DETERMINACIN DE LPIDOS TOTALES EN PERSONAS

NORMOPESO Y CON DISLIPIDEMIAS

CUESTIONARIO
1) Mediante que otros mtodos se puede cuantificar lpidos
totales?
Los lpidos son compuestos orgnicos cuya funcin ms importante es
la de actuar como combustible. Gran parte del inters en el estudio
del aumento de estos compuestos se debe a la conexin entre
hiperlipemia y arteriosclerosis, diabetes y enfermedad cardiaca.
DETERMINACIN DE LPIDOS TOTALES
Mtodo Sulfo-fosfo vainillina. (Qumico; colorimtrico): Los lpidos
insaturados reaccionan con el cido sulfrico en caliente con
formacin de iones carbonio. En una segunda etapa, stos, en
presencia de fosfovainillina dan una coloracin rosada. La intensidad
del color formado es proporcional a la concentracin de lpidos totales
presente en la muestra ensayada.
Muestra: Suero o Plasma
Estabilidad de la muestra: Los lpidos totales son estables 24 h a
temperatura ambiente
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 546 (490-550) nm

PATRON

Reactivo 1

BLANC
O
-

0.05 mL

MUEST
RA
-

Muestra

0.05 mL

cido
Sulfrico

2.0 mL

2.0 mL

Incubar
10
minutos en un

bao de agua hirviendo (100C).

Enfriar en bao de agua fra y pipetear en tubos secos:

Sol. anterior
cido
sulfrico
Reactivo 2

BLANC
O
-

PATRO
N
0.1 mL

MUEST
RA
0.1 mL

0.1 mL

2.5 mL

2.5 mL

2.5 mL

Dejar reposar 30 min a temperatura ambiente.

Leer las absorbancias.

Clculos:
Para calcular la concentracin total de lpidos en la muestra:

g
Amuestra
=10 X
L
Apatrn

mg
Amuestra
=1000 X
dl
Apatrn

Valores de referencia:
Suero: 4-10 g/L (400-1000 mg/dL)

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE COLESTEROL

El colesterol es uno de los lpidos ms importantes. Su funcin
principal es formar parte de las membranas plasmticas de las
clulas eucariotas; tambin es esencial para el crecimiento y
viabilidad celular.
Se trata de una molcula que slo es peligrosa cuando se encuentra
en grandes cantidades en la sangre.
Para poder circular en la sangre, el colesterol se combina con unas
protenas denominadas LDL.
Existen mtodos tanto de tipo qumico como enzimtico.
Los qumicos se utilizaron durante mucho tiempo para determinar el
colesterol colorimtricamente, aunque suelen ser poco precisos,
presentan interferencias, y resultan difcilmente automatizables. Por
ello se han sustituido casi por completo por los mtodos enzimticos,
que determinan el colesterol total directamente en plasma en una
serie de reacciones en que se hidrolizan los steres de colesterol, se
oxida el colesterol y el agua oxigenada resultante se determina
enzimticamente.
Mtodo enzimtico: Se es hidrolizado los esteres de colesterol
seguida de la oxidacin enzimtica del colesterol resultante. El
indicador oxidado puede medirse mediante espectrofotometra o
cuantificarse por fluorometra o con un electrodo de O2 que mida la el
consumo de O2.
Mtodo qumico: Se basa principalmente en la coloracin, para
identificar el colesterol. Se coloca cido actico a 1ml de solucin del
esteroide en cloroformo. Se aade 1ml de cido sulfrico
concentrado. Luego se observara un tono verde-azul que significa que
la prueba es positiva. El colesterol rpidamente se torna a un color
rojizo.
DETERMINACIN DE HDL-COLESTEROL
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) transportan el colesterol
desde las clulas perifricas hacia el hgado, donde es convertido a
cidos biliares y es excretado hacia el intestino.
Mtodo qumico: Los quilomicrones, VLDL (lipoprotenas de muy baja
densidad y LDL (lipoporteinas de baja densidad) se precipitan por
adicin de acido fosfotungstico y cloruro de magnesio. Despus de
centrifugar el sobrenadante contiene las HDL (lipoprotenas de alta
densidad en las que se determina HDL-colesterol.
DETERMINACIN DE LDL-COLESTEROL
Estudios sealan al LDL colesterol como el factor clave en la
patognesis de la ateroesclerosis y la enfermedad cardaca coronaria
(ECC), mientras que el HDL-colesterol es considerado como factor
protectivo.
Mtodo enzimtico: El colesterol liberado es consumido por la
colesterol esterasa y la colesterol oxidasa en una reaccin sin
desarrollo de color. Un segundo tensoactivo (Reactivo 2) solubiliza las
part-culas de LDL formndose, por la presencia de enzimas y un

