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1 INTRODUO

Com o mundo atual globalizado e a tecnologia se desenvolvendo na


direo da incluso e de estar ao alcance de todas as pessoas, os mais
variados setores indstriais vem crescendo e tomando propores antes no
imaginveis desde a sua escala de produo at a demanda por matria prima.
E no mbito das indstriais qumicas no tem sido diferente, j que na
situao atual inmeros produtos utilizados pelos seres humanos tem sua
origem ligada a processos qumicos, o que causa um alerta nas autoridades
governamentais ligadas a preservao do meio ambiente, pois com a crescente
demanda na fabricao de novos produtos oriundos de atividades laboratoriais
surge tambm uma crescente gerao de resduos que podem vir a contaminar
bens naturais como a gua e o solo, assim como os animais e a prpria
humanidade.
Levando em conta este cenrio descrito acima, plausvel que tambm
aja um maior incentivo das autoridades e esforo da comunidade cientifica no
desenvolver de novas tcnicas aplicadas aos processos realizados que vsem
uma reduo dos impactos ambientais gerados pelas atividades industriais
considerando toda a sua linha de produo at o uso do produto final.
Neste trabalho o enfoque foi nas industrias farmacuticas onde os
remdios criados so constitudos de substncias ativas que atualmente esto
sendo classificadas como uma classe emergente de contaminantes afetando
organimos terrestres e principalmente aquticos 2.
Pesquisas recentes documentam a ocorrncia destes compostos
farmacuticos em guas naturais e em efluentes de tratamento de esgoto
urbano, onde a de concentrao de tais substncias estaria na escala de g/L
e ng/L.[ref]
Dentro dessa classe ampla de compostos farmacuticos, podemos
denominar os antibiticos como sendo aqueles de maior periculosidade quando
se encontram presentes no meio ambiente, pois quando em contato com
organimos vivos podem acabar gerando uma resistncia ao uso desses
medicamentos, diminuindo assim a efetividade no combate a diversos tipos de
doenas.
Isto resultado do aumento no uso dessas drogas por atividades ligadas
a criao de rebanhos, aves e peixes assim como fruto do hbito das pessoas
de se automedicarem fazendo uso sem orientao de tais substncias que
podem resistir as reaes das vias metablicas sendo escretadas com at 90%
da quantidade inicalmente ingerida, acarretando em uma seleo de carter
gentico onde apenas as bactrias mais perigosas se reproduzem, causando
preocupao e necessidade de que se tenha legislaes e procedimentos para
monitorar, medir e controlar este tipo de resduo gerado 2,3.

Inclusa nessa gama de agentes antibacterianos, est a classe das


sulfonamidas, que so utilizadas desde a dcada de 1930 para tratamento de
doenas em seres humanos devido ao seu grande expectro de ao que se
mostra eficaz contra bactrias gram positivas e gram negativas, alm de ser
considerado um remdio de baixo custo para a linha de produo e
comercializao, fato que tambm faz com que essa classe de frmacos seja
utilizada no uso veretinrio.
Abaixo na figura 1, tem-se um esquema dos possveis fatos
responsveis pela contaminao de sulfonamidas no meio ambiente.

Figura 1 - possveis causas de contaminao das sulfonamias no meio ambiente. Fonte:

Esta classe de antibiticos sintticos deriva-se da substncia conhecida


como sulfonilamida5 e existem diversos compostos antimicrobianos que contm
o grupo sulfonamida como uma espcie de radical similar formando ento um
conjunto de cerca de 150 SNs diferentes.
A estrutura molecular com propriedades bacteriostticas a que nos
referimos esta representada na figura 2 abaixo, sendo composta por um radical
(-N4H2) em uma das extremidades, seguido de um anel benznico unido a um
grupo sulfonil ligado a outro grupo amida que serve como stio para ligao de
outros radicais, gerando ento as diversas sulfonamidas que tem sido
reportadas ao longo da histria6.

