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UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

Instituto Multidisciplinar em Sade

RELATRIO DE AULA PRTICA


Obteno de protease
Discentes: Arianne Correia, Alxia Venceslau
e Lzaro Ramon.
Docente: Wilson Rodrigues.

Vitria da Conquista BA
2015

INTRODUO
As proteases so protenas responsveis pela quebra de ligaes peptdicas que
so ligaes formadas por aminocidos e que juntos formam uma protena. O processo
chamado de clivagem proteoltica, um mecanismo comum de ativao ou inativao de
enzimas quando uma molcula de gua utilizada no processo, as proteases so
classificadas como hidrolases.
Proteases ocorrem naturalmente em todos os organismos e correspondem a 1-5%
de seus contedos genticos. Essas enzimas esto envolvidas numa grande variedade de
reaes metablicas, da simples digesto de protenas do alimento a cascatas altamente
reguladas (por exemplo a da coagulao, o sistema complementar, as vias de apoptose, e
a cascata ativadora da profenoloxidase nos invertebrados).
Muitas proteases podem apresentar interesse econmico, seja para sua utilizao
em processos industriais ou pelo risco que representam a degradao de produtos como
o leite. Muitas dessas enzimas podem estar associadas a ons metlicos, o que confere
uma alta resistncia a temperatura.
OBJETIVO
A presente prtica teve como objetivo a avaliao do desempenho de bactrias
quanto a produo de proteases termo resistentes. Foram utilizadas dois tipos de cepas:
Pseudomonas psicotrficas e Pseudomonas florensis, considerada a cultura padro.
METODOLOGIA
Separou-se dois tubos falcon (um para cada cepa) adicionou-se 5ml da cultura
celular (j crescida) em cada tubo, em seguida foram centrifugados em velocidade
mxima por 10 min. O sobrenadante foi recuperado e dividido em duas amostras de
cada cepa (cada uma contendo 2,5 ml) totalizando 4 amostras duas para cada cepa.
Dessas amostras, uma de cada cepa, passou por um tratamento trmico em banho-maria
60 C durante 30 min, as outras amostras foram mantidas em temperatura ambiente.
Para comprovao da viabilidade das culturas quanto produo de protease utilizou-se
100uL de cada tratamento, os quais foram colocados em uma circunferncia feita em
meio gar leite pronto, o tempo de incubao para avaliao da atividade proteoltica foi
de 30 horas.
RESULTADOS
Com Tratamento Trmico
Sem Tratamento Trmico

Formao de Halo
No
No

Tamanho do Halo
x
x

Tabela 01: Referente a cultura Padro de (Pseudomonas fluorescens) onde foi pipetada 100l.

Com Tratamento Trmico


Sem Tratamento Trmico

Formao de Halo
Sim
Sim

Tamanho do Halo

Tabela 02: Referente a cultura 2.1 de (Pseudomonas psicrotrficas) onde foi pipetada 50l.

Figura 1: Comparao da formao de halo entre os diferentes tratamentos.

Observa-se que a cepa controle no apresentou produo de proteases termo resistentes


em nenhum tratamento, isso pode ser verificado pela ausncia de halo proteoltico em
placa, a cepa teste, no entanto, demonstrou-se capaz de produzir proteases termo
resistentes visto que houve formao de halo em ambos os casos (com ou sem
tratamento trmico), sendo que visualmente possvel perceber que a amostra com
tratamento trmico apresentou um halo proteoltico maior, demonstrando maior
atividade enzimtica, embora isso no tenha sido estatisticamente comprovado.