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ANA ANGLICA RESENDE

Fisiologia de Micro-organismos
REGULAO DO METABOLISMO
O ajuste do metabolismo s diferentes condies fisiolgicas obtido graas a processos
que, em conjunto so chamados de regulao metablica.
Os eventos da regulao no so isolados, e cada um deles atua como um gerador primrio
de sinais, captados por geradores secundrios capazes de retransmiti-los at atingir toda a rede
metablica. E para manter o equilbrio do organismo necessrio que alguns processos estejam
interligados, como por exemplo, os temas unificadores.
A regulao do metabolismo nada mais do que o estudo das molculas presentes da
membrana para dentro da clulas (estudo de todos os componentes do metabolismo) e os conceitos
de regulao enzimtica ajudam a entender melhor a regulao do metabolismo pois a regulao
metablica feita atravs da modulao de enzimas regulatrias de processos metablicos chaves,
(geralmente reaes irreversveis) fazendo com que as reaes qumicas especficas sejam inibidas
ou ativadas em resposta a qualquer excesso ou falta de metablitos.
Para que a eficincia do processo seja obtida, o organismo utiliza vrios tipos de regulao
enzimtica que podem ocorrer ao mesmo tempo e simultaneamente. Sobre esses tipos de regulao
enzimtica, falaremos mais a frente, mais o importante sempre ter em mente que a regulao do
metabolismo de importncia fundamental para que um organismo possa responder as variaes
das condies ambientais e as condies adversas de maneira precisa.
Princpios bsicos de regulao:
Para que se entenda o metabolismo energtico das clulas, necessrio que algumas ideias
sobre ATP e energia estejam bastante claras. O ATP uma espcie de moeda energtica da clula
que utilizada sempre que necessrio. Em termos de estrutura, basicamente o ATP um
nucleotdeo e obtido durante as reaes de catabolismo. No necessrio que haja uma alta taxa
de ATP, mas no entanto preciso que se tenha maneiras de produzi-lo.
O fato que muitas molculas esto presentes durante o metabolismo, e uma dessas
molculas merecem um destaque especial, o NADPH, que atua como principal aceptor de eltrons,
pois mesmo quando ele no o aceptor de eltrons, as molculas que so, podem ser convertidas
em NADPH tendo importncia fundamental durante o metabolismo. preciso ter sempre em mente

tambm, que as vias de biossntese e degradao, so diferentes umas da outra, o que acaba
influenciando e contribuindo com a regulao do metabolismo em si.

FIGURA 1: Importncia do ATP e NADPH, na interligao da regulao do metabolismo.


A relao ATP/ADP diz muito sobre o estado metablico em que uma clula est. A alta
concentrao destes, indica que o metabolismo est ativo e a baixa concentrao indica que a clula
precisa de substratos para o metabolismo. As concentraes de NADPH e ATP so os sinais mais
importantes de qual tipo de metabolismo a clula realiza e a partir de uma centena de precursores, a
clula consegue sintetizar aminocidos, cidos nucleicos e muitas outras molculas que so
extremamente necessrias para o bom funcionamento da clula.
Os principais pontos de controle do metabolismo so:

Atravs do suprimento de substrato: onde a regulao metablica feita por interferncia direta
em determinadas reaes qumicas que compe o metabolismo, aumentando ou diminuindo sua
velocidade. O resultado imediato desta alterao de velocidade o aumento da oferta de
substratos para reaes subsequentes ou o acmulo de metablitos, o que, indiretamente, ir

afetar outras reaes relacionadas.


Das Interaes alostricas: As interaes alostricas, so interaes da enzima com
determinados metablitos, provocando grandes alteraes na sua atividade. Essas enzimas so
chamadas de enzimas alostricas, e so sensveis reguladoras do metabolismo. Esses
metablitos, so chamados de positivos (ativadores alostricos) ou negativos (inibidores

alostricos), segundo provoquem aumento ou reduo da velocidade da reao catalisada.


De modificaes covalentes: A atividade de uma enzima pode ser drasticamente alterada pela
ligao covalente de certos grupos cadeia polipeptdica, que causa modificaes importantes
em sua conformao. A modificao covalente constitui em uma reao qumica e , portanto,
catalisada por enzimas. A mudana da atividade no definitiva, pois este sistema de controle
tambm inclui enzimas capazes de catalisar a retirada do grupo adicionado devolvendo a enzima
modificada sua conformao original. Varias so as modificaes possveis (metilao,
adenilao, acetilao etc.), porm a mais frequente consiste na fosforilao da cadeia
polipeptdica.

