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O DNA vai ao tribunal: o impacto das tipagens genticas

03/11/2006
Eduardo Ribeiro Paradela e Andr Lus dos Santos Figueiredo
-----------------------------------------------------Eduardo Ribeiro Paradela
Especialista em gentica forense
-----------------------------------------------------Andr Lus dos Santos Figueiredo
Perito judicial
-----------------------------------------------------Laboratrios Mdicos Dr. Srgio Franco - Medicina Diagnstica
Setor de Gentica Forense
DNA Forense - Peritos Associados e Anlises Laboratoriais LTDA
Associao dos Peritos Judiciais do Estado do Rio de Janeiro
www.dnaforense.com
------------------------------------------------------Palavras-chave: DNA, gentica forense, genotipagem
Resumo: Os exames para a identificao humana por DNA podem ser
utilizados para economizar tempo e recursos ao sistema judicirio. Contudo,
a falta de padres e procedimentos de segurana na execuo desta
modalidade de exames no Brasil afeta a confiabilidade de muitos servios
oferecidos em territrio nacional.
Key-words: DNA, forensic genetic, genotyping
Abstract: The human identification by DNA tests may be used in order to
save resourses and time to the legal system. However, in Brazil there are
not standards and safety procedures to garantee the sucess of the analysis
in some of the local services.

1. Introduo

As anlises de DNA (cido desxirribonuclico), em virtude da sua


presumida confiabilidade, so cada vez mais empregadas para fins judiciais,
suplantando as tradicionais provas sorolgicas. Os exames para a
identificao humana por DNA podem ser utilizados para rapidamente
estabelecer vnculo gentico, exonerar falsos suspeitos ou relacionar
criminosos a cenas de crime e estas entre si, acarretando significativa
economia de tempo e dinheiro justia. Contudo, a forma de implantao
destes testes no Brasil no foi devidamente acompanhada pelos orgos
competentes a fim de garantir a confiabilidade de muitos dos servios

oferecidos em territrio nacional (Smarra et al. 2006a). A grande velocidade


com que esta tecnologia foi imposta e a falta de informao contribuem
para a existencia de incertezas que eventualmente surgem, tornando
imprescindvel em muitos casos a nomeao de um perito competente para
avaliar os procedimentos laboratoriais adotados e auxiliar na anlise dos
resultados no contexto do caso.
Com a exceo dos gmeos idnticos, o patrimnio gentico de cada pessoa
nico. Existem seqncias hipervariveis na molcula de DNA que, por
serem altamente polimrficas, podem ser utilizadas para distinguir
indivduos e estabelecer vnculo gentico. Outras ferramentas
anteriormente empregadas para as investigaes forenses, com os sistemas
ABO e HLA, no apresentam poder de discriminao comparvel
identificao humana por DNA.
O caso Pitchfork, na Inglaterra, foi o primeiro em que se empregou a
tipagem gentica para relacionar crimes em srie e identificar o criminoso,
alm de provar a inocncia de suspeitos. Desde ento, as tcnicas de
genotipagem passaram a ser disseminadas por todos os continentes.
Entretanto, casos com New York State versus Castro, no qual o laboratrio
responsvel pelos exames falhou na execuo dos testes e apresentou
interpretaes equivocadas para os resultados, provocaram a busca por
padres de qualidade mais rgidos. Este caso serviu de base para
associaes de advogados nos Estados Unidos da Amrica requisitarem a
reabertura de diversos processos resolvidos com o auxlio da tipagem
gentica naquele pas.
Em verdade, as anlises de DNA para identificao humana e determinao
de vnculo gentico esto provocando uma verdadeira revoluo nos
tribunais brasileiros e vrios laboratrios clnicos esto migrando para o
campo dos exames genticos, uma vez que estes servios constituem uma
lucrativa atividade. As tipagens atravs da anlise de DNA so um
importante instrumento para a distribuio de justia, tornando os
processos mais geis. Entretanto, ser que os testes laboratoriais e a
interpretao de seus resultados so isentas de erro? De fato, para que se
faa jus a credibilidade das genotipagens necessrio que se execute
vrias etapas para obter um perfil do DNA e, em cada uma delas, preciso
aplicar rigorosos procedimentos para a garantia da qualidade dos
resultados. A no utilizao dos controles de qualidade efetivamente pode
levar a interpretao equivocada dos resultados (Figueiredo e Paradela,
2006).
Historicamente, nos pases onde as tecnologias aqui discutidas foram
primeiro aceitas como forma de obteno de provas periciais, houve uma
fase de muitas controvrsias antes da larga aceitao que os testes de DNA
hoje possuem. Este perodo foi marcado por debates que acabaram por
estabelecer rigorosos padres para a execuo dos exames. No Brasil, no