reactivo cromognico, un color proporcional a la cantidad de LDL

colesterol presente en la muestra.
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE TAG
Esta determinacin es recomendada, para que sea evaluado en el
paciente un riesgo de enfermedad cardiovascular en adultos sanos,
sin embargo dicha determinacin no suele ser solicitada, debido a
que el riego cardiovascular est basado en concentraciones de
colesterol. La determinacin de triglicridos es utilizado para verificar
la eficacia del tratamiento pre-escrito a pacientes con aumento de las
concentraciones de triglicridos. Estas concentraciones se depositan
mayormente en clulas grasas (adipocitos) y constituyen un depsito
de combustible metablico.
Los triglicridos (TAG) se acumulan principalmente en las clulas
grasas (adipocitos) y constituyen un depsito de combustible
metablico. Para su determinacin se utilizan mtodos qumicos y,
sobre todo, enzimticos:
Mtodo enzimtico: Se lleva a cabo al hidrolizar los triglicridos, y el
glicerol obtenido se somete a reacciones enzimticas donde se
forman un compuesto denominado NADP (nicotinamida adenina di
nucletido fosfato), que se puede medir por espectofometra.
Mtodo qumico: Trata de extraer los triglicridos y otros lpidos con
disolventes orgnicos, luego se aslan los TAG, separando el glicerol
de los cidos grasos. El glicerol aislado es oxidado a formaldehido,
que se determina posteriormente por diferentes mtodos.
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE LIPOPROTENAS
En los casos que existe un exceso de colesterol (hipercolesterolemia)
o de triglicridos (hipertrigliceridemia), se realiza un anlisis de las
lipoprotenas, es decir, protenas que van asociadas a lpidos. Para
poder ser analizadas, las lipoprotenas requieren una etapa previa de
separacin. Existen diferentes mtodos de separacin:
Por ultracentrifugacin: Esta tcnica permite separar las
diferentes familias de lipoprotenas en base a sus densidades. Est
basada en dos propiedades, una es la baja densidad que tienen las
lipoprotenas respecto a otras macromolculas plasmticas, y la otra
es que cada tipo de lipoprotena tiene una densidad diferente; as las
lipoprotenas pueden ser separadas de otras protenas plasmticas y
a su vez ser separadas entre ellas.
Por precipitacin: La protenas precipitan en presencia de poli
aniones como el sulfato de heparina o en presencia de cationes
divalentes como el Ca, el Mg y el Mn. Dicha precipitacin est influida
por varios factores pero se han establecido condiciones para que las
principales protenas precipiten escalonadamente, empezando por las
de menor densidad.
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE FOSFOLPIDOS

Los fosfolpidos son otros componentes de la membrana plasmtica.

Se puede determinar su presencia en sangre por mtodos qumicos y
enzimticos. Los primeros se basan en la determinacin del contenido
de fsforo de los fosfolpidos. Los segundos se basan en la hidrlisis
de los fosfolpidos y en la posterior determinacin de algn producto
de la reaccin.
2) Qu enfermedades pueden incrementar los valores de lpidos
totales?
Obesidad

Incrementa niveles de
triglicridos y disminuye
colesterol-HDL

Sedentarismo

Disminuye colesterol-HDL

Consumo de alcohol

Aumenta triglicridos, incrementa

colesterol total

Diabetes mellitus

Aumenta triglicridos y colesterol

total

Hipotiroidismo

Aumenta colesterol total

Hipertiroidismo

Disminuye colesterol total

Sndrome nefrtico

Aumenta el colesterol total

Insuficiencia renal
crnica

Aumenta triglicridos y colesterol

total

Cirrosis

Disminuye colesterol total

Enfermedad
heptica
obstructiva
Cncer

Aumenta colesterol total

Uso de esteroides

Aumenta colesterol total

Anticonceptivos
orales

Aumenta triglicridos y colesterol

total.