Da concentrao da enzima limitante: onde enzimas que catalisam reaes-chave do


metabolismo tm tempos curtos de vida. A contnua sntese e degradao proteica exercida
sobre a transcrio do gene que codifica a enzima devem ser entendidas como um processo de
adaptao do metabolismo, que permite drenar o fluxo metablico em uma ou outra direo, de
acordo com as condies fisiolgicas prevalecentes no momento. Tais desvios seriam
dificultados se a concentrao das enzimas permanecesse constante em qualquer condio. Por
exemplo, uma dieta rica em carboidratos provoca aumento da expresso de genes que codificam

determinadas enzimas das gliclise.


Da Compartimentalizao (em eucariotos): Muitas vias anablicas e catablicas ocorrem em
diferentes compartimentos das clulas, portanto, a compartimentalizao das organelas das
clulas contribui para a regulao do metabolismo. Um exemplo disso o metabolismo de cidos
graxos, uma vez que sua degradao ocorre na matriz mitocondrial de clulas do fgado,

enquanto sua sntese ocorre no citoplasma dessas mesmas clulas.


E da especializao (em multicelulares): Apenas um tipo de clula realiza uma atividade, como
por exemplo, as clulas do fgado que so capazes de realizar gliclise.
AMP cclico
Quando cAMP est presente no interior da clula, ele se liga protena quinase A e ativa-o

para que possa fosforilar a glicognio sintase. Isso fecha a sntese de glicognio baixo, desativando a
enzima. A chave para a regulao hormonal o efeito dos hormonas na produo de cAMP. Isto
ocorre na superfcie da clula quando o hormonio se liga a uma molcula de receptor de superfcie
celular. Insulina, glucagon e epinefrina so os hormonios principais que o metabolismo de glicognio
em mamferos de controla.
As glndulas suprarrenais liberam a adrenalina de catecolaminas (tambm conhecida como
adrenalina) em resposta a sinais neurais que desencadeiam a reao de luta ou fuga. Epinefrina
estimula a decomposio do glicognio em glucose 1-fosfato, o qual convertido em glicose-6fosfato. O aumento em glucose-6-fosfato intracelular aumenta tanto a taxa de gliclise no msculo
quanto a quantidade de glicose libertado na corrente sangunea a partir do fgado. A epinefrina
desencadeia uma resposta a uma necessidade de energia sbita; glucagon e insulina agem durante
perodos mais longos para manter uma concentrao relativamente constante de glicose no sangue.
Liga-se a epinefrina -adrenrgicos de fgado e clulas musculares e para 1-adrenrgicos
de clulas do fgado. A ligao da epinefrina aos -adrenrgicos ou de glucagon aos seus receptores
ativa a via de sinalizao da adenilil ciclase. O segundo mensageiro, AMP cclico (cAMP), em
seguida, ativa a protena sinais A.
Alm de bloquear a sntese de glicognio, esses hormnios estimulam a degradao de
glicognio. O cAMP tambm um indicador de baixo nvel energtico, estimulando diversas vias
catablicas (lac operon).
AMP cclico x Lac operon

Quando a lactose est presente, e a glicose escassa, os nveis de cAMP alta e a


transcrio do lac estimulada. A RNA Polimerase tem uma afinidade elevada para o promotor lac
apenas quando o ativador, a protena ativadora catabolica (CAP), est ligada ao lado do promotor.
CAP est ativo apenas quando associado a AMP cclico (cAMP), cuja concentrao na clula
aumenta quando a concentrao da glicose preferida cai.
Regulao da atividade enzimtica:
Nas interaes no-covalentes, como por exemplo interaes de enzimas-substrato, as
enzimas no-regulatrias exibem cintica de Michaelis-Menten (hiperbolica) e as enzimas
regulatrias possuem cintica cooperativa (sigmoidal), como mostrado nas figuras a seguir:

FIGURA 2: Efeito da [S] na velocidade de reaes catalisadas por enzimas.

FIGURA 3: Efeito da [S] na velocidade inicial da reao.


Por meio deste tipo de grfico (figura 2), a Vmax, pode ser determinada apenas
aproximadamente, isso porque V0 se aproxima mas nunca chega a atingir Vmax. A concentrao de
substrato, em que a V0 a metade da Vmax, Km, a constante de Michaelis-Menten. A concentrao
da enzima em um experimento como esse geralmente to baixa que [S]>>[E] mesmo quando [S]
descrita como pequena ou relativamente pequena. As unidades so tpicas para reaes catalizadas
enzimaticamente e apresentadas apenas para ilustrar o significado V0 e [S] (note que a curva
descreve parte de uma hiprbole retangular, como uma das assntotas em V max. Se a curva
continuasse para concentraes abaixo de [S] = 0, ela se aproximaria de uma assntota vertical
quando [S]= -Km).