h fiscalizao adequada ou padronizao dos exames. Este fato, somado


ao desconhecimento que alguns magistrados tm de que os testes no so
infalveis, pode interferir nos julgamentos.
Vrias interpretaes podem ser obtidas a partir de uma anlise de DNA. Em
investigaes genticas, a validade dos resultados depende do clculo das
freqncias populacionais dos marcadores. Para isto, as fontes destas
freqncias devem estar disponveis a qualquer pessoa ligada ao processo
que necessite desta informao. Vale ressaltar que pode haver variaes na
composio gnica entre grupos populacionais, sendo este um fator
adicional a ser considerado. A expresso estatstica dos resultados deve
ainda basear-se na presena ou no de misturas de material biolgico, como
freqentemente encontrado em casos de abuso sexual.
Deste modo, torna-se necessrio avaliar rotineiramente os procedimentos e
conseqentes interpretaes dos exames de DNA. Considerando-se ainda a
pouca experincia dos laboratrios nacionais neste setor, pode-se gerar
algum receio a cerca da vulnerabilidade dos testes genticos.

2. Bases cientficas para a tipagem gentica

2.1- A molcula de DNA

O processo de recombinao gnica proporciona um alto grau de


variabilidade entre os organismos vivos que se utilizam deste mecanismo.
Cada ser humano possui um perfil gentico exclusivo, com a exceo de
gmeos monozigticos que compartilham do mesmo conjunto de genes.
O cido desoxirribonucleico (DNA) pode ser encontrado no ncleo de todas
as clulas, com a exceo das anucleadas hemcias, e nas mitocndrias. O
DNA um polinucleotdeo, isto , uma macromolcula formada pelo
encadeamento de subunidades chamadas de nucleotdeos. Por sua vez,
cada nucleotdeo resulta da combinao de trs componentes: um
grupamento fosfato, um acar (pentose) e uma base nitrogenada. No DNA,
estas ltimas so de quatro tipos: adenina, guanina, citosina e timina. O
DNA formado por duas cadeias de polinucleotdeos enrolados de forma
helicoidal e ligadas transversalmente atravs de ligaes qumicas
conhecidas como pontes de hidrognio. A adenina liga-se especificamente a
timina, enquanto que a guanina forma par sempre com a citosina.

2.2- Bases cientficas da hereditariedade


Cada espcie tem um nmero caracterstico de cromossomos. Nos seres

humanos, as clulas somticas apresentam 46 cromossomos, ou 23 pares


de cromossomos homlogos (2n = 46). Cada gene ocupa um lugar definido
no cromossomo, denominado locus gnico. Quando os genes que compem
um par no so idnticos entre si, o indivduo denominado heterozigoto
para o carter determinado pelo par de genes. A presena de genes
idnticos indica que o indivduo homozigoto para aquele carter.
Os gametas, que so clulas haplides, ou seja, possuem apenas 23
cromossomos (n=23), so gerados atravs de um processo de diviso
celular conhecido como meiose. No momento da fecundao, os 23
cromossomos presentes no espermatozide unem-se a outros 23 do vulo.
Desta forma, formado um ser contendo os 46 cromossomos caractersticos
da espcie, sendo 50% do DNA originado de cada um dos progenitores.
Como as mitocndrias dos espermatozides no so passadas ao vulo, o
DNA mitocondrial possui origem exclusivamente materna. O ser gerado ir
passar por milhares de divises celulares atravs do processo denominado
mitose. Deste modo, um indivduo carrega, em cada uma de suas clulas, as
caractersticas genticas que foram herdadas de seus pais. Este mecanismo
de herana torna possvel a determinao de vnculo gentico atravs das
tcnicas de biologia molecular (Paradela e Figueiredo 2006).

2.3- Regies hipervariveis da molcula de DNA

Os polimorfismos presentes nas regies hipervariveis do DNA podem ser


agrupados em dois tipos: polimorfismos de comprimento e polimorfismos de
seqncia. O primeiro tipo inclui as regies STR ("short tandem repeat") e
VNTR ("variable number of tandem repeat"), e caracterizado por
seqncias de nucleotdeos que se repetem em mltiplas cpias, variando o
nmero de repeties entre os indivduos para cada lcus. Os polimorfismos
de seqncia so compostos de diferentes nucleotdeos em uma
determinada localizao do genoma. Estas variaes em seqncia podem
ser manifestadas como regies de alelos alternativos ou substituies,
adies ou delees de bases, mas, em geral, originam-se de mutaes
pontuais.

