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TEMA 5

MICROPROPAGACIN

Aplicaciones
Propagacin industrial de plantas
Micropropagacin
-Cultivo de meristemos
Planta sana
-Embriognesis somtica
Semilla sinttica
-Conservacin de germoplasma

Mejora de plantas
Generacin de Variabilidad
-Variacin somaclonal
-Mutagnesis
Rescate de embriones
Cultivo de anteras y microsporas
-Obtencin de haploides
Cultivo de protoplastos
-Hbridos somticos

Produccin industrial de compuestos de inters

Propagacin
Sexual
Semilla

Asexual
Soma

Propagacin a partir de semillas

Producidas en gran nmero


Susceptibles de almacenamiento
Saneadas respecto a los parentales
Genotpicamente heterogneas, excepto:
Lneas homozigotas autgamas
F1 del cruce de dos lneas homozigticas
Apomixis

Propagacin vegetativa
Mejoras de las tcnicas tradicionales:
Evitar la desecacin de la estaquilla
Composts que favorecen el enraizamiento
Control de la temperatura en la zona de
enraizamento

Micropropagacin
Definicin
Mtodo de propagar plantas usando partes muy
pequeas de sta, que se desarrollan en cultivos
estriles.
Aplicaciones
-Propagacin clonal comercial
-Produccin de planta sana: cultivo de meristemos
-Almacenamiento de germoplasma: crioconservacin

Macropropagacin o micropropagacin?
Ejemplo con patata
Semilla para obtener nuevas variedades
Micropropagacin
Produccin de planta
Obtener planta sanas

Macropropagacin a partir de tubrculos


Suministro de material para cultivo

Ventajas y desventajas de la
micropropagacin
Ventajas
-Pequea necesidad de espacio
-Cultivos aspticos
-Certificacin de ausencia de
virus
-Condiciones controladas y
reproducibles
-Produccin continua
-Menor espacio de invernadero
-Plantas en stock (ortets)
-Amplio espectro de especies
-Caractersticas deseables
-Mecanizacin
-Menor laboreo

Desventajas
-Instalaciones muy especializadas
-Personal especializado
-Contaminacin
-Protocolos no estandarizados
-Menor tamao de las plntulas
-Transicin heterotrofa/autotrofa
-Inestabilidad gentica???
-Costes: produccin a gran escala
y con valor aadido

Etapas en la micropropagacin
Estado O. Seleccin y preparacin de la planta madre
-Eleccin de plantas vigorosas y sanas
-Puede ser necesaria la deteccin/eliminacin de virus
Estado I. Establecimiento de cultivos aspticos
-Esterilizacin en superficie y transferencia de los explantes al cultivo
Estado II. Multiplicacin
-Multiplicacin de estructuras capaces de dar lugar a plantas
intactas con los procedimientos adecuados
-Los cultivos podrn reciclarse varias veces para obtener las
tasas de crecimiento necesarias
Estado III. Preparacin para la transferencia
-Formacin de races por parte de los tallos (a veces se transfieren
directamente)
Estado IV. Transferencia al medio natural
-Lavado del agar de las races, transferencia a un medio estril de
enraizamiento
-Aclimatacin

Principales mtodos de micropropagacin

1. -Formacin de tallos a partir de yemas


axilares
2. -Organognesis directa
3. -Organognesis indirecta
4. -Formacin de propgulos vegetativos
5. -Microinjerto

EXPLANTES

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1. Formacin de tallos a partir de yemas


axilares

Shoot culture (Meristemos caulinares)


Cultivo de segmentos nodales

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Shoot culture

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Crecimiento y proliferacin de tallos


axilares
Citoquininas y dominancia apical
Posicin horizontal

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Atencin al origen de los tallos!!!

Meristemtico
Adventicio
Callo

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Cultivo de segmentos nodales

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Algunas caractersticas
ELEVADAS TASAS DE MULTIPLICACION
En fresa se han descrito tasas de multiplicacin de 156-256
plantas por ao a partir de una planta madre

ESTABILIDAD GENTICA
Las clulas de la yema son uniformemente diploides y
son menos susceptibles de sufrir cambios genotpicos
durante el cultivo
Mtodo true-to-type
***Las plantas quimricas se perpetan mejor con este
mtodo

Otros mtodos

Tallos a partir de semillas


Tallos a partir de meristemos florales

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2. Organognesis directa

Caulognesis adventicia
Embriognesis directa

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Tallos adventicios

-Es la formacin de tallos a partir de estructuras que


no contienen meristemos axilares o apicales.
-Entre ellos se incluyen: tallo, bulbos, tubrculos,
rizomas, hojas, races, etc.
-Los niveles de fidelidad del material propagado no
son tan altos como en los casos anteriores

Embriognesis directa
-Es la formacin de estructuras bipolares o embrioides a
partir de:
-tejidos embrionarios (vulos, nucela, embriones
zigticos, embriones somticos)
-plntulas muy juveniles (hipocotilo y cotiledones)
-otros materiales

-Ocurre de forma natural en ctricos: APOMIXIS

-No se obtienen tasas altas de propagacin

3. Organognesis indirecta
Multiplicacin a travs del cultivo de callo= INDIRECTA
-Se considera de menor valor la micropropagacin obtenida
de este modo, debido a la alta incidencia de anormalidades
cromosmicas producidas como aneuploidas o poliploidas.