Diurticos

Aumenta triglicridos y colesterol

total.
Aumenta colesterol, disminuye HDL.

Betabloqueadores

Disminuye colesterol total

3) Qu frmacos pueden aumentar y disminuir los valores de

lpidos totales?

Todo paciente con 2 ms factores de riesgo son candidatos a control

con hipolipemiantes del tipo de las estatinas y de profilaxis con
aspirina en quienes no exista contraindicacin.
Todo paciente hipertenso debe tener control farmacolgico adems
de cambios en el estilo de vida.
El control de los lpidos debe realizarse cada 6 a 12 meses para tomar
decisiones de cambios de medicacin.
La Niacina o cido nicotnico fue el primer hipolipemiante que redujo
el riesgo de enfermedad vascular coronaria. Reduce las partculas
VLDL y secundariamente las LDL en 15-25% e incrementa las HDL en
25-35%, sin embargo un 50-60% de los pacientes presenta
intolerancia a la droga principalmente por bochornos, intolerancia
gstrica incluso lcera , exacerbacin de la gota y elevacin de la
glicemia.
Los medicamentos secuestradores de cidos biliares reducen el riesgo
cardiovascular en 20% por reducir secundariamente los niveles de cLDL en 15-25%, aunque puede elevar triglicridos.
Pueden causar estreimiento, gases, disminucin en la absorcin de
vitaminas liposolubles y medicamentos.
Inhibidores de la HMG-CoA reductasa (estatinas). Disminuyen la
formacin de colesterol a nivel heptico e incrementan los receptores
de LDL disminuyendo c-LDL en sangre en un 35%, disminuyen
triglicridos e incrementan c-HDL. Pueden provocar inflamacin
muscular en pacientes susceptibles.
Derivados del cido fbrico (fibratos). Reducen preferentemente los
triglicridos en 40% y c-VLDL y secundariamente c-LDL en 10-15% e
incrementan c-HDL en 15-20%. Pueden provocar colestasis, hepatitis
y miositis.
Ezetimibe. Es un medicamento de reciente aparicin que inhibe la
absorcin intestinal de colesterol de la dieta y biliar, reduce el c-LDL
en 15%.
La decisin del tratamiento se comentar entre el paciente y su
mdico tratante.

4) Qu diferencias existen entre las lipoprotenas?

5) Explique cmo se forman las LDL y HDL
En la transformacin de VLDL a LDL se eliminan todas las
apoprotenas excepto la B-100 y gran parte del colesterol se esterifica
gracias a la enzima asociada con las HDL denominada LCAT (lecitinacolesterol aciltransferasa) que transfiere un cido graso del C-2 de la
fosfatidilcolina al colesterol.