3. Vantagens e limitaes dos testes de dna

Os testes de DNA para fins judiciais apresentam diversas vantagens para a


justia sem que haja desvantagens quando os procedimentos so
corretamente realizados. comum a presena de evidncias biolgicas em
cenas de crime e deve-se considerar que os testes tradicionais possuem
limitado poder de discriminao (incluso ou excluso). O cido
desxirribonuclico mais estvel e durvel que outras molculas. Alm

disto, os procedimentos utilizados para a tipagem gentica so muito


precisos, mesmo quando h poucas molculas de DNA disponveis.
De fato, os testes de DNA podem ser uma forma de economizar recursos
para a justia, uma vez que possvel exonerar suspeitos logo ao incio do
processo de investigao. Adicionalmente, pode-se armazenar o perfil de
DNA em bancos de dados informatizados e cruzar informaes, facilitando
deste modo a identificao de criminosos em srie. Muitos crticos afirmam
que determinadas anlises so aceitas em tribunais sem que sejam
seguidos os padres cientficos necessrios, fazendo pairar dvidas em
diversos casos (Paradela et al., 2006; Smarra et al, 2006a; Bonaccorso,
2001; Roeder, 1994). Como h custos inerentes aos testes de DNA, os
gastos com a contratao de expertos podem onerar as partes. Na literatura
cientfica internacional, h casos em que resultados de "incluso" ou
"excluso" foram alterados aps minuciosa reviso dos dados. Vrias destas
anlises passaram a ser ento classificadas como "inconclusivas" ou
"inconsistentes" (U.S. Congress, 1990).
No necessariamente a coincidncia entre o perfil de um suspeito e o
encontrado em uma amostra localizada em cena de crime significa que a
identificao positiva e o mesmo vale para a coincidncia entre um
suposto pai e o indivduo que requer o reconhecimento de sua paternidade.
A interpretao dos resultados depende do poder de discriminao das
tcnicas e varia de acordo com caractersticas de cada grupo populacional.

4. Validao e reproducibilidade dos testes de dna

Uma questo fundamental concernente ao uso do DNA como evidncia est


na validao cientfica dos mtodos de anlise. Em outras palavras,
preciso saber se os testes so capazes de inequivocamente identificar
incluses e excluses para cada marcador gentico utilizado.
Inicialmente, a credibilidade dos testes deve partir da natureza das
amostras biolgicas utilizadas. Com freqncia, as amostras so
encontradas em superfcies no-estreis, como por exemplo: roupas, mveis
e terra. Este material pode sofrer danos aps contato com a luz solar,
fungos, bactrias e solventes. Existem procedimentos que podem minimizar
a ao destes fatores de degradao do DNA. Entretanto, muitos cuidados
devem ser tomados para evitar a m interpretao (Paradela et al., 2001). A
amplificao pela PCR (reao em cadeia da polimerase) que largamente
empregada nas tipagens genticas pode produzir falhas e artefatos quando
a qualidade do material biolgico est comprometida. Amostras
parcialmente degradadas podem proporcionar, por exemplo, a amplificao
preferencial de alelos e o surgimento das bandas fantasmas ("stutter
bands"). No primeiro caso, tem-se a amplificao de um alelo em

detrimento do outro. Isto pode gerar a falsa impresso de se tratar de um


indivduo homozigoto ao invs de heterozigoto para o lcus em estudo. J as
bandas fantasmas ocorrem em virtude de falhas no processo analtico que
geram bandas com uma unidade de repetio a menos que a do alelo
original. Deste modo, pode-se equivocadamente interpretar o resultado
como um falso heterozigoto ou identificar um alelo erroneamente.
Atualmente, existem tecnologias, como os leitores por fluorescncia, que
so capazes de dirimir dvidas e evitar erros desta natureza. Contudo, estes
equipamentos so caros e poucos tcnicos no Brasil esto capacitados a
oper-los.
Outro fator importante est na reproducibilidade dos testes. Em cincia,
preciso que os resultados sejam passveis de reproduo para que sejam
aceitos como verdade cientfica. No campo forense, no incomum a
necessidade de reproduo das tipagens. Isto pode encarecer o processo,
mas no deve ser descartado, principalmente quando o que est sob
suspeita o teste em si.
Para as anlises de DNA, diversos quesitos podem ser postulados para a
interpretao dos dados, incluindo-se neste ponto a escolha e o uso
apropriado das tcnicas; as freqncias populacionais empregadas para os
clculos; o tipo de anlise estatstica empregada; os controles de qualidade
adotados; a documentao dos procedimentos e a qualidade dos
equipamentos e reagentes utilizados, bem como a capacitao tcnica dos
profissionais envolvidos (Smarra et al., 2006a, b).

