Brazilian Agencies National Council for Scientific and Technological

304Development (CNPq) and Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel (CAPES) for the
305financial support.
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16

33
34

17

452Tabela 1 Rendimento, total extractable phenol content (TPC), antioxidant capacity (EC50) and antiradical

Samples

Yield (%)

TPC

TPC

(mg GAE . g-1


D.E.*)C

(mg GAE . g-1


H. S.)

(g.mL-1)

Atividade
antirradicalar
[EC50-1]

EC50

ABTS

(mmol TEAC.g-1)

SA 50%

5.13 0.25 c

16.04 0.93 c

1.65 0.10 b

423.94 20.54 a

2.36 0.11 d

480.52 6.37 d

SA 80%

3.60 0.20 d

15.66 4.20 c

0.90 0.63 b

327.85 5.21 b

3.05 0.05 d

440.35 5.61 d

SM

3.93 0.15 d

28.69 6.43 c

1.78 1.18 b

137.07 2.27 c

7.30 0.12 d

597.28 12.14 c

SM 80%

3.30 0.20 d

35.28 15.73 c

1.56 1.33 b
126.00 1.16 c
Antocianinas
Flavonides

7.94 0.07 d

547.38 4.28 c

336.57 6.31 b

40117.96 47.32 b

Samples
-1
mg.g
32.26 16.54 a

-1
mg.g
2.97 0.05 d

SP

9.17 0.23 a

322.54 48.13 a

SP 80%

7.47 0.11 b

386.20 43.97 a
32.02 17.75 a
3.52 0.14 d
SA
0.61 0.00 c
9.95 0.03 c

284.16 10.87 c

52933.13 16.00 a

SM
1.96 0.03 b
a*
373.03 14.22
SP
28.39 0.00 a
282.08 19.80 b*
-

784.57 7.76 a

14.83 0.70 d

TBHQ

BHT

22.29 0.03 a
1.27 0.01 d
20.67 0.00 b
67.53 3.20 e

453efficiency measured in the DPPH radical tests dos extratos de casca de soja (SA, SM e SP), TBHQ e BHT.
454A Valores correspondentes mdia desvio padro (n=9).
455B Mdias seguidas por diferentes letras minsculas na mesma coluna diferem significativamente (p 0.05), pelo
456 teste de Tukey.
457C Teor de fenlicos totais contabilizados como mg de equivalentes de cido glico, contidos em 1g de TBHQ/
458 BHT.
459* D. E. extrato seco; H. S. casca de soja.
460
461
462Tabela 2 Teor de antocianinas e flavonides dos extratos de soja amarela, marrom e preta.
463
464
465
466
467
468
470A Valores correspondentes mdia desvio padro (n=9).
471B Mdias seguidas por diferentes letras minsculas na mesma coluna diferem significativamente (p 0.05), pelo
472 teste de Tukey.
473

35
36

18

FRAP
474Tabela
3
Antioxidant
Samples
OI -carotene (%)*
475capacity
determined by the
476FRAP, ABTS and
oxidation
(mmol Fe2+.g-1)
477inhibition (% OI)
by the b-carotene
478method.
SA 50%
0.33 0.04 f
31.76 1.66 c
479
480
SA 80%
0.57 0.05 e
40.29 2.91 c
481
482
SM
0.80 0.10 d
40.44 1.04 c
483
SM 80%
0.87 0.12 d
43.38 0.62 c
484
485
SP
12.92 3.19 c
51.91 5.61 b
486
487
SP 80%
13.22 0.98 b
12.39 2.74 d
488
489
BHT
0.54 0.05 e
81.76 0.52 a
490
TBHQ
30.29 0.10 a
83.82 0.35 a
491
492
Trolox
82.09 0.13 a
493
494
495
496
497
498A Valores correspondentes mdia desvio padro (n=9).
499B Mdias seguidas por diferentes letras minsculas na mesma coluna diferem significativamente (p 0.05), pelo
500 teste de Tukey.
501*Extratos com concentrao de 50 g.mL-1 em relao a TPC, comparado ao Trolox com concentrao de 50
502g.mL-1.
503
504
505
506
507
508
509
510
511
512
513
514
515
516
517
518
519
520
521
522
523Fig. 1 Cintica de descolorao do sistema -caroteno-cido linoleico: proteo contra peroxidao lipdica por
524ao dos extratos de soja amarela, marrom e preta comparados aos controles positivos (TBHQ, BHT e Trolox) e
525ao negativo.
526
527
528
529
530
531
532
533

37
38
534
535
536
537
538
539
540
541
542
543
544
545
546
547
548
549
550
551
552Fig. 2 Curvas TG (a) e DTA (b) dos extratos de alho e do BHT.
553

19

39
40

20
TG Dynamic

554
555
556
557 BHT
558
559
560
561 TBHQ
562
563
564 SA 50%
565
566
567
568
569

DTA

Steps

Tia Tfb/ C

Tonset C

mc/ %

1st

72 286

99

Residue

286 - 701

1.0

1st

91 299

99

Residue

299 - 701

1st
2nd
3rd
4th
5th
Residue

30 216
216 593
593 701
377 593
593 701
-

SA 80%

1st
2nd
3rd
4th
5th
Residue

SM

Transition

T/ C

Endo
Endo
-

74
173
-

1.0

Endo
Endo
-

132
227
-

159
595
317
570
-

31.1
34.1
16.8
9.6
16.7
2.4

Endo
Exo
-

127
633
-

25 103
103 199
199 234
234 457
457 702
-

68
115
217
295
538
-

10.7
19.8
20.0
20.3
27.5
1.0

Endo
Endo
Exo
Exo
Exo
-

68
118
219
317
546
-

1st
2nd
3rd
4th
5th
Residue

24 314
314 701
185 253
253 470
470 701
-

117
450
220
317
570
-

54.2
19.7
26.4
20.6
29.7
2.4

Endo
Exo
Exo
Exo
Exo
-

126
459
223
314
577
-

SM 80%

1st
2nd
3rd
4th
5th
Residue

32 63
63 486
486 701
234 457
457 702
-

68
124
217
295
538
-

10.7
19.8
20.0
20.3
27.5
1.0

Endo
Endo
Exo
Exo
Exo
-

68
118
219
317
546
-

SP

1st
2nd
3rd
4th
5th
Residue

28 360
360 701
185 253
253 470
470 701
-

122
415
220
317
570
-

48.9
21.3
26.4
20.6
29.7
2.4

Endo
Exo
Exo
Exo
Exo
-

130
532
223
314
577
-

SP 80%

1st
2nd
3rd
4th
5th
Residue

22 383
383 701
199 234
234 457
457 702
-

150
445
217
295
538
-

45.6
36.4
20.0
20.3
27.5
1.0

Endo
Exo
Exo
Exo
Exo
-

129
554
219
317
546
-

Tabela 4
Dados
referentes
s curvas
TG e
DTA dos
extratos
de alho e
BHT.

41
42
570aInitial temperature; bFinal temperature; cMass loss
571
572
573

21