O grfico da Figura 3, mostra parmetros cinticos que definem os limites da curva em


baixas e altas [S]. Em baixas [S], Km>>[S] e o termo [S] no denominador da equao de MichaelisMenten torna-se insignificante. A equao pode ser simplificada para V 0 = Vmax[s]/Km, e V0 passa a ter
uma dependncia linear em funo da [S], como pode ser observado na figura 3. Em [S] elevados,
onde [S]>>Km, o termo Km no denominador da equao de Michaelis-Menten torna-se insignificante e
a equao pode ser simplificada para V0=Vmax. Isso consistente com o patamar observado nas [S]
elevadas. Portanto, a equao de Michaelis-Menten consistente com a dependncia observada de
V0 em relao a [S]. A forma da curva definida pelos temos V max/ Km, quando a [S] pequena, e
apenas por Vmax quando a [S] alta.
No caso de regulaes alostricas, ligaes de efetores alostricos aumentam ou reduzem a
velocidade da reao (inibidores alostricos reduzem Km ou aumentam Vmax)
Inibio enzimtica

FIGURA 4: Inibies enzimticas


Painel A: enzima desinibida
Painel B : Inibidor competitivo: compete com o substrato pelo stio ativo da enzima, se ligando ao
centro ativo da enzima.
Painel C: Inibidores no competitivos: no competem com o substrato pelo stio ativo da enzima, se
ligando em regies diferentes do sitio ativo, mas se ligam apenas ao complexo ES (enzimasubstrato).
Painel D: Inibidores mistos: podem ou no competir pelo sitio ativo do substrato, se ligando em
regies diferentes do sitio ativo, mas podendo tambm se ligar tanto a enzima como ao complexo
ES.
Regulao de vias fermentativas Metabolismo de piruvato em E. coli

A piruvato formato liase catalisa a converso reversvel do piruvato e CoA em acetil-CoA e


formato. A reao ocorre em dois passos. Primeiro a ligao covalente entre a enzima e o piruvato
originando um produto da reao, o formato, e tambm um intermedirio estvel acetil-PFL 3. E
ento o composto acetil-PFL que reage com a CoA formando-se o segundo produto da reao, o
acetil-CoA. Em seguida uma cintica de ping-pong uma vez que a formao do segundo produto s
possvel aps a formao do formato e a participao de um segundo substrato, a co-enzima A.

A)

B)
FIGURA 5: A) Regulao de vias fermentativas metabolismo de piruvato em E. (coli B) Regulao de
vias fermentativas pela enzima Piruvato-Formato-Liase

Regulao enzimtica Sntese dos aminocidos da famlia do aspartato


Para manter um bom entendimento sobre a regulao enzimtica quanto a sntese da famlia
do aspartato, fundamental saber que ele um aminocido e que as famlias de aminocidos so

agrupamentos de acordo com a famlia dos precursores de cada um deles. As principais famlias so
a do -cetoglutarato, a do 3-fosfoglicerato, a do oxaloacetato, a do piruvato e do aspartato. Tais
famlias so de extrema importncia para a regulao da produo de aminocidos pois os
organismos podem selecionar os aminocidos que desejam produzir e podem interromper a via de
produo de alguns deles quando no h necessidade de tal aminocido no metabolismo, gerando
assim uma economia de energia na sntese de novos compostos essenciais em dado momento.
importante tambm considerar a regulao da produo de dois aminocidos em particular:
a Lisina e a isoleucina, (ambos da famlia do aspartato). Pois a regulao de ambas dada em
circunstancias diferentes, isto , a produo de lisina no regulada pelo seu excesso j que ela
um aminocido limitante para a produo de protenas e a isoleucina controlada por seu excesso.
Isto tende logicamente a uma produo maior de lisina que isoleucina, como podemos observar na
figura a seguir:

FIGURA 6: Regulao enzimtica Sntese dos aminocidos da famlia do aspartato


Controle Transcricional Negativo
Os reguladores negativos de controle (repressores), podem operar atravs de operons
induzveis ou atravs de operons repressores. Sistemas induzveis negativamente controlados,
utilizam um molcula de repressor que impede a transcrio de genes estruturais, a menos que uma
molcula indutora se ligue e inative o repressor. Sistemas repressores que so negativamente
controladas tambm envolvem uma protena repressora, mas, neste caso, o repressor inativo, a
menos que uma molcula corepressora se ligue e ative a protena repressora. Assim, operons
induzveis negativamente so controlados normalmente "desligados", enquanto operons repressveis
so normalmente "ligados" a menos que uma molcula secundria interaja com as respectivas
protenas reguladoras.