Sin embargo, a pesar de ello, en la propagacin de especies importantes


econmicamente, como cereales, legumbres forrajeras, rboles y palmas
tropicales, no se puede evitar la embriognesis y organognesis indirecta.

-Existen referencias de cultivos regenerativos de callos


estables, seleccionados a partir de sectores organognicos o
embriognicos de callos.

Callo con diferentes capacidades


morfognicas

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Embriognesis somtica indirecta


Se observaron por vez primera en zanahoria y se piensa que se puede inducir
en cualquier especie.

-Produccin de un alto n de plantas en un volumen muy pequeo (105/g. tejido).


-Posibilidad de sincronizar la induccin.
-Criba del medio para obtener embriones de tamao y desarrollo uniforme.
-Posibilidad de manipulacin de las suspensiones para ser transferidas de un
cultivo a otro y as aplicar tratamientos selectivos para el desarrollo de los
embrioides y la germinacin de plntulas.
-Imposicin de la dormicin en los embrioides y as crear semillas artificiales
que podrn ser finalmente sembradas.

-Importancia de la auxina para la induccin y su ausencia en la maduracin


-Aporte de nitrgeno, como coadyuvante de la embriognesis y el azcar.
-Adicin de ABA para evitar la germinacin precoz y la embriognesis secundaria,
contribuyendo a normalizar el desarrollo del embrin.

Embriognesis somtica indirecta a partir de suspensiones celulares


-Protocolo-

Explantes
(raz, pecolo, pednculo, hoja, tallo,embrin zigtico)

Medio de cultivo (semislido) + 2,4 D


-CalloSuspensin celular embriognica
Eliminar 2,4,D
Maduracin de embrioides

Criba para obtener embrioides uniformes


en tamao y desarrollo

Semillas artificiales

-Para el tratamiento en masa en especies de inters agrcola, se


persiguen poblaciones de embrioides sincronizadas, uniformes y
altamente viables.

Produccin de semillas artificiales


Los embrioides para ser encapsulados en una matriz de alginatos,
son sumergidos, cubiertos en alginato sdico y solucin nutritiva,
en una disolucin de CaCl2 50 mM. El calcio induce la formacin de
bolas de alginato que contienen los embrioides.
Se pueden
almacenarlos.

deshidratar

los

Aplicado en alfalfa, apio, coliflor

embrioides

encapsulados

4. Formacin de propgulos vegetativos

Los tubrculos de patata se


forman
in
vivo
subterrneamente, a partir
de estolones.
In vitro, se forman en
medios
ricos
en
citoquininas, en oscuridad,
a partir de yemas axilares
de los tallos.

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5. Microinjerto

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5. Microinjerto

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Factores que afectan a la morfognesis


y a la tasa de proliferacin
Estado fisiolgico de la planta donadora de explantos
-estado de crecimiento activo
-mecanismos naturales de propagacin vegetativa
Genotipo

Ambiente:
-medio de cultivo
-factores externos: luz, temperatura,

Problemas tcnicos
-contaminacin
-exudacin de compuestos inhibidores
- prdida de competencia

Produccin comercial plantas


EMPRESAS DE CULTIVO IN VITRO

Produccin de planta sana-Cultivo de MeristemosVariedad deseada


Clon seleccionado
Planta sobresaliente
(sana o enferma)
Escisin de meristemo apical
(domo meristemtico ms
1 o 2 primordios de hojas)

Medio de cultivo
adecuado
Establecimiento en el suelo

Plantas libre de virus

Identificacin de los virus, si es


que estn presentes
Aplicacin de
termoterapia a la planta
madre

Termoterapia o
quimioterapia

Pruebas de indexacin de
virus
a) Plantas indicadoras
b) Microscopa electrnica
c) Injerto
d) Serologa

Almacenamiento de germoplasma
-In situ
-Ex situ
Jardn Botnico
Banco de semillas
In vitro

Crecimiento ralentizado
Crioconservacin

Precultivo

Congelacin

Crioproteccin

Descongelacin

Almacenamiento

Recuperacin

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