Figura 2 - estrutura geral das sulfonamidas

Olhando para a parte farmacolgica, podemos salientar que as


sulfonamidas tem estrutura semelhante a de um composto importante para
reaes de sntese de cido flico por parte das bactrias, este o cido paminobenzico tambm conhecido como PABA, sendo assim sulfonamidas
agem como agentes competidores pelos stios ativos de uma enzima
denominada dipropteroato sintetase, o que impede a sntese de cido flico por
parte das bactrias impedindo assim a sua proliferao 7.
Devido a diversidade de sulfonamidas existentes e seus diferentes
modos de ao, elas so largamente utilizadas nos dias atuais tanto para uso
humano quanto veterinrio e como no h tratamento espcifico para tais
resduos que so deixados no meio ambiente, a contaminao inevitvel,
causando resistncia por parte das bactrias e mutaes da enzima
dipropteroato sintetase, o que dificulta a ao das sulfonamidas no mecanismo
de inibio da sntese do cido flico diminuindo sua eficcia no combate as
enfermidades8.
Sendo assim preciso que trabalhos atuais estudem e criem novos
mtodos que identifiquem e quantifiquem a presena desses antibiticos em
nosso ambiente, o problema que tais agentes bacterostticos se encontram
em quantidades minmas em matrizes complexas com diversos tipos de
interferentes que podem prejudicar uma determinao final de sua
concentrao, logo se faz necessrio o uso de mtodos que limpem e
preparem tais amostras para posterior uso de tcnicas de separao e
quantificao desses contaminantes. Por isso quando se trata de amostras de
origem ambiental de extrema importncia que os processos de preparo de
amostras sejam efetivos e eliminem quaisquer impurezas presentes, por isso
so requeridos processos que alm de realizarem a limpeza amostral tambm
permitam que se concentre os analitos de interesse para melhorar o sinal dos
mesmos em uma anlise final da presena destes contaminantes.
Atualmente com polticas de preservao do meio ambiente, o contexto
da qumica verde e os interesses financeiros dos setores industriais, so
exigidos cada vez mais mtodos que executem o processo de clean-up
amostral de maneira rpida, usando o mnimo de reagentes e gerando pouco
resduo. Tcnicas como a SPE (solid phase extractation), MEPS (microextractation by packed sorbent), SPME (solid phase micro-extractation) e
QuEChERS tem sido usadas revelando nveis satisfatrios de desempenho
no processo de preparo da amostra, trazendo como resultado taxas de
recuperao dos analitos e de reduo de efeitos de matriz cada vez melhores
frente a mtodos anteriormente utilizados, vale ressaltar que cada uma dessas
tcnicas tem suas particularidades porm no geral elas se assemelham por
serem processos limpos, econmicos e simples de serem executados, fatos
que as tornam mais viveis do ponto de vista industrial e ambiental.[ref]
Dentre os locais onde esto se tem encontrado a maior parte dos
contaminantes de origem farmacutica podemos destacar o solo, que tem
caractersticas porozas contendo matria inorgnica e orgnica favorecendo
assim interaes adsortivas dessa matriz com os mais diversos tipos de

compostos incluindo os frmacos10.Outra importante matriz atingida por este


tipo de contaminao so as guas subterrneas e de rios, levando em conta
que o solo desencadeia papel fundamental na preservao de ecossistemas
adjacentes por realizar a filtragem de substncias, podemos dizer que estas
duas matrizes esto relacionadas e o lodo de esgoto, tambm conhecido como
bioslido, proveniente de estaes de tratamento est incluso tanto no solo
onde usado como adubo orgnico ou nos efluentes de guas residurrias
onde gerado, sendo assim houve a escolha deste bioslido como matriz de
estudo devido ao mesmo apresentar altas probabilidades de adsoro de
resduos dos mais diversos tipos de frmacos, incluindo as sulfonamidas 11.
Considerando ento a fora das interaes de adsoro entre o lodo de
esgoto e os resduos de interesse, o processo de identificao e quantificao
de tais analitos tem certo grau elevado de difilcudade pois para extra-los de
uma matriz complexa como esta necessrio um mtodo efetivo que garanta
confiabilidade na limpeza da amostra. Levando em conta estes fatores, o
mtodo escolhido para realizar o processo de determinao das nove
sulfonamidas foi o ento denominado: quick, easy, cheap, effective,
rugged and safe, criado inicialmente por Anastassiades et al. no ano de
2003 que at os dias atuais vem sendo utilizado e aprimorado revelando altos
nveis de recuperao, baixo consumo de reagentes e geraes de resduos,
mostrando-se adequado para o estudo proposto 12.
Inicialmente a metodologia QuEChERS foi desenvolvida com o objetivo
de ser aplicada em amostras de origem alimentar com a finalidade de extrair e
isolar algumas classes de pesticidas e inseticidas como: os organiclorados,
organofosforados e os organonitrogenados. Portanto o mtodo deveria ter uma
ampla faixa de atuao sendo classificado como um mtodo MRMs
(Multiclass and Multiresidue methods), a necessidade de se desenvolver uma
nova metodologia de sucesso na identificao dessa classe de contaminantes
provm da concincia ambiental que vinha se criando durante a dcada de 90,
j que os pesticidas so uma classe de resduos com mais de 50 anos de
estudos e desenvolvimentos de diversas metodoligas, porm nenhuma capaz
de cobrir toda a faixa de contaminantes polares e apolares nos reportando uma
faixa de recuperao e repetibilidade aceitvel 12. Sendo a flexibilidade uma das
principais vantagens do mtodo escolhido para esse estudo, pois desde a sua
criao em 2003, inmeras pesquisas reportam adaptaes do processo de
extrao QuEChERS para torn-lo mais adequado e reprodutivo para
determinado tipo de matriz 13(diana),14,15.
O processo original criado por Anastassiades et al em 2003 est
ilustrado na figura 3, abaixo:

Figura 3 - Procedimento geral para a metodologia "QuEChERS"

10,0 g de amostra
(sem clean up)

10,0 mL de acetonitrila

Vortex (1,0 min)


4,0 g de MgSO4 anidro +
1,0 g de NaCl

Vortex (1,5 min)


Centrfugaa
Pega uma alquota e
adiciona 150 mg/mL MgSO4
+ 25mg/ ml adsorvente
(PSA)
Vortex (1,0 min)
Centrfugaa
Pega uma alquota para
anlise em GC/MS ou
LC/MS

Como era de se esperar a metodologia QuEChERS inicial contempla


poucos passos de extrao, sendo considerada simples e de fcil execuo
podendo ser conduzida por pessoas com um treinamento mnimo aceitvel no
manuseio laboratoral.
Porm para este presente trabalho onde se procura otimizar tal
procedimento, faz-se nessesrio entender cada um dos passos, as interaes
e efeitos gerados pelos reagentes usados, sendo assim uma explicao mais
terica da metodologia em geral deve ser feita.
O mtodo original de preparo de amostra QuEChERS pode ser dividido
em algumas etapas como:
i)

Fragmentao e homogenizao: Como a massa da matriz


utilizada no mtodo menor em relao a outras tcnicas
tradicionais de extrao, existe a necessidade de se fragmentar a
amostra inicial (geralmente na ordem de kilogramas) e
homoneizar a mesma para se obter uma maior superfcie de
contato na hora de extrair os componentes.

ii)

iii)

iv)

v)

vi)

Extrao e partio: Devido a natureza das matrizes utilizadas


nesse mtodo serem alimentares ou ambientais, sempre h uma
grande porcentagem de gua nas mesmas, por isso necessrio
a adio de um solvente orgnico como etapa de extrao, para
que haja a separao entre a fase aquosa e a orgnica com
posterior migrao dos analitos de interesse para a fase orgnica.
Logo este o papel exercido pelo solvente utilizado no mtodo,
geralmente acetonitrila, podendo ser tambm acetona ou acetato
de etila.
Adio do sal: nesta etapa da extrao so feitas as adies de
NaCl e MgSO4 afim de induzir a separao das fases
aquosa/orgnica e o ajuste da polaridade atravs do efeito
denominado salting-out, o qual auxlia promovendo a secagem
da fase aquosa aumentando o coeficiente de distribuio de
determinado analito na fase orgnica diminuindo a presena do
mesmo na gua, aumentado assim a eficincia do mtodo de
extrao.
Adio de padro interno: adiciona-se uma soluo de padro
interno visando minimizar possveis erros provenientes das
etapas de extrao do mtodo, est soluo pode ser usada em
uma etapa inicial do procedimento, porm se a matriz apresenta
uma concentrao significativa de gordura ( 0,3 g/10,0 mL de
acetonitrila) que pode criar uma camada adicional para onde parte
dos analitos podem migrar, recomendvel a adio deste
padro somente no final do procedimento analitico de extrao.
Utilizao de composto adsorvente: etapa onde uma alquota da
amostra movida para um tubo extrator vazio onde uma
pequena quantidade de composto adsorvente, geralmente PSA
(primary secondary amine), C18 ou Grafite adicionada e
homogeneizada com a soluo para que o material adsortivo se
distribua por toda a alquota retendo compostos interferentes
provenientes da matriz, realizando assim um clean up adicional
do extrato a ser analisado.
Anlise da amostra: dependendo da origem do extrato, aps a
execuo do quinto passo a amostra j pode ser inserida em um
equipamente GC ou HPLC para identificao e quantificao dos
analitos, porm em alguns casos necessrio passos adicionais
como: adio de protetores de analitos em sistemas GC ou a prconcentrao dos analitos em solvente, antes da injeo em
sistemas HPLC, no entanto como o intuito era explicar o mtodo
de uma maneira geral mais abrangente estes passos ficam
citados aqui na etapa de anlise amostral.

Depois de realizado todo o processo de estudo da matriz, da classe dos


analitos em questo e do processo de preparo da amostra, possvel realizar a
quantificao e identificao dos compostos atravs de tcnicas
cromatogrficas.

No ramo da cromatografia os processos de separaes so regidos por


interaes entre uma fase mvel (onde est contido o analito) e uma fase
estacionria, nesta estapa de separao e identificao dos analitos diferentes
variveis podem influenciar em uma melhor separao cromatogrfica.
Atualmente existem vrias tcnicas de cromatografia sendo utilizadas
em anlise de rotina tanto em laboratrios industriais quanto nos de pesquisa
cientfica. Esses tipos de cromatografia diferem entre si pelo mecanismo
utilizado na separao dos analitos, assim como na natureza da fase mvel e
estacionria a serem utilizadas.