Las LDL llevan colesterol a los tejidos que lo necesitan para sus
membranas o para la sntesis de hormonas esteroideas; este
colesterol y el de los quilomicrones regulan la sntesis heptica de
colesterol.
Las LDL entran a las clulas por un proceso de endocitosis mediada
por receptores especficos para estas lipoprotenas; el receptor de
LDL es una glicoprotena transmembranaria que se une de manera
especfica a apoB-100 y apoE. Una vez dentro de la clula, en el
lisosoma, la apoB-100 se degrada y una lipasa da colesterol a partir
de los steres de colesterol. El colesterol excedente se puede
reesterificar para su almacenamiento por accin de la ACAT (acil-CoAcolesterol aciltransferasa); la sobreacumulacin de steres de
colesterol se evita por dos mecanismos: supresin de la sntesis del
receptor de las LDL e inhibicin de la sntesis celular de colesterol.
Las HDL llevan a cabo el transporte inverso del colesterol eliminando
el exceso de colesterol de los tejidos y transportndolo al hgado para
que se excrete en la bilis, bien como tal o tras transformarse en sales
biliares
.
Las HDL se producen en hgado e intestino como pequeas partculas
discoidales ricas en protenas y se van organizando en el plasma a
partir de componentes de la degradacin de otras lipoprotenas. Las
HDL nacientes extraen el colesterol de las membranas celulares y lo
convierten en steres de colesterol por accin de su LCAT asociada
que es activada por la apoA-I. El colesterol libre pasa fcilmente de
las lipoprotenas a la membrana de las clulas; en el caso de las HDL
nacientes el trasvase de colesterol de las clulas a estas lipoprotenas
pobres en lpidos est mediado por un transportador de membrana
denominado ABCA-1(ATP-binding cassette transporter) que tambin
transfiere fosfolpidos y cuya ausencia produce la deficiencia en HDL
de la enfermedad de Tangier.
Los steres de colesterol generados por la LCAT son transferidos a
VLDL y LDL por la CETP (protena transferidora de steres de
colesterol) asociada a las HDL. La degradacin de las HDL tiene lugar
en el hgado tras su unin a una protena de membrana, la SRBI (receptor eliminador clase B tipo I), que es un receptor multiligando
que une no solo HDL sino tambin VLDL y LDL. Los steres de
colesterol de las HDL se transfieren al hepatocito y la lipasa heptica
de la superficie celular hidroliza los triacilgliceroles de estas
lipoprotenas; la apoA-I se recicla para formar nuevas HDL.
El hgado tambin metaboliza los remanentes de quilomicrones por
un mecanismo similar al de las HDL/LDL, aunque los macrfagos y
otras clulas tienen receptores especficos que reconocen esas
partculas y las internalizan; algunas LDL son captadas por receptores
basurero no especficos en ciertas clulas como macrfagos.

6) Qu funcin cumplen las HDL?

7) Qu es el perfil lipdico?
El perfil lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie
de lpidos que son transportados en la sangre por los diferentes tipos
de lipoprotenas plasmticas. La determinacin de estos parmetros
es un procedimiento analtico bsico para el diagnstico y
seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o secundarias.
Entre estos parmetros analticos que se pueden determinar estn: el
colesterol total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol
transportado por las HDL, los triglicridos totales, ciertas
apoprotenas particulares etc.
Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer
enfermedades cardiovasculares, en especial aquel unido a las LDL
(colesterol malo). El colesterol de las HDL (colesterol bueno), puesto
que representa aquella fraccin de colesterol que se transporta al
hgado para su metabolizacin y excrecin por va biliar, no se asocia
con riesgo de enfermedad.
8) Qu pruebas conforman el perfil lipdico y cules son los
valores normales de cada una de ellas?
Los resultados esperados son aquellos que se indican a continuacin
y se corresponden con los valores de referencia encontrados en la
poblacin sana y que varan segn sexo y edad
Colesterol total
Hasta 30 aos: 120-215 mg/dl
30- 39 aos: 135-240 mg/dl
40-49 aos: 140-280 mg/dl
50- 59 aos: 145-295 mg/dl
Colesterol-HDL

Hombre > 55 mg/dl

Mujer > 65 mg/dl
Triglicridos
36-165 mg/dl

9) Qu recomendaciones se deben hacer al paciente antes de

realizar la prueba?
Para las determinaciones de lpidos es conveniente que el paciente
lleve el estilo de vida cotidiano los das previos al examen,
manteniendo la dieta habitual y que el peso est estable. Por otra
parte se debe evitar el ejercicio fsico intenso durante las horas
previas de la extraccin, ayunar de 10 a 15 horas y suspender los
tratamientos farmacolgicos.
10)
Qu es el riesgo coronario y qu relacin tiene con el
perfil lipdico?