5. interpretao estatstica dos resultados

O fato de que duas amostras possuem o mesmo perfil para um grupo de


marcadores genticos em especial no significa obrigatoriamente que elas
possuam a mesma origem. A interpretao dos testes depende das
freqncias populacionais para cada marcador gentico utilizado. Quando a
tipagem gentica de duas amostras igual, torna-se necessrio expressar
numericamente a significncia deste evento. O nmero de marcadores
empregados, a presena de subestruturas na composio da populao e
mistura de amostras podem interferir nos resultados.

6. Elaborao do laudo ou relatrio pericial

Todas as etapas empreendidas para a tipagem do DNA, desde a coleta at a


interpretao do significado estatstico dos dados obtidos, sero
consubstanciadas em uma pea pericial escrita que servir aos interesses
de seus leitores. Em instncia final, o laudo poder ainda servir como

elemento de convico para juzes, promotores e advogados nas aes


judiciais (Bonaccorsso, 2000).
So recomendaes bsicas de quesitos para a elaborao do laudo pericial
de anlise de DNA: identificao do nmero do inqurito policial ou processo
judicial; identificao das partes envolvidas e amostras; informao da etnia
(raa) dos envolvidos, quando possvel e relevante; citao da metodologia
empregada na coleta e armazenamento de materiais e, se necessrio,
esclarecimento dos cuidados empreendidos para manuteno da cadeia de
custdia destes materiais. Em adio, o laudo deve conter informaes
bibliogrficas a cerca das metodologias utilizadas para a extrao,
quantificao e amplificao do DNA; forma de identificao dos alelos
obtidos nos testes e fundamentos empregados para os clculos estatsticos.
As freqncias estatsticas utilizadas como base para os clculos tambm
devem ser mencionadas (Commission of the International Society for
Forensic Haemogenetics, 1992; Sociedade Brasileira de Medicina Legal,
1999).

7. Credenciamento e fiscalizao dos laboratrios

A tentativa inicial de normatizao das tcnicas de tipagem humana no


Brasil foi realizada por um grupo ligado ao Ministrio da Sade chamado
GTDNA, um Grupo Tcnico Consultivo do qual participaram representantes
de alguns laboratrios brasileiros que realizavam testes de tipagem humana
para investigao de paternidade poca. De acordo com as normas da
ANVISA - Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria, rgo pblico
competente para avaliar os procedimentos tcnicos em laboratrios
analticos, todas as etapas da cadeia de custdia das amostras biolgicas
devem ser documentadas de modo apropriado, a fim de evitar
contaminaes (ISO/IEC 17.025). Em adio, Os procedimentos para
estabelecer padres de qualidade, como a calibrao de equipamentos e a
presena de um segundo analista devem ser implementados para as
anlises realizadas no Brasil se equivalham em termos de segurana e
credibilidade quelas realizadas em laboratrios de referncia no exterior.
Alm disto, os testes de identificao por DNA, por fazerem uso de tcnicas
de engenharia gentica, devem obedecer as normas estabelecidas na Lei de
Biossegurana N 8.974/95 (Paradela et al. 2006).

8. Consideraes finais

As evidncias cientficas so um importante componente de muitos


processos nas reas civil e penal. Usualmente, as informaes de carter
tcnico no so completamente entendidas por uma parcela dos

profissionais da lei. Em termos de impacto social, muito difcil estabelecer


um paralelo com outras ferramentas cientficas empregadas pela justia, j
que nenhuma se compara investigao gentica no tocante ao seu alto
poder de discriminao. Entretanto, os advogados, juzes e a comunidade
cientfica devem estar atentos ao fato de que os testes absolutamente no
so infalveis, como ocorre com qualquer outra atividade humana. Deve-se
implementar no Brasil, conforme j ocorre em outros pases, rigorosos
padres de qualidade para se garantir a credibilidade de to importante
ferramenta (Smarra et al. 2006b).
Na busca do aumento da confiabilidade dos testes genticos possvel
solicitar servio de contra-percia e assistncia de percia para qualquer uma
das partes envolvidas, alm do trabalho a ser realizado pelo perito do juzo.
Estes servios so rotineiramente oferecidos, tanto para acompanhamento
da coleta, da anlise propriamente dita e do laudo feito por outro
laboratrio, quanto para contra-prova das mesmas amostras colhidas para o
teste, bastando que a parte interessada contrate o perito assistente antes
da coleta, para este fim determinado.

9. Referncias Bibliogrficas

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SMARRA, Andr; FIGUEIREDO, Andr; PARADELA Eduardo. A Confiabilidade
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SMARRA, Andr; PARADELA Eduardo; FIGUEIREDO Andr. A Gentica Forense
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SOCIEDADE BRASILEIRA DE MEDICINA LEGAL. Recomendaes para
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1990.
Fonte: Escritrio Online

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