FIGURA 7: Controle transcricional Negativo


Controle transcricional Positivo
Mecanismos de controle positivo podem tambm regular de forma indutvel-operon ou
repressvel-operon. Sistemas indutveis utilizam um ativador de protena que requer a presena de
uma molcula de coativador a fim de aumentar a transcrio. Positivamente sistemas controlados de
forma repressvel (positivamente) produzir uma protena ativadora que ir aumentar a transcrio de
genes alvo estruturais, a menos que uma molcula de inibidor esteja presente. t, terminator, P,
promotor, , operador. Como mostrado na figura a seguir:

FIGURA 8: Controle trancricional Positivo


Protenas de Ligao ao DNA
A regulao ao nvel da transcrio depende fortemente de protenas de ligao ao DNA,
como visto nos controles negativos e positivos. Estudos realizados em diferentes protenas
reguladoras revelaram grupos com base em caractersticas estruturais comuns.
Hlice-volta-hlice (HTH): incluem os repressores dos lac, trp sistemas, Gal; Cro e CI
repressores e CRP. Ao contrrio de alguns motivos de ligao a DNA, o motivo HTH no um
domnio, separado estvel mas incorporado no restante da protena. Algumas das semelhanas
entre as protenas HTH: os repressores normalmente se ligam como dmeros, cada monmero

reconhecendo uma sitio em um local de ligao a ADN; o sitio operador so na forma B-DNA; as
cadeias laterais das unidades HTH se ligam a stios especficos com grupos do sulco maior (major
groove).
Dedos de zinco: Protenas desta famlia geralmente contm repeties em srie de 30
aminocidos, o resduo motivo dedo de zinco- (Tyr/Phe-x-Cys-X2 ou 4-Cys-X12-His-X3-5-His-LysX3). Elas contm uma folha antiparalela e uma hlice, duas cistenas, perto da curva na folha , e
duas histidinas na hlice, coordena uma central de ferro, zinco e mantem estas estruturas
secundrias juntas, formando um domnio globular compacto. O dedo de zinco liga-se no sulco
maior do -DNA, e por vrios dedos so geralmente ligados em conjunto, eles so suficientemente
longos para envolver-se parcialmente em torno da dupla hlice, tal como um dedo.
Zper de leucinas de ligao ao DNA: contm domnios geralmente entre 60-80 resduos com
dois subdomnios distintos. Leucina a cada 7 aminocidos: molcula anfiptica com regio
hidrofbica em um dos lados: L-X3-X2-L-L-L-X6-X3-X2-L-L-L-X6. Mais comum em eucariotos, os
zperes contem alfa hlices paralelas.
Protenas em folha : ligam-se como um dmero de enchimento com hlices antiparalelas
ao sulco maior (por exemplo, MetJ). O arranjo uma folha 7-resduo, um 14-16 resduo- helice, e
uma hlice de 15 resduo.
Controle Global, Regulao em nvel celular
O controle global, tido como a regulao do metabolismo em nvel celular. O nosso
organismo apresenta uma flexibilidade metablica notvel. Basta pensar, por exemplo, que ns
conseguimos adaptarmo-nos a situaes to contrrias como: estar 8-9 horas sem comer (quando
dormimos, por exemplo), ou ingerir uma refeio muito calrica. Ou ento fazer um exerccio fsico
muito intenso e num curto espao de tempo, ou um exerccio mais moderado e mais demorado, ou
ainda ficar em repouso. Esta nossa capacidade de lidar corretamente com estes opostos uma
consequncia da regulao que as nossas vias metablicas sofrem. A regulao dos processos
metablicos , o aspecto central para uma compreenso correta do metabolismo.
Tudo comea com um estimulo dentro da clula, ao qual gerado um sinal dentro da clula e
posteriormente esse sinal traduzido e regulado, atravs do DNA, onde enzimas podem ser
traduzidas e transcritas e logo, liberadas por exemplo, gerando uma resposta ao sinal emitido.

FIGURA 9: Controle global (Regulao em nvel celular)


Cascatas de fosforilao
As cascatas de fosforilao so um meio comum de se transmitir informao nas clulas.
Ocorre quando uma molcula sinalizadora se liga a um receptor na membrana que dispara sinais que
atuam fosforilando enzimas e estas, vo se tornando ativas. A cascata se d porque uma enzima
ativa atua fosforilando outras enzimas que vo se tornando ativas at que a resposta celular seja
finalmente disparada.
Reaes acopladas: Importncia de Metablitos Globais
Regulao das vias de sntese e degradao recproca, atuando assim, na manuteno da
homeostase (equilbrio dinmico), frente a variaes no fluxo (resposta demanda); evitando ciclo
ftil; E essa regulao ocorre sempre em pontos onde as reaes podem ser independentemente
controladas (reaes irreversveis); e um dos principais influenciadores da regulao, so os locais
onde ocorrem a sntese e a degradao dos metablitos, ou seja, as rotas so compartimentadas
(mitocndria x citossol).